CN109280047A - 一种盐酸莫西沙星光降解产物及其制备方法和检测方法 - Google Patents

一种盐酸莫西沙星光降解产物及其制备方法和检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种莫西沙星光降解产物及其制备方法、分析检测方法和其在莫西沙星有关物质检查时作为杂质对照品的用途。本发明发现了一种新的莫西沙星光降解产物，该降解产物结构首次报道；本发明提供的所述光降解产物的制备方法简单易行，可大量制备该降解产物；本发明提供的液相分析方法能快速检测出所述降解产物，选择该降解产物的最大吸收波长作为检测波长，提高了该降解产物的检出率，结果准确可靠；本发明提供的光降解产物可以用于莫西沙星及其制剂的有关物质检查，进一步提高莫西沙星及其制剂的质量标准，提高其安全性和可控性，为莫西沙星的安全用药提供了重要的指导意义。

Description

一种盐酸莫西沙星光降解产物及其制备方法和检测方法
技术领域
本发明涉及药物技术领域，具体涉及一种盐酸莫西沙星光降解产物，以及该光降解产物的制备方法和分析检测方法。
背景技术
盐酸莫西沙星是第四代喹诺酮类抗生素，由德国拜耳公司1999年推出，于2002年在我国上市，商品名为拜复乐，至今已上市十几年。盐酸莫西沙星抗菌谱广、杀菌力强，不仅保留了第3代喹诺酮类抗菌药对革兰氏阴性菌良好的抗菌活性，其8-甲氧基部分又增强了对革兰阳性菌、厌氧菌及非典型致病菌，如支原体、衣原体和军团菌的抗菌活性。而且盐酸莫西沙星口服吸收良好，具有良好的药代动力学特性和组织穿透性，绝对生物利用度可达90％，血浆蛋白结合率为50％，具有体内药物浓度高、血浆消除半衰期长、疗效好、不良反应少、耐药性低等优点。临床上盐酸莫西沙星广泛用于社区获得性肺炎、急性细菌性鼻窦炎、泌尿生殖系感染、继发性腹膜炎、强直性脊椎炎和皮肤、皮下组织感染等疾病的治疗。盐酸莫西沙星化学结构如下：
该原料药的质量标准在英国药典2015版、欧洲药典8.0、美国药典40版中均有收载，杂质控制要求为五个已知杂质A、B、C、D、E，限度不超过0.1％，未知杂质限度不超过0.1％，总杂质限度不超过0.3％。
五个已知杂质A、B、C、D、E，化学结构如下：
国际上公认的药品注册要符合人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)及欧洲药典的规定，这些规定对药物中的杂质进行了严格的要求。原料药中的杂质是指存在于原料药中但其化学结构与原料药不一样的任何一种成分；制剂中的杂质是指制剂中除了原料药或赋形剂以外的其他任何成分。由于药物中的杂质无治疗作用，或者影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人们的健康，因此，必须对药物中的杂质进行检查，以保证药品质量和临床用药安全、有效，同时也为生产和流通过程的药品质量管理提供依据。ICH要求申报者应对原料药和制剂在合成、精制和储存过程中最可能产生的实际存在的和潜在的杂质进行概述，该描述应对合成中的化学反应、由原料引起的杂质及可能的降解产物进行合理科学地评估，并且申报资料中还应对实际存在的表观量大于或等于0.1％的杂质和表观含量在0.1％以下的具有强烈生物作用的毒性杂质，予以定性或确证其结构。对在稳定性试验中出现的降解产物，也应按上述要求进行研究。
另外，ICH对于原料药和制剂的光稳定性进行了详细的规定，要求对原料药和制剂的光稳定特性应经过考察并评估，以保证适当的光照应不会引起不可接受的变化。ICH具体对光源、样品温度、放置环境、光照强度和光照方法等实验条件进行了规定，并要求所建的试验方法应能分离并检测研究中出现的光降解物质。光稳定性研究可以确定在制剂生产和处方配制过程中所必要的预防措施，以及是否需要避光包装，具有十分重要的意义。
现有的盐酸莫西沙星质量标准中，有关物质液相分析方法的洗脱强度较弱，可能无法将降解产物都分离检测出来。这些漏检的降解产物无疑会降低盐酸莫西沙星的质量，如不对这些降解产物严格控制，可能会对人体产生严重的毒副作用。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明采用洗脱强度高的洗脱剂对盐酸莫西沙星的破坏性试验样品和稳定性试验样品进行分析，在光破坏样品中发现了一种新的光降解产物，该光降解产物在稳定性试验长期9个月未避光样品中被检测到，含量达0.1％，且含量随时间增高。因此：
