CN109105309A - 一种6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种6‑二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,采用浓度为120‑150mg/L的6‑二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体。本发明还公开了采用6‑二甲基氨基嘌呤和浓度为2g/L的咖啡因联合诱导虹鳟三倍体。本发明诱导方法,使得虹鳟的三倍体率较高,并且其不对虹鳟受精率、发眼率产生影响,另外咖啡因可以作为辅助诱导因子,提高虹鳟三倍体的诱导率。
Description
技术领域
本发明涉及生物体诱导技术领域,具体地说,涉及一种6-二甲基 氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法。
背景技术
虹鳟(Oncorhynchus mykiss)是鲑形目中经济价值较高的类群, 因其性成熟个体体侧有一条宽而鲜艳的彩虹带而得名,英文名 rainbow trout,隶属硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辐鳍亚纲 (Actinopterygii)、鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae), 大麻哈鱼属(Oncorhynchus)。虹鳟原产于美国阿拉斯加地区的山川 溪流中,现已成为世界上养殖范围最广的冷水性鱼类,同时也是我国 重要的名优水产品之一。虹鳟与大西洋鲑统称三文鱼,属于市场价格 适中的鲑鳟鱼类,颇受广大消费者的喜爱,鱼卵则可制成高档鱼子酱, 属于高附加值水产品。
生物体一般为二倍体(diploid),但在自然或人工诱导条件下, 染色体组会成倍的增加产生多倍体(polyploid)。多数三倍体鱼类不 育,可将能量全部用于体细胞生长,从而提高饵料转化率,表现出较 好的生长势能。同时,鲑科鱼类繁殖后成熟个体常有的较高的死亡现 象,不育的虹鳟可以避免类似的损失。英国罗斯托夫渔业研究所研究 表明,三倍体虹鳟风味较佳,更受消费者喜爱。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体 的方法,提高虹鳟三倍体的诱导率,且不会对虹鳟的受精率、发眼率 产生影响。
为了解决上述技术问题,本发明公开了一种6-二甲基氨基嘌呤诱 导虹鳟三倍体的方法,采用浓度为120-150mg/L的6-二甲基氨基嘌呤 诱导虹鳟三倍体。
进一步地,起始时间为10-15min。
进一步地,持续时间为10-15min。
本发明还公开了一种6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法, 采用6-二甲基氨基嘌呤和咖啡因联合诱导虹鳟三倍体。
进一步地,6-二甲基氨基嘌呤的浓度为120-150mg/L。
进一步地,咖啡因的浓度为2g/L。
进一步地,起始时间为10-15min。
进一步地,持续时间为15min。
与现有技术相比,本发明可以获得包括以下技术效果:
1)本发明采用6-二甲基氨基嘌呤或者6-二甲基氨基嘌呤和咖啡 因联合诱导,使得虹鳟的三倍体率较高,并且其不对虹鳟受精率、发 眼率产生影响,另外试验证明,咖啡因可以作为辅助诱导因子,提高 虹鳟三倍体的诱导率。
2)本发明采用6-二甲基氨基嘌呤或者6-二甲基氨基嘌呤和咖啡 因联合诱导虹鳟三倍体,药物低毒、高效,处理后不需要清洗卵,可 以直接进行孵化。
3)与物理学方法诱导三倍体相比,该方法不需要高昂仪器设备, 实验技术相对简单易行。
当然,实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的 所有技术效果。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解,构成本发明 的一部分,本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明,并不构 成对本发明的不当限定。在附图中:
图1是本发明实施例中流式细胞仪细胞分群;圆圈表示两种细胞 分群;
图2是本发明实施例中不同细胞计数的流式细胞仪信号检测,A,Count: 10000;B,Count:20000;C,Count:50000;
图3是本发明实施例中不同倍型虹鳟红细胞流式细胞仪信号检测;
图4是本发明实施例中受精后到第二极体排放时间示意图。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式,藉此对本发明 如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充 分理解并据以实施。
本发明使用6-二甲基氨基嘌呤进行虹鳟三倍体诱导。采用L9(34) 正交表对处理起始时间、处理药物浓度和处理持续时间三个主要因素 进行了2次重复试验。每批试验设9个实验组,1个对照组。分组结 果与处理方法见表1和表2。
同时,采用2g/L的咖啡因与正交实验中的部分处理进行联合诱 导(表3)。
