CN109270059A - 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法 - Google Patents

碱性磷酸酶活性的双通道检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109270059A
CN109270059A CN201811229090.6A CN201811229090A CN109270059A CN 109270059 A CN109270059 A CN 109270059A CN 201811229090 A CN201811229090 A CN 201811229090A CN 109270059 A CN109270059 A CN 109270059A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alkaline phosphatase
fluorescence
dual channel
phosphatase activities
channel detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811229090.6A
Other languages
English (en)
Inventor
逯中
逯一中
陈传霞
姜媛媛
倪朋娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Jinan
Original Assignee
University of Jinan
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Jinan filed Critical University of Jinan
Priority to CN201811229090.6A priority Critical patent/CN109270059A/zh
Publication of CN109270059A publication Critical patent/CN109270059A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/3103—Atomic absorption analysis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6402—Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种比色‑荧光双通道检测碱性磷酸酶活性的方法，包括如下步骤：利用碱性磷酸酶催化其底物L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐(AAP)水解，产生具有还原性的抗坏血酸(AA)，而AA能够将托伦试剂还原成Ag单质；在金纳米粒子(AuNPs)和石墨烯量子点(GQDs)存在的条件下，Ag将会沉积到AuNPs表面形成金银核壳纳米粒子(Au@AgNPs)并猝灭GQDs的荧光。本发明将酶促银离子金属化、AuNPs诱导银沉积与Au@AgNPs猝灭GQDs荧光相结合，利用颜色、紫外‑可见吸收光谱和荧光强度的变化，能够实现对碱性磷酸酶活性的比色‑荧光双通道检测。该方法具有灵敏度高、特异性强、响应快、操作简单、不需复杂仪器等特点。

