CN109105669A - 提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：步骤1：向中草药粗粉中加入乙醇溶液，浸泡，再加入柠烯后进行湿法超微粉碎，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂；步骤2：取多孔淀粉和黄豆苷元乙醇溶液，混合均匀，烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元；步骤3：取中草药制剂、果寡糖、甘露聚糖酶和包埋处理后的黄豆苷元，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂。有益效果为：本发明饲料添加剂的制备方法简单可行，制得的饲料添加剂具有较好的分散性和流动性，使得饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，能够显著提高罗非鱼的机体免疫能力与营养水平、增强罗非鱼的抗病能力。

Description

提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法
技术领域
本发明涉及饲料技术领域，特别涉及提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法。
背景技术
罗非鱼原产于非洲东部，被人们俗称“非洲鲫鱼”。在动物分类上属于脊索动物门，脊椎动物亚门，鱼纲，鲈形目，鲡鱼科，罗非鱼属。其体形似鲫鱼，目前罗非鱼的品种至今已达到100多个，我国现在引进的主要品种有莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)及荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)等近10个品种，这些品种之间具有相似的生物学特征及生活习性。跟其他鱼类相比，罗非鱼具有食性杂，耐低氧、生长快、发病少、群体产量高、繁殖力和适应性强等重要特点。罗非鱼已经成为我国现代淡水养殖业的重要养殖品种，其养殖规模已经达到了产业化水平。然而，伴随着水产养殖业的大面积扩增与集约化养殖技术的应用，在养殖过程中也出现了大量问题，如水环境污染、生态安全等。最严重的还是病害问题突出，尤其是链球菌病，更是对全球罗非鱼产业造成严重的威胁，一旦感染造成大规模的死亡，并且传染性极高。生产上通常使用传统化学药物如抗生素来治疗链球菌病，抗生素等化学药品对很多细菌引起的疾病有良好的控制效果，但是在用抗生素治疗的过程中容易使用过量甚至是滥用，这会导致严重的后果。一方面会造成机体中病原体的抗药性显著增加，使机体自身的免疫功能下降；另一方面，大量抗生素的滥用又会带来药残，引起更严重的食品安全问题。因此，病害问题现如今已成为制约罗非鱼产业进一步发展、影响产品质量的主要因素之一。
免疫增强剂是现今研究最多探讨最多的话题之一，它指的是单独使用或是与抗原联合使用后，通过如增强机体巨噬细胞活性等调节方式，加强抗原物质的免疫原性及稳定性，促进抗体的合成与分泌，用以加强动物机体免疫系统的物质。其种类繁多，作用方式也多种多样。按其功能分类可分为两大类：一类是主要针对增强机体的非特异性免疫能力；另一类是通过增强由疫苗介导引起的特异性免疫。针对于水产动物而言，因其在抵抗异物入侵时主要发挥自身巨大的非特异性免疫系统，所以水产动物免疫增强剂主要应用的是前者，通过提高其非特异性免疫系统来增强水产动物清除外界病原体的能力。免疫增强剂虽然在水产业的起步较晚，但是发展迅速，增强剂种类及应用领域也越来越多。
现有技术如授权公告号为CN 104472873 B的中国发明专利，公开了一种改善罗非鱼肝脏功能、预防链球菌病的饲料添加剂，包括柴胡、枳实、败酱草、丹参、法半夏、泽泻、茵陈、女贞子、甘草、酵母细胞壁提取物、维生素C、维生素E、胆碱、泛酸。在罗非鱼饲料中补充该添加剂能够明显改善罗非鱼的肝脏健康状况，提高免疫力，增强抗链球菌病的能力，同时可有效减少抗生素类药物在投喂过程中的使用，减少抗生素引起的副作用。但是该饲料添加剂未对柴胡、枳实、败酱草、丹参、法半夏、泽泻、茵陈、女贞子、甘草进行处理，直接添加，会影响罗非鱼的摄食。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，制得的饲料添加剂具有较好的分散性和流动性，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，较小剂量即能够显著提高罗非鱼的机体免疫能力与营养水平、增强罗非鱼的抗病能力。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：按固液比为1:10-15（g/mL）向中草药粗粉中加入57-68%的乙醇溶液，浸泡25-35min，再加入中草药粗粉重量的0.071-0.078%的柠烯，然后在转速为7000-10000r/min、磨齿间隙为20-50μm的条件下湿法超微粉碎10-20min，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂，该步骤能提高中草药的细胞破壁率，使得细胞内功能成分的溶出具有扩散阻力小、溶出路径短、溶出面积大的优点，使粉碎与提取一步完成，大大提高功能成分的提取率，同时免去加热，从而有效能避免功能成分的结构被破坏，提高功能成分的活性及药效，具有激活罗非鱼的免疫系统、增强机体免疫力、促进生长发育、降低血脂、保护肝脏、增强体质和抗应激能力等作用；
步骤2：取多孔淀粉和10-15%黄豆苷元乙醇溶液，按1:0.7-0.8的重量比混合均匀，然后在60-80℃下烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元，对黄豆苷元进行包埋处理，不仅可以提高黄豆苷元在水体中的分散均匀性，提高添加剂的利用率和效果，而且可以对黄豆苷元有着良好地保护和缓释效果，延长饲料添加剂的药效；
