CN109021187A - 玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物及其制备方法与应用 - Google Patents

玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种玉米醇溶蛋白‑聚磺基甜菜碱两亲性缀合物及其制备方法与应用。该方法包括如下步骤：(1)将玉米醇溶蛋白溶于DMF中，并加入三乙胺混合均匀，得到玉米醇溶蛋白溶液；然后滴加2‑溴代异丁酰溴与DMF的混合液进行反应，得到溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂；(2)将溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂和两性离子单体溶于DMSO中，在保护性气体氛围下加入联吡啶和溴化亚铜进行聚合反应，透析，过滤，取滤液冷冻干燥，得到玉米醇溶蛋白‑聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。本发明的方法简便易行，获得的缀合物具有很好的生物相容性和血液长循环特性，可用于负载疏水性药物姜黄素，大幅度提高了姜黄素的稳定性。

Description

玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物及其制备方法与 应用
技术领域
本发明属于天然蛋白质化学改性及其医学应用领域，特别涉及一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物及其制备方法与应用。
背景技术
玉米醇溶蛋白是一种源自玉米的不水溶蛋白质，分子量约为44kDa，具有生物降解性和生物相容性，适合应用于生物医用材料领域。它由高比例(>50％)的非极性氨基酸组成，如亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸和苯丙氨酸。在药物递送系统中有广泛应用，可用作疏水药物载体，但由于本身疏水性强，有抗原性，通过一般的给药途径静脉注射会吸附血液中的血浆蛋白继而被单核吞噬细胞系统(MPS)识别和清除，而未能有效地达到病灶靶点。
药物载体领域常用聚乙二醇(PEG)修饰纳米粒子的表面，使得这些纳米粒难以吸附血浆蛋白，避免被MPS识别和清除，延长体内循环时时间从而增加其在病灶靶点积累的机会，提高递送效率。然而，PEG表面修饰在应用中遇到了一些未解决的问题，例如在体内生理条件下氧化降解，降低纳米粒的细胞摄取率和核内体逃逸可能性，在二次给药后免疫系统产生抗-PEG抗体而出现加速血液清除现象。上述问题可能导致聚乙二醇化药物的生物利用度显着降低，甚至可能引发不良的病理副作用。
两性离子聚合物具有强亲水性，比起PEG具有更优异的抗蛋白质吸附性能，由其组成或修饰的水凝胶或纳米粒表面上蛋白质吸附小于0.3ng·cm-2，而且多次给药不产生抗体，未发现加速血液清除现象。两性离子聚合物修饰的玉米醇溶蛋白药物载体对于减少MPS捕获，延长血液循环时间方面有巨大潜力，到目前为止未见报道。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法。本发明首先通过玉米醇溶蛋白上键连溴代异丁酰基得到原子转移自由基聚合的大分子引发剂，再引发甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱两性离子单体聚合，得到玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。
本发明的另一目的在于提供所述方法制备得到的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。
本发明的又一目的在于提供所述玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)溴化玉米醇溶蛋白(zein-Br)大分子引发剂的制备
将玉米醇溶蛋白溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，并加入三乙胺，混合均匀后置于0～4℃的乙醇浴中冷却，得到玉米醇溶蛋白溶液；然后将2-溴代异丁酰溴与二甲基甲酰胺的混合液滴加到玉米醇溶蛋白溶液中，滴加完毕后于0～4℃的乙醇浴条件下进行反应，待反应结束后自然恢复到室温，再将其滴加到二氯甲烷中使产物沉淀，取沉淀真空干燥，得到溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂；
(2)玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备
