CN109362872A - 一种蓝莓保鲜剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种蓝莓保鲜剂及其制备方法和应用，该保鲜剂由0.03％‑0.5％五倍子提取物、0.5％‑1.0％抗坏血酸和1.0％‑2.0％壳聚糖组成，pH为2.0‑6.0之间。本发明所提供的保鲜剂能够显著抑制蓝莓灰葡萄孢霉，有效缓解蓝莓采后膜脂过氧化，保持蓝莓细胞膜完整性，使蓝莓的贮藏时间由常规冷藏的20天延长至50天以上，蓝莓腐烂率降至10％以内，失重率控制在5％以内，实现蓝莓相对较长时间、高品质的保鲜贮藏。本发明的蓝莓保鲜剂使用安全，处理后的蓝莓无任何有毒有害物质，具有高效安全环保的特点。
Description
技术领域
本发明涉及生鲜水果绿色防腐保鲜技术领域，具体涉及一种蓝莓的绿色安全保鲜剂及其制备方法和应用。
背景技术
蓝莓果实风味独特，且含有丰富的花青素、类黄酮、维生素C、叶酸、鞣花酸等多种生理活性物质，具有抗衰老、降血压、抗氧化、抗癌等保健功效，堪称五大健康水果之一，备受消费者青睐，具有十分广阔的市场前景。然而蓝莓采收期高温多雨，果实含水量高，果皮薄，采后极易腐烂，其损失率高达20％～40％。再加上蓝莓在储藏过程中易受到病原真菌的侵袭，致使其结构、营养和生理生化反应发生急剧变化，果实品质下降，货架期缩短，这严重制约了蓝莓产业的发展，给蓝莓的贮藏及流通带来了很大困难。因此，做好蓝莓采后防害保鲜工作对减少蓝莓损失具有重要意义。
为了缓解蓝莓果实采后腐烂变质，目前常用的保鲜技术主要有采前喷施抗菌剂、采后二氧化氯水溶液浸泡、高压静电场处理、CO2气调辐照保鲜等。喷施抗菌剂和二氧化氯水溶液浸泡能够有效控制蓝莓附带的酵母菌和霉菌，然而蓝莓无明显外果皮，采后果实多直接食用，化学抗菌剂由于不易去除而存在安全隐患；高压静电场处理保鲜技术以其能耗低、卫生、容易操作等特点而具有广阔的市场前景，然后该处理技术电压较高，具有一定的危险性，对环境湿度要求较高，处理结果可重复性差；而CO2气调辐照保鲜技术具有设施费用昂贵、能耗大、成本高等缺点。因此，开发一种价格低廉，效果显著，安全环保的保鲜剂是目前研究的热点，具有重要的经济意义。
灰葡萄孢霉是蓝莓采后最主要的致病菌之一，蓝莓带该菌概率高达81.85％。尤其是在雨天过后，湿度大的条件下，灰霉病病菌易迅速繁殖、流行，引起蓝莓灰霉病，导致蓝莓采后腐败。因此，通过抑制蓝莓灰葡萄孢霉得繁殖可以实现蓝莓防害保鲜的目的。二氧化硫熏蒸法被证实能有效杀死灰葡萄孢霉、青霉等致腐菌，降低蓝莓采后贮运过程中灰霉病发病率。但残留的二氧化硫具有一定的毒性，过多摄入对人体有害,且国内外对食品中的SO2残留量都有严格的限制。植物源抑菌物质以其安全、低毒、高效等特点成为化学保鲜剂的良好替代品，已成为当下研究的热点和发展趋势。
五倍子(Galla chinensis)，又名文蛤、白虫仓、木附子等，是绵蚜科昆虫角倍蚜或者蛋倍蚜在其寄主漆树科植物盐肤木、青麸杨或红麸杨等树上不同部位形成的虫瘿统称，具有抗菌、抗氧化和收敛作用。五倍子除作为中药使用外，以其为基础原料的各种化工产品被广泛应用于医药、冶金、食品、航天等领域。五倍子的化学组分主要包括单宁、没食子酸、五倍子油、黄酮、有机酸、树脂、蛋白质、脂肪、淀粉、蜡质等，其中五倍子单宁(ChineseGallotannins,CGTs)是五倍子的主要功能成分和含量最多的成分，含量可达50％-70％。五倍子单宁又称单宁酸，是多种聚没食子酰葡萄糖酯的混合物，存在多种异构体，可以通过使蛋白质特别是酶类沉淀而发挥抗细菌和抗病毒的作用。