步骤3：按重量份取中草药制剂30-60份、果寡糖2-10份、甘露聚糖酶1-2份和包埋处理后的黄豆苷元10-30份，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂，本发明制备方法简单可行，制得的饲料添加剂具有较好的分散性和流动性，使得饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，较小剂量-饲料重量0.01-0.1%即能够显著提高罗非鱼的机体免疫能力与营养水平、增强罗非鱼的抗病能力。
作为优选，步骤1用柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.3-3.5。柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的特殊存在，使得到的中草药制剂有特殊的香味，能够满足罗非鱼的嗅觉刺激，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，具有较好的诱食效果；还能提高中草药制剂的分散性和流动性，保证饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，提高添加剂的利用率和效果。
作为优选，步骤2用多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4-4.5将玉米淀粉溶于pH为4.8-5.5的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于45-55℃下酶解，反应5-7h后调节pH至2.8-3.3反应10-20min使酶失活，再中和溶液中的盐酸，反应完成后，溶液经真空抽滤，淀粉用去离子水洗涤2-3次后置于40-50℃下干燥，粉碎后过50-100目筛，即得到多孔淀粉。该制备方法先通过玉米淀粉颗粒本身的孔洞或者对易水解区域进行水解，进入淀粉颗粒内部，然后又从内部向外开始水解，减弱淀粉颗粒结构，最终使淀粉颗粒破碎，使得淀粉无定形区和半结晶区结构均发生改变，增加淀粉的位点，提高包埋率。
进一步优选，复合酶为复合比为1:2.7-3.2的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.05-0.2×10-2mL/g。
进一步优选，多孔淀粉的制备方法中苹果酸中D-苹果酸和L-苹果酸的比例为50-55:1。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明饲料添加剂的制备方法简单可行，制得的饲料添加剂具有较好的分散性和流动性，使得饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，能够显著提高罗非鱼的机体免疫能力与营养水平、增强罗非鱼的抗病能力；2）本发明制备方法制得的中草药制剂有特殊的香味，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，还能保证饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，提高添加剂的利用率和效果；3）本发明制备方法对黄豆苷元进行包埋处理，不仅可以提高黄豆苷元在水体中的分散均匀性，提高添加剂的利用率和效果，而且可以对黄豆苷元有着良好地保护和缓释效果，延长饲料添加剂的药效。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：按固液比为1:15（g/mL）向中草药粗粉中加入57%的乙醇溶液，浸泡35min，再加入中草药粗粉重量的0.071%的柠烯，然后在转速为10000r/min、磨齿间隙为20μm的条件下湿法超微粉碎20min，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂，该步骤能提高中草药的细胞破壁率，使得细胞内功能成分的溶出具有扩散阻力小、溶出路径短、溶出面积大的优点，使粉碎与提取一步完成，大大提高功能成分的提取率，同时免去加热，从而有效能避免功能成分的结构被破坏，提高功能成分的活性及药效，具有激活罗非鱼的免疫系统、增强机体免疫力、促进生长发育、降低血脂、保护肝脏、增强体质和抗应激能力等作用；
步骤2：取多孔淀粉和10%黄豆苷元乙醇溶液，按1:0.8的重量比混合均匀，然后在60℃下烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元，对黄豆苷元进行包埋处理，不仅可以提高黄豆苷元在水体中的分散均匀性，提高添加剂的利用率和效果，而且可以对黄豆苷元有着良好地保护和缓释效果，延长饲料添加剂的药效；
步骤3：按重量份取中草药制剂60份、果寡糖2份、甘露聚糖酶2份和包埋处理后的黄豆苷元10份，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂，本发明制备方法简单可行，制得的饲料添加剂具有较好的分散性和流动性，使得饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，较小剂量即能够显著提高罗非鱼的机体免疫能力与营养水平、增强罗非鱼的抗病能力。
步骤1用柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.5。柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的特殊存在，使得到的中草药制剂有特殊的香味，能够满足罗非鱼的嗅觉刺激，可提高罗非鱼的食欲和摄食量，具有较好的诱食效果；还能提高中草药制剂的分散性和流动性，保证饲料添加剂能够均匀分散于饲料中，提高添加剂的利用率和效果。