Description

碱性磷酸酶活性的双通道检测方法
技术领域
本发明涉及一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，属于酶检测技术领域。
背景技术
碱性磷酸酶(ALP)是一种重要的生物标志物，其表达异常与乳腺癌、前列腺癌、骨病、糖尿病和肝脏功能障碍等多种疾病相关。血清中ALP的定量检测可辅助诊断相关疾病。光谱分析法由于简单、响应快等优势在ALP检测中得到了广泛应用。但是，基于单一材料、具有单一比色或荧光输出信号的常规光谱法抗干扰能力差、准确度低，难以用于复杂样品中目标物的检测。随着纳米科技的进步，已发展了多种基于纳米金和纳米银的ALP比色传感方法，但这类方法的灵敏度有待提高；核壳结构纳米粒子微弱的壳层改变即可引起显著的光谱和颜色变化，其出现为进一步提高比色检测的灵敏度提供了可能性。此外，与单一元素组成纳米粒子相比，核壳结构纳米粒子是更优异的纳米猝灭剂，将其与荧光材料结合可以构建双通道超灵敏酶生物传感器，赋予检测更高的准确性与多样性。中国专利CN104007080A公开了一种基于金纳米棒长银壳的碱性磷酸酶分析方法，该方法中的核壳纳米棒的波长可变性虽能提供丰富的颜色变化，却也因此使其难以与荧光材料相结合来构建多重信号传感体系。石墨烯量子点作为一种新型荧光碳材料，毒性低、稳定性高、且生物相容性好，在化学和生物传感中有广泛的应用前景。常规的非掺杂石墨烯量子点发光性能差、量子产率低，杂原子掺杂能有效调控其光学特征并提高荧光量子产率。中国专利CN106769959A公开了一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法，该方法响应时间较长，比色检测灵敏度和可视化半定量检测的分辨率均较低。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其包括如下步骤：
将柠檬酸和半胱氨酸混匀后，在240℃下反应后，溶解于超纯水中，在分子量为500的透析袋透析，得到氮硫掺杂的石墨烯量子点；
利用Turkevich-Frens方法制备粒径为13nm的金纳米粒子；
将所述石墨烯量子点、金纳米粒子和托伦试剂混匀后，得到检测液；
将Tris-HCl缓冲溶液、超纯水和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐混匀后，均分成若干份，除一份不加碱性磷酸酶之外，其余分别加入不同已知浓度的碱性磷酸酶，均置于37℃下孵育；
孵育结束后，分别加入相同体积的所述检测液，室温下反应后，记录紫外-可见吸收光谱和激发波长为346nm下的荧光发射光谱，计算不同碱性磷酸酶活性对应的A410/A520值，以及1-F/F0值，得到A410/A520及1-F/F0与碱性磷酸酶活性之间的关系。
作为优选方案，所述金纳米粒子的制备方法为：
将氯金酸溶液加热至沸腾后，加入柠檬酸钠溶液，至颜色为酒红色，继续搅拌反应后，得到金纳米粒子溶液，置于4℃下备用。
本发明的实现原理如图1所示，碱性磷酸酶催化其底物L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐(AAP)水解生成具有还原性的抗坏血酸，抗坏血酸还原托伦试剂生成银单质并沉积在纳米金表面形成Au@AgNPs，导致溶液颜色和吸收光谱的变化；此外，生成的Au@AgNPs能有效地猝灭石墨烯量子点(GQDs)的荧光，导致溶液荧光强度的变化。由此，可通过溶液颜色、吸光度和荧光强度的同时变化实现碱性磷酸酶活性的比色与荧光双通道测定。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1、本发明的比色-荧光双通道方法不仅兼具比色法操作简单、结构可视化与荧光法灵敏度高的优势，而且能借助荧光和比色信号的同时变化提高检测的准确度和多样性；特别是结合两种不同材料的比色-荧光双通道方法，能够通过变化材料的种类或特征设计多种传感体系，为提高传感性能提供了更多可能性；
2、本发明首次利用氮硫掺杂石墨烯量子点与原位生成金银核壳纳米粒子构建碱性磷酸酶的双重传感器：将酶促银离子金属化、AuNPs诱导银沉积与Au@AgNPs猝灭GQDs荧光相结合，利用颜色、吸收光谱和荧光的变化，实现对碱性磷酸酶活性的比色-荧光双通道超灵敏检测，操作简单、响应快、特异性高；
3、本发明中的球形金纳米粒子制备工艺比金纳米棒更简单，且无需使用具有生态毒性的表面活性剂；能够将球形金银核壳结构(波长固定，吸收强度可变)与石墨烯量子点结合，得到比色和荧光两种输出信号，减小了环境波动引起的误差，增强了检测的可靠性、准确性和多样性，更适合实际应用；
4、本发明的方法通过引入金纳米粒子，使生成的银单质沉积在其表面，缩短了响应时间，增加了比色检测的灵敏度和可视化半定量检测的分辨率，在制备石墨烯量子点的过程中引入半胱氨酸，通过杂原子掺杂将其量子产率提高了近8.6倍；制备的石墨烯量子点的发射光谱在415nm处，与银纳米粒子的吸收峰(410nm)重叠程度更大；相对于银纳米粒子，该方法中生成的金银核壳纳米粒子是更优异的纳米猝灭剂，这些都极大地增加了荧光检测的灵敏度；
5、本发明的方法可以用于检测实际样品中ALP的酶活性，从而有潜力应用到临床检测或诊断与ALP表达异常相关的疾病。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为基于酶促生成Au@AgNPs比色与荧光检测ALP的原理示意图；
图2为加入不同浓度ALP后，体系的紫外-可见吸收光谱图变化；从下到上ALP的浓度依次为0、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2、3、4、6、8mU/mL；
图3为加入不同浓度ALP后，A410/A520与ALP浓度的关系曲线；
图4为加入不同浓度ALP后，体系的颜色变化；
图5为加入不同浓度ALP后，体系的荧光发射光谱图。从上到下ALP的浓度依次为0、0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2、3、4、6、8mU/mL；
图6为为加入不同浓度ALP后，荧光猝灭效率1-F/F0与ALP浓度的关系曲线；
图7为为比色检测碱性磷酸酶的特异性柱状图；
图8为荧光检测碱性磷酸酶的特异性柱状图；
图9为血清中碱性磷酸酶的检测结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明中涉及的缩写及术语解释：ALP：碱性磷酸酶；AAP：L-抗坏血酸酸-2-磷酸三钠盐；AA：抗坏血酸；GQDs：石墨烯量子点；AuNPs：金纳米粒子；Au@AgNPs：金银核壳纳米粒子；BSA：牛血清蛋白；lysozyme：溶菌酶；pancreatin：胰酶；pepsin：胃蛋白酶；trypsin：胰蛋白酶；Tris：三羟甲基氨基甲烷；A410/A520：体系紫外-可见吸收峰在410nm和520nm处强度的比值；荧光抑制效率：1-F/F0，F0和F分别代表加入ALP前后体系的荧光峰的强度。