将步骤(1)得到的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂和两性离子单体溶于二甲基亚砜(DMSO)中，在保护性气体氛围下加入联吡啶和溴化亚铜进行反应，待反应结束后透析，过滤，取滤液冷冻干燥，得到玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。
步骤(1)中所述的二甲基甲酰胺(DMF)的用量优选为按每克(g)玉米醇溶蛋白配比5～15mL二甲基甲酰胺计算。
步骤(1)中所述的玉米醇溶蛋白与2-溴代异丁酰溴的质量比2：0.5～2。
步骤(1)中所述的2-溴代异丁酰溴与三乙胺的摩尔比为1：2～6；优选为1：6。
步骤(1)中所述的乙醇浴的温度优选为0℃。
步骤(1)中所述的2-溴代异丁酰溴与二甲基甲酰胺的混合液为2-溴代异丁酰溴与二甲基甲酰胺混合后得到的混合物；其中，二甲基甲酰胺(DMF)的用量按每克2-溴代异丁酰溴配比5～15mL二甲基甲酰胺计算；优选为按每克2-溴代异丁酰溴配比10.75mL二甲基甲酰胺计算。
步骤(1)中所述的滴加的时间为0.5～2小时；优选为1小时。
步骤(1)中所述的反应的时间为1～3小时；优选为1小时。
步骤(1)中所述的自然恢复到室温优选为在搅拌条件恢复到室温；其中，搅拌的时间为12～48小时；优选为24小时。
步骤(1)中所述的二氯甲烷优选为2～5℃的二氯甲烷。
所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，还包括将步骤(1)中得到溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂进行纯化的步骤；具体为：将溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂溶解到DMF中，然后将其滴加到二氯甲烷中使产物沉淀，重复3～6次。
步骤(1)中所述的真空干燥的条件为：在30～45℃条件下干燥24～48小时；优选为：在30～45℃真空烘箱中燥过夜。
步骤(2)中所述的两性离子单体为甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)。
步骤(2)中所述的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂与两性离子单体的质量比为1：1～8；质量比优选为1:5。
步骤(2)中所述的二甲基亚砜的用量优选为按每毫升(mL)二甲基亚砜配比0.0056g溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂计算。
步骤(2)中所述的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂、联吡啶与溴化亚铜的质量比为10：1：0.5。
步骤(2)中所述的反应的条件为：在30℃条件下反应12～48小时；优选为：在30℃条件下反应24小时。
步骤(2)中所述的反应优选为通过如下步骤实现：先将溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂和两性离子单体溶于二甲基亚砜中，然后对获得的溶液通入保护性气体鼓泡1～2小时去除溶液中的氧气，再在保护性气体氛围下加入联吡啶和溴化亚铜，于30℃条件下反应12～48小时，最后将反应获得的混合物暴露于空气中停止聚合反应。
步骤(2)中所述的保护性气体为氮气。
步骤(2)中所述的透析为采用截留分子量10000的透析袋进行透析；优选为采用截留分子量10000的透析袋透析3～5天；更优选为采用截留分子量10000的透析袋透析3天。
一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物，通过上述任一项所述的方法制备得到。
所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物在制备药物载体中的应用。
一种纳米胶束，包含上述玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。
所述的纳米胶束的制备方法，具体步骤如下：将上述玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物超声分散到溶剂中，得到纳米胶束。
所述的超声的条件为：100W超声15～30分钟；优选为：100W超声30分钟。
所述的溶剂优选为PBS缓冲液或去离子水。
所述的纳米胶束的浓度为1～10mg/mL；优选为2mg/mL。
所述的纳米胶束作为药物载体的应用。
一种姜黄素负载胶束，包含上述玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物和姜黄素，或包含上述纳米胶束和姜黄素。
