CN109115585A - 一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法，所述全自动组织切片染色机包括：染色机本体，于所述染色机本体内设有18个试剂槽、1‑2个备用试剂槽及3‑4个水洗槽，本发明通过增加染色试剂槽的数量，并优化HE染色过程，使得染色质量更加稳定。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法。
背景技术
组织细胞又称吞噬细胞，来自血液中的单核细胞，可见于痰液、浆膜腔积液及宫颈涂片等标本中，组织细胞的检验需要对组织细胞进行切片染色，从而进行观察。在对组织细胞进行切片染色的时候，传统的方法就是需要人工对盛放皿进行更换，需要将组织细胞在一种盛放皿中浸泡后再放入另外的盛放皿中进行浸泡，浪费了实验时间，还有的装置在使用时，在对组织细胞进行染色的过程中需要手动对组织细胞进行染色，容易对染色剂掌握不准确，需要非常娴熟的手法进行操作，为使用者增加了难度，还有的装置在使用时，在对组织细胞进行观察的时候，一般直接进行观察，这样细胞比较混杂，不方便将细胞切开后进行观察，影响了观察的清晰度。
随着医学技术的不断发展，越来越多的自动化仪器被应用到病理检验中，由电脑程序控制的全自动组织切片染色机就是其中一种。现有的全自动组织切片染色机可以完全替代技术人员手工操作的染色步骤，自动完成石蜡切片的HE染色(hematoxylin-eosinstaining，伊红染色)过程，从而达到病理科现代化实验室生物质量管理要求。
图1为现有全自动组织切片染色机的俯视结构示意图。如图1所示，现有全自动组织切片染色机包括染色机本体1，所述染色机本体1内设置有18个试剂槽2以及5个水洗槽3(WASH1-WASH5)，总所周知，全自动组织切片染色机的程序编排越精确，染色效果越好。现有的全自动组织切片染色机中HE染色程序一般设置为脱蜡3道，各5min；无水乙醇2道，各30s；95％乙醇、80％乙醇各5s；水洗1min；苏木素染液10min；水洗30s；1％盐酸乙醇分化40s；水洗30s，0.5％氢氧化氨水30s；水洗1min；伊红染液40s；水洗30s；80％乙醇5s；95％乙醇5s；无水乙醇2道，各10s；二甲苯3道，各5s。
然而，实际操作应用中，通过现有的全自动组织切片染色机的HE染色程序得到的染色结果，染色质量不够稳定。因此考虑在伊红前增加一道80％乙醇，延长伊红的使用时间，以增加HE切片染色质量的稳定性，而这样现有的全自动组织切片染色机又存在试剂槽的数量不能满足HE染色步骤的问题。
发明内容
为克服上述现有技术存在的不足，本发明之目的在于提供一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法，以通过增加染色试剂槽的数量，并优化HE染色过程，使得染色质量更加稳定。
为达上述目的，本发明提出一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机，包括：染色机本体，于所述染色机本体内设有18个试剂槽、1-2个备用试剂槽及3-4个水洗槽。
优选地，在所述备用试剂槽为对长期不使用的水洗槽改装而成。
优选地，将该水洗槽的接水口堵塞住，将一备用试剂桶放入所述水洗槽位置形成所述备用试剂槽，所述备用试剂槽与其他的水洗槽务必在同一个水平位置。
为达到上述目的，本发明还提供一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，包括如下步骤：
步骤S1，将蜡块切片烘烤后，将其放置于所述全自动组织切片染色机进行染色；
步骤S2，依照现有HE染色程序步骤依序对所述切片进行伊红染色之前的步骤；
步骤S3，在伊红步骤前利用备用试剂槽对切片增加一道80％乙醇步骤，以延长伊红的使用时间；
步骤S4，依照现有HE染色程序步骤依序对切片进行伊红染色之后的步骤。
优选地，所述伊红为醇溶性伊红。
优选地，所述80％乙醇步骤的时间为10-30秒。
优选地，于步骤S2中，所述伊红染色之前的步骤具体包括：脱蜡3道；无水乙醇2道；95％乙醇、80％乙醇2道；水洗1道；苏木素染液1道；水洗1道；0.5％盐酸乙醇分化1道；水洗1道；饱和碳酸锂1道；水洗1道。
优选地，于步骤S2中，所述伊红染色之前的步骤具体包括：第一道二甲苯30秒，第二、三道二甲苯各5分钟；两道无水乙醇各30秒；95％乙醇、80％乙醇各30秒；水洗2分钟；苏木素染液10分钟；水洗1分钟；0.5％盐酸乙醇分化1秒；水洗1分钟；饱和碳酸锂30秒；水洗3分钟。
优选地，于步骤S2之前，还包括于染色前还需检查试剂是否适量，不足时及时添加试剂的步骤。
优选地，对于脱蜡及透明的染色液采用滚动更换的方法。
与现有技术相比，本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法通过将水洗槽改装成备用试剂槽，并利用该备用试剂槽于HE染色程序的伊红步骤前增加一道80％乙醇，以延长伊红的使用时间，提高组织切片的HE染色质量并能于较长时间内维持稳定。
