CN109105262A

CN109105262A - 一种野生金果榄组培快繁方法

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Publication number: CN109105262A
Application number: CN201811259741.6A
Authority: CN
Inventors: 刘红美; 梁大勇; 石建龙
Original assignee: Zunyi Long Chi Bio Tech Ltd
Current assignee: Zunyi Long Chi Bio Tech Ltd
Priority date: 2018-10-26
Filing date: 2018-10-26
Publication date: 2019-01-01

Abstract

本发明涉及中药材培育技术领域，尤其是一种野生金果榄组培快繁方法，经过将金果榄幼嫩茎经过两种丛生诱导培养基进行丛生芽诱导培养，并再将丛生芽分成单株苗之后移栽到驯化苗床上进行驯化处理，使得组培繁育的金果榄丛生芽诱导率达到85％以上，驯化苗成活率达到了90％以上。

Description

一种野生金果榄组培快繁方法

技术领域

本发明涉及中药材培育技术领域，尤其是一种野生金果榄组培快繁方法。

背景技术

金果榄(Tinospora capillipes Gagnep.)为青牛胆属常绿缠绕藤本植物，主产于四川、湖南、广西、湖北、贵州等地，具有清热解毒、利咽止痛的功效，主治咽喉肿痛、痈疽疔毒、泄泻、痢疾、脘腹热痛等。金果榄块根含掌叶防己碱(Palnmtine)和咖伦宾(Colmtfifin)、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、千金藤碱、蝙蝠葛碱和木兰花碱等成分，民间广泛用于治疗胃痛。现代药理学研究表明，金果榄有明显的抗炎镇痛、抗菌、抗肿瘤、降血糖、抗应激及解毒等作用，又被喻为可替代抗生素的天然药物。由于长期采挖，金果榄野生资源日趋枯竭，人工种植和抚育势在必行。另外，金果榄雌雄异株，授粉受到环境影响极大，自然结实率低。在资源调查和引种中发现，雄株远多于雌株(约50∶1)，结果机会大大减少，且种子有明显的休眠期，发芽率较低。因此，种源缺乏是金果榄资源锐减的主要原因。加上近年来随着市场需求量的不断增加，对野生资源的采集量逐渐增大，野生金果榄资源濒临枯竭，目前，对于金果榄育苗方面的研究较少，例如：专利号为201510869891.9的金果榄扦插繁殖方法中公开了将金果榄经过扦插繁殖方式来实现金果榄育苗，并经过控制扦插过程中的处理方式，使得扦插成活率达到90％以上。再例如：专利申请号为201810067346.1的促进金果榄种子萌发的方法中公开为了改善金果榄种子的萌发率，缩短萌发周期，提高萌发整齐度，确保得到质量优良的金果榄种苗。

可见，现有技术中，主要集中在采用金果榄扦插枝和金果榄种子作为种质资源来进行育种，还未见有采用金果榄幼嫩茎作为种质资源，经过组培方式进行繁殖处理的报道。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种野生金果榄组培快繁方法。

具体是通过以下技术方案得以实现的：

野生金果榄组培快繁方法，组培快繁步骤是：将金果榄幼嫩茎切成段后，经过丛生芽诱导培养，继代培养，获得丛生芽；将丛生芽分成单株苗，移栽到生根驯化苗床上，即可。

具体包括：

(1)将金果榄无菌带腋芽幼嫩茎切成1-1.5cm的段，平接于丛生芽诱导1号培养基上培养60天；再接种于丛生芽诱导2号培养基上连续继代培养两个周期，每个周期为30天，获得丛生芽；