本发明的第一目的在于提供一种新的盐酸莫西沙星光降解产物；
本发明的第二目的在于提供所述光降解产物的制备方法；
本发明的第三目的在于提供所述光降解产物的分析检测方法；
本发明的第四目的在于提供所述光降解产物在盐酸莫西沙星及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。
本发明的第五目的在于提供所述光降解产物生成速率最低和最高时盐酸莫西沙星溶液的pH值，以指导盐酸莫西沙星液体制剂的质量控制。
上述目的是通过如下技术方案实现的：
本发明提供了一种盐酸莫西沙星光降解产物，化学结构如下，
本发明还提供了上述莫西沙星的光降解产物的盐酸盐形式，化学结构如下，
本发明提供了一种所述光降解产物的制备方法，可以采用粗产物的制备液相分离法，具体包括如下步骤：
(1)光照破坏样品制备：将盐酸莫西沙星注射液经酸或碱调节pH后，进行经冷白荧光灯照射的光照破坏；
(2)光降解产物制备：将上述光照破坏样品溶液经有机溶剂提取，干燥制成粉末后重结晶，得浓缩物；
(3)制备液相制备：将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，收集洗脱液，浓缩，干燥即得所述光降解产物。
进一步地，步骤(1)所述光照破坏样品制备方法，其特征在于所述的酸选自盐酸、硫酸和磷酸其中一种；所述的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾其中一种；所述的调节后盐酸莫西沙星溶液pH范围为3～8，所述光照破坏方法为经4500±500勒克斯冷白荧光灯照射1～270天。
进一步地，步骤(1)所述光照破坏样品制备方法为用氢氧化钠溶液将盐酸莫西沙星溶液pH调节为7后，经4500±500勒克斯冷白荧光灯照射30天。
进一步地，步骤(2)所述光降解产物的制备方法，其特征在于所述有机溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚和正己烷其中一种，干燥方式选自真空干燥或冷冻干燥其中一种；重结晶溶剂为水。
进一步地，步骤(2)所述光降解产物的制备方法，其特征在于用二氯甲烷提取样品溶液后，进行冷冻干燥制成粉末，以纯化水作为溶剂进行重结晶，离心后取上清液，得浓缩物；其中，重结晶方法优选为向300mg冻干粉末加4ml纯化水，混匀后置于50℃水浴中加热，并适时搅拌，1小时后取出置于4℃冷却。
进一步地，步骤(3)所述光降解产物的制备液相制备方法，其特征在于将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，色谱条件如下：
填充剂：烷基键合硅胶；
流动相：甲醇和甲酸水溶液，甲醇体积百分浓度为20-60％；
流动相流速：1～2mL/min；
检测波长：250～300nm；
柱温：30～50℃；
收集洗脱液，浓缩，干燥即得所述光降解产物。
进一步地，步骤(3)所述光降解产物的制备液相制备方法，其特征在于将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，色谱条件如下：
填充剂：十八烷基键合硅胶；
流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55，v/v)，等度洗脱；
流动相流速：1.3mL·min-1；
检测波长：280nm；
柱温：45℃；
收集洗脱液，减压旋转蒸发浓缩，真空干燥即得所述光降解产物。
本发明所述莫西沙星光降解产物的盐酸盐形式，可采用常规的制备盐酸盐的方法进行，包含但不限于，将上述光降解产物溶于盐酸的醇溶液或者水溶液中，搅拌反应形成盐酸盐，再使用常规的分离方法，制得较高纯度的杂质样品，例如重结晶，柱层析，制备液相分离等。
本发明不仅提供了粗产物的制备液相法来制得所述的莫西沙星光降解杂质，还通过不断摸索，获得了一种通过化学定向合成方式来制备该杂质的方法，具体如下，
