CN109269934A - 一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,主要经由热蒸馏水和消泡剂的溶解,恒温水浴振荡,离心,烘干至恒重,即可计算得到待测猪血浆蛋白粉的水可溶物含量。与现有技术相比,本发明的测定方法操作更简便快捷,避免主观评判,实现溶液零转移,测定结果更快速、准确、重复性好。
Description
技术领域
本发明属于猪血浆蛋白粉检测技术领域,涉及一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法。
背景技术
猪血浆蛋白粉是采集经检疫合格的健康动物新鲜血液,经抗凝、冷却、过滤、分离、冷藏、调质、喷雾干燥、干粉速冻等工艺流程生产的高品质蛋白质饲料原料。猪血浆蛋白粉在其生产工艺过程中保留了原血浆中功能性免疫球蛋白的活性,而这些活性物质能显著降低免疫刺激,同时有效防止仔猪断奶后生长停滞和下痢。因此,可以通过测定猪血浆蛋白粉水可溶物来反映其变性蛋白的多少,进而初步评价该猪血浆蛋白粉的产品质量,具有重要意义。本发明方法能够快速准确测定猪血浆蛋白粉水可溶物以监控猪血浆蛋白粉质量及品质,对其采购和验收提供参考数据,同时对饲料品质安全具有重要的意义。
基于目前大家对猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法都稍有差异,且国标《GB/T33914-2017饲料原料喷雾干燥猪血浆蛋白粉》中关于猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法较为繁琐,其中涉及溶液的多次转移,易引起的实验误差,且不同操作人员存在不同的转移方式,重复性较差。本发明在现有方法的基础上进行研发创新,选用42-45℃蒸馏水进行样品的溶解及水浴温度,不仅测定结果准确、重复性好,而且该测定环境与猪肠胃的消化温度(42-45℃)相似,更接近动物体对猪血浆蛋白粉的溶解情况,测定结果可靠、稳定,更接近于真实值。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,包括以下步骤:
(1)取待测猪血浆蛋白粉置于恒重的带盖离心管中,加入热蒸馏水及一滴消泡剂后,上盖密封,摇匀,使得待测猪血浆蛋白粉完全浸湿并均匀分散于热蒸馏水中;
(2)再将离心管置于恒温水浴摇床中振荡,离心,倾出上清液后,将载有不溶物的带盖离心管烘干至恒重,即可计算得到待测猪血浆蛋白粉的水可溶物含量。
进一步的,待测猪血浆蛋白粉的水可溶物含量的计算公式如下:
式中,m为待测猪血浆蛋白粉质量,m0为恒重的带盖离心管的质量,mt为载有不溶物的带盖离心管恒重后的质量。
进一步的,步骤(1)中加入的蒸馏水的温度为42-45℃。
进一步的,步骤(1)中,待测猪血浆蛋白粉与热蒸馏水的质量体积比为1:9。
进一步的,步骤(2)中,水浴摇床中的温度为42-45℃。
进一步的,步骤(2)中,振荡的条件为:150~200r/min振荡30~45min。
进一步的,步骤(2)中,离心的条件为:8500r/min离心15min。
进一步的,步骤(2)中,烘干至恒重的过程为:取载有不溶物的带盖离心管在105℃±2℃下烘干,再在干燥器中冷却,称重,重复上述烘干、冷却至称重的过程,直至相邻两次称重差值小于0.002g为止。
更进一步的,步骤(2)中,第一次称重时对应的烘干时间为3-5h,其余各次称重时对应的烘干时间为1h。
与现有技术相比,本发明的测定方法操作更简便快捷,避免主观评判,实现溶液零转移,测定结果更快速、准确、重复性好。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
以下各实施例或对比例中所采用的试剂、以及仪器设备等注意事项:
1)所需溶剂及仪器设备:
1.1蒸馏水:应至少符合G/B 6682中三级用水的要求;
1.2消泡剂(硅油);
1.3离心管:50mL,耐受温度-80~120℃;
