CN109392697B - 一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法，属于植物品种选育技术领域。本发明方法是利用和谐系列紫色品种紫罗兰与大白菜自交不亲和系A109进行远缘杂交获得远缘杂种，并以它为父本，以大白菜自交不亲和系A109为母本杂交获得紫色大白菜，将其与大白菜亲本回交2代后获得紫色大白菜新种质。采用本发明的方法培育的紫色大白菜新种质具有以下特点：紫色大白菜叶片正、背面呈现均匀紫色，颜色更为鲜艳，本发明方法适用于紫色叶片大白菜品种的培育。

Description

一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法

技术领域

本发明涉及一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法，属于植物品种选育技术领域。

背景技术

大白菜起源于中国，是我国的传统蔬菜，同时也是种植面积最大，栽培范围最广的蔬菜作物之一。而且我国大白菜种质资源十分丰富，叶球颜色从白色到绿色表现出很大的变异，这为大白菜育种奠定基础。蔬菜颜色是蔬菜的重要特征之一，也是吸引消费者的主要因素，同时也作为一种营养价值的考量。普遍认为绿色蔬菜含有丰富的维生素C、B1、B2，还含β胡萝卜素(维生素A原)及多种微量元素，而紫色蔬菜中含有较为丰富的花青素，能增强毛细血管的弹性，改善心血管功能。所以，近些年已经选育出一些不同叶球颜色大白菜品种，如桔红心大白菜、黄心大白菜、紫叶大白菜。尤其是紫色大白菜品种因其色泽艳丽、风味独特和营养丰富日益受到市场的关注和喜爱。紫色大白菜与绿叶以及其他叶片颜色的大白菜相比，不仅叶色鲜艳，还具有保健功能，而且花青素含量更为丰富，因此创制紫色大白菜新种质已成为大白菜育种的重要部分。花青素是最强效的自由基清除剂，在植物体内具有吸引昆虫传粉、抵御紫外线伤害等生理功能，同时食用具有抗氧化衰老、抗癌等保健功能。目前，紫色大白菜的来源主要有3种近源植物，包括紫红色芥菜、紫色小白菜和紫菜薹。但现在所育成的紫色大白菜存在以下就三个问题：1.紫色在叶片上分布不均匀；2，颜色呈暗紫色，不够鲜艳且叶片紫色分布不均匀；3.紫色叶球不能稳定遗传。

远缘杂交，能够有效地打破种、属间的隔离，把两个或多个物种通过自然界长时间的进化积累的特性重新组合而形成新的类型和品种，从而获得新种质资源，进一步拓宽栽培品种的遗传基础，提高其生产潜力，培育出特异性强的植物新类型。紫罗兰是十字花科紫罗兰属草本花卉，花色鲜艳、香气浓郁、花期长，还具有抗根肿病的特征。而且目前，没有报道过将同为十字花科的紫罗兰与大白菜进行杂交育种的工作。但是远缘杂交也存在一些问题，如远缘杂交亲本受精后比较常见的不亲和性障碍是杂种胚的败育。亲本授粉后能够正常发育的胚是吸收胚乳所提供的营养，而在远缘杂交中，由于亲本间亲缘关系较远不能形成提供营养的胚乳或是胚乳没有充分发育，都会使得幼胚在发育过程中受到阻碍或是不能及时发育而导致胚败育，以至于远缘杂交失败。

发明内容

为解决现有紫色大白菜存在紫色在叶片上分布不均匀，颜色呈暗紫色、不够鲜艳，紫色叶球不能稳定遗传，及种质资源单一的问题，本发明提供了一种利用远缘杂交技术获得紫色大白菜新种质的方法，该方法不仅能够改良大白菜种质资源而且能够创制紫色叶球大白菜品种，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种利用远缘杂交技术获得紫色大白菜新种质的方法，该方法包括如下步骤：