附图说明
图1为现有全自动组织切片染色机的俯视结构示意图；
图2为本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的俯视示意图；
图3为本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法的步骤流程图；
图4A与图4B为本发明具体实施例中增加80％乙醇伊红更换5天后伊红染色情况与未增加80％乙醇伊红更换5天后伊红染色情况的对比图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例并结合附图说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其它优点与功效。本发明亦可通过其它不同的具体实例加以施行或应用，本说明书中的各项细节亦可基于不同观点与应用，在不背离本发明的精神下进行各种修饰与变更。
图2为本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的结构示意图。如图2所示，本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机，包括：染色机本体2，于染色机本体1内设有18个试剂槽2、1-2备用试剂槽3及3-4个水洗槽4，在本发明具体实施例中，除原先的18个试剂槽2外，该备用试剂槽为对长期不使用的水洗槽改装而成，即将该水洗槽的接水口5堵塞住，将一备用试剂桶平稳的放入水洗槽位置形成该备用试剂槽3，该备用试剂槽3与其他的水洗槽2务必在同一个水平位置。
本发明将长期不用的WASH2水洗槽改装成试剂槽，以满足本发明在伊红染液前增加一道乙醇的要求，同时又不减少其它试剂槽的数量。由于染色机机器中水洗槽的底部与机器的水管相连，因该水管为水平位，所以所有水洗槽的接口水压相等，当水洗槽工作时自来水从底部升起，从槽的上沿溢出。如果拔出其中一个水洗槽，大量的水从该接口溢出，其他水洗槽接口的水压骤降，槽内液面不能升起，不能形成流水冲洗的状态。因此本发明利用1ml塑料吸管盲端粗大部刚好能堵住该水洗槽的接口，又不会堵住染色机的水管，不会影响其它水槽接口的水压，保证了其它水洗槽能够正常工作。由于染色机程序设置中可以重复设置使用水洗槽，因此认为有3个水洗槽就足够程序设置使用。染色机的试剂槽完全可以增加到20个，使得程序编排更加精细化，有利于切片染色质量的提高。
图3为本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法的步骤流程图。如图3所示，本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，包括如下步骤：
步骤S1，将蜡块切片烘烤后，将其放置于所述全自动组织切片染色机进行染色。在本发明具体实施例中，烘烤温度为65℃，时间为30min。
步骤S2，依照现有HE染色程序步骤依序对切片进行伊红染色之前的步骤，即脱蜡3道；无水乙醇2道；95％乙醇、80％乙醇2道；水洗1道；苏木素染液1道；水洗1道；0.5％盐酸乙醇分化1道；水洗1道；饱和碳酸锂1道；水洗1道；
步骤S3，在伊红步骤前利用一备用试剂槽对切片增加一道80％乙醇步骤，以延长伊红的使用时间。具体地，所述80％乙醇步骤的时间为10-30s，这里需说明的是，切片进入脱水程序后不能在低浓度乙醇中停留时间过长，因低浓度乙醇会将伊红颜色过度分化，较佳地，于本发明中，所述80％乙醇步骤的时间为15s。
步骤S4，依照现有HE染色程序步骤依序对切片进行伊红染色之后的步骤，即，80％乙醇1道；95％乙醇1道；无水乙醇2道；二甲苯3道。由于本发明具体实施例中使用的伊红为醇溶性伊红，醇溶性伊红在染色中忌水洗，因此伊红染色后除去了水洗的步骤。
较佳地，于步骤S1中，伊红染色之前的步骤具体包括：第一道二甲苯30s，第二、三道二甲苯各5min；两道无水乙醇各30s；95％乙醇、80％乙醇各30s；水洗2min；苏木素染液10min；水洗1min；0.5％盐酸乙醇分化1s；水洗1min；饱和碳酸锂30s；水洗3min。与现有HE染色程序相比，本发明缩短了第一缸脱蜡二甲苯的时间，因第一缸二甲苯溶解的石蜡最多，其二甲苯的纯度是最低的，切片应尽量减少在其中的停留时间以保证脱蜡质量。在本发明具体实施例中，盐酸分化设定为1s，浓度应由1％该为0.5％，由于机械臂每次起落均需耗费8s左右的时间，所以实际的时间为9s。
较佳地，于步骤S2之前，于染色前还需检查试剂是否适量，不足时及时添加试剂。在本发明具体实施例中，脱蜡及透明的染色液可采用滚动更换的方法，即废弃第一道乙醇或二甲苯，将后面的依次前移，在最后一道相应的乙醇或二甲苯试剂缸中加入新的试剂。在这需说明的是，染色中的步骤是不变的，只是其中的液体由后一缸中的液体代替，在同种液体的最后一缸加入新的试剂。
