CN109295204B - 诊断冠心病的外周血单个核细胞环状RNAs及相关应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了诊断冠心病的外周血单个核细胞环状RNAs及相关应用；具体而言，本发明提供了检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断冠心病患病风险的检测系统中的应用，所述circRNA包括：Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104。Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104的表达水平升高，待测个体冠心病患病风险升高。

Description

诊断冠心病的外周血单个核细胞环状RNAs及相关应用
技术领域
本发明是关于诊断冠心病的外周血单个核细胞环状RNAs及相关应用，具体而言，本发明是关于检测来自待测个体的样品中Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104的水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于评估冠心病患病风险的检测系统中的应用，还涉及一种评估冠心病发病风险的检测系统。
背景技术
冠心病(coronary artery disease，CAD)是目前最常见的心血管疾病。据统计，全球每年超过一千万人死于心血管疾病，其中多半归因于急性心肌梗死。近年来，我国CAD发病率呈上升趋势并趋于年轻化。目前CAD的影像学诊断、介入手术及药物治疗等诊断治疗方面水平有所提高，但CAD的发病率及死亡率仍居高不下。造成这种差异的原因之一是多数患者就诊时已失去最佳治疗时机，目前缺乏早期识别CAD的高度敏感及便捷的诊断方法。因此，探究CAD早期诊断的方法是提高CAD治愈率、降低死亡率的重要手段。
CAD的发生发展是由环境因素和遗传因素共同决定，而其生物标志物应表现为患者冠状动脉发生粥样硬化性损伤并在早期和发生发展过程中浓度显著升高或降低，有效预测心血管疾病风险程度及斑块不稳定的有潜力的指标。传统循环中有关标志物出现在炎症、内皮损伤、凝血等过程中，包括非特异性炎症标志物CRP、炎症因子类(白介素)、黏附分子类、金属基质酶类等等。随着检测技术和发病机制研究的深入，应深入探索CAD生物标志物以阐明CAD发生发展机制，为CAD预测、预后及靶向治疗提供有利基础。
人类基因组计划完成后，人们发现超过90％不编码的蛋白质序列，而针对非编码RNA的研究逐渐成为探索疾病发生发展的关键。环状RNA(circular RNA，circRNA)是继微小RNA(microRNA，miRNA)和长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)之后一种新的非编码RNA研究热点。circRNA是一类由外显子、内含子或两者的转录本形成的封闭环，既没有5’端帽子，也没有3’端的多聚A尾。由于其特殊的环状结构，使其具有高度的序列保守型、结构稳定性、丰度高并且有一定的组织特异性和疾病特异性，这也使circRNA作为疾病的生物标志物成为可能。circRNA在疾病的发生发展过程中，不仅可以作为竞争内源性RNA(competitive endogenous RNA，ceRNA)来影响基因表达水平，还可以利用其miRNA应答元件靶向结合miRNA，以阻断miRNA对其靶基因的调控作用，从而发挥基因的调控作用。
随着芯片及高通量测序技术的发展，许多研究筛选出了多种肿瘤疾病、免疫疾病及血液疾病中差异表达的circRNA，并为后续深入研究circRNA在疾病发生发展中的功能提供理论基础。这些研究主要集中在肝癌、结肠癌、宫颈癌、脑胶质瘤等肿瘤疾病，用于诊断CAD的circRNA诊断标志物证据不足。
发明内容
本发明的一个目的在于寻找新的诊断冠心病的生物标志物，为CAD发生发展机制研究、CAD预测、预后及靶向治疗等研究提供有利基础。
本案发明人在研究中发现，与对照相比，冠心病患者的外周血单个核细胞(PBMCs)中Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104表达水平显著上调，ROC曲线下面积AUC分别为0.70和0.70，两者结合诊断冠心病时，AUC可以升高到0.74。因此Hsa_circ_1879、Hsa_circ_0004104及其两者的联合可用于冠心病的早期诊断，为CAD致病机理、调控通路研究提供新思路和新角度。
从而，一方面，本发明提供了以下circRNA作为诊断冠心病的生物标志物的应用：
Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104。
另一方面，本发明还提供了检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断冠心病患病风险的检测系统中的应用，所述circRNA包括：
Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104。