所述的姜黄素负载胶束的制备方法，具体步骤如下：将姜黄素溶于易挥发溶剂中，再滴加到上述纳米胶束中，搅拌蒸发溶剂，过滤，滤液冻干，得到姜黄素负载胶束。
所述的易挥发溶剂优选为丙酮。
所述的姜黄素的用量优选为按每毫升(mL)丙酮配比0.5mg姜黄素计算。
所述的姜黄素与纳米胶束的质量比为1：10～100；优选为1：10。
所述的丙酮与胶束分散液的体积比为1：5～10；优选为1：5。
所述的纳米胶束的浓度优选为2mg/mL。
所述的搅拌蒸发溶剂优选为在通风橱中搅拌蒸发溶剂。
所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物、纳米胶束或姜黄素负载胶束在制备降血脂、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药物中的应用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明首先通过玉米醇溶蛋白上键连溴代异丁酰基得到原子转移自由基聚合的大分子引发剂，再引发两性离子单体甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱聚合，得到玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物，该缀合物具有很好的生物相容性。
(2)本发明利用两亲性缀合物的亲疏水作用在水中自组装成纳米胶束，具有较好的生物相容性和血液长循环特性。
(3)本发明通过玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物纳米胶束的方法操作简便易行，有望应用于体内的递送载体。
(4)本发明通过向纳米胶束水分散液中滴加姜黄素的丙酮溶液，搅拌待丙酮蒸发完全，借助玉米醇溶蛋白疏水核负载疏水性药物姜黄素，可大幅度提高姜黄素稳定性。
附图说明
图1是实施例1中产物的FT-IR谱图及NMR谱图；其中，图A为FT-IR谱图；图B为NMR谱图。
图2是两亲性缀合物的临界胶束浓度测定结果图。
图3是胶束的粒径及粒径分布及微观形貌图；图a为粒径分布图；图b为微观形貌图。
图4是细胞毒性实验结果图。
图5是活体荧光成像实验结果图。
图6是姜黄素降解速率测定结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。下述实施例中所使用的各原料以及试剂，除特别指出的以外，均可由市售获得。
实施例1
(1)溴化玉米醇溶蛋白(zein-Br)大分子引发剂的制备
2g玉米醇溶蛋白溶于10mL无水DMF(二甲基甲酰胺)中。然后在氮气气氛下加入1.0mL三乙胺，混合物在0℃的乙醇浴中冷却。在搅拌下，将0.93g2-溴代异丁酰溴混于10mL无水DMF中，逐滴滴加至玉米醇溶蛋白溶液中。1小时内滴加完，反应混合物保持在乙醇浴中继续反应1小时，然后自然温热至室温并搅拌24小时。将反应混合物滴加至冷(温度约2～5℃)的二氯甲烷中沉淀。产物经3次DMF溶解二氯甲烷沉淀法纯化，真空烘箱在30℃下干燥过夜，得到zein-Br大分子引发剂。
(2)玉米醇溶蛋白-磺基甜菜碱两性离子聚合物两亲性缀合物(zein-PSBMA)的制备
首先将0.112g zein-Br大分子引发剂和0.560g两性离子单体甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA，购于Sigma-Aldrich)溶于20mL无水DMSO(二甲基亚砜)中。对溶液通氮气鼓泡除氧气1小时后，在30℃下加入0.013g联吡啶和0.006g溴化亚铜，在氮气气氛下进行反应，24小时后，将反应混合物暴露于空气中停止聚合反应。反应产物混合物用去离子水透析(截留分子量10000)3天，过滤，取滤液冷冻干燥，获得产物zein-PSBMA。
(3)产物表征
在Bruker 500MHz核磁共振波谱仪上测原料玉米醇溶蛋白、上述步骤(1)(2)产物zein-Br和zein-PSBMA的1H NMR谱图。在Nicolet/Nexus 670(Thermo NicoletCorporation，Wisconsin，USA)红外光谱仪上记录傅立叶变换红外光谱(FT-IR)，其波长为500cm-1至4000cm-1，分辨率为4cm-1，使用KBr作为底物，进行32次扫描。
1H NMR谱图如图1B所示，1.97ppm(-CH2C(CH3)COO-，峰h)，2.24ppm(-CH2CH2CH2SO3，峰b)，2.93ppm(-CH2CH2SO3，峰a)，3.19ppm(-CH2N+(CH3)2CH2-，峰d，e)，3.56ppm(-SO3CH2CH2CH2N+(CH3)2-，峰c)，3.77ppm(-CH2N+(CH3)2CH2CH2O-，峰f)和4.46ppm(-CH2CH2OCO-，峰g)是PSBMA链段的特征化学位移，证实了PSBMA在玉米醇溶蛋白骨架上的成功接枝聚合。