1.4分析天平:精确至0.0001g;
1.5电热干燥箱:温度可控至105℃±2℃;
1.6干燥器;
1.7移液管:10mL移液管,需提前校正;
1.8水浴恒温振荡器:上海跃进SHZ-B;
1.9高速离心机:转速可调0~16000r/min。
2)所用的待测试样的选取及制备
选取有代表性的待检测猪血浆蛋白粉试样,其原始量应在1000g以上。用四分法将原始样品缩减至500g,再用四分法缩至200g,装入密封容器,贴上标签,放置于阴凉干燥处待检。
实施例1
一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,具体包括以下步骤:
(1)准确称取待测样品约2.0000g,精确至±0.0001g,记为m,缓慢置于已恒重的带盖离心管中,用移液管准确量取18mL 43℃蒸馏水,缓慢加入离心管,再加入一滴消泡剂,并旋紧离心管盖,以防样品漏出(过程中动作要缓慢轻细,防止因样品质地较轻而飞出,对结果造成影响),摇匀,待样品完全浸湿且均匀分散在蒸馏水后,将离心管斜放置于43℃恒温水浴振荡器中,以180r/min振摇30min,使其完全溶解后,取出,擦干离心管外壁水分,在高速离心机中,8500r/min离心15min,小心地除去上清液。
(2)将载有不溶物的离心管及对应的离心管盖于105℃烘干4h(以温度达到105℃开始计时)。然后将其取出,旋紧离心管盖,在干燥器中冷却30min,称重。再打开离心管盖,在相同的温度条件下(105℃)继续烘干1h,再取出,旋紧离心管盖,于干燥器中冷却30min,称重,直至两次称重的差值小于0.002g,认定残渣已达到恒重,记录恒重后的载有不溶物的带盖离心管的质量总和为mt。
根据以下公式(一)即可计算得到待测猪血浆蛋白粉的水可溶物:
公式(一)
式中,m为待测猪血浆蛋白粉质量,m0为恒重的带盖离心管的质量,mt为载有不溶物的带盖离心管恒重后的质量。
同样的,本实施例中带盖离心管的恒重称量过程如下:
将干净的离心管及盖子做好标记并置于105℃烘箱内烘干至恒重,即在105℃℃烘箱内烘4h(以温度达到105℃开始计时),取出置于干燥器内冷却至室温,记录初重m1;再将其置于105℃烘箱内烘1h,取出置于干燥器内冷却至室温,记录末重m2,若m1与m2之差的绝对值<0.002g,即为恒重;反之则继续将其置于105℃烘箱内烘1h,取出置于干燥器内冷却至室温,记录末重m3,以此类推,直至恒重,并以恒重后的带盖离心管的质量记为m0。
采用实施例1中的方法对某一猪血浆蛋白粉进行水可溶物含量测定,重复5次,试验结果见下表1。
表1
序号 | 本发明方法检测水可溶物含量% |
1 | 88.20 |
2 | 88.56 |
3 | 88.47 |
4 | 88.02 |
5 | 88.55 |
标准偏差% | 0.24 |
由表1可知,采用实施例1的方法进行测试的结果稳定,重复性好,误差小。
下面继续在实施例1的基础上,通过调整所称取的猪血浆蛋白粉样品的质量,再在相同条件下进行其水可溶物含量测定,试验结果见下表2。
表2
由表2可知,在添加18mL蒸馏水的前提下,添加质量为2g样品的两平行组测量结果的绝对差值最小,其测量结果最为稳定。由此可见,随着称样量的变化,猪血浆蛋白粉水可溶物含量会产生变化,并且,猪血浆蛋白粉与热蒸馏水的质量体积比太大(如2:9),则溶液很容易达到饱和,样品的不溶物含量增加,导致最终测定结果偏小;反之,猪血浆蛋白粉与热蒸馏水的质量体积比太小(如1:12),则溶液被不断稀释,导致最终测定结果偏高。
对比例1(体积法)
称5g试样于50mL比色管中,加入45mL热蒸馏水(43℃)及一滴消泡剂,样品与热蒸馏水的质量体积比为1:9,然后用力振荡溶解,直至完全溶解。再将比色管竖立放置在试管架上,让其自然沉降约8h,观察溶液,量取样品溶液部分高度h,量取比色管中试液总高度H,样品水溶性%=h/H×100%。
对比例2(国标GB/T 33914-2017)