a)将式2化合物即吡咯，溶于二氯甲烷，再加入咪唑，降温至内温0-5℃，缓慢加入三异丙基氯硅烷，滴毕保温反应1h，缓慢升至25-30℃继续搅拌反应2h，TLC监控反应完全，过滤，滤液中加入二氯甲烷和水，洗涤分层，有机相干燥，浓缩得到式3化合物；
b)将醋酸钯，丙烯酸正丁酯，式3化合物，以及过氧化苯甲酸叔丁酯，投入到醋酸、二氧六环和二甲基亚砜的混合溶液中，40-45℃下搅拌反应24h，TLC监控完毕，将反应液倾入甲基叔丁基醚和水中，搅拌过滤，浓缩至干，柱层析分离得到主要产物，即式4化合物；
c)将式4化合物溶于四氢呋喃中，加入10％钯碳，通入氢气，25-30℃下常压氢化5-10h，过滤除去钯碳，滤液减压浓缩蒸去溶剂，得式5化合物；
d)将式5化合物溶于无水四氢呋喃中，降温至内温-5-0℃，加入四氢铝锂，在0-5℃下搅拌2h，缓慢滴加入饱和氯化铵水溶液终止反应，反应液用甲基叔丁基醚萃取，干燥，浓缩得到式6化合物；
e)将式6化合物溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺，降温至0-5℃，搅拌下滴加入对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，0-5℃搅拌3h，TLC监控反应完全，分取二氯甲烷层，用水洗涤，干燥，浓缩得到式7化合物；
f)将式7化合物溶于四氢呋喃中，加入氨水，氮气保护下回流反应3-10h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式8化合物；
g)将式8化合物溶于四氢呋喃中，加入氢氧化钠溶液，在内温0-10℃时，缓慢加入二碳酸二叔丁酯，滴毕，在25-30℃继续搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，得到式9化合物；
h)将式9化合物溶于四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中，35±5℃下搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式10化合物；
i)将式10化合物溶于四氢呋喃中，降温至内温-10-0℃，加入钠氢，保温搅拌1h，再加入1-环丙基-6，7-二氟-8-甲氧基-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸-O3，O4-二醋酸合硼酯即式11化合物，缓慢升至25-30℃继续搅拌3-10h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，有机相用水洗涤，干燥，得到式12化合物；
j)将式12化合物溶于四氢呋喃中，降温至内温-5-0℃，缓慢加入浓盐酸，缓慢升至25-30℃，继续搅拌2-5h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌静置分层，有机相用水洗涤，干燥，浓缩至干所得油状物采用柱层析纯化，得到式1化合物，即莫西沙星的光降解产物。
本发明另外还提供一种所述光降解产物的液相分析检测方法，其特征在于，具体分析方法如下：
(1)对照品溶液的制备
选择权利要求1所述的盐酸莫西沙星的光降解杂质作为对照物质，采用稀释液溶解，配成每1mL含0.1-2μg所述盐酸莫西沙星的光降解杂质溶液作为对照品溶液，其中所述的稀释液选自水、甲醇、乙腈其中一种；
(2)供试品溶液的制备
取盐酸莫西沙星注射液，采用稀释液稀释，配制成每1mL含10-20mg盐酸莫西沙星的溶液，经光降解后的，作为供试品溶液，其中所述的稀释液选自水、甲醇、乙腈其中一种；(3)色谱条件：
填充剂：烷基键合硅胶；
流动相：甲醇和甲酸水溶液；
流动相流速：1～2mL·min-1；
检测波长：250～300nm；
柱温：30～50℃；
(4)测定方法
分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
进一步地，步骤(3)所述的盐酸莫西沙星光降解杂质的HPLC检测方法色谱条件，其特征步骤在于：
填充剂：十八烷基键合硅胶；