根据本发明的具体实施方案，所述circRNA水平包括外周血单个核细胞中表达水平、组织中表达水平或细胞系中表达水平。
根据本发明的具体实施方案，Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104的表达水平升高，待测个体冠心病患病风险升高。
可用本领域中任何的可行技术检测circRNA的表达水平。
根据本发明的具体实施方案，本发明中，所述检测所述circRNA的表达水平的试剂材料和/或仪器设备可以是任何可行的检测所述circRNA的表达水平的技术中所用到的试剂材料和/或仪器设备等。
根据本发明的具体实施方案，检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备包括以下方法中用到的试剂材料和/或仪器设备：
circRNAs微阵列芯片检测方法，和/或qRT-PCR检测方法。
在本发明的一些具体实施方案中，所述待测个体为男性。
另一方面，本发明还提供了一种评估冠心病发病风险的检测系统，其包括：检测来自待测个体的样品中以下circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备：
Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104。
根据本发明的具体实施方案，本发明所述的检测系统，其包括检测单元和评估单元，其中：
所述检测单元包括检测来自待测个体的样品中所述circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备，用于获得待测个体circRNA水平的检测结果；
所述评估单元包括用于根据检测单元的检测结果进行评估处理的处理单元；其中，Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104的表达水平升高，待测个体冠心病患病风险升高。
根据本发明的具体实施方案，本发明所述的检测系统，检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备包括以下方法中用到的试剂材料和/或仪器设备：
circRNAs微阵列芯片检测方法，和/或qRT-PCR检测方法。
根据本发明的具体实施方案，本发明所述的检测系统，其中，Hsa_circ_0001879表达水平每升高一个单位，个体冠心病发病风险升高56％或58％；Hsa_circ_0004104表达水平每升高一个单位，个体冠心病发病风险升高155％或153％。
根据本发明的具体实施方案，本发明中，所述待测个体可以为东亚人群，包括中国人、菲律宾人、美籍华人、新加坡籍华裔、新加坡籍马来西亚人等。具体检测时，所述样品可来自待测个体的血液、或活组织检查等。
本发明的评估冠心病发病风险的检测系统，可以是虚拟装置，只要能实现所述检测单元以及评估单元的功能即可。所述的检测单元可以是包括各种检测试剂材料和/或检测仪器设备等；所述的数据分析单元可以是任何可以实现对检测单元的检测结果进行分析处理而得出冠心病患病风险评估状况的运算仪器、模块或是虚拟设备，例如可以是预先将各种可能的检测结果与对应的患病风险情况制定相应的数据图表，将检测单元的检测结果对照该数据图表即能得出冠心病发病风险评估结果。
在本发明的一些具体实施方案的研究中发现，在CAD病例中，Hsa_circ_0001879的表达水平与体重指数、收缩压、舒张压和Gensini评分显著性正相关(P<0.05)，Hsa_circ_0004104的表达水平与高密度脂蛋白胆固醇呈显著性正相关(P<0.05)。
在本发明的另一些具体实施方案的研究中发现，单变量分析时，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104表达水平每升高一个单位，CAD发病风险分别升高56％(OR值：1.56，95％CI：1.30-1.86；P<0.001)和155％(OR值：2.55，95％CI：1.83-3.57；P<0.001)；通过不同模型调整后，circRNAs对于CAD发病风险的趋势是相同的。调整年龄、体重指数、高血压状况、吸烟状况、饮酒状况、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、收缩压后，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104表达水平每升高一个单位，CAD发病风险分别升高58％(OR值：1.58，95％CI：1.29-1.93；P<0.001)和153％(OR值：2.53，95％CI：1.68-3.81；P<0.001)；结果提示Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104是CAD潜在的危险因素。
