CN109316472A - 一种兽用多种维生素口服液的制备方法 - Google Patents

一种兽用多种维生素口服液的制备方法 Download PDF

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Abstract

一种兽用多种维生素口服液的制备方法，涉及生物制剂技术领域，依次进行：A种子液制备；B发酵罐放大；玉米酶解混合物发酵，得到酵母发酵的混合液体；C离心固液分离：酵母发酵的混合液体进行固液分离，离心后得到上清和沉淀，备用；D离心后的上清液灭菌、检查和罐装。本发明的有益效果是：采用生物酶解技术，对玉米粉进行预处理，制备出玉米水解物，以玉米水解物为主要作为发酵培养基组分，配制发酵培养基，进行工业化深层发酵，能够显著提高维生素A、D2、B1的含量，维生素A≥2000IU/ml、维生素D2≥3000IU/ml、维生素B1≥0.6mg/ml。

Description

一种兽用多种维生素口服液的制备方法
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域，进一步是一种兽用多种维生素口服液的制备方法。
背景技术
酵母菌（yeasts）是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，其细胞大小约为1～5μm×5～30μm，最长可达100μm。酵母菌含有蛋白质及氨基酸、B族维生素、矿物质、多糖和其它活性成分如麦角固醇、谷胱甘肽等而使发酵后的果蔬汁具有更丰富的营养，同时更容易吸收。酵母菌含有动物所需要的全部8种必需氨基酸，而且必需氨基酸的含量高于或接近FAO和WHO推荐氨基酸组成比例。酵母菌中VB含量相当丰富，并且酵母菌中的B族维生素一般都以磷酸酯类形式存在，故很容易被动物吸收。在饲料工业，中酵母主要作为蛋白质饲料使用，最早是用作反刍动物的蛋白质补充饲料(Carrer等，1944)。在维生素生产过程中，阿氏假囊酵母（Eremotheciuma shbyu）还用于维生素B12的工业生产；卡尔斯伯酵母则是维生素D最好的产生菌等。
现阶段，如何利用筛选出的酵母菌种，能够产生多种维生素，解决畜牧行业中液体多种维生素缺乏的问题，是亟待解决的问题。通过酵母菌发酵来生产维生素A、D2、B1，通过检测含量，筛选出最佳的发酵培养基，达到利用酵母菌生产多种维生素口服液的方法。能够更好的解决畜牧行业中对天然、绿色的维生素需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种兽用多种维生素口服液的制备方法，本发明充分结合了生物工程发酵转化技术，将酵母菌进行液体的深层发酵，制备出含有大量维生素A、D2、B1的多种维生素口服液产品。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种兽用多种维生素口服液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A种子液制备：制备种子培养基，进行灭菌后备用；挑取酵母单菌进行接种，摇床培养后得到种子液；所述种子培养基制作方法为：马铃薯140～160g加入350～400ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15～16g，蛋白胨9～11g与水990～1010mL混匀，调节pH值至7.1～7.3（调节pH值使用0.1mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L盐酸溶液，下同），在121℃温度下灭菌30min，形成种子培养基；所述接种方法为：挑取一个酵母单菌落接种至种子培养基装载量为200/500mL的容量瓶中，于36～38℃温度下、摇床转速为100rpm～120rpm，培养24h～48h制成种子液，备用；
B发酵罐放大：取玉米酶解混合物9～14%，豆饼粉8～12%，氯化钠1～1.5%，其余为水，调节pH值至7.0～7.5配制发酵培养基，在121℃温度下灭菌30min；当发酵培养基降温至37℃时，取种子液按照按照发酵液体积百分比为3%～5%的量进行接种，培养48h～60h，摇床转速为120rpm～150rpm，当pH值降低至5±0.2时，停止发酵，得到酵母发酵的混合液体；所述玉米酶解混合物的制作方法是：取玉米粉，按玉米粉与水重量比1:2～4加水，调节pH值至6.0～8.0，，反应温度：50～60℃，按玉米粉重量的1～2.5%加入酶，所述酶指中性蛋白酶和菠萝蛋白酶按1：1的比例混合，反应时间为6～10h，反应完毕后得到玉米酶解混合物；
C离心固液分离：酵母发酵的混合液体进行固液分离，离心后得到上清和沉淀，备用；
D离心后的上清液灭菌、检查和罐装：将步骤C离心得到的上清，进行巴氏灭菌后，检查维生素A、D2、B1含量，罐装后贴标签和包装。
进一步：
