CN109315384A - 一种乳腺癌组织的转移及冻存方法 - Google Patents

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韩建红
甘仲霖
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Abstract

本发明属于活体组织转移技术领域，具体涉及一种乳腺癌组织的转移及冻存方法。针对乳腺癌组织在两地间转运时，常因保存不善的问题而影响了活组织标本的活性，本发明的技术方案是，包括如下步骤：[1]在冰上保存冷冻培养基，所述冷冻培养基为质量分数100％的胎牛血清；[2]将新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液中漂洗；[3]将经过步骤[2]漂洗的乳腺癌组织切成薄片，得到肿瘤组织片；[4]将步骤[3]得到的肿瘤组织片放入步骤[1]准备的冷冻培养基中，并进行转运。本发明还提供一种技术方案类似的乳腺癌细胞冻存方法。

Description

一种乳腺癌组织的转移及冻存方法
技术领域
本发明属于活体组织转移技术领域，具体涉及一种乳腺癌组织的转移及冻存方法。
背景技术
在生物实验研究中，常常涉及组织移植的操作，例如可以将乳腺癌组织移植到实验小鼠体内进行培养。乳腺癌活组织移植过程中组织标本的活性是一个影响移植成功率的重要因素之一。肿瘤组织一旦被从人体切割下来后，其内的细胞很快就会因为缺乏水，电解质，氧气等因素而死亡。
现有技术中，乳腺癌活组织切下时地点在医院，而进行移植实验的地点在实验室，乳腺癌组织在两个地点之间转运时，常因保存不善的问题而影响了活组织标本的活性。
发明内容
针对乳腺癌组织在两地间转运时，常因保存不善的问题而影响了活组织标本的活性，本发明提供一种乳腺癌组织的转移及冻存方法，其目的在于：在转运过程中维持乳腺癌组织的活性，避免由于活性丧失而影响后续的实验研究。
本发明采用的技术方案如下：
一种乳腺癌组织的转移方法，包括如下步骤：
[1]在冰上保存冷冻培养基，所述冷冻培养基为质量分数100％的胎牛血清；
[2]将新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液中漂洗；
[3]将经过步骤[2]漂洗的乳腺癌组织切成薄片，得到肿瘤组织片；
[4]将步骤[3]得到的肿瘤组织片放入步骤[1]准备的冷冻培养基中，并进行转运。
采用该技术方案后，利用胎牛血清提供近似体内的细胞外液的环境与营养成分。并且由于将乳腺癌组织切成薄片，可以减少组织内部细胞的缺血缺氧，有利于保持组织的湿润，防止脱水。其次，通过低温处理使得乳腺癌组织内的细胞代谢水平降低。综合上述效果，能够在转运期间最大程度地保持活组织标本的活性。
优选的，步骤[2]的漂洗过程进行两次。
优选的，肿瘤组织片为长2.5-3.5mm，宽1.8-2.2mm和厚度0.8-1.2mm的薄片。
优选的，步骤[4]中，冷冻培养基的体积至少为肿瘤组织片的十倍。
优选的，肿瘤组织片经过步骤[4]转运后，在使用前用磷酸缓冲盐溶液漂洗。
一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：
[1]在冰上用冻存管保存冷冻培养基，所述冷冻培养基为质量分数10％的二甲基亚砜和90％的胎牛血清；
[2]将新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液中漂洗；
[3]将经过步骤[2]漂洗的乳腺癌组织切成薄片，得到肿瘤组织片；
[4]将步骤[3]得到的肿瘤组织片放入步骤[1]准备的冷冻培养基中，并进行长期冻存。
采用该技术方案后，利用胎牛血清提供近似体内的细胞外液的环境与营养成分。并且由于将乳腺癌组织切成薄片，可以减少组织内部细胞的缺血缺氧，有利于保持组织的湿润，防止脱水。其次，通过低温处理使得乳腺癌组织内的细胞代谢水平降低。综合上述效果，能够在冻存期间最大程度地保持活组织标本的活性。
优选的，步骤[4]进行长期冻存的步骤为，将冻存管放入一个填满棉花的泡沫盒子里，直接放入-80℃冰箱里过夜，次日转入液氮中长期保存。
该优选方案中，通过一个填满棉花的泡沫盒子作为缓慢降温的容器，能够降低冷冻过程中温度的变化速率。
优选的，步骤[2]的漂洗过程进行两次。
优选的，肿瘤组织片为长2.5-3.5mm，宽1.8-2.2mm和厚度0.8-1.2mm的薄片。
优选的，步骤[4]中，冷冻培养基的体积至少为肿瘤组织片的十倍。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1.利用胎牛血清提供近似体内的细胞外液的环境与营养成分。并且由于
2.将乳腺癌组织切成薄片，可以减少组织内部细胞的缺血缺氧，有利于保持组织的湿润，防止脱水。
3.通过低温处理使得乳腺癌组织内的细胞代谢水平降低。
4.通过一个填满棉花的泡沫盒子作为缓慢降温的容器，能够降低冷冻过程中温度的变化速率。
综合上述效果，能够在转运或冻存期间最大程度地保持活组织标本的活性。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
实施例1
本实施例涉及一种乳腺癌组织的转移方法，其具体步骤如下：
1.准备一个冰盒，一个5ml组织冻存管，冻存管中加入冰冻培养基，冰冻培养基为质量分数100％的胎牛血清(不含青-链霉素)，将冻存管放置于冰上保存。胎牛血清的作用是提供近似体内的细胞外液的环境与营养成分。
2.将切下来的新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中漂洗两次。维持4℃低温的目的是降低细胞的代谢水平。
3.将肿瘤组织切成3mm×2mm×1mm大小的薄片，薄片的关键是薄，越薄越好，且整个过程要保持组织湿润。切成薄片可以减少内部细胞的缺血缺氧。使乳腺癌组织保持湿润，防止脱水。
4.将肿瘤组织片放入冰冻培养基中。培养基的体积至少是组织的10倍以上，在本实施例中大约10片肿瘤组织片对应于1ml冷冻培养基。
5.装有肿瘤组织片的冻存管放在冰盒中转运，1小时内转运至实验室内。该转移时间越短，组织的活性越好。
6.从冰冻培养基中取出肿瘤组织片，用4℃的磷酸缓冲盐溶液(PBS)漂洗两次后使用。经过该处理的乳腺癌细胞组织在进行移植手术等过程中，操作的时间越短，组织的活性越好，优选的，整个过程不超过30分钟。
实施例2
本实施例涉及一种乳腺癌组织的冻存方法，其具体步骤如下：
1.准备一个冰盒，一个5ml组织冻存管，冻存管中加入冰冻培养基，冰冻培养基为质量分数10％的二甲基亚砜(DMSO)+质量分数90％的胎牛血清(不含青-链霉素)，将冻存管放置于冰上保存。胎牛血清的作用是提供近似体内的细胞外液的环境与营养成分。
2.将切下来的新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中漂洗两次。维持4℃低温的目的是降低细胞的代谢水平。
3.将肿瘤组织切成3mm×2mm×1mm大小的薄片，薄片的关键是薄，越薄越好，且整个过程要保持组织湿润。切成薄片可以减少内部细胞的缺血缺氧。使乳腺癌组织保持湿润，防止脱水。
4.将肿瘤组织片放入冰冻培养基中。培养基的体积至少是组织的10倍以上，在本实施例中大约10片肿瘤组织片对应于1ml冷冻培养基。
5.将冻存管放入一个填满棉花的泡沫盒子里(相当于一个缓慢降温的容器)，直接放入-80℃冰箱里过夜，次日转入液氮中长期保存。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。