以下将通过具体实施例对本发明进行说明：
在本发明具体实施例中，首先利用一1ml的塑料滴管，剪去塑料滴管的细长部分，保留盲端粗大部分长约2.0cm，用剪下来的塑料滴管盲端部堵塞WASH2水洗槽接水口，将备用试剂槽平稳的放入WASH2水洗槽位置，务必使该备用试剂槽与其他的水洗槽在同一个水平位置。
将蜡块切片烘烤(温度为65℃，时间30min)后，置于本发明之全自动染色机中染色。执行染色程序如表1所示：
表1染色程序
即本发明利用改装的该备用试剂槽于伊红步骤前增加一道80％乙醇，时间为15s，以延长伊红的使用时间，增加HE切片染色质量的稳定性。
虽然现有自动染色机的试剂槽数量为18个，水洗槽的数量为5个，能够满足全自动组织切片染色机中现有HE染色程序的设置。然而本发明使用的伊红为醇溶性伊红，其使用要求为：切片在入伊红之前忌水洗，应先经80％乙醇脱水后再入伊红染色10-30s。在醇溶性伊红前增加一道80％乙醇，可以减少由于切片水洗后将过多水份带入伊红染液中。当伊红中水分含量增加时，伊红就会沉淀析出，着色能力大大减弱，使得染色灰暗，影响镜下效果。现有的HE染色程序中，组织切片是水洗后直接入伊红染液，导致伊红染液的使用周期很短，为3-4天，大约染片500-600张就要更换新的伊红染液(图4B)。由于伊红染液的使用周期短，导致切片染色的效果短期内变化很大，不能很好满足稳定染色质量需求。因此本发明拟在伊红染液前增加一道80％乙醇，依照现有的染色机结构，若要在伊红染液前增加一道80％乙醇则不得不减少一道脱蜡或透明的二甲苯，这样必然影响脱蜡或透明的效果及试剂使用的时效性。因此本发明将长期不用的WASH2水洗槽改装成试剂槽，满足了在伊红染液前增加一道乙醇的要求，同时又不减少其它试剂槽的数量。
另外，在本发明具体实施例中，对HE染色程序，缩短了第一缸脱蜡二甲苯的时间，因第一缸二甲苯溶解的石蜡最多，其二甲苯的纯度是最低的，切片应尽量减少在其中的停留时间以保证脱蜡质量。盐酸分化设定为1s，浓度应由1％该为0.5％，由于机械臂每次起落均需耗费8s左右的时间，所以实际的时间为9s。切片进入脱水程序后不能在低浓度乙醇中停留时间过长，因低浓度乙醇会将伊红颜色过度分化。试剂更换方面，染色前需检查试剂是否适量，不足应及时添加，脱蜡及透明的染色液可采用滚动更换的方法，即废弃第一道乙醇或二甲苯，将后面的依次前移，在最后一道相应的乙醇或二甲苯试剂缸中加入新的试剂。
经实验证明，通过本发明之全自动组织切片染色机进行自动染色，组织切片的HE染色质量得到提高并能于较长时间内维持稳定，如图4A。
综上所述，本发明一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法通过将水洗槽改装成备用试剂槽，并利用该备用试剂槽于HE染色程序的伊红步骤前增加一道80％乙醇，以延长伊红的使用时间，提高组织切片的HE染色质量并能于较长时间内维持稳定。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何本领域技术人员均可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰与改变。因此，本发明的权利保护范围，应如权利要求书所列。
Claims (10)
1.一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机，包括：染色机本体，其特征在于：于所述染色机本体内设有18个试剂槽、1-2个备用试剂槽及3-4个水洗槽。
2.如权利要求1所述一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机，其特征在于：所述备用试剂槽为对长期不使用的水洗槽改装而成。
3.如权利要求2所述一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机，其特征在于：将该水洗槽的接水口堵塞住，将一备用试剂桶放入所述水洗槽位置形成所述备用试剂槽，所述备用试剂槽与其他的水洗槽务必在同一个水平位置。
4.一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，包括如下步骤：
步骤S1，将蜡块切片烘烤后，将其放置于所述全自动组织切片染色机进行染色；
步骤S2，依照现有HE染色程序步骤依序对所述切片进行伊红染色之前的步骤；
步骤S3，在伊红步骤前利用一备用试剂槽对所述切片增加一道80％乙醇步骤，以延长伊红的使用时间；
步骤S4，依照现有HE染色程序步骤依序对切片进行伊红染色之后的步骤。
5.如权利要求4所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于：所述伊红为醇溶性伊红。
