CN109161488A

CN109161488A - 一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法

Info

Publication number: CN109161488A
Application number: CN201811212342.4A
Authority: CN
Inventors: 冷桂华; 刘紫英; 袁斌; 王瑞君; 吕美云
Original assignee: Yichun University
Current assignee: Yichun University
Priority date: 2018-10-15
Filing date: 2018-10-15
Publication date: 2019-01-08
Anticipated expiration: 2038-10-15
Also published as: CN109161488B

Abstract

本发明提供一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法；是从一株亚香棒虫草的子实体分离纯化并经分子鉴定为白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮‑硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草，且菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤。

Description

一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法

技术领域：

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株菌株及其制备方法，特别是一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法。

背景技术：

虫草素的功效：虫草素是腺苷类活性物质，化学结构为 3-脱氧腺苷，是核苷类抗菌素。有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、免疫调节、抑制蛋白激酶活性、重建细胞骨架的作用。虫草素在小鼠 S180 肿瘤实验中有明显抑制作用，对小鼠的艾氏腹水癌也有同样效果；虫草素对炭疽杆菌、链球菌、出血性败血症菌均有抑制作用；对皮肤致病性真菌也有抑制作用，如小芽孢癣菌、大芽孢癣菌；对人体免疫缺陷型病毒和脑炎病毒的侵染和反转录酶的活性起到抑制作用；虫草素还具有抗白血病、抗炎症和免疫调节作用。

虫草素目前主要来源于化学合成、野生虫草和生物发酵三种途径。化学合成的虫草素，副产物多、产率低，反应原料贵且环境污染严重；野生虫草资源有限，虫草素含量低；生物发酵是菌种利用发酵培养基在较温和的条件下转化产生虫草素，可行性较好，菌种的选用是虫草素产量的关键因素之一。因此，因此在寻求高产虫草素的菌种；以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，经分离纯化培养、筛选、分子鉴定得到白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮-硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。该菌株高产虫草素，通过逐级培养，获得菌丝体，经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草；具菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤，有较广阔市场前景。

该菌种是原生态的、未进行基因操作，发酵转化只是利用基础培养基，未进行发酵培养基和条件的优化，胞内虫草素产率可达到6.83mg/g,胞外虫草素浓度可达12.2ug/ml，为后续培养基和发酵条件的优化，提高虫草素产率奠定良好的基础。

发明内容

本发明提供一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法；是从一株亚香棒虫草的子实体分离纯化并经分子鉴定为白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05。该菌种通过逐级培养，获得菌丝体，经液体发酵培养后，采用高效液相法分别测定孢内、胞外的虫草素、腺嘌呤和麦角甾醇的含量，同时采用蒽酮-硫酸比色法检测孢内、外虫草多糖，用高碘酸氧化比色法检测孢内、外产虫草酸。经检测发现菌丝体中虫草素含量远高于天然亚香棒虫草，且菌丝体内含有较高的麦角甾醇、虫草多糖、虫草酸和腺嘌呤。

本发明公开的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO: M 2018540，保藏日期，2018 年 8月14日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

本发明所述菌株为高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05，NCBI序列号MH890689；所述高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05的rRNA 基因 ITS1-5.8S-ITS4 区序列如下：

TATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAGTCCTACCTGATTTGAGCTCAGATTGTCAAATGATTGTCTCGGCAAGGAGACGGTTCGAAGCATGAACACCATAAATACTTCAACACCACAGCGCAGATAATTATCACACTGAAGGCGATCCGTAAGATTCACGCTAATGCATTTCAGAGGAGTCGACCGACAAGGGCCGACACAACCTCCAAGTCCAAGCCCGCTAAACCTTCATTACAAAAATTTAGGGGTTGAGAATACCATGAGACTCAAACAGGCATACTCCTCGGAATACCAAGGAGTGCAAGGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCGTTGCTGAAAGTTGTATATAAATGTGTTATACACAGTTGACATTCTATAACTGAAGCGTTTGTAGTAAAACATAAGAAAGAAAAACGGCTTGTTCAACCGAAGACCTCTCGCGAGATCCTGGAAGCTTCCACCATTTTTTTCTCTTACATAAAGTGCACAGAGGTTAAGAGTGGATGAGCCAGGCGTGCACATGCCTCGTGAGAGGCCAGCTACAACCCGTTCAAAACTCGATAATGATCCTTCCGCAGGT。