流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55，v/v)，等度洗脱；
流动相流速：1.3mL·min-1；
检测波长：280nm；
柱温：45℃。
上述色谱条件下，所述光降解产物能与极性相近的化合物完全分离开，分离度大于1.5。流动相在280nm检测波长下紫外本底吸收低，且280nm为所述光降解产物的最大吸收波长，保证了所述光降解产物的响应灵敏度，提高检出量。
所述的盐酸莫西沙星光降解产物在盐酸莫西沙星及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。该光降解产物容易获得，且纯度高(大于97％)，可以使用该化合物作为对照品利用外标法对其进行质量控制。
本发明的有益效果：
(1)本发明发现了一种新的盐酸莫西沙星光降解产物，该光降解产物结构首次报道；
(2)本发明提供的所述光降解产物的制备方法简单易行，可大量制备该光降解产物；
(3)本发明提供的液相分析方法能快速检测出所述光降解产物，选择该光降解产物的最大吸收波长作为检测波长，提高了该光降解产物的检出率，结果准确可靠；
(4)本发明提供的光降解产物可以用于盐酸莫西沙星及其制剂的有关物质检查，进一步提高盐酸莫西沙星及其制剂的质量标准，提高其安全性和可控性。
(5)本发明提供的光降解产物生成速率最低和最高时盐酸莫西沙星溶液的pH值，对于盐酸莫西沙星液体制剂的极性条件具有指导意义。
附图说明
图1为光降解产物氢谱信号归属图；
图2为光降解产物碳谱信号归属图；
图3为盐酸莫西沙星稳定性试验长期9个月未避光的供试品溶液色谱图(箭头指示的色谱峰即为本发明提供的光降解产物的色谱峰)。
图4为不同溶液pH条件下，20mg/mL盐酸莫西沙星溶液中该光降解产物生成情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1：盐酸莫西沙星光降解产物的制备和结构确证
取盐酸莫西沙星注射液，调节溶液的pH为7，置于冷白荧光灯下光照30天，光照强度为4500±500勒克斯，照射结束后取出。然后将光照破坏样品经二氯甲烷提取，冷冻干燥制成粉末，以纯化水作为溶剂进行重结晶，重结晶方法为300mg冻干粉末加4ml纯化水，混匀后置于50℃水浴中加热，并适时搅拌，1小时后取出置于4℃冷却，离心后取上清液。然后将上清液用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55)，等度洗脱，收集洗脱液。通过减压旋转蒸发浓缩，并在40℃真空干燥箱中放置过夜以彻底除去其中的水分，得淡黄色粉末光降解产物。归一化纯度大于97％。
光降解产物化学结构确证：淡黄色粉末，易溶于甲醇；HPLC-MS/MS显示[M+H]+为m/z399.82，[M+Na]+为m/z 482.82，[M+H-H2O]+为m/z 382.03，结合核磁特征可得分子式为C21H22O4N3F。核磁共振氢谱数据如图1，δH(ppm，DMSO-d6，500MHz)：8.80(2-H)，7.98(5-H)，3.35(15-H)，14.57(COOH)，4.22(11-H)，1.17(12-H和13-H)，7.02(16-H)，6.29(17-H)，6.91(19-H)，2.57(20-H)，1.87(21-H)，2.82(22-H)，7.91(NH2)；核磁共振碳谱数据如图2，δC(ppm，DMSO-d6，500MHz)：151.1(2-C)，107.0(3-C)，176.2(4-C)，106.0(5-C)，155.4(6-C)，128.1(7-C)，148.2(8-C)，133.0(9-C)，125.7(10-C)，41.3(11-C)，8.7(12-C和13-C)，165.2(14-C)，61.5(15-C)，123.0(16-C)，110.7(17-C)，124.1(18-C)，119.8(19-C)，23.1(20-C)，28.1(21-C)，38.4(22-C)，。
实施例2：盐酸莫西沙星光降解产物的制备