得到的zein-PSBMA的FT-IR谱图(图1A)中，除了含有玉米蛋白组分的特征吸收，还出现了PSBMA组分的红外特征吸收峰：1044cm-1(S＝O键的对称伸缩振动)，1185cm-1(S＝O键的不对称伸缩振动)，930cm-1(S-O的伸缩振动)，1482cm-1(N+(CH3)2基团的C-H弯曲振动)和1725cm-1(酯羰基的伸缩振动)，也验证了接枝聚合反应的成功。
使用紫外-可见分光光度计(TU-1901，中国)，根据酪氨酸和苯丙氨酸残基的最大吸收波长280nm，紫外可见分光光度法测定zein-PSBMA中玉米醇溶蛋白组分的含量。Zein-Br作为标准样品，室温下使用pH 11的NaOH水溶液作为溶剂建立标准工作曲线。制备2.000mg·mL-1的上述合成的zein-PSBMA样品，并在相同的溶剂和温度条件下测定。测定得到本实施例制备的缀合物中玉米醇溶蛋白的质量分数为45％。
使用芘作为荧光探针测定zein-PSBMA的临界胶束浓度(CMC)。将芘(6×10-5mol·L-1)的丙酮溶液加入到10mL玻璃小瓶中。丙酮完全蒸发后，将含有系列浓度的zein-PSBMA(0.001至1.00mg·mL-1)的磷酸盐缓冲溶液(0.01M PBS缓冲液，pH 7.4)加入到混合物中，并调整芘的最终浓度至6×10-7mol·L-1。将混合物涡旋5分钟，并在37℃下孵育过夜。使用RF-5301PC荧光分光光度计(日本岛津)，发射波长固定在390nm处，在300～350nm波长范围内记录样品的荧光激发光谱。绘制I339与I335的吸光度比对zein-PSBMA的对数浓度的关系。通过外推强度比，取交叉点来确定CMC。如图2，推算得到CMC为0.0091g/L，数值相对较低，体现了胶束的热力学稳定性。
实施例2
(1)溴化玉米醇溶蛋白(zein-Br)大分子引发剂的制备
1g玉米醇溶蛋白溶于15mL无水DMF(二甲基甲酰胺)中。然后在氮气气氛下加入3.2mL三乙胺，混合物在0℃的乙醇浴中冷却。在搅拌下，将1g2-溴代异丁酰溴混于5mL无水DMF中，逐滴滴加至玉米醇溶蛋白溶液中。2小时内滴加完，反应混合物保持在乙醇浴中继续反应3小时，然后自然温热至室温并搅拌48小时。将反应混合物滴加至二氯甲烷中沉淀。产物经6次DMF溶解二氯甲烷沉淀法纯化，真空烘箱在45℃下干燥过夜，得到zein-Br大分子引发剂。
(2)玉米醇溶蛋白-磺基甜菜碱两性离子聚合物两亲性缀合物(zein-PSBMA)的制备
首先将0.112g zein-Br大分子引发剂和0.896g两性离子单体甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)溶于20mL无水DMSO(二甲基亚砜)中。对溶液通氮气鼓泡除氧气2小时后，在30℃下加入0.013g联吡啶和0.006g溴化亚铜，在氮气气氛下进行反应，48小时后，将反应混合物暴露于空气中停止聚合反应。反应产物混合物用去离子水透析(截留分子量10000)5天，过滤，取滤液冷冻干燥，获得产物zein-PSBMA。
实施例3
(1)溴化玉米醇溶蛋白(zein-Br)大分子引发剂的制备
1g玉米醇溶蛋白溶于10mL无水DMF(二甲基甲酰胺)中。然后在氮气气氛下加入0.6mL三乙胺，混合物在0℃的乙醇浴中冷却。在搅拌下，将0.25g2-溴代异丁酰溴混于1.3mL无水DMF中，逐滴滴加至玉米醇溶蛋白溶液中。0.5小时内滴加完，反应混合物保持在乙醇浴中继续反应2小时，然后自然温热至室温并搅拌12小时。将反应混合物滴加至二氯甲烷中沉淀。产物经4次DMF溶解二氯甲烷沉淀法纯化，真空烘箱在40℃下干燥过夜，得到zein-Br大分子引发剂。
(2)玉米醇溶蛋白-磺基甜菜碱两性离子聚合物两亲性缀合物(zein-PSBMA)的制备
首先将0.112g zein-Br大分子引发剂和0.112g两性离子单体甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)溶于20mL无水DMSO(二甲基亚砜)中。对溶液通氮气鼓泡除氧气1小时后，在30℃下加入0.013g联吡啶和0.006g溴化亚铜，在氮气气氛下进行反应，12小时后，将反应混合物暴露于空气中停止聚合反应。反应产物混合物用去离子水透析(截留分子量10000)4天，过滤，取滤液冷冻干燥，获得产物zein-PSBMA。
实施例4
(1)胶束的制备
取上述实施例1中的两亲性缀合物zein-PSBMA制备胶束。借助100W超声仪超声30分钟，将10mg冻干产物直接分散至5mL去离子水中，制备得胶束(zein-PSBMA胶束)。