本发明的另一目的公开的是一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：

（1）固体分离培养：培养基选用改良马铃薯葡萄糖培养基，对亚香棒虫草的子实体采用表面消毒，组织分离法接种其到改良马铃薯葡萄糖培养基后培养得真菌，在 25-28℃条件下静止培养 5-10 天；纯化三次；经液体发酵筛选到白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05；然后接种白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05于改良马铃薯葡萄糖培养基中进行斜面培养，在25-28℃条件下静止培养 5-10 天，得白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05菌丝；

（2）种子培养：接种步骤（1）的白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05菌丝至种子培养基中，于 25-28℃条件下培养 5-10 天，得白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的种子菌液；

（3）发酵培养：按 5-20%（V/V）接种量接种步骤（2）白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的种子菌液至基础发酵培养基中，于 15-25℃条件下培养 7-18 天，得白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的发酵培养菌丝体；

（4）抽滤、烘干，制高产虫草素的白囊耙齿菌株：将步骤（3）所得的白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的发酵培养菌丝体进行抽滤、烘干、捣碎，即制得为高产虫草素的白囊耙齿菌株的菌丝粉产品。

所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其步骤（1）所述改良马铃薯葡萄糖培养基各组分的组成为：磷酸二氢钾 0.03-0.08%，马铃薯15-30%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁 0.03-0.08%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，琼脂1.5-2.0%。

所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其步骤（2）所述的种子培养基的各组分组成为磷酸二氢钾 0.03-0.07%，马铃薯15-25%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁0.03-0.06%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，其余为水，pH 自然；控制培养温度为25-28℃，转速为150r/min。

所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，优选的是其步骤（3）所述的发酵培养基包括如下质量组分组成：

1)碳源：葡萄糖1-3%，玉米粉1-3%，白糖0.5-1.5%，麸皮0.5-1.5%；

2)氮源：酵母浸膏0.1-0.3%，牛肉浸膏0.5-1.2%，豆粕0.5-1.5%，NH₄NO₃ 0.1-0.3%；

3)无机盐：MgSO₄ 0.05-0.09%,KH₂PO₄ 0.03-0.8%,K₂HPO₄ 0.03-0.08%，CaCl₂ 0.03-0.08%；

其余为水，pH 自然；控制发酵转化温度为15-25℃，转速为100r/min。

本发明制备的所述高产虫草素的白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05经上述方法培养，获得菌株菌丝粉，采用下述方法分别测定该菌种产虫草素、虫草多糖、虫草酸、腺嘌呤和麦角甾醇五类活性物质的含量：

(1) 虫草素含量的测定：采用液相色谱。

FL2200Ⅱ高效液相色谱仪, FL2200色谱工作站。色谱柱为NucleodurC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈：水(5:95);流速为1 ml/min;检测波长为２６０ nm;柱温为25℃。外标法计算含量,。

具体过程：发酵混合液进行抽滤，得1)滤液和2)菌丝。

1)胞外虫草素：滤液→真空浓缩→配成含85%乙醇溶液→4℃下过夜→过滤→滤液真空去酒精→浓缩液调配成流动相相似组成→用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

2) 胞内虫草素：菌丝→60℃下烘干→捣碎→液氮研磨→水超超声提取→过滤→滤液调配成流动相相似组成，用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

(2) 腺嘌呤含量的测定：仪器、条件和具体过程同（1）(虫草素含量的测定)

(3) 麦角甾醇含量的测定：仪器同（1）；流动相为甲醇；水=95；5，以紫外检测器检测，检测波长为282nm，流速1ml/min，柱温：25℃；

具体过程：发酵混合液进行抽滤，得1)滤液和2)菌丝。

1)胞外麦角甾醇：滤液真空浓缩→浓缩液调配成含95%乙醇溶液→4℃下过夜→过滤→滤液→用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

2) 胞内麦角甾醇：菌丝→60℃下烘干→捣碎→液氮研磨→95%乙醇超超声提取→过滤→滤液用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