取盐酸莫西沙星注射液，调节溶液的pH为3，置于冷白荧光灯下光照60天，光照强度为4500±500勒克斯，照射结束后取出。然后将光照破坏样品经二氯甲烷提取，冷冻干燥制成粉末，以纯化水作为溶剂进行重结晶，重结晶方法为300mg冻干粉末加4ml纯化水，混匀后置于50℃水浴中加热，并适时搅拌，1小时后取出置于4℃冷却，离心后取上清液。然后将上清液用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55)，等度洗脱，收集洗脱液。通过减压旋转蒸发浓缩，并在40℃真空干燥箱中放置过夜以彻底除去其中的水分，得淡黄色粉末光降解产物。归一化纯度大于97％。
结构确证数据与实施例1与相同。
实施例3：盐酸莫西沙星光降解产物的制备
取盐酸莫西沙星注射液，调节溶液的pH为8，置于冷白荧光灯下光照40天，光照强度为4500±500勒克斯，照射结束后取出。然后将光照破坏样品经二氯甲烷提取，冷冻干燥制成粉末，以纯化水作为溶剂进行重结晶，重结晶方法为300mg冻干粉末加4ml纯化水，混匀后置于50℃水浴中加热，并适时搅拌，1小时后取出置于4℃冷却，离心后取上清液。然后将上清液用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55)，等度洗脱，收集洗脱液。通过减压旋转蒸发浓缩，并在40℃真空干燥箱中放置过夜以彻底除去其中的水分，得淡黄色粉末光降解产物。归一化纯度大于97％。
结构确证数据与实施例1与相同。
实施例4：化学定向法合成莫西沙星的光降解产物
a)将吡咯100g，溶于二氯甲烷400mL，再加入咪唑110g，降温至内温0-5℃，缓慢加入三异丙基氯硅烷250g，滴毕保温反应1h，缓慢升至25-30℃继续搅拌反应2h，TLC监控反应完全，过滤，滤液中加入二氯甲烷500mL和水800mL，洗涤分层，有机相干燥，浓缩得到式3化合物，约268g；
b)将醋酸钯7g，丙烯酸正丁酯40g，式3化合物268g，以及过氧化苯甲酸叔丁酯60g，投入到醋酸50mL、二氧六环140mL和二甲基亚砜20mL的混合溶液中，40-45℃下搅拌反应24h，TLC监控完毕，将反应液倾入甲基叔丁基醚400mL和水600mL中，搅拌过滤，浓缩至干，柱层析分离得到主要产物，即式4化合物，约128g，HPLC-MS/MS显示[M+H]+为m/z 350.61；
c)将式4化合物128g溶于四氢呋喃600mL中，加入10％钯碳，约13g，通入氢气，25-30℃下常压氢化5-10h，过滤除去钯碳，滤液减压浓缩蒸去溶剂，得式5化合物，约120g；
d)将式5化合物120g溶于无水四氢呋喃700mL中，降温至内温-5-0℃，加入四氢铝锂20g，在0-5℃下搅拌2h，缓慢滴加入饱和氯化铵水溶液300mL终止反应，反应液用甲基叔丁基醚500mL萃取，干燥，浓缩得到式6化合物77g；
e)将式6化合物77g溶于无水二氯甲烷350mL中，加入三乙胺90g，降温至0-5℃，搅拌下滴加入对甲苯磺酰氯60g的二氯甲烷溶液120mL，0-5℃搅拌3h，TLC监控反应完全，加入水800mL，搅拌后静置分层，有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式7化合物91g；
f)将式7化合物91g溶于四氢呋喃400mL中，加入氨水600mL，氮气保护下回流反应3-10h，TLC监控反应完全，加入水800mL和乙酸乙酯800mL，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式8化合物46g；
g)将式8化合物46g溶于四氢呋喃350mL中，加入1M氢氧化钠溶液300mL，在内温0-10℃时，缓慢加入二碳酸二叔丁酯40g，滴毕，在25-30℃继续搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水500mL和乙酸乙酯400mL，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，得到式9化合物43g；
h)将式9化合物43g溶于1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液360mL中，35±5℃下搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水500mL和乙酸乙酯500mL，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式10化合物37g，HPLC-MS/MS显示[M+H]+为m/z 325.32；