6.如权利要求5所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于：所述80％乙醇步骤的时间为10-30秒。
7.如权利要求5所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于，于步骤S2中，所述伊红染色之前的步骤具体包括：脱蜡3道；无水乙醇2道；95％乙醇、80％乙醇2道；水洗1道；苏木素染液1道；水洗1道；0.5％盐酸乙醇分化1道；水洗1道；饱和碳酸锂1道；水洗1道。
8.如权利要求7所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于，于步骤S2中，所述伊红染色之前的步骤具体包括：第一道二甲苯30秒，第二、三道二甲苯各5分钟；两道无水乙醇各30秒；95％乙醇、80％乙醇各30秒；水洗2分钟；苏木素染液10分钟；水洗1分钟；0.5％盐酸乙醇分化1秒；水洗1分钟；饱和碳酸锂30秒；水洗3分钟。
9.如权利要求8所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于，于步骤S2之前，还包括于染色前还需检查试剂是否适量，不足时及时添加试剂的步骤。
10.如权利要求9所述的一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机的染色方法，其特征在于：对于脱蜡及透明的染色液采用滚动更换的方法。
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|---|---|---|---|
| CN201810968576.5A Pending CN109115585A (zh) | 2018-08-23 | 2018-08-23 | 一种可提高染色质量的全自动组织切片染色机及其方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109115585A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070072167A1 (en) * | 2003-03-12 | 2007-03-29 | Institut Claudius Regaud | Tissue binding composition |
| CN105241685A (zh) * | 2015-08-10 | 2016-01-13 | 河南科技大学 | 小鲵科动物皮肤显微组织切片的制备方法 |
| CN206300822U (zh) * | 2016-12-08 | 2017-07-04 | 上海市动物疫病预防控制中心 | 一种组织处理与自动染色两用一体机 |
-
2018
- 2018-08-23 CN CN201810968576.5A patent/CN109115585A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070072167A1 (en) * | 2003-03-12 | 2007-03-29 | Institut Claudius Regaud | Tissue binding composition |
| CN105241685A (zh) * | 2015-08-10 | 2016-01-13 | 河南科技大学 | 小鲵科动物皮肤显微组织切片的制备方法 |
| CN206300822U (zh) * | 2016-12-08 | 2017-07-04 | 上海市动物疫病预防控制中心 | 一种组织处理与自动染色两用一体机 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| RACHEL PETERS 等: "Automating Special Stains Using a Commercial Autostainer", 《JOURNAL OF HISTOTECHNOLOGY》 * |
| 何娟 等: "新型Leica 全自动染色机和封片机的应用体会", 《实用医技杂志》 * |
| 何金 等: "Infinity 高清恒染系统在常规 HE 自动化染色中的应用及染色持续能力的对比观察", 《临床与实验病理学杂志》 * |
| 朱育连 等: "Leica 全自动染色封片一体化工作站在病理常规制片中的应用体会", 《临床与实验病理学杂志》 * |
| 杨群 等: "SAKURA Tissue-Tek DRS 2000 染色机的应用", 《中国组织化学与细胞化学杂志》 * |
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Legal Events
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