1)以和谐系列紫色品种紫罗兰作为母本，以大白菜自交不亲和系A109作为父本，进行远缘杂交育种获得远缘杂交种；

2)以步骤1)获得的远缘杂交种为父本，以步骤1)所述大白菜自交不亲和系A109为母本，杂交获得回交一代紫色大白菜；

3)以步骤2)所得的回交一代紫色大白菜做为母本，以步骤1)所述大白菜自交不亲和系A109作为父本进行2代回交，获得叶片正面和反面均为紫色的紫色大白菜种质。

优选地，步骤1)所述大白菜自交不亲和系A109通过如下方法获得：以东农904大白菜为育种材料，利用系谱法对自交后代逐代进行抗病性鉴定选择，经过连续6代自交纯化获得性状稳定、抗病的大白菜自交不亲和系A109。更优选地，是以东农904大白菜为育种材料，于夏季播种于露地，秋季选择抗病单株，经过0℃-3℃低温贮藏135天，于春季定植于日光温室培养至开花，进行单株自交授粉获得自交一代种子，自交一代种子于夏季播种于露地，秋季对自交一代植株继续抗病性鉴定选择，之后利用系谱法，对自交后代逐代进行抗病性鉴定，选择优良单株，经过连续6代自交纯化获得性状稳定、抗病的大白菜自交不亲和系A109。其中：所述抗病性鉴定选择是进行抗芜菁花叶病毒(TuMV)和软腐病病性状的选择，经过连续6代自交纯化获得抗芜菁花叶病毒(TuMV)和软腐病病的大白菜自交不亲和系A109。

优选地，步骤1)是先播种母本种子，7天后播种父本种子，母本种子和父本种子出苗后，进行春化处理，春化处理后培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花；选取单瓣花的紫罗兰植株，在开花前一天进行授粉，摘取授粉后7天-9天的子房，进行离体器官培养，获得远缘杂交种。

更优选地，所述春化处理是在昼夜温度设置为8℃/4℃，昼夜时间设置12h/12h，光照强度10000lx的条件下春化处理21天。

更优选地，所述春化处理后培养至现蕾是在昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx的条件下进行的。

更优选地，所述器官离体培养的方法为：将摘取的子房进行清洗和消毒处理，切去杂交种子房基端1mm-2mm的长度，将剩余的子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行离体培养；所述培养条件为培养温度24℃，昼夜时间设置12h/12h，光照的强度为10000lx，每7天继代一次，培养40天后获得远缘杂交种。

更优选地，所述固体培养基为在MS培养基的基础上添加6-BA，NAA和2,4-D；其中：所述6-BA在固体培养基中的终浓度为1.0mg/L；所述NAA在固体培养基中的终浓度为0.2mg/L；所述2,4-D在固体培养基中的终浓度为1.0mg/L。

优选地，步骤2)是将远源杂交种子播种于土壤中，7天后播种大白菜自交不亲和系种子；远缘杂交种和大白菜自交不亲和系种子出苗后，进行春化处理；春化处理后培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花，以自交不亲和系作为母本，远源杂交种为父本进行杂交，获得回交一代紫色大白菜。

更优选地，所述春化处理是在昼夜温度设置为8℃/4℃，昼夜时间设置12h/12h，光照强度10000lx的条件下春化处理21天；所述春化处理后培养至现蕾是在昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx的条件下进行的。

最优地，所述方法包括如下步骤：

1)以和谐系列紫色品种紫罗兰作为母本，以大白菜自交不亲和系A109作为父本，先播种母本种子，7天后播种父本种子，母本种子和父本种子出苗后，昼夜温度设置为8℃/4℃，昼夜时间设置12h/12h，光照强度10000lx，培养箱中进行春化处理21天；春化处理后昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花；选取单瓣花的紫罗兰植株，在开花前一天进行授粉，摘取授粉后7天-9天的种子房，进行器官离体培养，获得远缘杂交种；其中：器官离体培养的方法是将摘取的子房进行清洗和消毒处理，切去种子房基端1mm-2mm的长度，将剩余的种子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行离体培养；所述培养条件为培养温度24℃，昼夜时间设置12h/12h，光照的强度为10000lx，每7天继代一次，培养40天后获得远缘杂交种；