(4)虫草多糖含量测定：采用蒽酮-硫酸比色法

将发酵液和培养的菌丝体通过水提、醇沉法获得虫草多糖，采用蒽酮-硫酸法测定亚香棒虫草多糖的量。

(5)虫草酸含量测定：采用高碘酸氧化比色法。

发酵混合液进行预处理得发酵液和菌丝体，发酵液直接利用高碘酸氧化比色法测定得胞外虫草酸含量；菌丝体烘干，破壁，水提液，采用高碘酸氧化比色法检测胞内虫草酸含量。

本发明一株亚香棒虫草中高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法的有益效果：

(1) 本发明公开的一株丝状真菌菌株为白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05，于 2018年 8月28日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO: M 2018540，经鉴定该菌株为白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05，ＮＣＢＩ获得序列号MH890689。

(2) 本发明的丝状真菌CHG05 经液体扩大培养，获得的虫草素产量高，高于天然亚香棒虫草；且含有一定量的虫草多糖、虫草酸、腺嘌呤和麦角甾醇等有效成分。

(3) 本发明所述的菌株利用基础发酵培养基能高产虫草素，产量可达6.83mg/g，为后续的培养基和发酵条件的优化，较大提高虫草素产量，进一步开发利用奠定了良好的基础。

（4）本发明的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05具有很高的产天然虫草素能力，能被广泛应用于制药、食品保健、动物营养饲料等多个行业，应用前景广阔。

附图说明：

图1、本发明高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05在改良马铃薯葡萄糖培养基上菌落形态图和液体发酵图；

图2、本发明制备的高产虫草素的白囊耙齿菌株的Irpex lacteus CHG05的rRNA 基因ITS1-5.8S-ITS4 区序列图；

图3，为本发明利用邻接法绘制本发明的高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05的 ITS序列的系统进化树；

图4、为本发明的高产虫草素白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05菌株的显微形态特征放大400倍的菌丝形态图；

图5、为虫草素对照品和本发明高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05提取液的HPLC色谱图。

具体实施方式：

以下实施例进一步说明本发明的内容，仅仅是为清楚说明本发明所作的举例，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对所属领域的普通技术人员来说，对本发明方法、步骤或条件所作的变化、变动、修改或替换，仍属于本发明的范围。下述实施方式中所述白囊耙齿菌和白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的意义相同。

本发明是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：

实施例 1

高产虫草素白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的固体分离与培养；

1、固体分离培养，

培养基使用改良马铃薯葡萄糖培养基:磷酸二氢钾 0.05%，马铃薯20%，蛋白胨1.0%，硫酸镁 0.05%，氨苄青霉素200ug/ml，葡萄糖2%，琼脂1.5%；

2、菌种的分离

在江西省宜春某县山区采集到亚香棒虫草，无菌水清洗2-3次；70%乙醇消毒3min，无菌水清洗4次；0.1% HgCl2消毒，消毒时间设1、2、3、4min 4个梯度，以考察其最佳消毒时间，无菌水清洗6次，无菌滤纸吸干水分；按不同部分切块，于分离培养基，倒置于培养箱中，于 26℃培养 8 天，平板上长出大小不一的菌落。

3. 菌株的纯化，

将平板上长出的单个菌落分别挑取到新的培养基平板上，进行传代培养 5-15 天，发现菌落、形态、大小一致，并通过显微镜对菌丝进行镜检，菌种单纯无杂菌污染。

4.纯化菌株的斜面培养，

接种上述纯化菌株于改良马铃薯葡萄糖培养基斜面，于 26℃条件下培养 6 天。

5.菌株的形态观察

在改良马铃薯葡萄糖培养基上接种6mm的菌块，26℃条件下培养，菌丝生长快，第七天覆盖平板，菌落如图1所示的白色后转变为淡黄色，菌落中心菌丝体初致密，后有微微隆起，稍离中心菌丝渐渐形成明显的圆环状，菌丝呈绒毛状渐变为棉花絮状；

