CN109371046A - 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件 - Google Patents

一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件 Download PDF

Info

Publication number
CN109371046A
CN109371046A CN201811166948.9A CN201811166948A CN109371046A CN 109371046 A CN109371046 A CN 109371046A CN 201811166948 A CN201811166948 A CN 201811166948A CN 109371046 A CN109371046 A CN 109371046A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hhp
tac
gene
toxin
selective screening
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811166948.9A
Other languages
English (en)
Inventor
徐俊
宋庆浩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN201811166948.9A priority Critical patent/CN109371046A/zh
Publication of CN109371046A publication Critical patent/CN109371046A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
    • C12N2830/002—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination inducible enhancer/promoter combination, e.g. hypoxia, iron, transcription factor

Landscapes

  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素‑抗毒素元件；所述元件携带有诱导型启动子、热稳定的毒素基因和抗毒素基因；所述制备方法包括构建正向选择标记和诱导型毒素‑抗毒素反向选择标记；该原件可在嗜热微生物中进行遗传操作。本发明提供的热稳定的毒素抗毒素元件可在嗜热微生物中进行遗传操作时作为高效的选择性标记，该元件可应用于嗜热微生物的分子遗传学研究。

Description

一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件
技术领域
本发明涉及一种利用热稳定的毒素-抗毒素元件构建遗传筛选标记的方法和应用，具体涉及通过高静水压力诱导此类毒素-抗毒素元件在超嗜热微生物中进行遗传操作的方法和应用。
背景技术
超嗜热微生物遗传操作研究已经有超过20年的时间，但是由于高温条件的限制，已开发可用的遗传工具数量非常有限。例如，热球菌Thermococcus kodakaraensis KOD1是第一个发展了基因敲除系统的菌株，其使用pryF基因作为筛选标记，尿嘧啶缺陷菌株作为出发菌株配合合成培养基使用。随后几种氨基酸缺陷标记陆续被开发：像色氨酸缺陷菌株,组氨酸缺陷菌株，但这些标记只能在合成培养基中使用。直到开发了辛伐他丁/HMG-CoA还原酶过表达系统，其真正实现了在富营养培养基中操作。但是目前为止，超嗜热古菌中还没有科学家开发出一套可以直接在原养型菌株中进行无痕敲除的遗传系统。目前超嗜热菌遗传操作的出发菌株皆为氨基酸/核苷缺陷菌株，相比于原养型菌株，缺陷菌株对于代谢网络和适应性研究具有一定的干扰，增加了研究难度。而且在合成培养基中进行遗传操作由于菌株生长较慢需要花费更长的时间。因此亟需开发一种可在原养型菌株中进行遗传操作的遗传系统。
最近，毒素抗毒素(TA)系统已经在中温细菌中实现了遗传操作。特别是II型的TA系统，由于毒素与抗毒素都是蛋白，并且直接相互作用，毒素蛋白通过转录或翻译抑制菌体生长，抗毒素可以中和这种毒性，而且TA系统广泛分布在细菌和古菌中，特别是能耐受更高温度的超嗜微生物中寻找可用的TA系统用于遗传操作是一种可行的方案。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种可直接应用于原养型超嗜热微生物的遗传操作的选择性元件，具体是一种用于超嗜热微生物遗传操作的高静水压诱导的毒素-抗毒素元件；本发明还提供了制备上述选择性元件的方法和其应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明涉及一种热稳定的毒素-抗毒素选择性筛选标记HHP-TAC，所述选择性筛选标记HHP-TAC包含来自于超嗜热古菌的高静水压力诱导型启动子、热稳定性毒素基因和抗毒素基因、组成型启动子以及HMG-CoA还原酶基因。