2)将远源杂交种播种于土壤中，7天后播种大白菜自交不亲和系A109种子；远缘杂交种和大白菜自交不亲和系种子出苗后，在昼夜温度设置为8℃/4℃、昼夜时间设置12h/12h、光照强度10000lx的培养箱中进行21天春化处理；春化处理后昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花，以自交不亲和系A109作为母本，远源杂交种为父本进行杂交，获得回交一代紫色大白菜；

3)以回交一代紫色大白菜做为母本，大白菜自交不亲和系A109作为父本进行2代回交，获得叶片正面和反面均为紫色的回交三代紫色大白菜种质。

本发明还提供了上述任一方法培育获得的紫色大白菜。

关于本发明方法中的亲本材料：

母本：十字花科紫罗兰属紫罗兰，本发明方法选用日本Takii种子公司(日本泷井种苗株式会社)的“和谐系列中紫色品种的紫罗兰，该“和谐系列”紫色品种的紫罗兰可以通过商业途径购买获得，如通过向日本Takii种子公司(日本泷井种苗株式会社)直接购买，也可以通过国内销售渠道购买，如淘宝网夏日阳光店(https://item.taobao.com/item.htm？spm＝a230r.1.14.19.1e7e18f7ZgNOv1&id＝550857853791&ns＝1&abbucket＝17#detail)。“和谐系列”紫罗兰是混系品种，2/3以上的植株是重瓣花，没有花粉，只有少部分是单瓣花有花粉，本发明在培育过程中选择单瓣花植株做母本。

父本：十字花科芸薹属的大白菜，本发明方法以大白菜自交不亲和系A109为父本，该自交不亲和系可以通过“东农904大白菜”经过6代自交选育获得。“东农904大白菜”可以通过东北农业大学园艺园林学院获得，该品种于2001年通过黑龙江省农作物品种审定委员会审定，审定证书编号“黑审2001-31”。本发明所使用的大白菜自交不亲和系A109已经于2014年(于振华，怀凤涛，张耀伟.大白菜新品种‘东农909’的选育.中国瓜菜，2014,27(3)26-28)中予以公开，并且该文献中已经记载了大白菜自交不亲和系A109的育种方法(2.1亲本选育)，目前大白菜自交不亲和系A109保藏在东北农业大学园艺园林学院，公众可以从东北农业大学园艺园林学院获取大白菜自交不亲和系A109，申请人保证从申请日起二十年内向公众发放大白菜自交不亲和系A109，并在申请本专利申请文件的同时提交相关证明。

本发明有益效果：

本发明通过将十字花科紫罗兰属的“和谐系列”紫色品种的紫罗兰作为母本与十字花科芸薹属的大白菜自交不亲和系A109(由东农904大白菜经过6代自交选育获得)作为父本进行远缘杂交，经过回交3代后可以获得叶片正反两面都是紫色的紫色大白菜新种质。该方法不仅能够改良大白菜种质资源，而且能够创制紫色叶球大白菜新种质、丰富紫色大白菜资源，获得了能够稳定遗传的紫色大白菜；并且所获得回交三代紫色大白菜种质的叶片正、背面呈现均匀紫色，且与其亲本A109(绿色大白菜)相比，花青素含量更为丰富，颜色更为鲜艳。

由于紫罗兰属于十字花科紫罗兰属，而大白菜是十字花科芸薹属，他们直接杂交容易出现远缘杂交不亲和的现象，为了克服该技术难题，本发明方法采取在紫罗兰开花前1天进行蕾期授粉来克服受精障碍，并采取胚挽救技术克服受精后障碍、提高远缘杂交的成功效率。

由于大白菜自交不亲和系A109和和谐系列紫罗兰都具有冬性，本发明在种子出苗后在白天8℃/夜间4℃的培养箱中春化处理21天，确保它们开花，同时要求大白菜自交不亲和系A109比紫罗兰晚播种7天，确保他们花期相遇。