以样品质量与蒸馏水体积比为1:10的比例,在烧杯内加入定量的蒸馏水(25℃),采用电磁搅拌器搅拌30min后,再加入一滴消泡剂,然后将溶液分装于两个离心管,4000r/min离心20min,倾去上清液,用棉栓擦净管壁,再加入水约10mL,加塞,上、下摇动,使沉淀悬浮,再离心10min,倾去上清液,用棉栓擦净管壁,用少量水将沉淀冲洗入已知质量的称量皿,先在沸水浴上或在80℃干燥箱中将皿中水分蒸干,再移入105℃烘箱中干燥至恒重,最后,参照公式(一)计算水可溶物含量。
取待测猪血浆蛋白粉样品1-5号,分别将同一号样品按照实施例1、对比例1和对比例2中方法进行检测,试验结果见下表3。
表3
由表3可知,本发明实施例对猪血浆蛋白粉水可溶物含量的测定方法与国标测定的结果差别不大,表明本测定方法有效可行。而国标测定结果略高于本发明方法是国标在进行溶液和沉淀的多次转移过程中存在转移不完全而致使部分溶液或不溶物的损失,导致最终测定结果偏高;而本发明方法中实现零转移,使得测定结果更快速、简便、准确。此外,体积比法的测定结果与另两种方法的存在较大差异,其原因在于体积比法是通过肉眼观察,具有不可控的随意性,检测结果的可靠性较低,且因操作者不同,肉眼评判的标准不同,存在较大的误差。
因此,综合以上三种方法,采用本发明方法测定猪血浆蛋白粉水可溶物具有明显优势,一方面可排除体积比法通过肉眼观察的随意性,减少沉降时间,节约时间成本,检测结果更可靠;另一方面可克服在进行溶液和沉淀的多次转移过程中存在转移不完全而致使部分溶液或不溶物的损失的问题,测定结果更准确,而且操作更加简单快捷,重复性更好。
对比例3
与实施例1相比,除了本实施例中蒸馏水的温度和水浴振荡时的温度改为25℃外,其余均一样。
对比例4
与实施例1相比,除了本实施例中蒸馏水的温度和水浴振荡时的温度改为60℃外,其余均一样。
上述实施例1、对比例3、对比例4中,所测得的同一猪血浆蛋白粉水可溶物含量结果如下表4所示。
表4
溶解温度 | 水可溶物含量(%) |
实施例1(43℃) | 89.14 |
对比例3(25℃) | 87.64 |
对比例4(60℃) | 92.31 |
从表4可以看出,加入不同温度的蒸馏水及在不同温度下水浴振荡,均会在一定程度上影响猪血浆蛋白粉水可溶物含量测定。本发明通过多次研发试验发现,样品溶解温度及水浴温度较低时(如25℃),会阻碍样品的溶解,导致不溶物增加,致使得最终结果偏低;而样品溶解温度及水浴温度较高时(如60℃),在一定程度上会使得小分子的运动加剧,加速样品的溶解,导致不溶物减少,致使得最终结果偏高;而本发明方法样品的溶解及水浴温度为42-45℃,不仅测定结果准确、重复性好,而且该测定环境与猪肠胃的消化温度(42-45℃)相似,更接近动物体对猪血浆蛋白粉的溶解情况,使得测定结果可靠、稳定,更接近于真实值。
实施例2
一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,具体包括以下步骤:
(1)准确称取待测样品约2.0000g,精确至±0.0001g,记为m,缓慢置于已恒重的带盖离心管中,用移液管准确量取18mL 42℃蒸馏水,缓慢加入离心管,再加入一滴消泡剂,并旋紧离心管盖,以防样品漏出(过程中动作要缓慢轻细,防止因样品质地较轻而飞出,对结果造成影响),摇匀,待样品完全浸湿且均匀分散在蒸馏水后,将离心管斜放置于42℃恒温水浴振荡器中,150r/min振摇30min,使其完全溶解后,取出,擦干离心管外壁水分,在高速离心机中,8500r/min离心15min,小心地除去上清液。
(2)将载有不溶物的离心管及对应的离心管盖于103℃烘干5h(以温度达到105℃开始计时)。然后将其取出,旋紧离心管盖,在干燥器中冷却30min,称重。再打开离心管盖,在相同的温度条件下(103℃)继续烘干1h,再取出,旋紧离心管盖,于干燥器中冷却30min,称重,直至两次称重的差值小于0.002g,认定残渣已达到恒重,记录恒重后的留有不溶物的带盖离心管的质量总和为mt。
