CN109097460A - 一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及DNA修饰检测领域，具体而言，涉及一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法，本发明所述的氧化修饰的含氮碱基的检测方法测定不同含氮碱基的IPD值，根据IPD值的不同得到氧化修饰的含氮碱基。本发明人发现，氧化修饰的含氮碱基与未修饰的含氮碱基的IPD(脉冲间隔时间)值不同，据此，可区分含氮碱基是否进行了修饰。

Description

一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法
技术领域
本发明涉及DNA修饰检测领域，具体而言，涉及一种氧化修饰 的含氮碱基的检测方法。
背景技术
DNA存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，当受到外界环 境和生物体内部的因素影响时，会导致DNA分子的损伤或改变。自 由基是一类高活性的物质，能够直接或间接的发挥强氧化的作用。活 性氧(Reactive oxygen species，ROS)常见的形式包括羟自由基(·OH)、 超氧阴离子(O2-·)及过氧化氢(H2O2)等，含有即为活泼的单电子， 极易与亲核性的DNA分子结合，导致DNA碱基的修饰改变。其中， 鸟嘌呤C8位的氧化(形成8-羟基脱氧鸟嘌呤，8-oxoG)是由活性氧 引发的最常见的DNA氧化修饰之一，具有体内生成量较高、普遍且稳定的特点。8-oxoG修饰可引起DNA复制时碱基的错误配对及编码， 从而导致基因突变，具有诱发基因突变、致癌的潜在风险。DNA损 伤与肿瘤、衰老以及免疫性疾病等多种疾病的发生有着密切的联系。 因此，作为DNA氧化损伤的生物标志物，对8-oxoG含量的检测对 于疾病的早期检测和监控有着重要的意义。
8-oxoG是DNA氧化修饰的特异产物，是公认的外源以及內源因 素对DNA氧化损伤的生物标志物。当生物体内的修复机制正常时，8-oxoG能够在DNA糖基化酶，如8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶OGG1 的作用下从DNA链上切除，同时掺入正常的鸟嘌呤碱基。DNA中 8-oxoG的检测方法主要有酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、32P后标记法和高效液相色谱-电化 学检测法(High Performance Liquid Chromatography-Electrochemical Detection，HPLC-ECD)等。这几种方法都具有检测灵敏度高的特点， 但是其测定的都是DNA中全部氧化产物的量或者是组织中8-oxoG 的总含量，并不能确定8-oxoG修饰在基因组DNA中发生损伤的具 体位点。而确定基因组上易发生8-oxoG修饰的区域位置及基因偏好 性对于疾病的预防及精准治疗意义非凡。
随着测序技术的不断发展，第三代测序技术，即单分子实时测序 (SingleMolecule Real Time，SMRT)技术在基因组DNA、转录组、 甲基化修饰等表观遗传学、靶向测序等方面已应用的十分广泛。SMRT 技术能够实现真正单分子测序，即测序过程无需进行PCR扩增，可 轻松覆盖高GC和高重复区域，对低丰度/低频突变定量更准。目前， 基于SMRT测序技术的PacBio Sequel测序仪具有超长的读长，平均 读长可达到8～12Kb，数据产出可达到4～7Gb/SMRT Cell，并且可以 利用测序过程中聚合酶反应的动力学变化，直接检测碱基的修饰情况， 从而统一分析基因组学和表观遗传学数据。
鉴于此，针对DNA氧化损伤在疾病预防和治疗中的重要性，有 必要提供一种能够确定8-oxoG在基因组DNA上发生氧化修饰的位 点的新方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法，特 别提供一种8oxoG修饰位点分析法，基于SMRT测序技术对DNA序 列中发生8-oxoG修饰的位点进行确认，实现对DNA中氧化修饰的 位点鉴定和分析的方法。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法，测定不同含氮碱基的IPD 值，根据IPD值的不同得到氧化修饰的含氮碱基。
本发明人发现，氧化修饰的含氮碱基与未修饰的含氮碱基的IPD (脉冲间隔时间)值不同，据此，可区分含氮碱基是否进行了修饰。
进一步地，所述含氮碱基包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧 啶。
进一步地，所述含氮碱基为鸟嘌呤，所述氧化修饰的含氮碱基为 8-oxoG。
进一步地，所述IPD值为氧化修饰的含氮碱基的IPD值与相应 的含氮碱基的IPD值的比值。