附图说明

图1为利用远缘杂交技术选育紫色大白菜方法流程图。

图2为紫色大白菜种质资源DN-PC-BC3。

图3为A109和紫色大白菜种质幼叶；图中A为A109和紫色大白菜种质DN-PC-BC3球叶正面；B为A109和紫色大白菜种质DN-PC-BC3球叶背面。

图4为紫罗兰亲本、大白菜亲本以及二者的远缘杂交种DN-PC-Z1的花粉活力测定和染色体数目；图中A为染色体数，B为花粉活力测定。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。

实施例1：

本实施例所使用的大白菜自交不亲和系A109已经于(于振华，怀凤涛，张耀伟.大白菜新品种‘东农909’的选育.中国瓜菜，2014,27(3)26-28)中予以公开，并且该文献中已经记载了大白菜自交不亲和系A109的育种方法，参见2.1亲本选育：‘A109’是从‘东农904’大白菜自交后代中选育出的自交不亲和系。播种至收获80d左右；直筒类型，球形指数2.2；外叶绿色，帮白绿色；优质；单株质量3.0kg；抗TuMV和软腐病。具体为：

是以东农904大白菜为育种材料，于夏季播种于露地，秋季选择抗病单株，经过0℃-3℃低温贮藏135天，于春季定植于日光温室培养至开花，进行单株自交授粉获得自交一代种子，自交一代种子于夏季播种于露地，秋季对自交一代植株继续抗病性鉴定选择，之后利用系谱法，对自交后代逐代进行抗病性鉴定，选择优良单株，经过连续6代自交纯化获得性状稳定、抗病的大白菜自交不亲和系A109。其中：所述抗病性鉴定选择是进行抗芜菁花叶病毒(TuMV)和软腐病病性状的选择，经过连续6代自交纯化获得抗芜菁花叶病毒(TuMV)和软腐病病的大白菜自交不亲和系A109。

本实施例还提供了一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法，该方法的流程图如图1所示，该方法具体步骤如下：

步骤一：远缘杂交

以日本Takii种子公司的“和谐系列”紫色品种的紫罗兰作为母本，具有优良性状的大白菜自交不亲和系A109作为父本进行杂交育种；杂交育种的具体过程为：先播种母本种子，7天后播种父本种子，母本种子和父本种子出苗后，昼夜温度设置为8℃/4℃，昼夜时间设置12h/12h，光照强度10000lx，培养箱中进行春化处理21天；春化处理后昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花；选取单瓣花的紫罗兰植株，在开花前一天进行授粉，在授粉后的7天-9天摘取子房，然后进行清洗和消毒处理，切去杂交授粉子房基端1mm-2mm的长度，将剩余的子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行器官离体培养；获得远缘杂交种DN-PC-Z1。

由于紫罗兰属于十字花科紫罗兰属，而大白菜是十字花科芸薹属，他们直接杂交容易出现远缘杂交不亲和的现象。为了克服这一现象，采取在紫罗兰开花前1天进行授粉，并采取胚挽救技术(器官离体培养)提高远缘杂交的成功效率。器官离体培养具体操作如下：

在授粉后7天-9天后，摘取杂交授粉子房，在超净工作台中利用无菌水冲洗15分钟，在滤纸上沥干。之后用75％的酒精对子房表面进行消毒，然后立即用蒸馏水冲洗3次后沥干。再用浓度为0.2％的升汞溶液浸泡8分钟，用无菌水冲洗4-5次后擦干备用。切去子房基端1-2mm长度，将剩余的子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行器官离体培养。培养条件为培养温度24℃，昼夜时间设置12h/12h，光照的强度为10000lx，每7天继代一次，培养40天后获得远缘杂交种DN-PC-Z1。其中：固体培养基是在MS培养基的基础上添加6-BA，NAA和2,4-D；6-BA在固体培养基中的终浓度为1.0mg/L；NAA在固体培养基中的终浓度为0.2mg/L；2,4-D在固体培养基中的终浓度为1.0mg/L。

步骤二：将远源杂交种DN-PC-Z1播种于土壤中，7天后播种大白菜自交不亲和系A109种子；远缘杂交种和大白菜自交系种子出苗后，在昼夜温度设置为8℃/4℃、昼夜时间设置12h/12h、光照强度10000lx的培养箱中进行21天春化处理；春化处理后昼夜温度设置为28℃/18℃，昼夜时间设置16h/8h，光照强度10000lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花，以自交不亲和系A109作为母本，远源杂交种DN-PC-Z1为父本进行杂交，获得回交一代DN-PC-BC1，其为紫色大白菜；