在本发明的另一些具体实施方案中，采用ROC分析了circTCF25对于CAD的诊断价值。结果显示Hsa_circ_0001879的曲线下面积为0.70(95％CI：0.66-0.75；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.83和0.54；Hsa_circ_0004104的曲线下面积为0.70(95％CI：0.65-0.76；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.71和0.61。结果表明，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104作为CAD的潜在生物标志物，对于CAD的诊断具有一定价值。采用logistic回归综合分析两个circRNA形成的复合标志物曲线下面积为0.74(95％CI：0.69-0.80；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.74和0.68，相比于单个circRNA稍有升高。
在本发明的另一些具体实施方案中，还检测了所述的circRNAs在人多组织和多细胞系中表达水平。结果Hsa_circ_0001879在胎盘、胰腺、睾丸和胰腺中表达量较高，在心脏和骨骼肌中表达量较低；细胞系中，Hsa_circ_0001879在THP-1中表达量最多，在HUVECs，HEK 293T，
Figure GDA0003228464930000041
及VSMCs中表达量较高，在Hela和HepG2中表达量较低；Hsa_circ_0004104在HUVECs中表达量最多，在HEK 293T和VSMCs中表达量较低。
综上所述，本发明提供了一种新的诊断冠心病的生物标志物，能够为CAD发生发展机制研究、CAD预测、预后及靶向治疗等研究提供积极帮助。
附图说明
图1A-图1D显示circRNAs在独立样本中的表达水平检测结果。其中，图1A，Hsa_circ_0001879；图1B，Hsa_circ_0004104；图1C，Hsa_circ_0004432，图1D，Hsa_circ_0007142。***’表示P<0.01。
图2A-图2C显示受试者工作曲线分析circRNA对于CAD的诊断效能结果。其中，图2A，Hsa_circ_0001879，图2B，Hsa_circ_0004104，图2C，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104联合分析。
图3A-图3C显示circRNAs在人多组织和多细胞中表达水平检测结果。其中，图3A，组织中的Hsa_circ_0001879，图3B，细胞系中的Hsa_circ_0001879，图3C，细胞系中的Hsa_circ_0004104。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明，现参照下列实施例进一步描述本发明。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本发明。
实施例中未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照制造商所建议的条件。
实施例一
本实施例的研究实验方案包括circRNAs芯片筛选阶段和独立样本验证阶段。
circRNAs芯片筛选阶段：收集冠心病病例24例，健康对照7例，应用circRNAs微阵列芯片(4×180K)检测待测个体样品中的circRNA在冠心病组与对照组中的差异表达。
独立样本验证阶段：收集412例冠心病病例，290例健康对照作为独立样本，应用qRT-PCR检测样本的PBMCs中验证差异表达circRNAs的表达水平。
一、研究受试者入选标准
CAD病例人群来自2011年1月至2014年2月在阜外医院确诊的412名CAD男性患者。入选标准：经冠状动脉造影证实，左主干至少50％狭窄或至少一支主要的冠状动脉血管出现至少70％以上的狭窄。根据CAD的诊断标准，疾病可分为：1)稳定性心绞痛：由于运动或其他增加心肌需氧量的情况所诱导的短暂胸痛发作；伴有心电图ST-T段改变；休息或舌下含服硝酸甘油后可缓解疼痛；2)急性冠脉综合征，包括急性心肌梗死和不稳定心绞痛；急性心肌梗死为典型的胸痛症状，持续30min以上，心电图连续2个导联ST段抬高并有动态改变，心肌损伤标志物升高并大雨正常值高限的2倍，24h内有动态演变。不稳定心绞痛可分为初发劳累型心绞痛、恶化型心绞痛和自发型心绞痛。根据下列标准排除受试者：1)急性感染疾病；2)中风；3)糖尿病；4)风湿性瓣膜病；5)先天性心脏病；6)癌症；7)肝肾功能障碍；8)严重精神病；9)甲状腺疾病；10)未签署知情同意书。
健康男性对照来自2014年3月到2014年6月在石景山调查现场招募的290人，通过冠状动脉CT、颈动脉超声、脉搏波速度和内皮功能筛查，证实无冠心病或中风病史。
本研究方案经中国医学科学院阜外医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。
二、实验方法
实施例中用到的主要实验方法包括：
PBMCs分离和储存：
抗凝全血用Hanks液1:1的比例稀释混匀，按2:1的比例缓慢沿离心管壁加于淋巴细胞分离液上，室温2500rpm离心20min。弃除最上层血浆，尽量全部吸出血浆层和分离液交界面的单个核细胞，移入一新的离心管中，加入12mLHank’s液，悬浮并混匀细胞，2000rpm离心10min。弃上清液，2000rpm离心3min，吸去残余的Hank’s液，向分离出的PBMCs中加入1mLTRIzol，慢慢吹打混匀后转移入1个1.5mL无RNase的Eppendorf管中，-80℃冻存。