Claims (10)

1.一种乳腺癌组织的转移方法，其特征在于，包括如下步骤：
[1]在冰上保存冷冻培养基，所述冷冻培养基为质量分数100％的胎牛血清；
[2]将新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液中漂洗；
[3]将经过步骤[2]漂洗的乳腺癌组织切成薄片，得到肿瘤组织片；
[4]将步骤[3]得到的肿瘤组织片放入步骤[1]准备的冷冻培养基中，并进行转运。
2.按照权利要求1所述的一种乳腺癌组织的转移方法，其特征在于：步骤[2]的漂洗过程进行两次。
3.按照权利要求1所述的一种乳腺癌组织的转移方法，其特征在于：所述肿瘤组织片为长2.5-3.5mm，宽1.8-2.2mm和厚度0.8-1.2mm的薄片。
4.按照权利要求1所述的一种乳腺癌组织的转移方法，其特征在于：步骤[4]中，冷冻培养基的体积至少为肿瘤组织片的十倍。
5.按照权利要求1所述的一种乳腺癌组织的转移方法，其特征在于：所述肿瘤组织片经过步骤[4]转运后，在使用前用磷酸缓冲盐溶液漂洗。
6.一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：
[1]在冰上用冻存管保存冷冻培养基，所述冷冻培养基为质量分数10％的二甲基亚砜和90％的胎牛血清；
[2]将新鲜的乳腺癌组织在4℃的磷酸缓冲盐溶液中漂洗；
[3]将经过步骤[2]漂洗的乳腺癌组织切成薄片，得到肿瘤组织片；
[4]将步骤[3]得到的肿瘤组织片放入步骤[1]准备的冷冻培养基中，并进行长期冻存。
7.按照权利要求6所述的一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于：步骤[4]进行长期冻存的步骤为，将冻存管放入一个填满棉花的泡沫盒子里，直接放入-80℃冰箱里过夜，次日转入液氮中长期保存。
8.按照权利要求6所述的一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于：步骤[2]的漂洗过程进行两次。
9.按照权利要求6所述的一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于：所述肿瘤组织片为长2.5-3.5mm，宽1.8-2.2mm和厚度0.8-1.2mm的薄片。
10.按照权利要求6所述的一种乳腺癌组织的冻存方法，其特征在于：步骤[4]中，冷冻培养基的体积至少为肿瘤组织片的十倍。
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