CN109234453A - 一种hpv dna检测试剂盒 - Google Patents

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汪宁梅
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Abstract

本发明涉及一种HPV DNA检测试剂盒，包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液包括以下组分：三甲基甘氨酸、硫酸铵、海藻糖、氯化钙、Triton X‑1000和叠氮钠；所述扩增引物为HPV16型扩增引物。利用本发明HPV DNA检测试剂盒进行PCR扩增效果更好，进而使得对HPV的检测更加精确。

Description

一种HPV DNA检测试剂盒
技术领域
本发明涉及一种HPV DNA检测试剂盒，属于分子生物检测技术领域。
背景技术
人类乳头状瘤病毒（Human papillomavirus, HPV）是一种嗜上皮性病毒，有高度的特异性，属双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对；其中包括8个早期开发读码框架（E1-E8）、2个晚期读码框架和1个非编码长控去。在早期开放读码框架下，E6和E7基因对细胞生长刺激最为重要，E6、E7编码的E6、E7蛋白引起宫颈上皮细胞永生话；而晚期读码框L1和L2基因分别编码HPV的主要和次要衣壳蛋白，组装成HPV的衣壳。
正常的子宫颈被HPV感染后，大部分人能自动清除，但病毒停留于体内超过一年则可能引起细胞则可能引起细胞异常或轻度癌症。在子宫颈癌形成之前会有一段病变期，由轻度到中度再到高度，已病变的人再感染致癌型HPV，则易发展成高度病变或者子宫颈癌，在高度病变或者侵犯性子宫颈癌的子宫颈分泌物中，可以坚持到HPV DNA的存在。但是，并非所有的子宫颈癌都是从轻度病变开始的，其余感染的HPV型别有关。
HPV可区分为低危险型和高危险型，与宫颈癌相关的高危型HPV有16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、62、68、82；其中，HPV16型在宫颈磷状上皮细胞癌中占主要地位，18型在宫颈腺状上皮细胞癌和腺鳞细胞癌中占主要地位，除此之外，我国HPV类别中52和58型HPV检出率较高。
目前，针对HPV急需一种快捷精确的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种HPV DNA检测试剂盒，本发明HPV DNA检测试剂盒中PCR的缓冲液稳定性强，不易结晶；且对HPV的检测更加灵敏。本发明技术方案如下：
一种HPV DNA检测试剂盒，包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液包括以下组分：三甲基甘氨酸、硫酸铵、海藻糖、氯化钙、Triton X-1000和叠氮钠；所述扩增引物为HPV16型扩增引物。
进一步的，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.5-4.8g/L、硫酸铵5-5.5mM、海藻糖1-3g/L、氯化钙1-3g/L、Triton X-1000 2-4%（v/v）、叠氮钠0.1-0.2g/L，余量为去离子水。
更进一步的，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.6g/L、硫酸铵5.3mM、海藻糖2g/L、氯化钙2g/L、Triton X-1000 3%（v/v）、叠氮钠0.1g/L，余量为去离子水。
更进一步的，所述PCR缓冲液的pH为9.0-9.5；优选的，所述pH为9.3；更优选的，利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH。
更进一步的，HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
本发明的使用方法同常规检测试剂盒。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
利用本发明HPV DNA检测试剂盒进行PCR扩增效果更好，进而使得对HPV的检测更加精确；本发明的PCR缓冲液稳定性强，不易结晶，尤其是缓冲液中含有海藻糖，提高了PCR的反应效率。
附图说明
为更清楚地说明背景技术或本发明的技术方案，下面对现有技术或具体实施方式中结合使用的附图作简单地介绍；显而易见地，以下结合具体实施方式的附图仅是用于方便理解本发明实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；
图1为DNA凝胶电泳图；其中，1为利用本发明PCR扩增后的DNA凝胶电泳图，2为利用对比文件1检测试剂盒PCR扩增后的DNA凝胶电泳图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1 一种HPV DNA检测试剂盒
检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.6g/L、硫酸铵5.3mM、海藻糖2g/L、氯化钙2g/L、Triton X-1000 3%（v/v）、叠氮钠0.1g/L，余量为去离子水；利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH至9.3。
HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
实施例2一种HPV DNA检测试剂盒
检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.5g/L、硫酸铵5.5mM、海藻糖1.5g/L、氯化钙1.5g/L、Triton X-1000 3%（v/v）、叠氮钠0.2g/L，余量为去离子水利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH至9.1。
HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
实施例3一种HPV DNA检测试剂盒
检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.7g/L、硫酸铵5.2mM、海藻糖2.5g/L、氯化钙2.5g/L、Triton X-1000 1.5%（v/v）、叠氮钠0.1g/L，余量为去离子水利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH至9.2。
HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
实施例4一种HPV DNA检测试剂盒
检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.8g/L、硫酸铵5.4mM、海藻糖2g/L、氯化钙1.5g/L、Triton X-1000 1%（v/v）、叠氮钠0.2g/L，余量为去离子水利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH至9.5。
HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
对比例1调整PCR缓冲液后的HPV DNA检测试剂盒
检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液为常规PCR缓冲液；
HPV16型上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
实验例 利用本发明HPV DNA检测试剂盒对HPV16型进行检测
在同等条件下利用本发明和对比例1中的检测试剂盒对样品进行扩增，扩增后DNA凝胶电泳如图1所示，1为利用本发明PCR扩增后的DNA凝胶电泳图，2为利用对比文件1检测试剂盒PCR扩增后的DNA凝胶电泳图；结果显示，本发明扩增效果优于对比例1。

Claims (7)

1. 一种HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，HPV DNA检测试剂盒包括PCR缓冲液和HPV16型扩增引物；所述PCR缓冲液包括以下组分：三甲基甘氨酸、硫酸铵、海藻糖、氯化钙、TritonX-1000和叠氮钠；所述扩增引物为HPV16型扩增引物。
2. 根据权利要求1所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.5-4.8g/L、硫酸铵5-5.5mM、海藻糖1-3g/L、氯化钙1-3g/L、TritonX-1000 2-4%（v/v）、叠氮钠0.1-0.2g/L，余量为去离子水。
3. 根据权利要求2所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.6g/L、硫酸铵5.3mM、海藻糖2g/L、氯化钙2g/L、Triton X-1000 3%（v/v）、叠氮钠0.1g/L，余量为去离子水。
4. 根据权利要求1所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液的pH为9.0-9.5。
5. 根据权利要求4所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液的pH为9.3。
6. 根据权利要求4或5所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH。
7. 根据权利要求1所述的HPV DNA检测试剂盒，其特征在于，HPV16型扩增引物的上游引物为：5’-ACCGTTCGATGTATGTCTTGTTG-3’； HPV16型下游引物为：5’-AATTCAATACGACTCACTATAGGGC-3’。
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