步骤三：以紫色大白菜DN-PC-BC1做为母本，大白菜自交不亲和系A109作为父本进行2代回交，获得叶片正面和反面均为紫色的紫色大白菜种质DN-PC-BC3，如图2，其叶片正面和反面均为紫色，如图3。

通过如下实验说明本发明所能够获得的效果：

1、远缘杂交后代的育性和花粉发育特征

为了分析远缘杂种的育性和花粉发育特征，利用TTC(2，3，5－三苯基氯化四氮唑)染色法测试了亲本紫罗兰和大白菜以及杂交后代的花粉活力，染为红色的花粉粒说明活性较强，淡红色活性较弱，而无色则说明花粉没有活力或者没有育性。

结果显示亲本紫罗兰和大白菜的花粉均具有极强较强的活力和较多的花粉数目，与亲本相比，远缘杂交杂交种DN-PC-Z1具有较弱的花粉活力和较少的花粉数，说明杂交种具有活性的花粉粒较少且可育性较弱，如图4A。

进一步观察染色体数目进行杂交种真伪辨别，利用植株根尖镜检的方法观察染色体数目。大白菜染色体数目为2n＝20，紫罗兰染色体数目为4n＝28。本试验经过卡宝染剂染色，显微镜观察，结果发现杂后代染色体数目为24条，如图4B，说明该杂交后代确实为紫罗兰与大白菜的远缘杂交种质。

2、对照实验

按照本发明实施例1的方法，分别以美酒系列的紫色品种紫罗兰和自交系大白菜A54-1为对照进行实验，具体分组如下：

对照组1：父本为大白菜自交不亲和系A109，母本为美酒系列的紫色品种紫罗兰，其他步骤与实施例1相同；

对照组2：父本为大白菜自交系A54-1，母本为和谐系列紫色品种紫罗兰，其他步骤与实施例1相同；

对照组3：父本为大白菜自交系A54-1，母本为美酒系列的紫色品种紫罗兰，其他步骤与实施例1相同；

大白菜自交系A54-1的育种方法为：以‘中白78’大白菜为育种材料，经连续自交6代选育而成。播种至收获65d左右；合抱，球形指数1.5；结球性好，配合力强；外叶深绿色，帮白绿色；单株质量2.0kg；抗TuMV和霜霉病。

以和谐系列紫色品种紫罗兰、美酒系列紫色品种紫罗兰为母本，大白菜自交不亲和系A109和自交系A54-1为父本，获得的远源杂交植株性状与紫罗兰一致，而只有在以和谐系列紫罗兰中紫色品种为母本、大白菜自交不亲和系A109为父本进行的远缘杂交植株(实施例1)中发现一株特异植株，该单株茎叶的颜色、株型与紫色品种紫罗兰一致，花色与紫色品种紫罗兰一致，花形与大白菜一致。由于紫罗兰为四倍体植物，配子为2n＝14，大白菜为二倍体植物，配子为n＝10，对该单株进行卡宝染剂染色，显示该单株染色体数目为24条，确定该单株为紫罗兰与大白菜的真正远缘杂交种(命名DN-PC-Z1)，而其他对照组1-4中获得的远源杂交植株性状均与紫罗兰一致，均未发现花形与大白菜一致的远缘杂交植株，卡宝染剂染色显示对照组的远缘杂交植株染色体数目10条-24条不等，以对照组的远缘杂交植株为父本，以大白菜自交不亲和系A109和自交系A54-1为母本，回交后代中未发现紫色大白菜。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (8)

1.一种利用远缘杂交技术培育紫色大白菜新种质的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）以和谐系列紫色品种紫罗兰作为母本，以大白菜自交不亲和系A109作为父本，进行远缘杂交育种获得远缘杂交种；先播种母本种子，7天后播种父本种子，母本种子和父本种子出苗后，进行春化处理，春化处理后培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花；选取单瓣花的紫罗兰植株，在开花前一天进行授粉，摘取授粉后7天-9天的子房，进行器官离体培养，获得远缘杂交种；所述母本为单瓣花植株；