优选地，所述组成型启动子包括组成型启动子PhmtB和组成型启动子Pgdh。
进一步优选地，所述组成型启动子PhmtB和Pgdh区域来源于质粒pTS535。
优选地，所述诱导型启动子是来自于超嗜热古菌Pyrococcus yayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp；热稳定性毒素和抗毒素的编码基因分别来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因和PF0775基因。
优选地，所述选择性筛选标记HHP-TAC的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
第二方面，本发明涉及一种选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，包括如下步骤：
使用融合PCR扩增技术，依次将高静水压力诱导型启动子与热稳定性毒素基因融合，组成型启动子与抗毒素基因融合，以及组成型启动子与HMG-CoA还原酶基因融合，获得所述选择性筛选标记HHP-TAC。
优选地，所述高静水压力诱导型启动子为来自于超嗜热古菌Pyrococcusyayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp。该压力诱导型启动子Phhp元件序列长度488bp，碱基序列如SEQ ID NO.13所示。
优选地，所述热稳定性毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因；所述抗毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0775基因。所述毒素基因PF0776和抗毒素基因PF0775序列长度分别为327bp和324bp；所述热稳定性毒素基因的碱基序列如SEQID NO.14所示；抗毒素基因的碱基序列如SEQ ID NO.15所示。控制毒素基因的表达可以实现对菌株生长的抑制。
进一步优选地，使用融合PCR扩增技术，依次将高静水压力诱导型启动子Phhp与热稳定性毒素基因PF0776融合，组成型启动子PhmtB与抗毒素基因PF0775融合，以及组成型启动子Pgdh与HMG-CoA还原酶基因融合，获得所述选择性筛选标记HHP-TAC。
优选地，所述HMG-CoA还原酶基因来源于超嗜热古菌P.furiosus。过表达该基因可赋予该超嗜热古菌对辛伐他汀的抗性。其碱基序列如SEQ ID NO.16所示。
优选地，所述制备方法还包括对所得选择性元件进行验证的步骤。
优选地，所述验证具体包括将所述选择性元件插入无痕敲除质粒pUS776TA1369中在E.coli DH5α中进行质粒扩增并测序验证，然后将其转入超嗜热古菌P.yayanosii A1验证其成功进行敲除实验。
第三方面，本发明提供一种所述选择性筛选标记HHP-TAC在嗜热微生物中的用途，该选择性筛选标记HHP-TAC可在嗜热微生物的原养型中直接进行分子遗传操作。
优选地，所述选择性筛选标记HHP-TAC中的高静水压力诱导型启动子用于控制蛋白的表达。
本发明构建的用于超嗜热微生物遗传操作的高压诱导型毒素-抗毒素元件，可以在原养型的超嗜热微生物中直接进行基因敲除的遗传操作工具并极大的扩大了负筛选标记的选择范围。同时该元件携带有高温可用的辛伐他汀抗性标记基因，使在高温下对其进行抗性筛选成为可能。丰富了超嗜热微生物遗传工具的种类，有助于对该类菌株进行功能基因组学研究。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
(1)压力诱导型启动子使用物理(压力)诱导，易于操作，应用成本低。
(2)毒素-抗毒素元件广泛分布在超嗜热微生物中，该遗传标记不存在高温失活的问题。而且同一微生物中存在多种毒素抗毒素元件，可以发展为不同的选择性标记。
(3)基于压力诱导的毒素-抗毒素元件可以直接在原养型菌株中进行遗传操作，排除了营养缺陷型基因的干扰。
附图说明
通过阅读参照以下附图对选择性元件实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1是选择性元件HHP-TAC构建说明图；
图2是pUS776TA1369无痕敲除质粒示意图；
图3是无痕敲除菌株Δ1369-基因组水平PCR验证结果图；其中，图A为目的基因PYCH_1369基因上下游区域间PCR片段分析，M为1kb DNA ladder；1,A1；2,Δ1369-；图B为目的基因PYCH_1369基因内部PCR片段分析，M为1kb DNA ladder；1,A1；2,Δ1369-；图C为鲁戈氏碘液法残余淀粉量分析，1,TRM含2‰(M/V)可溶性淀粉；2,菌株A1培养在含2‰(M/V)可溶性淀粉TRM培养基中；3,无痕敲除菌株Δ1369-培养在含2‰(M/V)可溶性淀粉TRM培养基中；4,TRM。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明所涉菌株均为公知菌株，公开情况具体如下：
