CN109042629A - 一种保存子宫内膜组织的保存液及其制备方法 - Google Patents

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张冰晶
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Abstract

本发明提供了一种保存子宫内膜组织的保存液及其制备方法，涉及生物组织保存液领域，每100ml保存液按照质量体积或活性单位的组分，包括0.04‑2.5g组织细胞营养物、5‑15g渗透压保护剂、1‑20g生物制品保护剂、100‑10000IU低分子肝素钠、100‑2000ng低分子肝素钠、100‑2000ng人用细胞因子、100‑1500ng抗生素以及余量的D‑Hank’s溶液，本发明能使子宫内膜组织在运输过程中保持较高的活性，减少组织损伤及其组织内细胞的失活。

Description

一种保存子宫内膜组织的保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物组织保存液领域，具体而言，涉及一种保存子宫内膜组织的保存液及其制备方法。
背景技术
卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指40岁前月经己形成规律的女性，由于卵巢功能衰退而出现月经不调、闭经、性器官萎缩等症状，而且常伴随着促性腺激素水平的上升和雌激素水平的下降。卵巢早衰是妇产科临床工作中的常见病和多发病，已经成为当今妇女不孕症的最主要病因。目前，主要通过激素治疗和免疫治疗等方法恢复卵巢功能，然而上述方法只能暂时地缓解症状，不能有效促进自身损伤卵巢组织的再生修复，无法根治疾病。
子宫内膜(endometrium，uterine endome-trium)是指构成哺乳类子宫内壁的一层。对雌激素和孕激素都起反应，因此可随着性周期发生显著的变化。子宫内膜分为致密层、海绵层和基底层3层。内膜表面2/3为致密层和海绵层统称功能层，受卵巢性激素影响发生周期变化而脱落。基底层为靠近子宫肌层的1/3内膜，不受卵巢性激素影响，不发生周期性的变化。人的子宫内膜是一个高度再生组织，在育龄期妇女中要经历400多次的增殖、分化和脱落。人子宫内膜由腺上皮细胞、间质细胞和血管组成，近年越来越多的研究表明，子宫内膜组织中存在一小群具有强大增殖和多向分化潜能的干细胞，可不断分裂增殖，及时补充脱落的终末分化细胞，使子宫内膜始终保持自我更新和再生能力。在月经周期的不同时期，内膜上皮和间质细胞的集落形成活性无明显差别。进一步的研究发现，内膜间质细胞在增生期的集落形成能力超过分泌期，而上皮细胞在分泌期的集落形成能力更强。因此可以推断，子宫内膜上皮和基质细胞具有子宫内膜干细胞的特性，在子宫内膜周期性脱落，增长中起到关键作用。子宫内膜的雌孕激素受体作为一种转录因子(transcription factor)调节与雌孕激素有关的基因表达，从而使内膜发生增生和分泌变化。同时，子宫合成的一些多肽类生长因子及其受体，如EGF、PDGF、和IGF-1、IGF-2等，可能是雌激素发生效应的介质，促进细胞的增生和分化。
干细胞移植治疗是一门先进的医学技术，为一些疑难杂症的治疗带来了希望。干细胞移植治疗是把健康的干细胞移植到患者体内，以达到修复或替换受损细胞或组织，从而达到治愈的目的。干细胞移植治疗范围很广，一般能治疗神经系统疾病、免疫系统疾病、还有其他的一些内外科疾病。干细胞在医学界被称为“万用细胞”，它可以分化成多种功能细胞或组织器官,但是子宫内膜组织难以保存，因此如何能够有效长期保存子宫内膜组织成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术或相关技术中存在的技术问题之一，公开了一种保存子宫内膜组织的保存液及其制备方法，能使子宫内膜组织在运输过程中保持较高的活性，减少组织损伤及其组织内细胞的失活。
本发明公开了一种保存子宫内膜组织的保存液，每100ml保存液按照质量体积或活性单位的组分，包括0.04-2.5g组织细胞营养物、5-15g渗透压保护剂、1-20g生物制品保护剂、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子、100-1500ng抗生素以及余量的D-Hank’s溶液。
根据上述技术方案，优选地，组织细胞营养物为L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Ala-Gln)水溶液。
根据上述技术方案，优选地，渗透压保护剂选用低分子右旋糖酐或海藻糖磷酸盐缓冲液。
根据上述技术方案，优选地，渗透压保护剂为海藻糖磷酸盐缓冲液。
根据上述技术方案，优选地，生物制品保护剂为人血白蛋白或聚乙二醇。
根据上述技术方案，优选地，生物制品保护剂为人血白蛋白。