进一步地，所述比值大于1时为氧化修饰的含氮碱基；反之，则 不是。
进一步地，步骤如下：
将待检测物测序，得到的序列依次测定含氮碱基的IPD数值，得 到第一列IPD数值；
将待检测物的序列按照未氧化的形式依次测定含氮碱基的IPD 数值，得到第二列IPD数值；
相同位置上的所述第一列IPD数值与所述第二列IPD数值相比 得到比值，根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱基。
进一步地，所述测序采用SMRT测序技术进行。
进一步地，所述待检测物构建基因文库，纯化，平末端连接接头， 结合测序引物和酶进行测序。
进一步地，所述测序在测序仪上进行，优选为PacBio RSII测序 仪或PacBioSequel测序仪。
进一步地，在步骤根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱 基中，氧化修饰的含氮碱基的目标比值通过软件进行筛选，所述软件 并给出氧化修饰的含氮碱基的位置。
一般地，具体整个步骤如下：
1)提取样本基因组DNA；2)将1)中基因组DNA构建成文库； 3)将步骤2)的文库然后在PacBio RSII/Sequel测序仪上进行测序，得 到原始序列；4)将步骤3)对测序得到的原始序列采用SMRT Link v5.1.0软件进行数据质控与过滤，导出序列；5)从步骤4)序列与参考序列对比，数据中筛选出不同组间相同原始序列的脉冲间隔时间 (IPD)；6)将步骤5)得到的IPD使用python软件分析筛选高覆盖度 到准确率的G修饰位点；7)确定氧化修饰位点。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明根据氧化修饰的含氮碱基与未修饰的含氮碱基的 IPD(脉冲间隔时间)值不同，据此，可区分含氮碱基是否进行了修 饰。
(2)本发明通过将检测序列与参考序列的IPD值的比值，经过 软件筛选得到氧化修饰的位点，自动化操作，检测高效。
(3)本发明提供的氧化修饰的含氮碱基的检测方法为疾病的检 测和精准治疗提供便利。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以 下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例1中DNA氧化修饰产物8-羟基脱氧鸟嘌 呤的化学结构图；
图2为本发明实施例1中基于SMRT测序技术定位检测DNA 序列中碱基(G)氧化修饰的原理示意图；
图3为本发明实施例2中样本载量评估图；
图4为本发明实施例2中一个质粒样本测序酶的读长分布图；
图5为本发明实施例2中高质量测序read的分布图；
图6为本发明实施例2中插入片段不同长度的分布图；
图7为本发明实施例2中未氧化对照组的质粒图；
图8为本发明实施例2中经1μM的H2O2处理后的质粒图；
图9为本发明实施例2经5μM的H2O2处理后的质粒图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本 领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视 为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件 或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均 为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
基于SMRT测序技术定位检测DNA序列中碱基(G)氧化修饰 的方法，具体包括以下步骤：
1)采用Takara Clontech公司生产的带有两个8-oxoG位点的155bp 长DNA序列，2个氧化修饰的鸟嘌呤其位于DNA序列上游中第34 和57位点，DNA氧化修饰产物8-羟基脱氧鸟嘌呤的化学结构如图1 所示；
2)步骤1)中获取的序列样品构建成基因文库；
3)步骤2)的文库在PacBio RSII测序仪上进行测序，得到原始序 列；
4)步骤3)原始序列采用SMRT Link v5.1.0软件进行数据质控与 过滤，然后导出序列，以备生物信息学分析；
5)用已知合成序列做参考序列，步骤4)序列和参考序列使用 SMRT Link v5.1.0软件分析处理得到每一个碱基的脉冲间隔的持续时 间(IPD)数值；
6)步骤5)中得出的每组IPD数值的案子相同位置相比，得到 IPD比值，若G位点的IPD比值大于1，碱基位点达到高覆盖度25x 以上，用python软件进一步分析；
7)将步骤6(G)氧化修饰位点确定。
得到的结果如表1所示。
表1检测结果
8-oxoG位置 34 57
IPD比值 2.44 3.16
实施例2
利用SMRT测序技术和碱基修饰位点分析方法进行质粒DNA pcDNA3.1 8-oxoG氧化修饰位点鉴定的方法，具体包括以下步骤：