实施例1
(1)GQDs的制备，具体包括如下步骤：
将1g柠檬酸和0.3g半胱氨酸在5mL的小烧杯中混合均匀后，利用加热套将其加热到240℃，该混合物在能够在2min内熔解成无色液体，并于10min内逐渐由无色经浅黄变为橙色，形成GQDs。将得到的产物溶解于超纯水，并用截留分子量为500的透析袋透析24h，最终得到的GQDs于室温黑暗条件下保存。所制备GQDs粒径在1.2-2.6nm之间，最大激发和发射波长分别在346nm和415nm处，量子产率为67％，室温下至少能保持半年稳定。
(2)AuNPs的制备，具体包括如下步骤：
所有用到的玻璃容器都用王水(浓盐酸与浓硝酸体积比为3:1)浸泡，并用超纯水清洗烘干备用。平均粒径为13nm、柠檬酸根包覆的AuNPs由经典的Turkevich-Frens方法合成：100mL氯金酸溶液(1mM)在剧烈搅拌下加热至沸腾后，迅速加入10mL柠檬酸钠溶液(38.8mM)，溶液颜色由浅黄色变为酒红色，在加热状态下继续搅拌10min。停止加热后，继续搅拌15min。待溶液冷却至室温后，将AuNPs溶液保存在4℃冰箱中备用。所制备AuNPs粒径为13nm，浓度为14nM，在520nm处有特征吸收峰。
(3)检测碱性磷酸酶活性的方法，具体包括如下步骤：
向含500μLTris-HCl缓冲溶液(2mM，pH 9.8)、300μL超纯水和20μL AAP(10mM)的系列1.5mL离心管中加入100μL不同浓度的ALP，混合均匀后于37℃水浴锅内孵育1小时。随后，向离心管中依次加入40μL AuNPs溶液(14nM)、10μL托伦试剂(20mM)、30μL GQDs溶液，室温下反应5min后记录反应液的紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱(激发波长为346nm)，并计算各ALP活性对应曲线的A410/A520值及1-F/F0值，确定比色和荧光检测碱性磷酸酶活性的线性范围和检出限。由图2可知，体系的紫外-可见吸收峰随ALP活性增加而逐渐增强，溶液颜色由红色经橙色最终变为黄色(图4)；在0.01～6.0mU/mL的范围内，A410/A520与ALP活性有良好的线性关系，检出限为0.009mU/mL(图3)。体系的荧光发射峰随ALP活性增加而逐渐减弱，ALP活性大于4mU/mL后，荧光强度变化不再明显(图5)；在0.01～2.0mU/mL的范围内，1-F/F0与ALP活性有良好的线性关系，检出限为0.005mU/mL(图6)。
本实施例对实验条件进行了优化，包括Tris-HCl缓冲溶液浓度、AAP和托伦试剂的浓度，孵育时间。Tris-HCl缓冲溶液浓度为：1～9mM；AAP浓度范围为：0～0.4mg/mL；托伦试剂浓度范围为：0～0.6mM；酶反应孵育时间范围为：0～80min；信号产生反应孵育时间为：0～10min。
最佳实验条件为：Tris-HCl缓冲液(pH 9.8)浓度为1mM；底物AAP浓度为0.2mM；托伦试剂浓度为0.2mM；碱性磷酸酶与AAP的孵育(37℃)时间为60min；信号产生步骤(室温)的孵育时间5min。
(4)抗干扰实验，具体步骤为：
各物质单独存在时的干扰实验：向含500μL Tris-HCl缓冲溶液(2mM，pH 9.8)、300μL超纯水和20μL AAP(10mM)的系列1.5mL离心管中加入100μL 0.1mg/mL的干扰物质(BSA、lysozyme、pancreatin、pepsin、trypsin)，混合均匀后于37℃水浴锅内孵育1小时。随后，向离心管中依次加入40μL AuNPs溶液(14nM)、10μL托伦试剂(20mM)、30μL GQDs溶液，室温下反应5min后记录反应液的紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱(激发波长为346nm)，并计算各物质对应曲线的A410/A520值及1-F/F0值。
各物质与ALP共存时的干扰实验：向含500μL Tris-HCl缓冲溶液(2mM，pH 9.8)、200μL超纯水、20μL AAP(10mM)和100μL ALP(20mU/mL)的系列1.5mL离心管中加入100μL0.1mg/mL的干扰物质(BSA、lysozyme、pancreatin、pepsin、trypsin)，混合均匀后于37℃水浴锅内孵育1小时。随后，向离心管中依次加入40μL AuNPs溶液(14nM)、10μL托伦试剂(20mM)、30μL GQDs溶液，室温下反应5min后记录反应液的紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱(激发波长为346nm)，并计算各物质对应曲线的A410/A520值及1-F/F0值。
结果如图7和8所示，其它酶或蛋白加入不含碱性磷酸酶的体系后，体系比色和荧光信号均无明显变化；其它酶或蛋白加入碱性磷酸酶反应体系后，比色和荧光信号与单独的碱性磷酸酶反应体系差别极小，说明该方法对碱性磷酸酶的检测特异性较好。
(5)血清中ALP活性的检测，具体步骤为：
分别将12份10μL不同的血清加入到含500μL Tris-HCl缓冲溶液(2mM，pH 9.8)、390μL超纯水和20μL AAP(10mM)的系列1.5mL离心管中，混合均匀后于37℃水浴锅内孵育1小时。随后，向离心管中依次加入40μL AuNPs溶液(14nM)、10μL托伦试剂(20mM)、30μL GQDs溶液，室温下反应5min后记录反应液的紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱(激发波长为346nm)，并根据得到的标准曲线计算每份血清对应的ALP活性。此外，利用基于磷酸单硝基苯基酯(pNPP)的标准比色法测定12份血清中ALP活性作为参照。
结果如图9所示，利用该方法测得各血清中ALP含量在29.4-95.6mU/mL之间，利用标准方法测得各血清中ALP含量在34.8-87.6mU/mL之间，与正常成人血清中ALP含量相符(～40-190mU/mL)；且本方法测得的每份血清中ALP含量与标准方法相一致。上述结果说明该方法能用于复杂实际样品中ALP活力的检测，且准确性良好。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (3)