(2)将丛生芽分成单株苗，按照行株距为5cm×5cm移栽到生根驯化苗床上，驯化培育60天，即得金果榄组培苗。

经过将金果榄幼嫩茎经过两种丛生芽诱导培养基进行丛生芽诱导培养，并在将丛生芽分成单株苗之后移栽到驯化苗床上进行驯化处理，使得组培繁育的金果榄丛生芽诱导率达到85％以上，驯化苗成活率达到了90％以上。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的丛生芽诱导1号培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+KT 0.5mg/L+TDZ 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖60g/L。经过对原料以及原料用量进行控制，使得蔗糖使用浓度比常规使用浓度较高，进而促进了丛生芽诱导阶段丛生芽萌芽，提高丛生芽诱导率。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的丛生芽诱导2号培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.3mg/L+IBA 0.1mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解蛋白胨500mg/L+蔗糖30g/L。经过在第二阶段进行丛生芽诱导的培养基中添加谷氨酰胺、水解蛋白胨等原料成分，并对原料成分的用量进行调整，极大程度的改善了丛生芽诱导率。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的丛生芽诱导1号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0。有助于改善丛生诱导率，使得丛生芽单株苗较多。尤其优选琼脂添加量以配成的培养基为半固体状态为准。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的丛生芽诱导2号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0。有助于改善丛生芽诱导率，使得丛生芽单株苗较多。尤其是使得培养基为半固体状态，改善了诱导环境。尤其优选琼脂添加量以配成的培养基为半固体状态为准。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的丛生芽诱导培养，在前15天，置于完全黑暗条件下培养，之后，置于光照为1200Lx、12h/d条件下培养。尤其是使得培养基为半固体状态，改善了诱导环境。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的生根驯化苗床是在简易搭棚中，按照宽×长＝1m×5m开厢，在厢面上平铺5cm厚的育苗基质，在丛生芽单株苗移栽之后，在厢面上搭成高度为0.5m的塑料拱棚；保持拱棚内湿度为80-85％，温度为26-28℃，每7天喷洒一次生根剂。实现了瓶外生根培育金果榄，降低了繁育成本。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的育苗基质是按照质量比为珍珠岩：腐殖土：草木灰＝3:5:1配制而成。

为了具有更好的技术效果，优选，所述的生根剂为IBA 0.5mg/L+NAN 0.5mg/L+阿司匹林10片/15L。经过在生根剂中加入阿司匹林，使得增强了促进生根作用，提高了生根率和金果榄成活率。

本发明创造优选采用带腋芽的幼嫩茎。在切段过程中，要求幼嫩茎为无菌的。

本发明创造中未尽事宜，本领域技术人员可以参照生物组培中相关的公知常识以及常规技术进行操作，尤其是可以参照植物组织培养方面的操作方法进行管理，实现金果榄的组织培养。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。

实施例1

(1)将金果榄幼嫩茎切成1-1.5cm的段，平接于丛生芽诱导1号培养基上培养60天；再接种于丛生芽诱导2号培养基上连续继代培养两个周期，每个周期为30天，获得丛生芽；

所述的丛生芽诱导培养，在前15天，置于完全黑暗条件下培养，之后，置于光照为1200Lx、12h/d条件下培养。所述的生根驯化苗床是在简易大棚中，按照宽×长＝1m×5m开厢，在厢面上平铺5cm厚的育苗基质，在丛生芽单株苗移栽之后，在厢面上搭成高度为0.5m的塑料拱棚；保持拱棚内湿度为80-85％，温度为26-28℃，每7天喷洒一次生根剂。所述的育苗基质是按照质量比为珍珠岩：腐殖土：草木灰＝3:5:1配制而成。所述的丛生芽诱导1号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0。所述的丛生芽诱导2号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0。

所述的丛生芽诱导1号培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+KT 0.5mg/L+TDZ 0.1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖60g/L。

所述的丛生芽诱导2号培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.3mg/L+IBA 0.1mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解蛋白冻500mg/L+蔗糖30g/L。

所述的生根剂为IBA 0.5mg/L+NAN 0.5mg/L+阿司匹林10片/15L。

实施例2

在实施例1的基础上，对于步骤(1)中，采用丛生芽诱导1号培养基培养60天后，再继续采用丛生芽诱导1号培养基连续两个周期的继代培养，每个周期30天，其他同实施例1。

实施例3

在实施例1的基础上，对于步骤(1)中，采用丛生芽诱导2号培养基培养60天后，再继续采用丛生芽诱导2号培养基连续两个周期的继代培养，每个周期30天，其他同实施例1。

实施例4

在实施例1的基础上，对于步骤(1)中，采用丛生芽诱导2号培养基培养60天后，再继续采用丛生芽诱导1号培养基连续两个周期的继代培养，每个周期30天，其他同实施例1。

统计实施例1-4进行的金果榄培育时的诱导率，丛生芽上能分出的单株苗数量以及将分出的单株苗进行移栽之后的成活率，其结果如下表1所示：

表1

	诱导率(％)	丛生芽上能分出的单株苗平均数量(株)	成活率(％)
				实施例1	89.3	23.1	90.8
实施例2	84.3	17.9	88.3
				实施例3	78.4	17.6	76.4
实施例4	78.9	16.3	77.1