1)提取质粒pcDNA3.1(5477bp)，采用天根高纯度质粒大提试 剂盒(非离心柱型，DP116)。具体方法如下：
a)取100mL过夜培养的菌液，室温10000rpm离心3分钟收集 细菌。
b)尽量吸除上清，向留有菌体沉淀的离心管中加入10mL溶液 P1，涡旋振荡彻底悬浮细胞沉淀。
c)向离心管中加入10mL溶液P2，立即温和上下翻转6-8次， 使菌体充分裂解，室温放置5分钟。
d)向离心管中加入10mL溶液P4，立即温和上下翻转6-8次， 充分混匀，至溶液出现白色散絮状沉淀，室温放置10分钟，10000rpm 离心10分钟后将上清小心倒入过滤器CS1中，慢慢推动推柄过滤， 滤液收集于干净的50mL管中。
e)向滤液中加入0.35倍滤液体积的异丙醇和1/2倍异丙醇体积 的5M NaCl，上下颠倒充分混匀。
f)4℃10000rpm离心30分钟，轻轻倒掉上清液，倒置于吸水 纸上。
g)向管中加入6mL 70％乙醇充分漂洗沉淀，4℃10000rpm离 心10分钟，轻轻倒掉上清液，倒置于吸水纸上。
h)重复操作步骤f。
i)将离心管敞口室温放置10-20分钟，使乙醇充分挥发后加入 1-1.5mL洗脱缓冲液TB，充分溶解沉淀，得到环状pcDNA3.1质粒。
2)使用EcoRV限制性内切酶单酶切环状质粒，按说明书配制反 应体系，每4μg质粒加1μL酶，在37℃条件下反应2小时，得到平 末端的线性化质粒片段；
3)采用1μM和5μM的H2O2处理终浓度，37℃条件下氧化线 性化质粒1小时，同时设置未氧化对照组；
4)将得到的三组质粒采用Template Prep Kit构建5K DNA文库，文库构建中删除DNA损伤修复步骤，质粒经PB magnetic beads纯化后进行末端修复，再次纯化后进行平末端接头连 接反应，纯化后结合测序引物和酶，然后在PacBio Sequel测序仪上 进行测序，得到原始序列；
得到的结果如图3-6所示。
测序获得总数据量为7,387,121,749bp；
高质量测序reads长度为555,833bp；
测序reads的平均长度为13,254bp，测序reads中，50％的reads 长度大于30,250bp；
插入片段长度为4,314bp；50％的插入片段大于5,750bp。
5)数据分析
原始序列采用SMRT Link v5.1.0软件进行数据质控与过滤，然后 导出序列，以备生物信息学分析；
用已知合成序列做参考序列，导出的原始序列和参考序列使用 SMRT Linkv5.1.0软件分析处理得到每一个碱基的脉冲间隔的持续时 间(IPD)数值；
得出的每组IPD数值的案子相同位置相比，得到IPD比值，若G 位点的IPD比值大于1，碱基位点达到高覆盖度25x以上，用python 软件进一步分析；
确定DNA氧化损伤的位点。
得到的结果如图7-图9所示。图7为未氧化对照组；图8为1μM 的H2O2处理后的质粒的测定图；图9为5μM的H2O2处理后的质粒 的测定图。
质粒图中，内圈至外圈，分别表示质粒基因组正义链和反义链上 的IPD比率(1圈和2圈)，每个检测位点的得分(3圈和4圈)，每 个检测位点的覆盖率(5圈和6圈)，以及8-oxoG修饰位点(7圈和 8圈)。第7圈和第8圈中的线条分别表示正义链和反义链上的8-oxoG修饰位点。
从最外的两圈可以看出，经过H2O2处理后的质粒的氧化损伤点 明显多于未氧化对照组，并且氧化剂的浓度越高，氧化损伤越多。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到， 在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和 修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的 所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法，其特征在于，测定不同含氮碱基的IPD值，根据IPD值的不同得到氧化修饰的含氮碱基。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含氮碱基包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含氮碱基为鸟嘌呤，所述氧化修饰的含氮碱基为8-oxoG。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述IPD值为氧化修饰的含氮碱基的IPD值与相应的含氮碱基的IPD值的比值。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述比值大于1时为氧化修饰的含氮碱基；反之，则不是。
6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤如下：