实施例3
一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,具体包括以下步骤:
(1)准确称取待测样品约2.0000g,精确至±0.0001g,记为m,缓慢置于已恒重的带盖离心管中,用移液管准确量取18mL 45℃蒸馏水,缓慢加入离心管,再加入一滴消泡剂,并旋紧离心管盖,以防样品漏出(过程中动作要缓慢轻细,防止因样品质地较轻而飞出,对结果造成影响),摇匀,待样品完全浸湿且均匀分散在蒸馏水后,将离心管斜放置于45℃恒温水浴振荡器中,以200r/min振摇30min,使其完全溶解后,取出,擦干离心管外壁水分,在高速离心机中,8500r/min离心15min,小心地除去上清液。
(2)将载有不溶物的离心管及对应的离心管盖于107℃烘干3h(以温度达到105℃开始计时)。然后将其取出,旋紧离心管盖,在干燥器中冷却30min,称重。再打开离心管盖,在相同的温度条件下(107℃)继续烘干1h,再取出,旋紧离心管盖,于干燥器中冷却30min,称重,直至两次称重的差值小于0.002g,认定残渣已达到恒重,记录恒重后的留有不溶物的带盖离心管的质量总和为mt。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改,并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此,本发明不限于上述实施例,本领域技术人员根据本发明的揭示,不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取待测猪血浆蛋白粉置于恒重的带盖离心管中,加入热蒸馏水及消泡剂,上盖密封,摇匀,使得待测猪血浆蛋白粉完全浸湿并均匀分散于热蒸馏水中;
(2)再将离心管置于恒温水浴摇床中振荡,离心,倾出上清液后,将载有不溶物的带盖离心管烘干至恒重,即可计算得到待测猪血浆蛋白粉水可溶物含量。
2.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,待测猪血浆蛋白粉的水可溶物含量的计算公式如下:
式中,m为待测猪血浆蛋白粉质量,m0为恒重的带盖离心管的质量,mt为载有不溶物的带盖离心管恒重后的质量。
3.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(1)中加入的热蒸馏水的温度为42-45℃。
4.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(1)中,待测猪血浆蛋白粉与热蒸馏水的质量体积比为1:9。
5.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(2)中,水浴摇床中的温度为42-45℃。
6.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(2)中,振荡的条件为:150~200r/min振荡30~45min。
7.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(2)中,离心的条件为:8500r/min离心15min。
8.根据权利要求1所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(2)中,烘干至恒重的过程为:取载有不溶物的带盖离心管在105℃±2℃下烘干,再在干燥器中冷却,称重,重复上述烘干、冷却至称重的过程,直至相邻两次称重差值小于0.002g为止。
9.根据权利要求8所述的一种猪血浆蛋白粉水可溶物的测定方法,其特征在于,步骤(2)中,第一次称重时对应的烘干时间为3-5h,其余各次称重时对应的烘干时间为1h。
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