Tian等研究表明五倍子单宁能有效抑制金黄色酿脓葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等致病细菌；但对酿酒酵母、米根霉、木霉菌等真菌却无抑制效果(Tian,F.,et al.Antioxidant and antimicrobialactivities of consecutive extracts from Galla chinensis:The polarity affectsthe bioactivities.Food Chemistry,2009(1).113(1):173-179；Tian,F.,etal.Identification and structure–activity relationship of gallotanninsseparated from Galla chinensis.LWT-Food Science and Technology,2009(2).42(7):1289-1295)。江凯研究发现五倍子单宁对李斯特杆菌等细菌以及苹果青霉等真菌有一定抑菌效果(江凯.五倍子单宁的提取纯化及其抗菌、抗突变作用研究.陕西师范大学硕士学位论文,2011)。没食子酸(又称五倍子酸，Gallic acid)是五倍子的另一主要有效成分，临床研究表明其同样具有抗菌抗病毒作用，广泛应用于医药、食品和农业等领域。
目前关于五倍子对蓝莓病原菌灰葡萄孢霉的抑制的研究还未见相关报道。本发明通过研究五倍子提取物对灰葡萄孢霉的抑制作用，旨在开发一种以五倍子提取物为主要成分的绿色保鲜剂，用于蓝莓采后病害防治，大幅延长蓝莓采后保鲜期，提升品质。
发明内容
针对蓝莓采后病害防治现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种蓝莓保鲜剂。该保鲜剂由五倍子提取物、抗坏血酸和壳聚糖组成，其能够有效抑制引发蓝莓采后腐败的主要病原菌灰葡萄孢霉，从而发挥蓝莓防害保鲜的作用。
在一些优选方式中，所述保鲜剂的组分中，以重量百分比计，含五倍子提取物0.03％-0.5％、抗坏血酸0.5％-1.0％、壳聚糖1.0％-2.0％。
在一些优选方式中，所述保鲜剂的pH为2.0-6.0。
所述蓝莓保鲜剂的制备方法按照以下步骤进行：(1)五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％乙醇室温超声提取，离心，取上清液旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得到五倍子提取物；(2)按重量百分比分别向蒸馏水中加入五倍子提取物、抗坏血酸、壳聚糖，进行溶解；(3)混合溶液充分搅拌混匀后，调节pH至2.0-6.0之间，得到所述蓝莓保鲜剂。
在一些优选方式中，上述保鲜剂制备方法中，五倍子提取料液比为1:10-1:20(W/V)，超声波处理时间为0.5-2小时，真空旋转蒸发的温度为60℃以下。
在一些优选方式中，所述保鲜剂制备时可用0.5％-2％的Tween80进行增溶。
另一方面，本方面提供一种所述的蓝莓保鲜剂处理蓝莓的方法，通过该处理方法，可以有效减低蓝莓果实腐烂率，延长贮藏期至50天以上，使蓝莓腐烂率降至10％以内，失重率控制在5％以内，显著提高蓝莓品质。
在一些优选方式中，运用所述蓝莓保鲜剂处理蓝莓的方法包括以下步骤：(1)将采摘的新鲜蓝莓用清水冲洗，沥干待用；(2)将清洗后的蓝莓在所述保鲜剂溶液中浸泡，取出晾干装入带气孔的塑料盒中；(3)将保鲜剂处理过的蓝莓放入预冷库预冷后，低温保存。
在一些优选方式中，保鲜剂浸泡时间为1-2min，预冷库温度为1℃-5℃，预冷时间为2-4小时，低温保存温度为1℃-5℃。