2）以步骤1）获得的远缘杂交种为父本，以步骤1）所述大白菜自交不亲和系A109为母本，杂交获得回交一代紫色大白菜；

3）以步骤2）所得的回交一代紫色大白菜做为母本，以步骤1）所述大白菜自交不亲和系A109作为父本进行2代回交，获得叶片正面和反面均为紫色的紫色大白菜种质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述春化处理是在昼夜温度设置为8 ℃/4℃，昼夜时间设置12 h/12 h，光照强度10000 lx的条件下春化处理21天。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述春化处理后培养至现蕾是在昼夜温度设置为28 ℃/18 ℃，昼夜时间设置16 h/8 h，光照强度10000 lx的条件下进行的。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述器官离体培养的方法为：将摘取授粉后7天-9天的子房进行清洗和消毒处理，切去子房基端1 mm-2 mm的长度，将剩余的子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行离体培养；所述培养条件为培养温度24 ℃，昼夜时间设置12 h/12 h，光照的强度为10000 lx，每7天继代一次，培养40天后获得远缘杂交种子。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述固体培养基为在MS培养基的基础上添加6-BA，NAA和2,4-D；其中：所述6-BA在固体培养基中的终浓度为1.0 mg/L；所述NAA在固体培养基中的终浓度为0.2 mg/L；所述2,4-D在固体培养基中的终浓度为1.0 mg/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）是将远源杂交种子播种于土壤中，7天后播种大白菜自交不亲和系种子；远缘杂交种子和大白菜自交不亲和系种子出苗后，进行春化处理；春化处理后培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花，以大白菜自交不亲和系作为母本，远源杂交种为父本进行杂交，获得回交一代紫色大白菜。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述春化处理是在昼夜温度设置为8 ℃/4℃，昼夜时间设置为12 h/12 h，光照强度10000 lx的条件下春化处理21天；所述春化处理后培养至现蕾是在昼夜温度设置为28 ℃/18 ℃，昼夜时间设置16 h/8 h，光照强度10000lx的条件下进行的。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）以和谐系列紫色品种紫罗兰作为母本，以大白菜自交不亲和系A109作为父本，先播种母本种子，7天后播种父本种子，母本种子和父本种子出苗后，昼夜温度设置为8 ℃/4℃，昼夜时间设置12 h/12 h，光照强度10000 lx，培养箱中进行春化处理21天；春化处理后昼夜温度设置为28 ℃/18 ℃，昼夜时间设置16 h/8 h，光照强度10000 lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花；选取单瓣花的紫罗兰植株，在开花前一天进行授粉，摘取授粉后7天-9天的子房，进行器官离体培养，获得远缘杂交种DN-PC-Z1；其中：器官离体培养的方法是将摘取的授粉后子房进行清洗和消毒处理，切去子房基端1 mm-2 mm的长度，将剩余的子房扦插到固体培养基中，在组培室中进行离体培养；所述培养条件为培养温度24 ℃，昼夜时间设置12 h/12 h，光照的强度为10000 lx，每7天继代一次，培养40天后获得远缘杂交种；

2）将远源杂交种播种于土壤中，7天后播种大白菜自交不亲和系A109种子；远缘杂交种和大白菜自交不亲和系种子出苗后，在昼夜温度设置为8 ℃/4 ℃、昼夜时间设置为12 h/12 h、光照强度10000 lx的培养箱中进行21天春化处理；春化处理后昼夜温度设置为28℃/18 ℃，昼夜时间设置16 h/8 h，光照强度10000 lx，在培养箱中培养至现蕾；然后移至日光温室内培养至开花，以自交不亲和系A109作为母本，远源杂交种为父本进行杂交，获得回交一代紫色大白菜；

3）以回交一代紫色大白菜做为母本，大白菜自交不亲和系A109作为父本进行2代回交，获得叶片正面和反面均为紫色的紫色大白菜种质。

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