不同倍性虹鳟红细胞存在形态学差异,细胞核DNA含量也存在 倍数差异,本发明使用流式细胞仪测定DNA含量测定,三倍体虹鳟 红细胞DNA含量理论上是野生型(二倍体)DNA含量的1.5倍(参 见图1、2、3)。
表1虹蹲三倍体诱导正交试验因素水平表
表2虹蹲三倍体诱导的L9(34)正交试验结果
表3咖啡因三倍体诱导水平表
实验结果
(1)流式细胞技术信号检测
使用流式细胞仪检测不同倍型虹鳟红细胞DNA含量,三倍体虹 鳟信号强度约为二倍体虹鳟1.5倍,一定程度上验证了三倍体虹鳟其 DNA含量亦为二倍体虹鳟的1.5倍(表4)。
表4药物诱导实验结果(N=12-15)
(2)6-二甲基氨基嘌呤诱导实验结果
采用L9(34)正交表对处理起始时间、处理浓度和处理持续时间三 个主要因素进行正交试验,结果表明试验各组受精率均在78%以上, 6-二甲基氨基嘌呤为120mg/L时三倍体诱导率最佳,达到50%及以上 (表4)。同时,根据已有报道(王太,2010),对各组处理进行综 合评分,第1(起始时间:10min;持续时间:10min;处理浓度: 120mg/L),6(起始时间:12min;持续时间:15min;处理浓度: 120mg/L),8(起始时间:15min;持续时间:12.5min;处理浓度:120mg/L),9(起始时间:15min;持续时间:15min;处理浓度: 135mg/L)组得分较高(表5)。
表5药物诱导综合得分评价*(N=12-15)
*三倍体率和发眼率之和为100,三倍体率占40%,发眼率占60%。若三倍体率与发眼 率中有一项为零,则综合评分为零。
(3)6-二甲基氨基嘌呤和咖啡因联合药物诱导实验结果
采用2g/L的咖啡因与正交实验中的部分处理进行联合诱导,咖 啡因不对虹鳟的受精率、发眼率产生影响,且咖啡因给药组三倍体率 与综合评分高于对照组(见图4,表6,表7)。
表6联合药物诱导实验结果(N=12-15)
表7联合药物诱导综合得分评价*(N=12-15)
*三倍体率和发眼率之和为100,三倍体率占40%,发眼率占60%。若三倍体率与发眼 率中有一项为零,则综合评分为零。
三倍体虹鳟不育,避免了因性腺发育造成鱼体生长性能与肉质降 低的风险,其肉质媲美挪威三文鱼,养殖效益较高。同时,不育的三 倍体可以维持渔业生态环境的稳定,避免鲑科鱼类性腺成熟个体常有 的死亡现象,具有市场与生态双重效益。
本发明采用6-二甲基氨基嘌呤或者6-二甲基氨基嘌呤和咖啡因 联合诱导,使得虹鳟的三倍体率较高,并且其不对虹鳟受精率、发眼 率产生影响,另外试验证明,咖啡因可以作为辅助诱导因子,提高虹 鳟三倍体的诱导率。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例,但如前所述,应 当理解发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例 的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发 明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而 本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围,则都应在 发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (8)
1.一种6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,采用浓度为120-150mg/L的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体。
2.根据权利要求1所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,起始时间为10-15min。
3.根据权利要求1或2所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,持续时间为10-15min。
4.一种6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,采用6-二甲基氨基嘌呤和咖啡因联合诱导虹鳟三倍体。
5.根据权利要求4所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,所述6-二甲基氨基嘌呤的浓度为120-150mg/L。
6.根据权利要求5所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,所述咖啡因的浓度为2g/L。
7.根据权利要求6所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,起始时间为10-15min。
8.根据权利要求4-7任一项所述的6-二甲基氨基嘌呤诱导虹鳟三倍体的方法,其特征在于,持续时间为15min。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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