根据上述技术方案，优选地，人用细胞因子为EGF、basic-FGF和PDGF-BB中的一种或两种或全部。
根据上述技术方案，优选地，抗生素为临床安全无过敏和变态反应的硫酸庆大霉素注射液。
一种保存子宫内膜组织的保存液的制备方法，包括以下步骤
(1)配置组织细胞营养物水溶液：称取组织细胞营养物0.2g，使用100ml医用级别的无菌注射用水充分溶解后，4℃保存备用；
(2)选用海藻糖磷酸盐缓冲液作为渗透压保护剂：选用海藻糖10g，然后使用磷酸盐缓冲液45ml溶解后，磁力搅拌溶解，40μm滤网过滤除去溶剂中的杂质，然后定容至50ml，4℃保存备用；
(3)取配置好的组织细胞营养物水溶液50ml和海藻糖缓冲液25ml，按上述比例加入1-20g人血白蛋白、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子和100-1500ng抗生素，然后加入D-Hank’s溶液，搅拌至完全溶解，然后将混合液分别经40μm滤网、0.22μm滤膜和0.1μm滤膜过滤去除细菌和支原体，所得溶液于4℃保存备用。
本发明的有益效果至少包括：
(1)减少因低温保存导致的子宫内膜组织细胞内水肿；
(2)防止子宫内膜组织细胞酸化作用；
(3)防止氧自由基的损伤；
(4)保持细胞内环境的稳定。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明并不限于下面公开的具体实施例的限制。
实施例1
一种保存子宫内膜组织的保存液，每100ml保存液按照质量体积或活性单位的组分，包括0.04-2.5g组织细胞营养物、5-15g渗透压保护剂、1-20g生物制品保护剂、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子、100-1500ng抗生素以及余量的D-Hank’s溶液。
实施例2
根据上述实施例，优选地，每100ml保存液按照质量体积或活性单位的组分，包括0.1g组织细胞营养物、5g渗透压保护剂、20g生物制品保护剂、5000IU低分子肝素钠、2000ng人用细胞因子、500ng抗生素以及余量的D-Hank’s溶液。
根据上述实施例，优选地，组织细胞营养物为L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Ala-Gln)水溶液。
根据上述实施例，优选地，渗透压保护剂选用低分子右旋糖酐或海藻糖磷酸盐缓冲液。
根据上述实施例，优选地，渗透压保护剂为海藻糖磷酸盐缓冲液。
根据上述实施例，优选地，生物制品保护剂为人血白蛋白或聚乙二醇。
根据上述实施例，优选地，生物制品保护剂为人血白蛋白。
根据上述实施例，优选地，人用细胞因子为EGF、basic-FGF和PDGF-BB中的一种或两种或全部。
根据上述实施例，优选地，抗生素为临床安全无过敏和变态反应的硫酸庆大霉素注射液。
一种保存子宫内膜组织的保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)配置组织细胞营养物水溶液：称取组织细胞营养物0.2g，使用100ml医用级别的无菌注射用水充分溶解后，4℃保存备用；
(2)选用海藻糖磷酸盐缓冲液作为渗透压保护剂：选用海藻糖10g，然后使用磷酸盐缓冲液45ml溶解后，磁力搅拌溶解，40μm滤网过滤除去溶剂中的杂质，然后定容至50ml，4℃保存备用；
(3)取配置好的组织细胞营养物水溶液50ml和海藻糖缓冲液25ml，按上述比例加入1-20g人血白蛋白、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子和100-1500ng抗生素，然后加入D-Hank’s溶液，搅拌至完全溶解，然后将混合液分别经40μm滤网、0.22μm滤膜和0.1μm滤膜过滤去除细菌和支原体，所得溶液于4℃保存备用。
本发明的实施例1和2的有益效果至少包括：
(1)减少因低温保存导致的子宫内膜组织细胞内水肿；
(2)防止子宫内膜组织细胞酸化作用；
(3)防止氧自由基的损伤；
(4)保持细胞内环境的稳定。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，每100ml保存液按照质量体积或活性单位的组分，包括0.04-2.5g组织细胞营养物、5-15g渗透压保护剂、1-20g生物制品保护剂、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子、100-1500ng抗生素以及余量的D-Hank’s溶液。