A步骤，所述种子液制备中，马铃薯150g加入385ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15.5g、蛋白胨10g，与水1000mL混匀，调节pH值至7.2，在121℃温度下灭菌30min；方法为：挑取一个酵母单菌落接种至种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于36～38℃、100rpm～120rpm摇床培养24h～48h制成种子液，备用。
C步骤中，所述固液分离采用三足式离心机，转速80～120rpm，时间5～10min。
本发明中：
蛋白胨可以是是普通的蛋白胨，包括牛骨蛋白胨和植物蛋白胨等。
本发明的有益效果是：本发明采用生物酶解技术，对玉米粉进行预处理，制备出玉米水解物。以玉米水解物为主要作为发酵培养基组分，配制发酵培养基，进行工业化深层发酵，能够显著提高维生素A、D2、B1的含量，维生素A≥2000IU/ml、维生素D2≥3000IU/ml、维生素B1≥0.6mg/ml。
多种维生素口服液能够满足家禽日常生长对维生素的需求，增强机体免疫力和减少应急反应等，是一种新型的兽用发酵多种维生素口服液。满足了畜牧行业对天然维生素的要求，而且酵母菌在发酵产生代谢产物的过程中，会产生大量生物活性酶、多种氨基酸等有效的生物活性物质，为畜牧行业提供优质的发酵型多种维生素口服液。其中富含多种维生素，如维生素A、D2、B1、多种微量元素等，这些物质可以作为天然的维生素源，对于缺乏维生素的畜禽有着十分明显功效，从而能够提高动物的免疫力，减少疾病的发生和抗生素的用量，创造更大的经济效益。此外，本产品是生物发酵产生的，具有酵母香味，能够起到诱食的功能，增加禽食欲，增产增收。本方法属于生物工程领域，能够利用微生物发酵分批转化技术，酶解处理和液体深层发酵相结合的方式，为畜牧行业健康发展提供更性价比高的产品，为行业发展创造更大效益。
以下根据相关试验资料说明本发明效果。
试验资料：
1、主要功效：快速补充多种维生素，维持畜禽的正常生理机能，改良机体的新陈代谢，促进畜禽恢复。
2、使用方法：将本品每吨水加入500ml，可以计算好总采食量集中投放药物。连用5-7天为一个疗程，如果症状没有改善，可以追加一个疗程，一般两个疗程，效果就十分显著。
3、典型案例：
（1）河南省博爱县月山镇蛋鸡场，210日龄，该鸡场的养殖规模是6000只，2018年9月底出现缺乏维生素D的症状，主要是蛋壳的硬度下降，产蛋率减少15%，鸡的采食量下降十分明显。该鸡场使用兽用多种维生素口服液第3天，就发现采食量明显增加，增加了20%，蛋壳硬度加强，产蛋率提高20%。使用兽用多种维生素口服液第7天后，采食量明显增加，增加了23%，蛋壳硬度恢复正常，产蛋率提高22%。
（2）河南省固始县城关镇鸡场，220日龄，该鸡场的养殖规模是7000只，2018年10月底出现缺乏维生素A的症状，主要表现为趾爪蜷缩，步态不稳。该鸡场使用兽用多种维生素口服液第4天，趾爪蜷缩，步态不稳得到明显改善，恢复率80%。使用兽用多种维生素口服液第6天后，趾爪蜷缩，步态不稳的症状恢复率达到98%。
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，并使本发明的上述目的、特征和有点能够更加明显易懂，下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。
附图说明
图1一种兽用发酵多种维生素口服液的制的工艺流程。在对各实施例的解读过程中，可参考图1。
具体实施方式
实施例1：
一种兽用多种维生素口服液的制备方法，包括以下步骤：
A种子液制备：制备种子培养基，进行灭菌后备用；挑取酵母单菌进行接种，摇床培养后得到种子液；所述种子培养基制作方法为：取马铃薯150g、加入360～390ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15.5g，蛋白胨10g与水1000mL混匀，调节pH值至7.2，121℃灭菌30min，形成种子培养基；所述接种方法为：挑取一个酵母单菌落接种至种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于36℃，100rpm摇床培养24h制成种子液，备用。
B发酵罐放大：
取玉米酶解混合物9%，豆饼粉8%，氯化钠1%，调节pH值至7.0，配制发酵培养基，121℃灭菌30min。当发酵培养基降温至37℃时，将种子液按照体积百分比为3%的量进行接种，培养48h，转速为120rpm，当pH值降低至5±0.2时，停止发酵，得到酵母发酵的混合液体。所述玉米酶解混合物的制作方法是：取玉米粉，按料水重量比1:2加水，调节pH值至6.0，反应温度：50℃，按玉米粉重量的1%加入酶，所述酶指中性蛋白酶和菠萝蛋白酶按1：1的比例混合，反应时间为6h，反应完毕后得到玉米酶解混合物。
C离心固液分离：发酵酵母菌混合液体进行固液分离，采用的是三足式离心机，转速80rpm。离心后得到上清和沉淀，备用。
D离心后的上清液灭菌、检查和罐装：将步骤C离心得到的上清，进行巴氏灭菌后，检查维生素A、D2、B1含量，维生素A为2050IU/ml、维生素D2为3033IU/ml、维生素B1为0.62mg/ml，罐装后贴标签和包装。