i)将式10化合物37g溶于四氢呋喃370mL中，降温至内温-10-0℃，加入钠氢27g，保温搅拌1h，再加入1-环丙基-6，7-二氟-8-甲氧基-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸-O3，O4-二醋酸合硼酯即式11化合物20g，缓慢升至25-30℃继续搅拌3-10h，TLC监控反应完全，加入水500mL和乙酸乙酯500mL，搅拌后静置分层，有机相用水洗涤，干燥，得到式12化合物，约41g；
j)将式12化合物约41g溶于四氢呋喃300mL中，降温至内温-5-0℃，缓慢加入浓盐酸300mL，缓慢升至25-30℃，继续搅拌2-5h，TLC监控反应完全，加入水600mL和乙酸乙酯600mL，搅拌静置分层，有机相用水洗涤，干燥，浓缩至干所得油状物采用柱层析纯化，通过减压旋转蒸发浓缩，并在40℃真空干燥箱中放置过夜以彻底除去其中的水分，得淡黄色粉末状的莫西沙星的光降解产物式1化合物，约28g，归一化纯度大于97％。
光降解产物化学结构确证：淡黄色粉末，易溶于甲醇；HPLC-MS/MS显示[M+H]+为m/z399.82，[M+Na]+为m/z 482.82，[M+H-H2O]+为m/z 382.03，结合核磁特征可得分子式为C21H22O4N3F。核磁共振氢谱数据如图1，δH(ppm，DMSO-d6，500MHz)：8.80(2-H)，7.98(5-H)，3.35(15-H)，14.57(COOH)，4.22(11-H)，1.17(12-H和13-H)，7.02(16-H)，6.29(17-H)，6.91(19-H)，2.57(20-H)，1.87(21-H)，2.82(22-H)，7.91(NH2)；核磁共振碳谱数据如图2，δC(ppm，DMSO-d6，500MHz)：151.1(2-C)，107.0(3-C)，176.2(4-C)，106.0(5-C)，155.4(6-C)，128.1(7-C)，148.2(8-C)，133.0(9-C)，125.7(10-C)，41.3(11-C)，8.7(12-C和13-C)，165.2(14-C)，61.5(15-C)，123.0(16-C)，110.7(17-C)，124.1(18-C)，119.8(19-C)，23.1(20-C)，28.1(21-C)，38.4(22-C)，。
实施例5：盐酸莫西沙星9个月避光和未避光样品检测分析
对照品溶液制备：精密称取光降解杂质于容量瓶中，用甲醇-0.1％甲酸(45∶55)溶解定容，作为2μg/mL光降解杂质溶液。
供试品溶液制备：取两份每1mL含20mg的盐酸莫西沙星注射液，放于稳定性试验光照箱中分别进行9个月避光和未避光处理，分别得到长期9个月避光供试品溶液和长期9个月未避光供试品溶液。
液相色谱条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-20AT液相色谱仪，二元泵，LCSolution工作站；
色谱柱：DiamonsilTMC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；
流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55，v/v)，等度洗脱；
流动相流速：1.3mL·min-1；
检测波长：280nm；
柱温：45℃；
进样量：10μL。
分别精密量取光降解杂质对照品溶液和盐酸莫西沙星供试品溶液10μL注入液相色谱仪分析。结果在长期9月未避光样品溶液中检出光降解杂质(见图3)，含量为0.1％，避光样品中未检测到，说明盐酸莫西沙星应避光保存。该光降解杂质在稳定性试验中，随着时间推移呈增长趋势，且含量较高，应列入质量研究控制中。
实施例6：盐酸莫西沙星溶液pH值对光降解产物生成情况的影响