RNA制备：
采用厂家推荐的方案用TRIzol LS Reagent(Invitrogen，USA)，从500μL血浆中提取血浆总RNA。用20μL无RNA酶水溶解纯化的总RNA，用NanoDrop2000(NanoDrop Products，Wilmington，Del.，USA)进行RNA定量。
circRNA芯片和验证：
使用Agilent Feature Extraction软件对芯片数据进行背景校正、探针荧光值换算基因表达值及芯片数据质量评估。使用R语言数据包对芯片数据进行对数运算及标准化处理。标准化后的数据中，不同的样本之间存在一定的差异，使用箱图对各个样本的数据进行初步的质量评估。样本数据的中位数，四分位数以及极端值均可在箱图中展示出来。使用t-test法，比较CAD患者和对照组在芯片中差异表达的基因，选择log2FC(fold change)≥1.5或log2FC≤0.67，P值<0.05是选择差异表达基因的标准。
实时定量PCR：
采用SYBR Select Master Mix试剂，使用7900HT荧光实时定量PCR仪进行表达水平的检测。取1μL8倍稀释的cDNA作为模板，每个样品设三个平行孔，结果取平均值分析。使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)基因作为内参，Ct值是指当PCR反应达到平台期所在拐点时经历的PCR循环数.Ct值越小，表达量越高；反之越低。通过Ct值的计算，可以表示目标基因的相对表达水平。引物序列如下表1。
表1引物序列
基因名称 引物序列(5’-3’)
GAPDH-F GGTGAAGGTCGGAGTCAACG(SEQ ID No.1)
GAPDH-R CAAAGTTGTCATGGATGACC(SEQ ID No.2)
Hsa_circ_0001879-F AGTTGTGGCGGCTGTTCG(SEQ ID No.3)
Hsa_circ_0001879-R AGCACCATTAGCAGACAGATCC(SEQ ID No.4)
Hsa_circ_0004104-F CGGCATCAAGCAGAGTGTGC(SEQ ID No.5)
Hsa_circ_0004104-R CAAGGCCCGATGTAGTCCAG(SEQ ID No.6)
Hsa_circ_0004432-F AACAAGCCAATGACCTTGTG(SEQ ID No.7)
Hsa_circ_0004432-R TGCAGGAAAAGCTAAAACTGC(SEQ ID No.8)
Hsa_circ_0007142-F AGCTCTACGTGCAAGATAAC(SEQ ID No.9)
Hsa_circ_0007142-R GGCATCATAGTTATAAAAAGCTGT(SEQ ID No.10)
统计分析：
连续性数据以均数±标准差表示，分类数据以频数(百分数)表示。连续性数据使用独立样本t检验，分类数据使用卡方检验进行CAD病例组和对照组间的变量比较。采用Spearman进行circRNA与CAD危险因素和传统标志物的相关性分析。通过单变量和多元logistic回归分析，评估circRNA与CAD发病的关系。circRNA对于CAD诊断价值的评价通过受试者工作特征曲线(Receiver-operator characteristic，ROC)进行评估。GraphPadPrism 6软件绘制图。数据分析均使用R语言(3.2.4版本；http://www.r-project.org)。P<0.05有统计学意义。
三、实验研究结果
(一)circRNA芯片分析
用于circRNA芯片的研究人群的基本特征如表2所示。
表2 circRNA芯片样本的CAD病例及对照基本特征
Figure GDA0003228464930000081
与对照组相比，CAD组的年龄较低(P<0.05)，其余特征均无显著性差异。
本发明中，发现以下四个circRNAs在冠心病与对照组中差异表达：Hsa_circ_0001879，Hsa_circ_0004104，Hsa_circ_0004432和Hsa_circ_0007142。结果显示，与对照相比，Hsa_circ_0001879，Hsa_circ_0004104，Hsa_circ_0004432和Hsa_circ_0007142在冠心病患者中显著上调(均为1.5倍以上，P值均小于0.05)。将这4个circRNAs在独立样本中进行验证。
(二)独立样本验证分析
1.circRNAs表达水平
验证样本的基本特征如表3所示。
表3验证样本的CAD病例及对照基本特征
病例(n＝412) 对照(n＝290) P
年龄(岁) 53.29±7.96 50.87±12.32 0.8674
体重指数(kg/m<sup>2</sup>) 25.99±3.13 25.47±3.44 0.038
收缩压(mmHg) 124.03±16.91 127.86±16.37 0.003