1.一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
将柠檬酸和半胱氨酸混匀后，在240℃下反应后，溶解于超纯水中，在分子量为500的透析袋透析，得到氮硫掺杂的石墨烯量子点；
利用Turkevich-Frens方法制备粒径为13nm的金纳米粒子；
将所述石墨烯量子点、金纳米粒子和托伦试剂混匀后，得到检测液；
将Tris-HCl缓冲溶液、超纯水和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐混匀后，均分成若干份，除一份不加碱性磷酸酶之外，其余分别加入不同已知浓度的碱性磷酸酶，均置于37℃下孵育；
孵育结束后，分别加入相同体积的所述检测液，室温下反应后，记录紫外-可见吸收光谱和激发波长为346nm下的荧光发射光谱，计算不同碱性磷酸酶活性对应的A410/A520值，以及1-F/F0值，得到A410/A520及1-F/F0与碱性磷酸酶活性之间的关系。
2.如权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，所述柠檬酸和半胱氨酸的质量比为10:3。
3.如权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，所述金纳米粒子的制备方法为：
将氯金酸溶液加热至沸腾后，加入柠檬酸钠溶液，至颜色为酒红色，继续搅拌反应后，得到金纳米粒子溶液，置于4℃下备用。
CN201811229090.6A 2018-10-22 2018-10-22 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法 Pending CN109270059A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811229090.6A CN109270059A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811229090.6A CN109270059A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109270059A true CN109270059A (zh) 2019-01-25