(2)胶束粒径及形貌观察
使用ZetaPALS(Brookhaven Instruments Corporation，USA)在670nm激光波长、25℃、检测角度为90°条件下，通过动态光散射法(DLS)和相位分析光散射法(PALS)测量胶束尺寸分布和zeta电位。用于测试的样品浓度为1mg·mL-1。3组平行实验。如图3a所示，测量得到胶束的平均直径(Mean diameter)为154.7±2.7nm，多分散系数(PDI)为0.108。尺寸分布较窄。ζ电位为-5.26±0.91mV，接近于电中性，其趋向于具有较长的血液循环时间和较高的对肿瘤的递送效率。
将胶束溶液(0.5mg·mL-1)滴加到锡箔上，室温下干燥。在E-1045离子溅射仪(Hitachi，Japan)溅射镀金后，使用扫描电子显微镜(Quanta 400F，FEI)观察样品。如图3b所示，可观察到胶束呈球形，直径约为100nm，胶束的粒径大小较均一。
(3)胶束的细胞毒性测定
使用MTT活力测定法分析zein-PSBMA胶束的细胞毒性。将鼻咽癌CNE1细胞(南方医科大学实验动物中心)接种在含有DMEM培养基的96孔板(约104个细胞/孔)中，并在培养箱中培养24小时。然后移去培养基，加入含不同浓度zein-PSBMA的新鲜DMEM培养基，其中为zein-PSBMA的浓度分别为5、10、100、1000、3000μg·mL-1。将纯的新鲜DMEM培养基作为对照。分别进一步孵育1小时、1天、2天和4天后，加入50μL的MTT(1mg·mL-1)，并将细胞再培养4小时。用150μL DMSO代替含MTT的培养基，在37℃下溶解甲瓒晶体10分钟。使用ELISA读数器(Multiskan MK3，Thermo Scientific，USA)在波长490nm处测量吸光度。相对细胞活力(％)通过样品与对照在490nm处的吸光度比确定。每组5个平行样。如图4所示，显示培养1小时至4天的CNE1细胞的活力，共聚物的浓度范围为5至3000μg/mL。即使浓度高达3000μg/mL，细胞活力均大于90％，说明zein-PSBMA没有产生明显的细胞毒性，生物相容性好。
(4)小动物活体荧光成像观察胶束的体内循环时间
将10只体重18～21g的雄性BALB/c小鼠(南方医科大学实验动物中心)随机分为两组，Cy 5.5作为对照，通过尾静脉分别注射Cy 5.5标记的胶束(100μL)和Cy 5.5，其中Cy5.5的注射用量相等(均为2μg/mL)。对小鼠使用4％(v/v)氧气—异氟烷混合气体麻醉。使用小动物体内荧光成像系统(In-Vivo FxPro；Carestream，MI，USA)，在注射后1、3、6、24、48、72小时后，以670nm波长激发，捕获700nm荧光信号。在整个实验中，在采集室中用2％(v/v)氧气—异氟烷混合气体保持小鼠的麻醉状态。将每只小鼠的荧光信号叠加在相应的白光图像上，并使用Carestream MI软件标定荧光强度。如图5所示，注射了Cy 5.5标记的zein-PSBMA胶束的小鼠的图像显示了四肢、口、腋窝、睾丸和肝脏中的荧光强度较高，72小时后仍然可见荧光信号。这个结果与这些器官组织具有丰富的血管和微循环而且贴近体表的事实相关。而注射了自由Cy 5.5的小鼠的图像荧光信号较弱，注射6h后荧光强度和分布面积显着减小，48h后几乎消失。由上述结果可以得出，与自由Cy 5.5相比，Cy 5.5标记的zein-PSBMA胶束的循环时间延长了。这可归因于zein-PSBMA胶束中两性离子磺基甜菜碱外壳的超亲水性和抗蛋白吸附性能。结果证实了zein-PSBMA可有效延长体内循环时间，有望应用于体内的递送载体。
实施例5
(1)姜黄素负载胶束的制备
将5mg姜黄素溶解于10mL丙酮中，再逐渐滴加至50mL空白胶束分散液(空白胶束分散液为将实施例1中制得的产物zein-PSBMA分散到去离子水中，其浓度为2mg·mL-1)中，将混合物在通风橱中搅拌至丙酮完全蒸发；过滤混合物除去水相中的姜黄素聚集体；冻干滤液得到载药胶束，呈橙黄色疏松固体。
药物负载量(DLC)和药物负载率(DLE)的测定：用DMSO-水(1/1，v/v)混合溶剂溶解载药胶束，使用UV-vis分光光度计，测定420nm处的吸光度。绘制姜黄素浓度对UV吸光度的标准工作曲线。比照标准曲线，计算胶束中的姜黄素含量。
药物负载量(DLC)和药物负载率(DLE)计算公式如下：
计算得到玉米蛋白-g-PSBMA胶束中的药物负载量(DLC)和负载效率(DLE)分别计算为3.6％和72％。
(2)姜黄素的稳定性研究