步骤2用多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4将玉米淀粉溶于pH为5.5的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于45℃下酶解，反应7h后调节pH至2.8反应20min使酶失活，再中和溶液中的盐酸，反应完成后，溶液经真空抽滤，淀粉用去离子水洗涤2次后置于50℃下干燥，粉碎后过50目筛，即得到多孔淀粉，上述复合酶为复合比为1:3.2的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.05×10-2mL/g。该制备方法先通过玉米淀粉颗粒本身的孔洞或者对易水解区域进行水解，进入淀粉颗粒内部，然后又从内部向外开始水解，减弱淀粉颗粒结构，最终使淀粉颗粒破碎，使得淀粉无定形区和半结晶区结构均发生改变，增加淀粉的位点，提高包埋率。
实施例2：
提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：按固液比为1:12（g/mL）向中草药粗粉中加入60%的乙醇溶液，浸泡30min，再加入中草药粗粉重量的0.075%的柠烯，然后在转速为8000r/min、磨齿间隙为30μm的条件下湿法超微粉碎15min，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂；
步骤2：取多孔淀粉和12%黄豆苷元乙醇溶液，按1:0.75的重量比混合均匀，然后在70℃下烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元；
步骤3：按重量份取中草药制剂45份、果寡糖6份、甘露聚糖酶1.5份和包埋处理后的黄豆苷元20份，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂。
步骤1用柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.4。
步骤2用多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4.2将玉米淀粉溶于pH为5.0的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于50℃下酶解，反应6h后调节pH至3.0反应15min使酶失活，再中和溶液中的盐酸，反应完成后，溶液经真空抽滤，淀粉用去离子水洗涤2次后置于45℃下干燥，粉碎后过80目筛，即得到多孔淀粉，上述复合酶为复合比为1:3的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.12×10-2mL/g；多孔淀粉的制备方法中苹果酸中D-苹果酸和L-苹果酸的比例为52:1。
实施例3：
提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：按固液比为1:10（g/mL）向中草药粗粉中加入68%的乙醇溶液，浸泡25min，再加入中草药粗粉重量的0.078%的柠烯，然后在转速为7000r/min、磨齿间隙为50μm的条件下湿法超微粉碎10min，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂；
步骤2：取多孔淀粉和15%黄豆苷元乙醇溶液，按1:0.7的重量比混合均匀，然后在80℃下烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元；
步骤3：按重量份取中草药制剂30份、果寡糖10份、甘露聚糖酶1份和包埋处理后的黄豆苷元30份，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂。
步骤1用柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.3。
步骤2用多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4.5将玉米淀粉溶于pH为4.8的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于55℃下酶解，反应5h后调节pH至3.3反应10min使酶失活，再中和溶液中的盐酸，反应完成后，溶液经真空抽滤，淀粉用去离子水洗涤3次后置于40℃下干燥，粉碎后过100目筛，即得到多孔淀粉，上述复合酶为复合比为1:2.7的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.2×10-2mL/g。
实施例4：
提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，进一步优化步骤为：
步骤1：按固液比为1:12（g/mL）向中草药粗粉中加入60%的乙醇溶液，浸泡30min，再加入中草药粗粉重量的0.075%的柠烯，然后在转速为8000r/min、磨齿间隙为30μm的条件下湿法超微粉碎15min，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂；
步骤2：取多孔淀粉和12%黄豆苷元乙醇溶液，按1:0.75的重量比混合均匀，然后在70℃下烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元；