超嗜热古菌P.yayanosii已在文献：《Pyrococcus yayanosii sp.nov.,anobligate piezophilic hyperthermophilic archaeon isolated from a deep-seahydrothermal vent》,2011中公开；
超嗜热古菌P.furiosus已在文献：《Pyrococcus furiosus sp.nov.represents anovel genus of marine heterotrophic archaebacteria growing optimally at 100℃》,1986中公开；
超嗜热古菌P.yayanosii A1已公开于文献：所述P.yayanosii A1菌株已经发表于《Genetic tools for the piezophilic hyperthermophilic archaeon Pyrococcusyayanosii》,2015；
实施例1、构建选择性元件HHP-TAC
选择性元件HHP-TAC构建说明书如图1；PCR扩增超嗜热古菌P.yayanosii A1中压力诱导型启动子Phhp元件488bp，超嗜热古菌P.furiosus的毒素基因PF0776(327bp)和抗毒素基因PF0775(324bp)；以及质粒pTS535的启动子区PhmtB和Pgdh(421bp)，以及P.furiosus的HMG-CoA还原酶基因1227bp，并使用融合PCR将其依次融合得到选择性元件HHP-TAC，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
实施例2、构建功能验证无痕敲除载体pUS776TA1369
在已获得过选择性元件HHP-TAC的基础上进行进一步修饰，过程如下：
(1)、对质粒pUC18进行PCR线性化改造，所用引物碱基序列如SEQ ID NO.3-4所示；
(2)、PCR扩增P.yayanosii A1中基因PYCH_01369上游片段PYCH1369-TA-up(890bp)所用引物碱基序列如SEQ ID NO.5-6所示，下游片段PYCH1369-TA-dw(656bp)所用引物碱基序列如SEQ ID NO.7-8所示以及目的片段PYCH1369-TA(820bp)所用引物碱基序列如SEQ ID NO.11-12所示；
(3)、PCR扩增选择性元件HHP-TAC所用引物碱基序列如SEQ ID NO.9-10所示，并使用重组酶按照上游片段PYCH1369-TA-up、下游片段PYCH1369-TA-dw、选择性元件HHP-TAC和目的片段PYCH1369-TA的顺序将其连接到线性化质粒pUC18上，得到功能验证无痕敲除质粒pUS776TA1369，碱基序列如SEQ ID NO.2所示；pUS776TA1369无痕敲除质粒示意图如图2所示；
(4)、将构建好的pUS776TA1369无痕敲除质粒在E.coli DH5α中进行质粒扩增并测序验证质粒已经构建正确。pUS776TA1369无痕敲除质粒序列如表2所示。将构建好的pUS776TA1369无痕敲除质粒，使用M13-47/48引物PCR扩增得到线性化敲除片段，转化至超嗜热古菌P.yayanosii A1中，通过辛伐他丁抗性正向筛选和高压反向筛选，进行功能的验证，所用引物见表1。
表1 pUS776TA1369无痕敲除质粒构建及鉴定的引物序列
表2 pUS776TA1369无痕敲除质粒序列说明
实施例3、实施效果
pUS776TA1369无痕敲除质粒具有自杀载体的特性，可以在大肠杆菌E.coli DH5α中复制，获得大量质粒。然后使用引物M13-47/48扩增得到线性化敲除片段，将获得的线性化敲除片段转化至超嗜热古菌P.yayanosii A1中，经过辛伐他汀抗性筛选阳性克隆子，提取总DNA进行PCR验证。然后转接至TRM培养基中高压诱导培养，筛选阳性克隆子无痕敲除菌株Δ1369-，进行PCR无痕敲除结果验证，验证结果如图3A.B所示。对鉴定为阳性的克隆子在含可溶性淀粉的培养基中进行培养，验证其对淀粉的降解能力，验证结果如图3C所示。
表明选择性元件HHP-TAC可以作为一种超嗜热古菌P.yayanosii A1基因选择元件进行遗传操作应用。
综上所述，本发明的选择性元件HHP-TAC能够在超嗜热古菌P.yayanosii A1菌株中高效的进行辛伐他丁抗性正向选择和高压诱导方向选择，该元件可作为超嗜热古菌的基因遗传操作应用于基因功能鉴定研究。本发明涉及的选择性元件HHP-TAC具有诸多效果：高压诱导表达，既可以用来表达毒性蛋白也可以用来其他蛋白的控制性表达，可用于蛋白的过表达纯化等；毒素-抗毒素元件广泛分布在超嗜热微生物中，该遗传标记不存在高温失活的问题。而且同一微生物中存在多种毒素抗毒素元件，可以发展为不同的选择性标记；基于压力诱导的毒素-抗毒素元件可以直接在原养型菌株中进行遗传操作，排除了营养缺陷型基因的干扰。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (10)