下述实施例中未说明之处，均与实施例1相同。

实施例 2

高产虫草素白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05的液体培养，

1. 培养基

种子培养基：磷酸二氢钾 0.05%，马铃薯20%，蛋白胨1%，硫酸镁 0.05%，氨苄青霉素200ug/ml，葡萄糖2%。其余为水，pH 自然；

发酵培养基：碳源：葡萄糖2%，玉米粉2%，白糖1%；

　　　　　氮源：酵母浸膏0.2%，牛肉浸膏0.8%，豆粕1%，NH4NO3 0.2%；

　　　　　无机盐：MgSO₄ 0.07%,KH₂PO₄ 0.05%,K₂HPO₄ 0.05%,CaCl₂ 0.05%；

　　　　　其余为水，pH 自然。

2. 培养方法

菌种的扩大培养：挑取一环新鲜斜面生长的菌丝体，于种子培养基中震荡培养，培养温度为 25℃，转速为150r/min，培养7天，菌丝体干重达到发酵液的 0.6％。

发酵培养：按 8%（V/V）接种量接种至发酵培养基中，于 20℃条件下培养 12 天，菌丝体干重达到发酵液的 1.6％。

实施例 3

白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05液体发酵菌丝的有效成份分析

（１）高产虫草素的测定：采用液相色谱法

FL2200Ⅱ高效液相色谱仪, FL2200色谱工作站。色谱柱为NucleodurC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈：水(5:95);流速为1 ml/min;检测波长为２６０ nm;柱温为25℃。外标法计算含量；如图5所示。

具体过程：发酵混合液进行抽滤，得1)滤液和2)菌丝；

1)胞外虫草素：滤液→真空浓缩→调配成含８５%乙醇溶液→4℃下过夜→过滤→滤液真空去酒精→浓缩液配制成流动相组成→用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

2) 胞内虫草素：菌丝→60℃下烘干→捣碎→液氮研磨→水超超声提取→过滤→滤液调配成流动相组成用0.45 µm滤膜过滤→备用待检。

培养基，

测定方法，

1)虫草素标准曲线的制作：五个标准浓度为：25.5µg/ml ；51µg/ml ；76.5µg/ml ；102µg/ml； 127.5µg/ml,进样量为20µl，利用高液液相自带系统汇制成标准曲线；

2）胞内、外虫草素含量的测定：待检测的胞内、外溶液取20µl进样检测，调用标准曲线，读出含量，再根据样品处理过程的体积稀释倍数得出胞内、外虫草素的含量；

3) 测定实施例2发酵培养的白囊耙齿菌菌丝体粉中虫草素含量为6.83mg/g,发酵液中的虫草素为12.2ug/ml；

(2) 腺嘌呤含量的测定：采用液相色谱法

仪器、条件和具体过程同（1）(虫草素含量的测定)

测定实施例2发酵培养的白囊耙齿菌菌丝体粉中腺嘌呤含量为0.58mg/g,发酵液中的腺嘌呤为3.7ug/ml；

(3) 麦角甾醇含量的测定：采用液相色谱法

仪器同（1）；流动相为甲醇；水=95；5，以紫外检测器检测，检测波长为282nm，流速1ml/min，柱温：25℃。实施例2发酵培养的白囊耙齿菌菌丝体粉中麦角甾醇含量为1.42mg/g,发酵液中的麦角甾醇为0.09ug/ml；

(4)虫草多糖含量测定：采用蒽酮-硫酸比色法

将发酵液和培养的菌丝体通过水提、醇沉法获得虫草多糖，采用蒽酮-硫酸法测定白囊耙齿菌虫草多糖的含量。实施例2发酵培养的白囊耙齿菌菌丝体粉中虫草多糖含量为16.9mg/g，发酵液中的虫草多糖为1.23mg/ml；

(5)虫草酸含量测定：采用高碘酸氧化比色法，

发酵混合液进行预处理得发酵液和菌丝体，发酵液直接利用高碘酸氧化比色法测定得胞外虫草酸含量；菌丝体烘干，破壁，水提液，采用高碘酸氧化比色法检测胞内虫草酸含量。实施例2发酵培养的白囊耙齿菌菌丝体粉中虫草酸含量为1.69mg/g,发酵液中的虫草酸为0.52mg/ml。

实施例4

本发明制备的高产虫草素白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05菌株的鉴定

（1）形态染色

本发明高产虫草素白囊耙齿菌Irpex lacteus CHG05菌株的鉴定，放大400倍的菌丝形态如图4所示。

（2）菌株分子鉴定

用SDS -CTAB法提取亚香棒虫草真菌的DNA

（1）取50mg菌丝体到研钵中，同时加入65℃的相同分量的2%SDS和裂解缓冲液，充分研磨溶解，把研磨好所得的液体倒入1.5mL的离心管中，贴上标签。放到65℃的水浴锅中恒温保存30-50min，每过10min缓慢倒转离心管多次，使得样品充分溶解；