步骤3：按重量份取中草药制剂45份、果寡糖6份、甘露聚糖酶1.5份和包埋处理后的黄豆苷元20份，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂。
步骤1用柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.4。
步骤2用多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4.2将玉米淀粉溶于pH为5.0的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于50℃下酶解，反应6h后调节pH至3.0反应15min使酶失活，再中和溶液中的盐酸，反应完成后，溶液经真空抽滤，淀粉用去离子水洗涤2次后置于45℃下干燥，粉碎后过80目筛，即得到多孔淀粉，上述复合酶为复合比为1:3的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.12×10-2mL/g；多孔淀粉的制备方法中苹果酸中D-苹果酸和L-苹果酸的比例为52:1。苹果酸中D-苹果酸和L-苹果酸的特殊比例可以破坏淀粉分子表面的水化膜，并打断淀粉分子中的1,4-糖苷键，破坏颗粒中的螺旋结构，从而使得它能有效促进淀粉的水解，使得淀粉形成蜂窝状的多孔结构，增加表面积大，且能对多孔淀粉进行化学改性，改变其吸附效果，对黄豆苷元产生更为有效的截留保护作用，提高包埋率，进而提高饲料添加剂的使用效果，延长饲料添加剂的药效。
实施例5：
喂养试验
养殖品种：1克左右的罗非鱼稚鱼2500条，随机分配为五组：网箱1、网箱2、网箱3、网箱4和网箱5，各组总重相当，每组网箱总放养罗非鱼稚鱼500条；
养殖条件：环境因素、化学因素和生物因素基本相同的同一水域的网箱；
养殖管理：其它条件基本相同，所不同的只是网箱1每天投喂的饲料中添加有0.08%（重量）实施例1产品；网箱2每天投喂的饲料中添加有0.08%（重量）实施例2产品；网箱3每天投喂的饲料中添加有0.08%（重量）实施例3产品；网箱4每天投喂的饲料中添加有0.08%（重量）实施例4产品；网箱4(对照组)每天仅投喂饲料。
结果比较：养殖实验持续2个月，然后计算罗非鱼的成活条数、成活率和免疫保护率，免疫保护率=（1-实验组死亡率/对照组死亡率）×100%，实验结果如表1所示；
表1：提高罗非鱼免疫力饲料添加剂在养殖中的应用效果
类别 成活条数（条） 成活率（%） 免疫保护率（%）
网箱1 452 90.4 50.52
网箱2 448 89.6 46.39
网箱3 480 96 79.38
网箱4 493 98.6 92.78
网箱5 403 80.6 0
由表1可知，网箱1、2、3罗非鱼的病害发生率显著下降，表明饲料中添加本发明提高罗非鱼免疫力饲料添加剂能增强罗非鱼的免疫力和防病抗病能力，最终提高罗非鱼的成活率；而网箱4罗非鱼的成活率和免疫保护率均高于网箱1、2、3，说明苹果酸中D-苹果酸和L-苹果酸的特殊比例可以提高饲料添加剂的使用效果。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1：向中草药粗粉中加入乙醇溶液，浸泡，再加入柠烯后进行湿法超微粉碎，过滤，滤液喷雾干燥即得中草药制剂；
步骤2：取多孔淀粉和黄豆苷元乙醇溶液，混合均匀，烘干，粉碎过100目，即得包埋处理的黄豆苷元；
步骤3：取中草药制剂、果寡糖、甘露聚糖酶和包埋处理后的黄豆苷元，搅拌均匀，即得提高罗非鱼免疫力饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1中中草药粗粉和水的固液比为1:10-15（g/mL），浸泡25-35min。
3.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1中柠烯的添加量为中草药粗粉重量的0.071-0.078%。
4.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1中柠烯中左旋柠烯和右旋柠烯的比例为1:3.3-3.5。
5.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1中湿法超微粉碎的转速为7000-10000r/min、磨齿间隙为20-50μm、时间为10-20min。
6.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2中黄豆苷元乙醇溶液的浓度为10-15%。
7.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2中多孔淀粉和黄豆苷元乙醇溶液的重量比为1:0.7-0.8。
8.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2中多孔淀粉的制备方法为：按重量比为1:4-4.5将玉米淀粉溶于pH为4.8-5.5的苹果酸-磷酸氢二钠缓冲溶液中，加入复合酶后于45-55℃下酶解，反应5-7h后使酶失活，溶液抽滤，淀粉用去离子水洗涤后干燥，粉碎后过筛，即得到多孔淀粉。
9.根据权利要求8所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2中复合酶为复合比为1:2.7-3.2的α-淀粉酶和葡萄糖糖化酶，加酶量为0.05-0.2×10-2mL/g。
10.根据权利要求1所述的提高罗非鱼免疫力饲料添加剂的制备方法，其特征在于：所述步骤3中饲料添加剂中原料的重量份为：中草药制剂30-60份、果寡糖2-10份、甘露聚糖酶1-2份、包埋处理后的黄豆苷元10-30份。
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