取六份每1mL含20mg的盐酸莫西沙星注射液，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液分别将六份溶液的pH值调节到3～8，置于冷白荧光灯下光照25天，光照强度为4500±500勒克斯，分别于0、3、8、15、25天取样，按实施例2所述液相色谱条件进行检测分析。结果见图4，当盐酸莫西沙星溶液pH为7时，光降解杂质生成速率最快；盐酸莫西沙星溶液pH为5时，光降解杂质生成速率最慢。

Claims (14)

1.一种盐酸莫西沙星的光降解产物，其特征在于，化学结构如下所示，
2.根据权利要求1所述的光降解产物，其特征在于，该光降解产物是盐酸盐的形式，化学结构如下，
3.一种权利要求1所述光降解产物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)光照破坏样品制备：将盐酸莫西沙星注射液经酸或碱调节pH后，进行经冷白荧光灯照射的光照破坏；
(2)光降解产物制备：将上述光照破坏样品溶液经有机溶剂提取，干燥制成粉末后重结晶，得浓缩物；
(3)制备液相制备：将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，收集洗脱液，浓缩，干燥即得所述光降解产物。
4.根据权利要求3所述光照破坏样品的制备方法，其特征在于步骤(1)所述酸选自盐酸、硫酸和磷酸其中一种；所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾其中一种；调节后盐酸莫西沙星溶液pH范围为3～8，所述光照破坏方法为经4500±500勒克斯冷白荧光灯照射1～270天。
5.根据权利要求4所述光照破坏样品的制备方法，其特征在于：用氢氧化钠溶液将盐酸莫西沙星溶液pH调节为7后，经4500±500勒克斯冷白荧光灯照射30天。
6.根据权利要求3所述光降解产物的制备方法，其特征在于步骤(2)：所述有机溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚和正己烷其中一种；干燥方式选自真空干燥或冷冻干燥其中一种；重结晶溶剂为水。
7.根据权利要求6所述光降解产物的制备方法，其特征在于：用二氯甲烷提取样品溶液后，进行冷冻干燥制成粉末，以纯化水作为溶剂进行重结晶，重结晶后的固液混合物经离心后取上清液，得浓缩物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，重结晶方法为向300mg冻干粉末加4ml纯化水，混匀后置于50℃水浴中加热，并适时搅拌，1小时后取出置于4℃冷却。
9.根据权利要求3所述光降解产物的制备方法，其特征在于步骤(3)中，将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，色谱条件如下，
填充剂：烷基键合硅胶；
流动相：甲醇和甲酸水溶液，甲醇体积百分浓度为20-60％；
流动相流速：1～2mL/min；
检测波长：250～300nm；
柱温：30～50℃；
收集洗脱液，浓缩，干燥即得所述光降解产物。
10.根据权利要求9所述光降解产物的制备方法，其特征在于，将上述光降解产物浓缩物用制备液相纯化，色谱条件如下，
填充剂：十八烷基键合硅胶；
流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55，v/v)，等度洗脱；
流动相流速：1.3mL·min-1；
检测波长：280nm；
柱温：45℃；
收集洗脱液，减压旋转蒸发浓缩，真空干燥即得所述光降解产物。
11.一种权利要求1所述盐酸莫西沙星的光降解产物的液相分析方法，其特征在于，具体分析方法如下：
(1)对照品溶液的制备
选择权利要求1或2所述的盐酸莫西沙星的光降解杂质作为对照物质，采用稀释液溶解，配成每1mL含0.1-2μg所述盐酸莫西沙星的光降解杂质溶液作为对照品溶液，其中所述的稀释液选自水、甲醇、乙腈其中一种；
(2)供试品溶液的制备
取盐酸莫西沙星注射液，采用稀释液稀释，配制成每1mL含10-20mg盐酸莫西沙星的溶液，经光降解后的，作为供试品溶液，其中所述的稀释液选自水、甲醇、乙腈其中一种；
(3)色谱条件：
填充剂：烷基键合硅胶；
流动相：甲醇和甲酸水溶液，甲醇体积百分浓度为20-60％；