1.一种热稳定的毒素-抗毒素选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC包含来自于超嗜热古菌的高静水压力诱导型启动子、热稳定性毒素基因和抗毒素基因、组成型启动子以及HMG-CoA还原酶基因。
2.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述组成型启动子包括组成型启动子PhmtB和组成型启动子Pgdh。
3.根据权利要求2所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述组成型启动子PhmtB和组成型启动子Pgdh来源于质粒pTS535。
4.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述诱导型启动子是来自于超嗜热古菌Pyrococcus yayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp；热稳定性毒素和抗毒素的编码基因分别来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因和PF0775基因。
5.根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
6.一种如权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用融合PCR扩增技术，依次将高静水压力诱导型启动子与热稳定性毒素基因融合，组成型启动子与抗毒素基因融合，以及组成型启动子与HMG-CoA还原酶基因融合，获得所述选择性筛选标记HHP-TAC。
7.根据权利要求6所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，所述高静水压力诱导型启动子为来自于超嗜热古菌Pyrococcus yayanosii的高静水压力诱导型启动子Phhp。
8.根据权利要求6所述的选择性筛选标记HHP-TAC的制备方法，其特征在于，所述热稳定性毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0776基因；所述抗毒素基因为来自于超嗜热古菌P.furiosus的PF0775基因。
9.一种根据权利要求1所述的选择性筛选标记HHP-TAC在嗜热微生物中的用途，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC可在嗜热微生物的原养型中直接进行分子遗传操作。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述选择性筛选标记HHP-TAC中的高静水压力诱导型启动子用于控制蛋白的表达。
CN201811166948.9A 2018-09-29 2018-09-29 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件 Pending CN109371046A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811166948.9A CN109371046A (zh) 2018-09-29 2018-09-29 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811166948.9A CN109371046A (zh) 2018-09-29 2018-09-29 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109371046A true CN109371046A (zh) 2019-02-22