由表1的数据显示，对于丛生芽诱导1号培养基，丛生芽诱导2号培养基在使用过程中的使用顺序，将会极大程度的影响金果榄幼嫩茎产生单株苗以及将单株苗移栽之后的成活率；其中，对于丛生芽诱导培养基中的原料成分以及各原料成分之间的用量，将会极大程度的影响金果榄的育苗。

为了进一步的说明，本发明创造在金果榄育苗过程中的采用的培养基以及育苗结果情况，本研究者开展了如下试验研究：

试验1

在实施例1的基础上，对于在丛生芽诱导1号培养基和丛生芽诱导2号培养基中，均未添加琼脂，直接采用液体培养金果榄幼嫩茎，其他按照实施例1的处理方式进行处理。

试验2

在实施例1的基础上，对于在丛生芽诱导1号培养基中，其蔗糖添加量按照30g/L添加，其他均同实施例1。

试验3

在实施例1的基础上，对于在生根剂中不添加阿司匹林，其他均同实施例1。

试验4

在实施例1的基础上，对于在生根剂中添加阿司匹林量为1片/15L，其他均同实施例1。

对上述试验1-4中的金果榄培育的诱导率，丛生芽每丛分出单株苗数量以及驯化培育苗的成活率，其结果如下表2所示：

表2

由表1和表2的数据显示可见，对于丛生诱导培养基将会影响金果榄的诱导率以及每丛分出单株金果榄苗的数量以及移栽成活率。

试验5

在实施例1的基础上，对于幼嫩茎采用的是带有腋芽的幼嫩茎，其他均同实施例1，其培育过程的诱导率以及每丛分出单株苗数量和移栽成活率结果如下表3所示。

表3

	诱导率(％)	每丛分出单株苗数量(株)	成活率(％)
				试验5	89.1	25.6	92.1

由表3的数据显示可以看出，对于采用带有腋芽的幼嫩茎，有助于提高金果榄育苗过程的成活率和每丛能够分出单株苗的数量，降低金果榄育苗成本，降低金果榄人工种植成本，提高金果榄种植利润。

Claims

1.一种野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，组培快繁步骤是：将金果榄幼嫩茎切成段后，经过丛生芽诱导培养，继代培养，获得丛生芽；将丛生芽分成单株苗，移栽到生根驯化苗床上，即可。

2.如权利要求1所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的步骤，包括：

(1)将金果榄无菌带腋芽幼嫩茎切成1-1.5cm的段，平接于丛生诱导1号培养基上培养60天；再接种于丛生诱导2号培养基上连续继代培养两个周期，每个周期为30天，获得丛生芽；

3.如权利要求1或2所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的丛生芽诱导1号培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+KT 0.5mg/L+TDZ 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖60g/L。

4.如权利要求1或2所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的丛生芽诱导2号培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.3mg/L+IBA 0.1mg/L+谷氨酰胺500mg/L+脯氨酸500mg/L+水解蛋白冻500mg/L+蔗糖30g/L。

5.如权利要求1或2所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的丛生芽诱导1号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0；所述的丛生诱导2号培养基中添加有琼脂粉4g/L，pH5.8-6.0。

6.如权利要求1或2所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的丛生诱导培养，在前15天，置于完全黑暗条件下培养，之后，置于光照为1200Lx、12h/d条件下培养。

7.如权利要求1或2所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的生根驯化苗床是在简易大棚中，按照宽×长＝1m×5m开厢，在厢面上平铺5cm厚的育苗基质，在丛生芽单株苗移栽之后，在厢面上搭成高度为0.5m的塑料拱棚；保持拱棚内湿度为80-85％，温度为26-28℃，每7天喷洒一次生根剂。

8.如权利要求7所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的育苗基质是按照质量比为珍珠岩：腐殖土：草木灰＝3:5:1配制而成。

9.如权利要求7所述的野生金果榄组培快繁方法，其特征在于，所述的生根剂为IBA0.5mg/L+NAN 0.5mg/L+阿司匹林10片/15L。

10.阿司匹林应用于金果榄组培快繁育苗中的瓶外生根。