另一方面，本方面提供一种保鲜剂在制备抑制蓝莓上的灰葡萄孢霉的试剂的用途，其中，该保鲜剂由0.03％-0.5％五倍子提取物、0.5％-1.0％抗坏血酸和1.0％-2.0％壳聚糖组成，所述保鲜剂的pH为2.0-6.0。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明针对蓝莓采后贮藏容易腐烂、变色、出汁等问题，通过研究五倍子提取物以及五倍子提取物与抗坏血酸、壳聚糖复配使用对蓝莓采后腐败的主要病原菌灰葡萄孢霉的抑制作用，开发了一种以五倍子提取物为主成分的蓝莓绿色保鲜剂。本发明所述保鲜剂的pH值为2.0-6.0之间，并且为实现高效抑菌效果应现配现用。本发明的保鲜剂具有高效安全环保的特点，其主要原料源自中药材，使用安全，处理后的蓝莓无任何有毒有害物质。
(2)本发明提供了一种蓝莓保鲜方法，通过将蓝莓在保鲜剂中短时间浸泡，预冷库预冷之后进行冷藏即可实现蓝莓的保鲜保存。该保鲜方法操作简单，处理时间短，能有效地缓解蓝莓采后膜脂过氧化，保持蓝莓细胞膜完整性，使蓝莓的贮藏时间由常规冷藏的20天延长至50天以上，蓝莓腐烂率降至10％以内，失重率控制在5％以内，实现了蓝莓相对较长时间、高品质的保鲜贮藏。
(3)本发明所开发的保鲜剂以五倍子提取物为主要成分，通过本发明的研究表明，五倍子主要成分之一的没食子酸在蓝莓防腐保鲜中没有发挥抑菌作用，可能是五倍子单宁，或者是五没食子酰基葡萄糖(β-PGG)等多组分多种因素共同作用的结果。并且，抗坏血酸和壳聚糖的复配使用增强了五倍子提取物的抑菌效果，使得该保鲜剂能够产生显著的蓝莓防腐保鲜效果。
附图说明
图1是五倍子提取物对灰葡萄孢霉的抑制率。
图2是pH对五倍子提取物抑菌稳定性的影响。
图3是温度对五倍子提取物抑菌稳定性的影响。
图4是辐照时间对五倍子提取物抑菌稳定性的影响。
图5是保鲜剂对蓝莓果实腐烂率和失重率的影响，其中，(A)图表示蓝莓果实腐烂率，(B)图表示蓝莓果实失重率。
图6是保鲜剂对蓝莓果肉膜通透性和膜脂过氧化的影响，其中(A)图表示对膜通透性的影响，(B)图表示对膜脂过氧化的影响。
图7是保鲜剂处理对蓝莓抗病性相关酶活性的影响，其中(A)图表示对苯丙氨酸解氨酶活性的影响，(B)图表示多酚氧化酶活性的影响。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。若无特别指明，实施例采用的方法为本领域通用技术。
实施例中选用的五倍子，采至湖南张家界；蓝莓品种为“莱格西”，采摘于采自浙江省杭州市安吉县“森之蓝”种植基地。
实施例1五倍子提取物、壳聚糖、抗坏血酸对灰葡萄孢霉的抑制
1、五倍子提取物的制备
取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％(V/V)乙醇，料液比1:15(W/V)室温超声提取(功率300W)1h后，离心10min，取上清液50℃旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得五倍子提取物。
2、五倍子提取物、壳聚糖、抗坏血酸对灰葡萄孢霉的抑制试验
供试菌种及试剂：灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)于本实验室分离自所采摘的蓝莓，壳聚糖和抗坏血酸为商业途径购买。
培养基及培养条件：采用PDA培养基，28℃恒温培养6d。
抑菌效果实验：将灰葡萄孢霉用PDA培养基活化后挑取菌苔，用无菌水制成菌悬液备用。用打孔器将吸水性强的滤纸制成直径为1cm的滤纸片，滤纸片经干热灭菌后分别浸泡在五倍子提取液、壳聚糖溶液和抗坏血酸溶液中，浸泡4h后晒干备用。将固体PDA培养基熔化后倒入培养基，冷却凝固后加入0.1mL菌悬液并涂布均匀，然后将浸有上述溶液的滤纸片贴在含菌培养皿上，并用浸有无菌水的滤纸片做对照。经以上处理的培养皿在28℃恒温培养6d，测量抑菌圈直径。
表1五倍子提取液、壳聚糖、抗坏血酸、没食子酸的抑菌效果