舒张压(mmHg) 74.38±11.76 80.07±10.59 <0.001
高血压状况(n，％) 132(32.0) 109(37.6) 0.127
吸烟状况(n，％) 338(82.0) 197(67.9) <0.001
饮酒状况(n，％) 238(57.8) 178(61.4) 0.337
总胆固醇(mg/dL) 163.32±42.32 180.99±28.62 <0.001
甘油三酯(mg/dL) 150.38±78.26 148.80±93.47 0.809
高密度脂蛋白胆固醇(mg/dL) 38.74±8.75 48.04±11.73 <0.001
低密度脂蛋白胆固醇(mg/dL) 100.71±37.47 101.61±25.02 0.728
空腹血糖(mmol/L) 5.76±1.47 5.18±0.62 <0.001
血肌酐(μmol/L) 77.85±14.33 86.77±16.59 <0.001
与对照组相比，CAD组的体重指数、高血压状况、饮酒状况、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平无明显差异(P>0.05)，年龄、吸烟状况及空腹血糖较高(P<0.05)，收缩压、舒张压、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及血肌酐水平较对照组低(P<0.05)。
应用qRT-PCR检测4个circRNAs的表达水平。结果显示：与对照相比，在冠心病患者中，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104显著升高(P<0.05)，分别为对照组的
1.66倍和1.81倍，(图1A，图1B)。而Hsa_circ_0004432和Hsa_circ_0007142在两组间没有显著性差异(P>0.05，图1C，图1D)。
2.circRNAs表达水平与临床指标相关性
本实施例中进行了S pearman相关分析，评估CAD病例组中circRNA的表达水平是否与CAD危险因素和传统生物标志物相关。结果如表4所示。
表4 circRNA与临床指标、CAD危险因素及传统标志物的相关性
Figure GDA0003228464930000091
Figure GDA0003228464930000101
在CAD病例中，Hsa_circ_0001879的表达水平与体重指数、收缩压、舒张压和Gensini评分显著性正相关(P<0.05)，Hsa_circ_0004104的表达水平与高密度脂蛋白胆固醇呈显著性正相关(P<0.05)。
3.circRNAs可作为CAD的独立影响因素
采用单变量和多元logistic回归评估circRNAs是否可以作为CAD发生的独立影响因素。结果如表5所示。
表5 circRNA作为CAD独立影响因素的logistic回归分析
Figure GDA0003228464930000102
Figure GDA0003228464930000111
单变量分析时，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104表达水平每升高一个单位，CAD发病风险分别升高56％(OR值：1.56，95％CI：1.30-1.86；P<0.001)和155％(OR值：2.55，95％CI：1.83-3.57；P<0.001)；通过不同模型调整后，circRNAs对于CAD发病风险的趋势是相同的。在模型4中，调整年龄、体重指数、高血压状况、吸烟状况、饮酒状况、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、收缩压后，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104表达水平每升高一个单位，CAD发病风险分别升高58％(OR值：1.58，95％CI：1.29-1.93；P<0.001)和153％(OR值：2.53，95％CI：1.68-3.81；P<0.001)；结果提示Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104是CAD潜在的危险因素。
4.circRNA对CAD的诊断效能评价
采用ROC分析circTCF25对于CAD的诊断价值。结果显示Hsa_circ_0001879的曲线下面积为0.70(95％CI：0.66-0.75；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.83和0.54(图2A)；Hsa_circ_0004104的曲线下面积为0.70(95％CI：0.65-0.76；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.71和0.61(图2B)。结果表明，Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104可能作为CAD的潜在生物标志物，对于CAD的诊断具有一定价值。同时，本实施例采用logistic回归综合分析两个circRNA形成的复合标志物曲线下面积为0.74(95％CI：0.69-0.80；P<0.001)，敏感性和特异性分别为0.74和0.68(图2C)，相比于单个circRNA稍有升高。