将待检测物测序，得到的序列依次测定含氮碱基的IPD数值，得到第一列IPD数值；
将待检测物的序列按照未氧化的形式依次测定含氮碱基的IPD数值，得到第二列IPD数值；
相同位置上的所述第一列IPD数值与所述第二列IPD数值相比得到比值，根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱基；
进一步地，所述氧化修饰的含氮碱基的位点的覆盖率达到25倍以上。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述测序采用SMRT测序技术进行。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述待检测物构建基因文库，纯化，平末端连接接头，结合测序引物和酶进行测序。
9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述测序在测序仪上进行，优选为PacBio RSII测序仪或PacBioSequel测序仪。
10.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，在步骤根据比值的大小判断是否为氧化修饰的含氮碱基中，氧化修饰的含氮碱基的目标比值通过软件进行筛选，所述软件并给出氧化修饰的含氮碱基的位置。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110484602A (zh) * 2019-07-16 2019-11-22 山东师范大学 一种单分子计数检测基因组中dna损伤的荧光化学传感器、方法和应用
WO2020042598A1 (zh) * 2018-08-30 2020-03-05 青岛大学 一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103048392A (zh) * 2011-10-13 2013-04-17 蔡剑平 评价哺乳动物老化程度的试剂盒、检测系统和8-oxoG的应用
CN103131754A (zh) * 2011-11-24 2013-06-05 深圳华大基因科技有限公司 一种检测核酸羟甲基化修饰的方法及其应用
CN103205135A (zh) * 2013-04-25 2013-07-17 大连理工大学 光敏染料锇配合物及其制备方法、癌变早期 dna 氧化损伤快速检测试剂盒及检测方法
CN103370423A (zh) * 2010-11-12 2013-10-23 加利福尼亚太平洋生物科学股份有限公司 核酸模板的分类

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102169118B (zh) * 2011-04-15 2012-01-25 华瑞同康生物技术（深圳）有限公司 血清或尿液中8-氧代脱氧鸟苷的定量检测方法
CN109097460A (zh) * 2018-08-30 2018-12-28 青岛大学 一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103370423A (zh) * 2010-11-12 2013-10-23 加利福尼亚太平洋生物科学股份有限公司 核酸模板的分类
CN103048392A (zh) * 2011-10-13 2013-04-17 蔡剑平 评价哺乳动物老化程度的试剂盒、检测系统和8-oxoG的应用
CN103131754A (zh) * 2011-11-24 2013-06-05 深圳华大基因科技有限公司 一种检测核酸羟甲基化修饰的方法及其应用
CN103205135A (zh) * 2013-04-25 2013-07-17 大连理工大学 光敏染料锇配合物及其制备方法、癌变早期 dna 氧化损伤快速检测试剂盒及检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
黄雯等: "DNA氧化损伤检测方法进展", 《全国自由基医学与毒理学学术交流大会》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020042598A1 (zh) * 2018-08-30 2020-03-05 青岛大学 一种氧化修饰的含氮碱基的检测方法
CN110484602A (zh) * 2019-07-16 2019-11-22 山东师范大学 一种单分子计数检测基因组中dna损伤的荧光化学传感器、方法和应用
CN110484602B (zh) * 2019-07-16 2023-03-14 山东师范大学 一种单分子计数检测基因组中dna损伤的荧光化学传感器、方法和应用

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