流动相流速：1～2mL·min-1；
检测波长：250～300nm；
柱温：30～50℃；
(4)测定方法
分别精密量取所述供试品溶液和所述对照品溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
12.如权利要求11所述的盐酸莫西沙星的光降解产物的液相分析方法，其特征步骤在于，步骤(3)所述的色谱条件为：
填充剂：十八烷基键合硅胶；
流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液(45∶55，v/v)，等度洗脱；
流动相流速：1.3mL·min-1；
检测波长：280nm；
柱温：45℃。
13.一种权利要求1所述光降解产物的制备方法，其特征在于，该光降解产物是采用如下所示的化学方法定向合成的，具体如下，
a)将式2化合物即吡咯，溶于二氯甲烷，再加入咪唑，降温至内温0-5℃，缓慢加入三异丙基氯硅烷，滴毕保温反应1h，缓慢升至25-30℃继续搅拌反应2h，TLC监控反应完全，过滤，滤液中加入二氯甲烷和水，洗涤分层，有机相干燥，浓缩得到式3化合物；
b)将醋酸钯，丙烯酸正丁酯，式3化合物，以及过氧化苯甲酸叔丁酯，投入到醋酸、二氧六环和二甲基亚砜的混合溶液中，40-45℃下搅拌反应24h，TLC监控完毕，将反应液倾入甲基叔丁基醚和水中，搅拌过滤，浓缩至干，柱层析分离得到主要产物，即式4化合物；
c)将式4化合物溶于四氢呋喃中，加入10％钯碳，通入氢气，25-30℃下常压氢化5-10h，过滤除去钯碳，滤液减压浓缩蒸去溶剂，得式5化合物；
d)将式5化合物溶于无水四氢呋喃中，降温至内温-5-0℃，加入四氢铝锂，在0-5℃下搅拌2h，缓慢滴加入饱和氯化铵水溶液终止反应，反应液用甲基叔丁基醚萃取，干燥，浓缩得到式6化合物；
e)将式6化合物溶于无水二氯甲烷中，加入三乙胺，降温至0-5℃，搅拌下滴加入对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，0-5℃搅拌3h，TLC监控反应完全，分取二氯甲烷层，用水洗涤，干燥，浓缩得到式7化合物；
f)将式7化合物溶于四氢呋喃中，加入氨水，氮气保护下回流反应3-10h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式8化合物；
g)将式8化合物溶于四氢呋喃中，加入氢氧化钠溶液，在内温0-10℃时，缓慢加入二碳酸二叔丁酯，滴毕，在25-30℃继续搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，得到式9化合物；
h)将式9化合物溶于四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液中，35±5℃下搅拌12h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，将有机相用水洗涤，干燥，浓缩得到式10化合物；
i)将式10化合物溶于四氢呋喃中，降温至内温-10-0℃，加入钠氢，保温搅拌1h，再加入1-环丙基-6，7-二氟-8-甲氧基-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸-O3，O4-二醋酸合硼酯即式11化合物，缓慢升至25-30℃继续搅拌3-10h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌后静置分层，有机相用水洗涤，干燥，得到式12化合物；
j)将式12化合物溶于四氢呋喃中，降温至内温-5-0℃，缓慢加入浓盐酸，缓慢升至25-30℃，继续搅拌2-5h，TLC监控反应完全，加入水和乙酸乙酯，搅拌静置分层，有机相用水洗涤，干燥，浓缩至干所得油状物采用柱层析纯化，得到式1化合物，即莫西沙星的光降解产物。
14.权利要求1或2所述的盐酸莫西沙星的光降解产物在盐酸莫西沙星及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。
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