2.根据权利要求1所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述组织细胞营养物为L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Ala-Gln)水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述渗透压保护剂选用低分子右旋糖酐或海藻糖磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求3所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述渗透压保护剂为海藻糖磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述生物制品保护剂为人血白蛋白或聚乙二醇。
6.根据权利要求5所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述生物制品保护剂为人血白蛋白。
7.根据权利要求1所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述人用细胞因子为EGF、basic-FGF和PDGF-BB中的一种或两种或全部。
8.根据权利要求1所述的一种保存子宫内膜组织的保存液，其特征在于，所述抗生素为临床安全无过敏和变态反应的硫酸庆大霉素注射液。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的一种保存子宫内膜组织的保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
(1)配置组织细胞营养物水溶液：称取组织细胞营养物0.2g，使用100ml医用级别的无菌注射用水充分溶解后，4℃保存备用；
(2)选用海藻糖磷酸盐缓冲液作为渗透压保护剂：选用海藻糖10g，然后使用磷酸盐缓冲液45ml溶解后，磁力搅拌溶解，40μm滤网过滤除去溶剂中的杂质，然后定容至50ml，4℃保存备用；
(3)取配置好的组织细胞营养物水溶液50ml和海藻糖缓冲液25ml，按上述比例加入1-20g人血白蛋白、100-10000IU低分子肝素钠、100-2000ng人用细胞因子和100-1500ng抗生素，然后加入D-Hank’s溶液，搅拌至完全溶解，然后将混合液分别经40μm滤网、0.22μm滤膜和0.1μm滤膜过滤去除细菌和支原体，所得溶液于4℃保存备用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110810399A (zh) * 2019-11-21 2020-02-21 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 细胞运输保护液及制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0516901A1 (en) * 1991-06-06 1992-12-09 Richard L. Lindstrom Method and apparatus of a serumfree medical solution
WO1999020741A1 (en) * 1997-10-23 1999-04-29 Geron Corporation Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells
CN105028388A (zh) * 2015-07-08 2015-11-11 深圳爱生再生医学科技有限公司 保存液及其制备方法
CN106834218A (zh) * 2017-01-06 2017-06-13 庞希宁 人羊膜上皮干细胞无血清培养基及其培养方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0516901A1 (en) * 1991-06-06 1992-12-09 Richard L. Lindstrom Method and apparatus of a serumfree medical solution
WO1999020741A1 (en) * 1997-10-23 1999-04-29 Geron Corporation Methods and materials for the growth of primate-derived primordial stem cells
CN105028388A (zh) * 2015-07-08 2015-11-11 深圳爱生再生医学科技有限公司 保存液及其制备方法
CN106834218A (zh) * 2017-01-06 2017-06-13 庞希宁 人羊膜上皮干细胞无血清培养基及其培养方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110810399A (zh) * 2019-11-21 2020-02-21 康妍葆(北京)干细胞科技有限公司 细胞运输保护液及制备方法和应用

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