Family

ID=65194106

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811229090.6A Pending CN109270059A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109270059A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109668881A (zh) * 2019-01-31 2019-04-23 湖南大学 基于温度变化的碱性磷酸酶便携式检测试剂盒及其应用
CN110108685A (zh) * 2019-05-09 2019-08-09 南宁师范大学 利用石墨烯量子点作为荧光探针检测碱性磷酸酶浓度的方法
CN111220609A (zh) * 2020-02-05 2020-06-02 江苏大学 基于CeVO4的碱性磷酸酶活度比色检测法
CN111965150A (zh) * 2020-07-30 2020-11-20 济南大学 一种基于原位生成的2,3-二氨基吩嗪荧光检测碱性磷酸酶的方法
CN112666092A (zh) * 2020-12-02 2021-04-16 中国科学院新疆理化技术研究所 一种具有高抗干扰性的检测识别爆炸物的方法及其应用
CN112730367A (zh) * 2020-12-30 2021-04-30 四川农业大学 一种基于便携式智能终端的多信号光谱传感平台对碱性磷酸酶的测定方法及装置

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104812697A (zh) * 2012-11-29 2015-07-29 北京奈艾斯新材料科技有限公司 一种氮硫共掺石墨烯量子点的制备方法
CN106769959A (zh) * 2016-11-21 2017-05-31 安徽医科大学 一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法、制备的传感器及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104812697A (zh) * 2012-11-29 2015-07-29 北京奈艾斯新材料科技有限公司 一种氮硫共掺石墨烯量子点的制备方法
CN106769959A (zh) * 2016-11-21 2017-05-31 安徽医科大学 一种基于荧光和比色双重模式检测碱性磷酸酶活性的方法、制备的传感器及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JINGJING LIU，ET AL.: "Chemical redox modulated fluorescence of nitrogen-doped graphene quantum dots for probing the activity of alkaline phosphatase", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
YUEHUA GUO,ET AL.: "A plasmonic colorimetric strategy for biosensing through enzyme guided growth of silver nanoparticles on gold nanostars", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109668881A (zh) * 2019-01-31 2019-04-23 湖南大学 基于温度变化的碱性磷酸酶便携式检测试剂盒及其应用
CN110108685A (zh) * 2019-05-09 2019-08-09 南宁师范大学 利用石墨烯量子点作为荧光探针检测碱性磷酸酶浓度的方法
CN111220609A (zh) * 2020-02-05 2020-06-02 江苏大学 基于CeVO4的碱性磷酸酶活度比色检测法
CN111965150A (zh) * 2020-07-30 2020-11-20 济南大学 一种基于原位生成的2,3-二氨基吩嗪荧光检测碱性磷酸酶的方法
CN111965150B (zh) * 2020-07-30 2022-12-20 济南大学 一种基于原位生成的2,3-二氨基吩嗪荧光检测碱性磷酸酶的方法
CN112666092A (zh) * 2020-12-02 2021-04-16 中国科学院新疆理化技术研究所 一种具有高抗干扰性的检测识别爆炸物的方法及其应用
CN112730367A (zh) * 2020-12-30 2021-04-30 四川农业大学 一种基于便携式智能终端的多信号光谱传感平台对碱性磷酸酶的测定方法及装置

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109270059A (zh) 碱性磷酸酶活性的双通道检测方法
Tang et al. Assays for alkaline phosphatase activity: Progress and prospects
Yao et al. Enzyme-activatable fluorescent probes for β-galactosidase: from design to biological applications
Peng et al. A new biosensor for glucose determination in serum based on up-converting fluorescence resonance energy transfer
Tang et al. A new nanobiosensor for glucose with high sensitivity and selectivity in serum based on fluorescence resonance energy transfer (FRET) between CdTe quantum dots and Au nanoparticles
Hu et al. H2O2-sensitive quantum dots for the label-free detection of glucose
Wang et al. A carbon dot-based ratiometric fluorometric and colorimetric method for determination of ascorbic acid and of the activity of ascorbic acid oxidase
Ma et al. A “switch-on” fluorescence assay based on silicon quantum dots for determination of ascorbic acid
CN108535236B (zh) 一种基于双重放大SERS信号系统超灵敏检测miRNA的方法
Huang et al. Gold nanoparticle–enzyme conjugates based FRET for highly sensitive determination of hydrogen peroxide, glucose and uric acid using tyramide reaction
Li et al. Alkaline phosphatase activity assay with luminescent metal organic frameworks-based chemiluminescent resonance energy transfer platform
Liu et al. Silicon quantum dots based dual-mode fluorometric and colorimetric sensing of D-penicillamine
Zhang et al. Inter filter effect between fluorescent copper nanoclusters and Cr (VI) and its application for probing the activity of alkaline phosphatase
Xu et al. Fluorometric determination of the activity of alkaline phosphatase based on the competitive binding of gold nanoparticles and pyrophosphate to CePO 4: Tb nanorods
CN114518344B (zh) 基于ACP@Ce/Tb-IPA的比率荧光和比色双模式检测农药残留的方法
Liu et al. “Turn-on” fluorometric probe for α-glucosidase activity using red fluorescent carbon dots and 3, 3′, 5, 5′-tetramethylbenzidine
Wang et al. Fluorescein-inspired near-infrared chemodosimeter for luminescence bioimaging
Hong et al. Gold nanoclusters/graphene quantum dots complex-based dual-emitting ratiometric fluorescence probe for the determination of glucose
Si et al. A novel surface-enhanced Raman scattering-based ratiometric approach for detection of hyaluronidase in urine
Sadani et al. Enzymatic optical biosensors for healthcare applications
Gao et al. Electrochemiluminescence immunosensor for cancer antigen 125 detection based on novel resonance energy transfer between graphitic carbon nitride and NIR CdTe/CdS QDs
Yin et al. Turn-on fluorescent inner filter effect-based B, S, N co-doped carbon quantum dots and vanadium oxide nanoribbons for α-glucosidase activity detection
Speranskaya et al. Enzyme modulation of quantum dot luminescence: Application in bioanalysis
CN112014336A (zh) 一种基于级联反应检测α-葡萄糖苷酶活性的普适性方法
Qin et al. A fluorescein–gold nanoparticles probe based on inner filter effect and aggregation for sensing of biothiols

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190125