上述结果显示，五倍子提取物对灰葡萄孢霉具有较强的抑制效果，而壳聚糖和抗坏血酸对灰葡萄孢霉均无抑制效果。
为了确认五倍子提取物中发挥抑菌效果的活性物质，研究了五倍子主要成分之一的没食子酸(商业购买)对灰葡萄孢霉的抑菌效果。结果显示，没食子酸对灰葡萄孢霉并无抑制效果，说明五倍子提取物中发挥抑菌效果的物质不是没食子酸。
实施例2不同浓度五倍子提取物的抑菌效果
五倍子提取物溶于10％Tween80中充分乳化。待融化的PDA培养基冷却到50℃左右，加入一定体积的五倍子悬浮液，充分振荡混合后倒平板，使平板终浓度为37.5μL/mL、75μL/mL、150μL/mL、300μL/mL、和600μL/mL。以不添加五倍子提取物的培养基平板为对照。用无菌打孔器在培养7d的病原菌平板上打取直径为6mm菌块放在PDA平板(直径90mm)中央。置于28℃生化培养箱中培养6d，观察抑菌效果。采用十字交叉法测量菌落直径并计算抑制率。每个浓度梯度3个平板，试验重复3次。抑制率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-6mm)×100。以抑制率100％的最低菌液浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。由图1可知，五倍子提取物对灰葡萄孢霉的MIC为300μL/mL。
实施例3 pH对五倍子提取物抑菌效果的影响
利用乙酸调节五倍子提取物pH值为2、4、6、8、10、12，分别对比了不同pH的五倍子提取物对灰葡萄孢霉的抑制效果，实验过程如实施例1所述。
从图2可以看出，pH对五倍子提取物的抑菌活性影响较大，随着pH值逐渐增大，五倍子提取物对抑菌圈直径逐渐降低，在酸性条件下五倍子提取物的抑菌活性较强，而在碱性条件，五倍子提取物对抑菌活性基本丧失。这是由于五倍子提取物中某些含有羧基、酚羟基类的化合物随着外界环境pH值的增大，部分羧基、酚羟基均会发生不同程度的解离，使其原来的结构遭到破坏，因此酸性条件更有利于五倍子提取物发挥抑菌效果。
据悉，五倍子单宁是一种易水解的多酚化合物，其能在酸性、碱性条件下水解产生没食子酸、五没食子酰基葡萄糖(β-PGG)等中间产物，这些中间产物之间存在相互转化的可能，导致在不同的pH条件下，五倍子单宁、没食子酸、β-PGG的含量均呈现相应的变化。
结合实施例1的实验结果，我们推测五倍子提取物中发挥抑菌作用的物质不是没食子酸，可能是五倍子单宁，或者是多组分多种因素共同作用的结果，具体是什么组分起到了抑菌作用以及其抑菌机理还有待进一步研究。
实施例4温度对五倍子提取物抑菌效果的影响
以灰葡萄孢霉的抑菌圈直径为检测对象，测定不同温度下五倍子提取物的抑菌活性，通过图3可以看出，随着温度的升高，五倍子提取物的抑菌活性整体呈下降趋势，但仅下降了26.32％，五倍子提取物随着温度的升高部分降解，但由于处理时间短，整体下降趋势不明显。短时间内高温处理对五倍子提取物的活性有一定影响，而长时间的高温处理则会因导致五倍子中的活性物质降解，结构改变而导致其抑菌活性的降低。为保证五倍子提取物的抑菌活性，其提取温度或使用温度应低于60℃。
实施例5辐照对五倍子提取物抑菌效果的影响
辐照时间对五倍子提取物抑菌效果的影响如图4显示，随着辐照时间的增加，抑菌圈直径呈下降趋势，尤其在连续光照3天以后，抑菌圈直径下降更为明显。这是由于五倍子提取物中含有的单宁类、没食子酸等物质，在不间断的光照下的吸光值下降，导致其稳定性下降，而影响其抑菌效果。五倍子提取液在使用时做到现用现配，避免长时间曝光放置。
实施例6以五倍子提取物为主要成分的保鲜剂对灰葡萄孢霉的抑制
1、保鲜剂的制备
按照重量百分比，将五倍子提取物、抗坏血酸、壳聚糖于蒸馏水中溶解，用2％Tween80增溶，搅拌混匀后，用乙酸调节pH至4.0。
2、不同重量百分比的保鲜剂的抑菌实验
将配制而成的不同重量百分比的保鲜剂分别进行灰葡萄孢霉抑菌实验，并以五倍子提取物为对照，结果如下表所示：
表2不同配比保鲜剂的抑菌效果
从结果可以看出，抗坏血酸、壳聚糖与五倍子提取物的复配使用显著提高了五倍子提取物的抑菌活性。五倍子单宁具有强还原性，抗坏血酸的加入对其起到了保护作用。壳聚糖是一种良好的成膜剂，可以在水果表面形成一层相对致密的保护膜，隔绝大部分空气，抑制水果的呼吸代谢。五倍子提取物与抗氧化剂以及成膜剂相互协同，对灰葡萄孢霉产生了显著的防腐抗菌能力，从而达到对蓝莓的防腐保鲜。
实施例7一种蓝莓保鲜剂对蓝莓的保鲜方法
一种蓝莓保鲜剂应用于蓝莓保鲜的方法，按以下步骤进行：
1、五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％(V/V)乙醇，料液比1:15(W/V)室温超声提取(功率300W)1h后，离心10min，取上清液50℃旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得五倍子提取物。
2、蓝莓绿色保鲜剂的制备：五倍子提取物0.1％，抗坏血酸0.5％，壳聚糖1.0％，蒸馏水余量，用0.5％Tween80增溶，搅拌混匀后，调节乙酸pH至6.0。
3、处理方法：选择成熟度相对一致(8～9成熟)，大小均一，无机械伤、无病虫害的新鲜蓝莓,于清水下冲洗，沥干后，在保鲜剂溶液中浸泡1min，取出晾干后，装入带气孔的塑料盒中储藏。在4℃的冷库预冷3h后，置于4℃温度下冷藏。每隔10天检查果实发霉腐烂情况，直至贮藏结束。
进一步地，以不使用保鲜剂的贮藏方法作为对照，其处理方式如下；
选择成熟度相对一致(8～9成熟)，大小均一，无机械伤、无病虫害的新鲜蓝莓果实，于清水下冲洗，沥干后，装入带气孔的塑料盒中储藏。在4℃的冷库预冷3h后，置于4℃温度下冷藏。每隔10d检查果实发霉腐烂情况，直至贮藏结束。
4、按照下述方法对处理组和对照的蓝莓果实分别进行检测，取样时间为第0d、10d、20d、30d、40d、50d、60d和70d，其中：
(1)果实腐烂率测定：果实腐烂率(％)＝腐烂果实数/总果实数×100％，烂果是指果实表面至少有一处发生汁液外漏、软化或腐烂现象。
(2)失重率：采用称重法测定，用样品的初始重量减去贮藏过程中每次称得的重量，该差值与样品的初始重量之比，即为失重率，单位用％表示。
(3)果肉膜透性测定：通过测定相对电导率来研究果肉膜透性。切取1mm厚蓝莓的薄片，混匀后取20片，共计3.0g，置于25mL试管中，加入25.0mL去离子水，在摇床上震荡30min后，用电导率仪测定溶液电导率P1；测定电导率后，将溶液煮沸10min，冷却至室温，加水至原刻度，用电导率仪测定溶液电导率P2；测定去离子水电导率P0。按下式计算相对电导率，表示果肉膜透性。
P＝(P1-P0)/(P2-P0)×100％
(4)丙二醛含量(MDA)的测定：通过MDA含量变化来表征保鲜剂对蓝莓膜脂过氧化的影响。称取1g蓝莓冻样于10mL离心管中，加入5mL 100g/L的TCA溶液，于4℃条件下10000r/min离心20min，收集上清液。取2.0mL上清液(空白对照加入2.0mL 100g/L TCA溶液)，加入2.0mL 0.67％硫代巴比妥酸溶液，混合后沸水浴20min，分别测定450、532、600nm波长处的吸光值。
(5)果肉苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定：3mL反应液包括1.5mmol/L抗坏血酸1mL，0.1875mmol/L EDTA-Na l.6mL，1mmol/L，H2O2 0.3mL和0.1mL的酶液。以加入H2O2开始,记录1min内290nm处光吸收值的变化。每分钟变化0.01表示一个酶活单位(U)。
(6)果肉多酚氧化酶(PPO)定活性测定：反应体系包含：2.9mL 0.1mol邻苯二酚、0.1mL上清酶液，混匀。15s内放入紫外分光光度计中测3min内420nm吸光度的变化，以不加底物邻苯二酚的反应液为对照，每分钟变化0.01表示一个酶活单位(U)。
测定结果如图5、6和7所示。可以看出，随着贮藏时间的延长，蓝莓果实腐烂率和失重率逐渐上升，品质逐渐下降，本发明方法能很好的降低果实腐烂率及失重率，贮藏至30d，一般贮藏方法果实腐烂率达到13.26％，而本发明方法果实尚未发生腐烂；延长贮藏期至50d，一般贮藏方法果实腐烂率达到23.00％，而使用本发明可使腐烂率降至10％以内。同时本方法能很好地抑制蓝莓贮藏过程中水分的流失，使蓝莓失重率控制在5％以内；本发明的保鲜剂及保鲜方法，能有效地缓解蓝莓采后膜脂过氧化，保持蓝莓细胞膜完整性；此外，本发明还可显著(P<0.05)提高蓝莓采后自身抗病性相关苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶的活性,有效提高蓝莓抗病性，延长贮藏时间。综上所述，应用本发明所述的保鲜剂能明显抑制蓝莓采后腐烂失水，缓解膜脂过氧化，提高蓝莓抗病性，保持蓝莓的贮藏品质。
实施例8一种蓝莓保鲜剂对蓝莓的保鲜方法
一种蓝莓保鲜剂应用于蓝莓保鲜的方法，按以下步骤进行：
1、五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％(V/V)乙醇，料液比1:20(W/V)室温超声提取(功率300W)2h后，离心10min，取上清液45℃旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得五倍子提取物。
2、蓝莓绿色保鲜剂的制备：五倍子提取物0.03％，抗坏血酸1.0％，壳聚糖2.0％，蒸馏水余量，用1.0％Tween80增溶，搅拌混匀后，用乙酸调节pH至2.0。
3、蓝莓保鲜处理方法：选择成熟度相对一致(8～9成熟)，大小均一，无机械伤、无病虫害的新鲜蓝莓,于清水下冲洗，沥干后，在保鲜剂溶液中浸泡2min，取出晾干后，装入带气孔的塑料盒中储藏。在1℃的冷库预冷2h后，置于1℃温度下冷藏。每隔10天检查果实发霉腐烂情况，直至贮藏结束。
经实验检测可达到实施例7的技术效果，此处不再一一赘述。
实施例9一种蓝莓保鲜剂对蓝莓的保鲜方法
一种蓝莓保鲜剂应用于蓝莓保鲜的方法，按以下步骤进行：
1、五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％(V/V)乙醇，料液比1:10(W/V)室温超声提取(功率300W)0.5h后，离心10min，取上清液60℃旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得五倍子提取物。
2、蓝莓绿色保鲜剂的制备：五倍子提取物0.5％，抗坏血酸1.0％，壳聚糖2.0％，蒸馏水余量，用2.0％Tween80增溶，搅拌混匀后，用乙酸调节pH至4.0。
3、蓝莓保鲜处理方法：选择成熟度相对一致(8～9成熟)，大小均一，无机械伤、无病虫害的新鲜蓝莓,于清水下冲洗，沥干后，在保鲜剂溶液中浸泡1.5min，取出晾干后，装入带气孔的塑料盒中储藏。在5℃的冷库预冷4h后，置于5℃温度下冷藏。每隔10天检查果实发霉腐烂情况，直至贮藏结束。
经实验检测可达到实施例7的技术效果，此处不再一一赘述。
实施例10一种蓝莓保鲜剂对葡萄和黑布李的保鲜方法
一种蓝莓保鲜剂应用于葡萄和黑布李保鲜的方法，按以下步骤进行：
1、五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％(V/V)乙醇，料液比1:10(W/V)室温超声提取(功率300W)0.5h后，离心10min，取上清液60℃旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得五倍子提取物。
2、蓝莓绿色保鲜剂的制备：五倍子提取物0.5％，抗坏血酸1.0％，壳聚糖2.0％，蒸馏水余量，用2.0％Tween80增溶，搅拌混匀后，用乙酸调节pH至4.0。
3、处理方法：分别选择成熟度相对一致(8～9成熟)，大小均一，无机械伤、无病虫害的新鲜葡萄和和黑布李于清水下冲洗，沥干后，在保鲜剂溶液中浸泡1.5min，取出晾干后，装入带气孔的塑料袋中储藏。在4℃的冷库预冷3h后，置于4℃温度下冷藏。每隔10天检查果实发霉腐烂情况，直至贮藏结束。同时设置不用保鲜剂处理的对照组。
随着贮藏时间的延长，葡萄和黑布李果实腐烂率和失重率逐渐上升，品质逐渐下降。贮藏至30d，处理组葡萄果实腐烂率达到20.36％，黑布李果实腐烂率达到10.57％，果肉变软。两种水果失水明显，并且电导率与对照组相比无显著降低，即不能有效地缓解葡萄和黑布李膜脂过氧化。以上结果说明，该保鲜剂对葡萄和黑布李并没有产生明显的保鲜结果，具体原因有待进一步分析。
综合上述实施例，本发明所述的保鲜剂能明显抑制蓝莓采后腐烂失水，缓解蓝莓膜脂过氧化，显著提高蓝莓采后自身抗病性相关苯丙氨酸解氨酶和多酚氧化酶的活性而引起蓝莓抗病性增强，从而有效保持蓝莓的贮藏品质。
Claims (8)
1.一种蓝莓保鲜剂，其特征在于所述的蓝莓保鲜剂由0.03％-0.5％五倍子提取物、0.5％-1.0％抗坏血酸和1.0％-2.0％壳聚糖组成。
2.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于所述保鲜剂的pH为2.0-6.0。
3.一种制备权利要求1所述的保鲜剂的方法，其特征在于按照以下步骤进行：(1)五倍子提取物的制备：取优质干燥五倍子去除内部虫卵后经高速打粉机粉碎完全，用75％乙醇室温超声提取，离心，取上清液旋转蒸干，得到的粗提物用水复溶后，用乙酸乙酯进行萃取，取乙酸乙酯层蒸干，得到五倍子提取物；(2)按重量百分比分别向蒸馏水中加入五倍子提取物、抗坏血酸、壳聚糖，进行溶解；(3)混合溶液充分搅拌混匀后，调节pH至2.0-6.0之间，得到所述蓝莓保鲜剂。
4.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于，所述保鲜剂制备时五倍子提取料液比为1:10-1:20(W/V)，超声波处理时间为0.5-2小时，真空旋转蒸发的温度为60℃以下。
5.根据权利要求1所述的保鲜剂，其特征在于所述保鲜剂制备时可用0.5％-2％的Tween80进行增溶。
6.一种应用权利要求1所述的蓝莓保鲜剂处理蓝莓的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将采摘的新鲜蓝莓用清水冲洗，沥干待用；(2)将清洗后的蓝莓在所述保鲜剂溶液中浸泡，取出晾干装入带气孔的塑料盒中；(3)将保鲜剂处理过的蓝莓放入预冷库预冷后，低温保存。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述保鲜剂浸泡时间为1-2min，预冷库温度为1℃-5℃，预冷时间为2-4小时，低温保存温度为1℃-5℃。
8.一种保鲜剂在制备抑制蓝莓上的灰葡萄孢霉的试剂的用途，其中，该保鲜剂由0.03％-0.5％五倍子提取物、0.5％-1.0％抗坏血酸和1.0％-2.0％壳聚糖组成，所述保鲜剂的pH为2.0-6.0。
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