实施例2：
一种兽用多种维生素口服液的制备方法，包括以下步骤：
A种子液制备：制备种子培养基，进行灭菌后备用；挑取酵母单菌进行接种，摇床培养后得到种子液；所述种子培养基制作方法为：马铃薯150g、加入360～390ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15.5g，蛋白胨10g与水1000mL混匀，调节pH值至7.2，121℃灭菌30min，形成种子培养基；所述接种方法为：挑取一个酵母单菌落接种至种子培养基装载量为200mL/500mL的三角瓶中，于38℃、120rpm摇床培养48h制成种子液，备用。
B发酵罐放大：
取玉米酶解混合物14%，豆饼粉12%，氯化钠1.5%，调节pH值至7.5，配制发酵培养基，121℃灭菌30min。当发酵培养基降温至37℃时，将种子液按照体积百分比为5%的量进行接种，培养60h，转速为150rpm，当pH值降低至5±0.2时，停止发酵，得到酵母发酵的混合液体。所述玉米酶解混合物的制作方法是：取玉米粉，按料水重量比1:4加水，调节pH值至8.0，反应温度：60℃，按玉米粉重量的2.5%加入酶，所述酶指中性蛋白酶和菠萝蛋白酶按1：1的比例混合，反应时间为10h，反应完毕后得到玉米酶解混合物。
C离心固液分离：发酵灵芝菌混合液体进行固液分离，采用的是三足式离心机，转速120rpm。离心后得到上清和沉淀，备用。
D离心后的上清液灭菌、检查和罐装：将步骤C离心得到的上清，进行巴氏灭菌后，检查维生素A、D2、B1含量，维生素A为2013IU/ml、维生素D2为3077IU/ml、维生素B1为0.64mg/ml，罐装后贴标签和包装。
通过上述步骤所得的兽用发酵多种维生素口服液，维生素A≥2000IU/ml、维生素D2≥3000IU/ml、维生素B1≥0.6mg/ml。
本发明中，所述种子培养基制作物还可以为以下组合之一种：
（1）马铃薯140g加入350ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15g，蛋白胨9g，与水990mL混匀；
（2）马铃薯160g加入400ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖16g，蛋白胨11g，与水1010mL混匀；
（3）马铃薯150g加入385ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15.5g，蛋白胨10g，与水1000mL混匀。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种兽用多种维生素口服液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
A种子液制备：制备种子培养基，进行灭菌后备用；挑取酵母单菌进行接种，摇床培养后得到种子液；所述种子培养基制作方法为：马铃薯140～160g加入350～400ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15～16g，蛋白胨9～11g与水990～1010mL混匀，调节pH值至7.1～7.3，在121℃温度下灭菌30min，形成种子培养基；所述接种方法为：挑取一个酵母单菌落接种至种子培养基装载量为200/500mL的容量瓶中，于36～38℃温度下、摇床转速为100rpm～120rpm，培养24h～48h制成种子液，备用；
B发酵罐放大：取玉米酶解混合物9～14%，豆饼粉8～12%，氯化钠1～1.5%，其余为水，调节pH值至7.0～7.5配制发酵培养基，在121℃温度下灭菌30min；当发酵培养基降温至37℃时，取种子液按照按照发酵液体积百分比为3%～5%的量进行接种，培养48h～60h，摇床转速为120rpm～150rpm，当pH值降低至5±0.2时，停止发酵，得到酵母发酵的混合液体；所述玉米酶解混合物的制作方法是：取玉米粉，按玉米粉与水重量比1:2～4加水，调节pH值至6.0～8.0，，反应温度：50～60℃，按玉米粉重量的1～2.5%加入酶，所述酶指中性蛋白酶和菠萝蛋白酶按1：1的比例混合，反应时间为6～10h，反应完毕后得到玉米酶解混合物；
C离心固液分离：酵母发酵的混合液体进行固液分离，离心后得到上清和沉淀，备用；
D离心后的上清液灭菌、检查和罐装：将步骤C离心得到的上清，进行巴氏灭菌后，检查维生素A、D2、B1含量，罐装后贴标签和包装。
2.根据权利要求1所述的兽用多种维生素口服液的制备方法，其特征在于：A步骤，所述种子液制备中，马铃薯150g加入385ml水，煮30min过滤残渣，得到马铃薯液体，加入葡萄糖15.5g、蛋白胨10g，与水1000mL混匀，调节pH值至7.2，在121℃温度下灭菌30min。
3.根据权利要求1所述的兽用多种维生素口服液的制备方法，其特征在于：C步骤中，所述固液分离采用三足式离心机，转速80～120rpm，时间5～10min。
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