5.circRNAs在人多组织和多细胞系中表达水平
为初步探索circRNA可能发挥的作用部位，本实施例在人体组织及细胞系中检测circRNA的表达丰度。人体多组织包括胎盘(placenta)、胰腺(pancrease)、睾丸(testis)、脾脏(spleen)、肝脏(liver)、肺(lung)、大脑(brain)、卵巢(ovary)、前列腺(prostate)、肾脏(kidney)、小肠(small intestine)、结肠(colon)、胸腺(thymus)、心脏(heart)、白细胞(leukocyte)和骨骼肌(skeletal muscle)，细胞系包括单核细胞(THP-1)、巨噬细胞(macrophages，
Figure GDA0003228464930000112
)、血管平滑肌细胞(Vascular Smooth muscle cell，VSMCs)、HUVECs、宫颈癌细胞(Hela)、肝癌细胞(HepG2)和人胚肾细胞(HEK293T)中Hsa_circ_0001879和Hsa_circ_0004104的表达水平。
结果参见图3A、图3B和图3C。如图3A所示，Hsa_circ_0001879在胎盘、胰腺、睾丸和胰腺中表达量较高，在心脏和骨骼肌中表达量较低，Hsa_circ_0004104在人组织中未检测到表达。如图3B所示，Hsa_circ_0001879在THP-1中表达量最多，在HUVECs，HEK 293T，
Figure GDA0003228464930000121
及VSMCs中表达量较高，在Hela和HepG2中表达量较低。如图3C所示，Hsa_circ_0004104在HUVECs中表达量最多，在HEK 293T和VSMCs中表达量较低，并且在THP-1，Hela和HepG2中未能检测到其表达。
序列表
<110> 中国医学科学院阜外医院
<120> 诊断冠心病的外周血单个核细胞环状RNAs及相关应用
<130> GAI18CN3847
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 1
ggtgaaggtc ggagtcaacg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 2
caaagttgtc atggatgacc 20
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 3
agttgtggcg gctgttcg 18
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 4
agcaccatta gcagacagat cc 22
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 5
cggcatcaag cagagtgtgc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 6
caaggcccga tgtagtccag 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 7
aacaagccaa tgaccttgtg 20
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 8
tgcaggaaaa gctaaaactg c 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 9
agctctacgt gcaagataac 20
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 引物
<400> 10
ggcatcatag ttataaaaag ctgt 24

Claims (4)

1.检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断冠心病患病风险的检测系统中的应用，所述circRNA包括：
Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104；
其中，检测来自待测个体的样品中circRNA水平的试剂材料和/或仪器设备包括以下方法中用到的试剂材料和/或仪器设备：
circRNAs微阵列芯片检测方法，和/或qRT-PCR检测方法。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，circRNA水平包括外周血单个核细胞中表达水平、组织中表达水平或细胞系中表达水平。
3.根据权利要求1所述的应用，其中，Hsa_circ_0001879和/或Hsa_circ_0004104的表达水平升高，待测个体冠心病患病风险升高。
4.根据权利要求1所述的应用，其中，所述待测个体为男性。
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