Family

ID=65403710

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811166948.9A Pending CN109371046A (zh) 2018-09-29 2018-09-29 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109371046A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690674A (zh) * 2020-06-23 2020-09-22 上海交通大学 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件
CN117511982A (zh) * 2023-11-09 2024-02-06 中国科学院南海海洋研究所 内源性接合质粒中成瘾性毒素-抗毒素系统的敲除方法及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999041392A1 (fr) * 1998-02-13 1999-08-19 Champagne Moet & Chandon Acide nucleique comprenant la sequence d'un promoteur inductible par un stress et une sequence d'un gene codant pour une stilbene synthase
WO2000039275A2 (en) * 1998-12-24 2000-07-06 Florence Medical Ltd. Multiple shear stress responsive elements (ssre) and methods of use thereof
WO2011107808A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 The University Of Warwick Molecular engineering of a floral inducer for crop improvement
CN106676119A (zh) * 2015-11-05 2017-05-17 中国科学院微生物研究所 细菌无痕遗传操作载体及其构建方法与应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999041392A1 (fr) * 1998-02-13 1999-08-19 Champagne Moet & Chandon Acide nucleique comprenant la sequence d'un promoteur inductible par un stress et une sequence d'un gene codant pour une stilbene synthase
CN1375011A (zh) * 1998-02-13 2002-10-16 莫特和尚东香帕尼公司 含有压力诱导型启动子序列和二苯乙烯合成酶编码基因序列的核酸
WO2000039275A2 (en) * 1998-12-24 2000-07-06 Florence Medical Ltd. Multiple shear stress responsive elements (ssre) and methods of use thereof
WO2011107808A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 The University Of Warwick Molecular engineering of a floral inducer for crop improvement
CN106676119A (zh) * 2015-11-05 2017-05-17 中国科学院微生物研究所 细菌无痕遗传操作载体及其构建方法与应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690674A (zh) * 2020-06-23 2020-09-22 上海交通大学 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件
CN117511982A (zh) * 2023-11-09 2024-02-06 中国科学院南海海洋研究所 内源性接合质粒中成瘾性毒素-抗毒素系统的敲除方法及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hugenholtz et al. Novel division level bacterial diversity in a Yellowstone hot spring
Lee et al. Identification of a new regulator in Streptococcus pneumoniae linking quorum sensing to competence for genetic transformation
Husseiny et al. Rapid method for the construction of Salmonella enterica serovar Typhimurium vaccine carrier strains
van Wolferen et al. Molecular analysis of the UV‐inducible pili operon from Sulfolobus acidocaldarius
CN109371046A (zh) 一种用于嗜热微生物遗传操作的诱导型毒素-抗毒素元件
Okada et al. The sigma factor RpoN (σ54) is involved in osmotolerance in Listeria monocytogenes
Chilton Agrobacterium. A memoir
Durante-Rodríguez et al. The standard European vector architecture (SEVA) plasmid toolkit
CN104087610A (zh) 穿梭质粒载体及其构建方法和应用
Byrne et al. Transcriptional regulation of the virR operon of the intracellular pathogen Rhodococcus equi
Kesik-Brodacka et al. A novel system for stable, high-level expression from the T7 promoter
Cohen et al. Control of competence in Vibrio fischeri
CN104387460A (zh) 一种抗水稻褐飞虱的杀虫蛋白及其编码基因与应用
Monday et al. A 12-base-pair deletion in the flagellar master control gene flhC causes nonmotility of the pathogenic German sorbitol-fermenting Escherichia coli O157: H− strains
Lacap et al. Thermophilic microbial mats in a tropical geothermal location display pronounced seasonal changes but appear resilient to stochastic disturbance
Fiorentino et al. MarR-like transcriptional regulator involved in detoxification of aromatic compounds in Sulfolobus solfataricus
Lu et al. Using overlap‐extension PCR technique to fusing genes for constructing recombinant plasmids
Shimada et al. Novel regulator P gr R for switch control of peptidoglycan recycling in E scherichia coli
Jiang et al. Citrate utilization under anaerobic environment in Escherichia coli is under direct control of Fnr and indirect control of ArcA and Fnr via CitA‐CitB system
Tittes et al. Cellular and genomic properties of Haloferax gibbonsii LR2-5, the host of euryarchaeal virus HFTV1
Chernov et al. Extracellular membrane vesicles and phytopathogenicity of Acholeplasma laidlawii PG8
Eisfeld et al. A LysR‐type transcriptional regulator controls the expression of numerous small RNAs in Agrobacterium tumefaciens
Mongkolsuk et al. The repressor for an organic peroxide‐inducible operon is uniquely regulated at multiple levels
Mohapatra et al. Methylation‐dependent transcriptional regulation of crescentin gene (creS) by GcrA in Caulobacter crescentus
MacLellan et al. Identification of a megaplasmid centromere reveals genetic structural diversity within the repABC family of basic replicons

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination