CN109161519A - 一种磁性纳米材料分离xy精子的方法 - Google Patents

一种磁性纳米材料分离xy精子的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括：配比精液分离液、人工采集精液、精液检测、精液稀释、XY精子分离、精液保存，其中XY精子分离通过使用直径50纳米、带负电荷的氧化铁核纳米硅材料，利用XY精子本身所带电荷不同，其中Y精子电荷与纳米材料电荷相近，接触后可形成复合体，并在磁力作用下Y精子‑纳米材料复合体与试管壁发生粘附，没有形成复合体的X染色体悬浮于液体中，进而实现对精子进行分离。本发明达到了精液分离效率高、操作简便、成本低、效果显著，对动物影响小的优点。

Description

一种磁性纳米材料分离xy精子的方法
技术领域
本发明涉及一种磁性纳米材料分离XY精子的方法，属于繁殖领域。
背景技术
目前市场上常见的XY精子分离方法主要有流式细胞仪分离和密度梯度离心分离两种方法。其中，流式细胞仪分离面临设备贵、分离慢，密度梯度离心分离效果不佳等问题。市场急需建立省时省力，适于规模化生产和应用且快速、简便、准确的分离体系来促进畜牧行业的发展；
通过性别控制，不但可减少性连锁遗传疾病的发生，既帮助具有性连锁隐性遗传病的患者选择后代性别，避免遗传疾病的发生；也可挽救濒临灭绝的珍稀物种；更重要的是可使乳用家畜多产母畜，满足畜牧生产需要，大大提高畜牧生产的经济利益。同时，优质种公畜精液的分离不但能够提高家畜繁殖效率，也能够减少家畜遗传疾病的传播，这在家畜遗传育种中尤为重要。
发明内容
本发明为了解决上述现有技术中存在问题，提供一种磁性纳米材料分离XY精子的方法，以解决现在XY精子分离设备贵、分离慢的技术问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：采集精液离心后使用分离液重新悬浮、稀释，按比例缓慢加入纳米材料使其与Y精子充分混合，静止一定时间等待Y精子与管壁附着后，使用移液枪将悬浮精子移入新离心管中，即为分离的X精子。
本发明提供了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括以下步骤：
(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342。
(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。
(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统 (CASA：Computer-assisted sperm analysis)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心。
(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml。
(5)X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。
(6)精液保存：根据采集精液中精子总数，用精液稀释液保存，用37℃预热稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定。
另外，根据本发明实施例的磁性纳米材料分离XY精子方法还可以具有以下附加技术特征：
分离精液体外保存。所述在保证精子活性的同时，可根据分离精子总数，密度及输精使用量要求，用精液低温保存稀释液将精子进行一定密度比例稀释，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存。
这样，通过使用磁性纳米材料、利用XY精子特性对采集精子进行分离后的分离效率明显优于传统的分离方法。上述分离方法能够保证精子的活率和膜完整率，可使乳用家畜多产母畜，满足畜牧生产需要，大大提高畜牧生产的经济利益；本发明的分离液配制简单，使用方便，随用随取，省时省力，适于规模化生产和应用。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。
本发明提供了一种磁性纳米材料分离XY精子方法，包括以下步骤：
(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342。
(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。
(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统 (CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心。
(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml。
(5)X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。
(6)精液保存：根据采集、分离精子数，使用37℃预热精液低温保存稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4 度进行低温保存，并使用精子全自动分析系统(CASA)定时检测不同保存时间的精子活力，然后用SPSS软件进行统计分析。
具体的，
(1)人工采集精液：使用假阴道方法采集公畜精液，采精前，向假阴道内加入适量的温水，水温为42-45℃。公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干。临采精前在一次性里衬内，其中深度为1/3处均匀地涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力。采精器准备妥当后，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。
(2)精液质量检测：将采集的精液滤除凝胶部分后置于38℃预热的量筒中，读取精液体积，用精子密度仪测量精子密度，先加入3mL生理盐水于比色皿中，归零，后于精液液面下中部取120μL原精液加入比色皿中，混合均匀，测量密度。同时，精液液面以下中间部位取7μL原精液置于预热的载玻片上，盖上盖玻片，置于带有38℃恒温板的显微镜下用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测精液活力。每个样本检测5个视野，记录前进式活力和快速前进式活力。检测密度≥1.5×108个/ml，直线前进运动式活力≥0.7的精液用于以下操作。
(3)精液稀释：精子500G离心10分钟后弃去上清，根据精子数使用分离液将精子重新悬浮到100×106个/ml。
(4)X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。具体的为重新悬浮精子中添加纳米材料并缓慢混合5分钟，静止30分钟。然后使用移液枪将管中悬浮部分的液体转移到新的离心管中，即为分离的X精子。
此外，对分离精液体外保存。根据采集、分离精子数，使用37℃预热精液低温保存稀释液对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度进行低温保存，并使用精子全自动分析系统(CASA)定时检测不同保存时间的精子活力。所述精液分离液在保证精子活性的同时，可将精子进行一定比例密度稀释。
此外，本发明还提供了一种精子分离液，具体的，精子分离液，包括：丙酮酸钠、硫酸镁、链霉素、磷酸二氢钾、青霉素、氯化钾、葡萄糖、碳酸氢钾、氯化钠、60％乳酸钠、氯化钙。其中每100ml的精子分离液中，各组分的质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA(牛血清蛋白)：60％乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342，各组分含量可为：丙酮酸钠3.65mg、硫酸镁4.93mg、链霉素5mg、磷酸二氢钾5.04mg、青霉素7.5mg、氯化钾34.96mg、葡萄糖50mg、碳酸氢钾210mg、氯化钠593.75mg、60％乳酸钠0.342mg、氯化钙60mg、BSA 400mg。其中，葡萄糖为无水葡萄糖，其分子式为C6H12O6，氯化钙为二水氯化钙，其分子式为Cacl2.2H20，硫酸镁为七水硫酸镁，其分子式为MgSO4.7H2O。
具体的，本发明提供的是一种加抗氧化剂的糖类稀释分离液，其中丙酮酸钠、葡萄糖、 60％乳酸钠作为精子体外活动能量提供物质，丙酮酸钠具有抗氧化作用；硫酸镁、氯化钾、氯化钠、氯化钙提供精子盐离子平衡；碳酸氢钾、磷酸二氢钾为稀释液建立缓冲体系保证精子存在于较为恒定的PH环境中；BSA可对精子表面酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，并减轻不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。
精液分离稀释液是精子的保护剂，对精液保存的效果有重要的影响。哺乳动物常用的精液分离稀释液类型有加抗氧化剂的糖类稀释液、柠檬酸一糖一卵黄类稀释液和奶类稀释液等。无论使用哪种类型的精液稀释液，它们一般都应由维持渗透压物质、抑菌物质、防冻保护剂或低温保护剂等组成。其中，卵黄、奶类可在精子低温冷冻时起保护作用，但两种物质成份复杂，牛奶蛋白会影响纳米材料和Y精子表面结合以及结合的复合物在试管壁的粘附。柠檬酸一糖一卵黄类稀释液本身具有酸性条件，需要添加强碱性物质调节PH值，这将不利于精子的体外长时间保存。
本发明是将采集、离心后合格精子用分离稀释液重新悬浮到100×106个/ml，然后使用带负电荷、直径50纳米的氧化铁核外部覆盖纳米硅材料，利用X Y精子本身所带电荷不同(其中X为-20mv,Y为-16mv)、Y精子电荷与纳米材料电荷相近、接触后可形成复合体，在磁力作用下Y精子-纳米材料复合体与试管壁粘附，而X染色体由于没有形成复合体会悬浮于分离稀释液体中的原理对精子进行分离，然后将分离精子进行保存。
关于稀释密度等问题，由于公畜单次射精的总精子数约为2～15×109个精子左右。人工干预条件下，子宫体人工输精通常会输入250～500x 106直线前进精子。因此，将分离精子使用稀释分离液将精子重新悬浮到100×106个/ml可方便实际生产使用。
其中，使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。具体的为重新悬浮精子中添加纳米材料并缓慢混合5分钟，静止30分钟。待Y精子与纳米材料形成复合物后使用移液枪将管中悬浮部分的液体转移到新的离心管中，即为带有X染色体的精子。
实施例1：
本实施例用于说明精液分离液的制备及操作过程。
人工采集精液：采精前，向假阴道内加入适量的温水，水温为42～45℃。公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干。临采精前在一次性里衬内，其中深度为1/3处均匀地涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力。采精器准备妥当后，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室。
精液检测：精液采集后，使用4-6层脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统 (CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，要求精子活力0.90以上。最后，精液经过低速，约500g，常温离心10min后弃上清，进行下一步操作。
精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定。离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml。
X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合。具体的为重新悬浮精子中添加纳米材料并缓慢混合5分钟，静止30分钟。然后使用中控泵将管中悬浮部分的X染色体和纳米材料复合物吸取到新的管中，进行下一步操作。
精液保存：根据采集精液中精子总数，用精液稀释液低温保存，用37℃预热后对精液进行稀释。精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，正常范围内，精子密度为100×106个 /ml，人工授精时要求的活精子数最少为250～500×106个。实际操作中，1单位体积性控精液可使用1～2倍体积的37℃精液分离稀释液稀释，之后用5cm厚的脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存。定时检测不同保存时间(24h，48h，72h)的精子活力。检测使用精子全自动分析系统(CASA)。所有实验结果6次独立重复，最后用SPSS软件进行统计分析如表1。
表1性控精液与阴性对照低温保存
对同一时间内的保存效果进行对比；同一保存时间里上标小写字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。
结果发现，阴性对照组和性控组精子活力会随着低温保存时间的延长而下降。XY精子分离组精子活力和对照组活力在相同保存时间内相比，两者并无统计学差异。需要说明的是，本实验例对照组所使用的精液、与性控组仅有XY精子分离步骤差异。
精子分离效果检测：为验证分离精子有效性，采用流式细胞仪分离方法对分离的精液进行鉴定，结果见表2。
表2 X精子分离效果统计分析
其中每个样品独立采集6次精液分析鉴定(均值±方差)统计平均结果显示，约90％的分离精子为X精子。
利用SYBR-14/PI检测精子质膜完整性：精液标本用PBS(0.01mol/L，pH 7.4)洗涤2次后 300g离心5min。PBS悬浮精子，调整精子密度为1×106个/m L。SYBR-14贮存液于DMSO中稀释50倍，取5μL稀释液加入1mL精子悬浮液中(SYBR-14终浓度为100nmol/L)，振荡后在36℃恒温箱中避光孵育10min。之后用PBS洗涤1次除去游离的多余染料，然后用PBS重悬，加入5 μL PI(终浓度为12mol/L)，振荡后36℃恒温箱避光孵育10min，上流式细胞仪检测。
应用Cell Quest软件获取和分析数据：前向散射光和侧向散射光对数放大设门，荧光通道FL1(绿)和FL3(红)对数放大，检测每个精子SYBR-14和PI的荧光强度，每份悬液标本获取10000个精子。SYBR-14+/PI-表示质膜完整的精子，SYBR-14-/PI+表示质膜破损并已坏死的精子，SYBR-14+/PI+表示正处于将要死亡的过渡状态的精子。
表3不同精液稀释液对保存72小时精子活率及质膜完整性的影响
其中，SYBR-14+/PI-表示质膜完整的精子，SYBR-14-/PI+表示质膜破损并死亡的精子， SYBR-14+/PI+表示濒临死亡状态精子。
结果发现，精液低温保存72小时后，对照组和性控组精子质膜完整性(SYBR14+/PI-)分别为40.86±3.42和41.24±2.46，且两者之间无统计学差异(P＞0.05)。对照组和性控组质膜破损并死亡的精子(SYBR14-/PI+)分别为36.50±1.59和32.20±5.5，且两者之间无统计学差异(P＞0.05)。对照组和性控组濒临死亡状态精子(SYBR14+/PI+)分别为7.21±1.72 和6.82±1.45，且两者之间无统计学差异(P＞0.05)(表3)。
在实例1中分离液用同质量乳糖替换葡萄糖。结果表明，随着保存时间的延长，两者精子活率并无明显差别(表4)。
表4分离液中乳糖替换葡萄糖对精液低温保存活率影响
其中，同一时间内、同一字母表示差异不显著(P＞0.05)
实施例2：
本实验例用于说明本发明所述的纳米材料精液比优化。本实验例提供2个对比例，分别为：对比例1：将实施例1中的每100mL稀释液中将葡萄糖替换为同为乳糖，添加含量不变，50mg。对比例2：将实施例1中的纳米材料与精子比例3:1改变为1:1，2:1，4:1。将以上2个对比例与实施例1，在同样操作条件下按照实验例1的基本操作进行，所有实验结果6次独立重复，最后用SPSS软件进行统计分析如表4和表5。