使用UV-vis分光光度计，常温常压下，在420nm处记录游离姜黄素和被胶束包载的姜黄素(制备方法参考上述步骤(1))的吸光度随时间的变化，其中姜黄素为等量浓度20μg/mL。样品分散在PBS(0.01M，pH 7.4)中，游离姜黄素组加入5％(v/v)甲醇助溶。使用标准工作曲线计算各组在降解过程中的姜黄素剩余量，并对姜黄素剩余量随时间变化的关系作图。结果如图6所示，包封在zein-PSBMA胶束中的姜黄素比自由姜黄素的稳定性提高了约230倍。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂的制备
将玉米醇溶蛋白溶于二甲基甲酰胺中，并加入三乙胺，混合均匀后置于0～4℃的乙醇浴中冷却，得到玉米醇溶蛋白溶液；然后将2-溴代异丁酰溴与二甲基甲酰胺的混合液滴加到玉米醇溶蛋白溶液中，滴加完毕后于0～4℃的乙醇浴条件下进行反应，待反应结束后自然恢复到室温，再将其滴加到二氯甲烷中使产物沉淀，取沉淀真空干燥，得到溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂；
(2)玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备
将步骤(1)得到的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂和两性离子单体溶于二甲基亚砜中，在保护性气体氛围下加入联吡啶和溴化亚铜进行反应，待反应结束后透析，过滤，取滤液冷冻干燥，得到玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物。
2.根据权利要求1所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的两性离子单体为甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱。
3.根据权利要求1所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的玉米醇溶蛋白与2-溴代异丁酰溴的质量比2：0.5～2；
步骤(1)中所述的2-溴代异丁酰溴与三乙胺的摩尔比为1：2～6；
步骤(2)中所述的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂与两性离子单体的质量比为1：1～8；
步骤(2)中所述的溴化玉米醇溶蛋白大分子引发剂、联吡啶与溴化亚铜的质量比为10：1：0.5。
4.根据权利要求1所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的二甲基甲酰胺的用量按每克玉米醇溶蛋白配比5～15mL二甲基甲酰胺计算；
步骤(1)中所述的2-溴代异丁酰溴与二甲基甲酰胺的混合液中二甲基甲酰胺的用量按每克2-溴代异丁酰溴配比5～15mL二甲基甲酰胺计算。
5.根据权利要求1所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的滴加的时间为0.5～2小时；
步骤(1)中所述的反应的时间为1～3小时；
步骤(1)中所述的真空干燥的条件为：在30～45℃条件下干燥24～48小时；
步骤(2)中所述的反应的条件为：在30℃条件下反应12～48小时；
步骤(2)中所述的保护性气体为氮气；
步骤(2)中所述的透析为采用截留分子量10000的透析袋透析3～5天。
6.一种玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物，其特征在于：通过权利要求1～5任一项所述的方法制备得到。
7.权利要求6所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物在制备药物载体中的应用。
8.一种纳米胶束，其特征在于：包含权利要求6所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物；所述的纳米胶束通过如下步骤制备得到：将玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物超声分散到溶剂中，得到纳米胶束；
所述的纳米胶束的浓度为1～10mg/mL；
所述的溶剂为PBS缓冲液或去离子水。
9.一种姜黄素负载胶束，其特征在于：包含权利要求6所述的玉米醇溶蛋白-聚磺基甜菜碱两亲性缀合物和姜黄素，或包含权利要求8所述的纳米胶束和姜黄素。
10.权利要求9所述的姜黄素负载胶束的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将姜黄素溶于易挥发溶剂中，再滴加到权利要求8所述的纳米胶束中，搅拌蒸发溶剂，过滤，滤液冻干，得到姜黄素负载胶束；
所述的易挥发溶剂为丙酮；
所述的姜黄素与纳米胶束的质量比为1：10～100。
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