（2）恒温保存完后，在8000r/min的条件下离心5min，然后弃掉沉淀，留下上清液。加入1：5体积的5倍CTAB溶液。继续水浴65℃恒温保持10min。再加入相同体积的苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻缓倒转离心管使得溶液呈乳状，并且维持几分钟；

（3）8000r/min的条件下离心10min，取出上清液放到另一个离心管中，弃掉蛋白沉淀，不断加苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）溶液离心数次，一直等到上清液的液面变得清晰为止；

（4）将液面清晰的上清液转移到另一个离心管中，向其中加入两倍体积—20℃的95%乙醇。之后再将离心管保存在—20℃的冰箱中几个小时（时间越长越好)，用离心法取出DNA，即放入离心机中离心，然后弃上清液，留下沉淀，再加入70%乙醇润洗，离心得DNA沉淀。之后加入TE缓冲液溶解，放置于—4℃下保存备用；

电泳检测

取5 μl 所提取的DNA产物点样于1×TBE (40 mM Tris, 1 mM EDTA，pH8.0)的1%琼脂糖凝胶上，然后在100V条件下电泳50min，之后在紫外仪下检测产物，最后得出结果并进行分析。

PCR 扩增

通用引物ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG一3’)；ITS4(5'-GGAAGTAAAAGTCGTAAGG-3’)，反应体系组成（25ul）为：2×easyTaqPCRmix12.5ul，引物ITS1和ITS4各0.8ul，模板DNA1ul，去离子水9.9ul。PCR 反应循环参数为：反应条件：94℃ 4 min；94℃45 s；55℃ 45s，72℃ 1 min 30 个循环；72℃ 10 min。1%琼脂糖凝胶电泳检测，胶回收纯化目的片段，纯化产物由生工生物工程上海某有限公司测序，见图2所示。

以NCBI 数据库中Blastn 程序比对分析，使利用MEGA6.0软件和邻接法(neighbour-joining methods)进行聚类分析鉴定种属。

基于10个菌株ITS序列采用邻接法构建系统发育树，以确证菌株的分类归属如图3所示，由此可以看出与CHG05处于同一分支的4株菌株均为白囊耙齿菌Irpex lacteus ，并且这个菌株与白囊耙齿菌的ITS序列相似性达100%。Renske 等认为，通过ITS区域比对，序列相似性≥99%，鉴别为相同种，即菌株鉴定为白囊耙齿菌Irpex lacteus ；

如图3所示的是利用邻接法绘制高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteusCHG05的ITS序列的系统进化树。

是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：

序列表

<110> 宜春学院

<120> 一株高产虫草素的白囊耙齿菌株及其培养方法

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3

<212> DNA

<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum

<400> 1

Claims

1.一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO: M 2018540，保藏日期，2018 年 8月 28日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。

2.根据权利要求1所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株，其特征是所述菌株为高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05，NCBI序列号MH890689；所述高产虫草素的白囊耙齿菌株Irpex lacteus CHG05的rRNA 基因 ITS1-5.8S-ITS4 区序列如下：

3.根据权利要求1所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其特征是以亚香棒虫草中组织分离得到的菌株为菌种，包括如下方法步骤：

4.根据权利要求3所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其特征是，步骤（1）所述改良马铃薯葡萄糖培养基各组分的组成为：磷酸二氢钾 0.03-0.08%，马铃薯15-30%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁 0.03-0.08%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，琼脂1.5-2.0%。

5.根据权利要求3所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其特征是，步骤（2）所述的种子培养基的各组分组成为磷酸二氢钾 0.03-0.07%，马铃薯15-25%，蛋白胨0.5-1.5%，硫酸镁 0.03-0.06%，氨苄青霉素150-250ug/ml，葡萄糖1-3%，其余为水，pH 自然；控制培养温度为25-28℃，转速为150r/min。

6.根据权利要求3所述的一株高产虫草素的白囊耙齿菌株的培养方法，其特征是，步骤（3）所述的发酵培养基包括如下质量组分组成：

1)碳源：葡萄糖1-3%，玉米粉1-3%，白糖0.5-1.5%，麸皮0.5-1.5%；