表5不同纳米材料与精子比例对精子性控筛选结果
其中，4种纳米材料与精子比例分离效果进行对比；同一保存时间里上标小写字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。
表5结果表明，不同纳米材料与精子比例对分离效果有显著影响。在本实验例1中，1:1 组，2:1组，4:1组的分离效果分别为70.2±1.8，80.7±3.4，70.9±4.6。相较于上述3组，每个精子添加3分子纳米材料可以得到最佳的分离效果90.4±3.4(P＜0.05)。
有益效果:使用本发明动物XY精子分离液及分离方法进行精液的分离，克服了流式细胞仪仪器昂贵，分离效率慢，密度离心法分离效果不佳的缺点。精液效率明显优于传统分离方法，且分离液配制简单，使用方便，随用随取，省时省力，使用实际生产。分离精液可使乳用家畜多产母畜，提高畜牧生产的经济利益。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (3)

1.一种磁性纳米材料分离XY精子方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配比精液分离液，所述精液分离液配置质量比为：丙酮酸钠:硫酸镁:链霉素:磷酸二氢钾:青霉素:氯化钾:葡萄糖:碳酸氢钾:氯化钠:氯化钙:BSA：60％的乳酸钠＝3.65:4.93:5:5.04:7.5:34.96:50:210:593.75:60:400：0.342；
(2)人工采集精液，采精前向假阴道内加入适量的温水，公畜阴茎勃起后，使用苏打水进行清洗，然后使用清水冲洗干净并擦干，临采精前涂抹润滑剂，根据种公畜阴茎的长短，粗细调节采精筒的压力，采精员站在公畜右后侧，调教师牵引种公畜令其爬跨假台畜，并将阴茎导入采精筒内，待公畜射精后，将采精器集精杯端向下倾斜，同时打开放气阀放气，然后缓慢取下采精器，拿回处理室；
(3)精液检测：精液采集后，使用脱脂消毒纱布去除胶状物，用精子全自动分析系统(CASA)对其进行检测精液的活率、体积、密度，精液经过低速、常温离心；
(4)精液稀释：精液的稀释倍数根据其密度要求来确定，离心后的精子使用精液分离液重新悬浮到100×106个/ml；
(5)X Y精子分离：使用纳米材料与精子数按3:1进行混合，即3个纳米材料与1个精子混合；
(6)精液保存：根据采集精液中精子总数，用精液稀释液低温保存，用37℃预热后对精液进行稀释，精液的稀释倍数根据其密度及输精要求来确定，之后用脱脂棉包裹严密，放置于4度低温保存，定时检测不同保存时间的精子活力，检测使用精子全自动分析系统(CASA)，再用SPSS软件进行统计分析。
2.根据权利要求1所述的磁性纳米材料分离XY精子方法，其特征在于，提供一种精液分离液，所述精液分离液在保证精子活性的同时，将精子进行一定密度稀释。
3.根据权利要求1所述的磁性纳米材料分离XY精子方法，其特征在于，通过使用直径50纳米、带负电荷的氧化铁核纳米硅材料，利用XY精子本身所带电荷不同，其中Y精子电荷与纳米材料电荷相近，接触后可形成复合体，并在磁力作用下Y精子-纳米材料复合体与试管壁发生粘附，没有形成复合体的X染色体悬浮于液体中，进而实现对精子进行分离。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1667118A (zh) * 2004-08-31 2005-09-14 广西大学 一种分离哺乳动物xy精子的方法
CN101487841A (zh) * 2009-02-13 2009-07-22 刘瑜 一种包被载体及其在检测精子成熟度和无创分离成熟精子方法中的应用
CN103262837A (zh) * 2013-05-20 2013-08-28 北京市农林科学院 一种家畜精液冷冻保护剂及其应用
CN105232178A (zh) * 2015-09-25 2016-01-13 三穗县万顺养殖场 一种番鸭与麻鸭的人工授精方法
CN105646707A (zh) * 2016-02-26 2016-06-08 西北农林科技大学 用于牛、羊x/y精子快速分离的uty抗体纳米颗粒的制备方法及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1667118A (zh) * 2004-08-31 2005-09-14 广西大学 一种分离哺乳动物xy精子的方法
CN101487841A (zh) * 2009-02-13 2009-07-22 刘瑜 一种包被载体及其在检测精子成熟度和无创分离成熟精子方法中的应用
CN103262837A (zh) * 2013-05-20 2013-08-28 北京市农林科学院 一种家畜精液冷冻保护剂及其应用
CN105232178A (zh) * 2015-09-25 2016-01-13 三穗县万顺养殖场 一种番鸭与麻鸭的人工授精方法
CN105646707A (zh) * 2016-02-26 2016-06-08 西北农林科技大学 用于牛、羊x/y精子快速分离的uty抗体纳米颗粒的制备方法及应用

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