CN109007276A - 一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂，按重量份数计，由以下原料组成：枯草芽孢杆菌10‑50％；产氨短杆菌20‑45％；啤酒酵母菌10‑40％；沸石粉0‑20％；纤维素酶0‑8％；本发明还提供上述生物制剂的制备方法。本发明的生物制剂及其制备方法，其免疫活性物质能增强机体免疫机能，提高动物抗应激、抗疾病能力、改善动物生产性能，还有毒副作用小、无耐药性、不易残留等优点，同时其营养丰富，富含多种氨基酸、蛋白质、和微量元素，并富含多种有机酸和酶，不但能够提高鲫鱼的成活率，而且能够有效改善鱼的肉质。

Description

一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及水产养殖微生物饲料添加剂领域，尤其涉及一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂及其制备方法。

背景技术

鲫鱼，杂食性鱼，喜群居而行，择食而居。肉质细嫩，肉营养价值很高，每百克肉含蛋白质13克、脂肪11克，并含有大量的钙、磷、铁等矿物质。鲫鱼药用价值极高，其性平味甘，入胃、肾，具有和中补虚、除羸、温胃进食、补中生气之功效。鲫鱼分布广泛，全国各地水域常年均有生产，以2～4月份和8～12月份的鲫鱼最肥美，为我国重要食用鱼类之一。最大体长约30cm，栖息深度为0～20米，无毒，经济型食用鱼类，物美价廉。在现有技术中，通常存在鲫鱼养殖成活率低、管理不便的缺陷。

由于鲫鱼具有味美和营养的双重优点，其生长迅速，适应性强，饵料来源广泛，产量高，并且营养丰富，是我国主要的水产养殖品种，也是人们日常的食物之一。然而，目前池塘养殖池水处于不流动状态，水质容易恶化；人工精饲料喂养的鲫鱼口感较自然生长的鲫鱼差，肉质疏松，鲜味下降；而纯青饲料喂养鲫鱼生长周期较长，不能满足市场的需求。

随着近些年人们的生活水平不断提高，目前人们对鱼的需求量也在逐年增加，为了满足需要，鱼的养殖趋向大规模化和科技化，鱼饲料是鱼养殖的重要环节之一。然而，目前市面上的鱼饲料营养成分单一，且含有大量的防腐剂和人工色素等，不仅影响鱼肉的品质和鱼的成活率，而且也会对食用者产生不良影响。

现代大规模水产养殖方式提高了生产速度的同时，也带来了许多问题。为防治水生动物疾病，越来越多地使用到抗生素。抗生素所发挥的积极作用主要体现在防治水生动物疾病、促进生长、节约营养成分等方面。尤其是抗生素的应用有效控制了许多水产疾病的发生，促进了水产养殖业的发展。但是，由于抗生素的不断使用容易产生耐药菌株、存在药物残留以及容易破坏水生动物微生态平衡，一方面使得水产养殖疾病越来越难治；另一方面水产品质量安全得不到保证。随着生活水平的提高和对食品安全认识的不断增强，人们的消费观念有了很大转变，对动物源食品的质量提出了越来越高的要求。

肌苷酸作为一种非常重要的鲜味物质，能有效提升水产动物的鲜度，肌苷酸含量与肉制品的初始PH，口感和风味直接相关，目前世界上已有不少国家以肌苷酸的含量作为肉类新鲜程度的指标。通过发酵方法可以使得产氨短杆菌的肌苷磷酸化产生肌苷酸，但是肌苷酸对细胞膜的透性很差，产氨短杆菌的磷酸脂酶活性较弱；微生物中普遍存在肌苷酸脱磷酸化的酶类，枯草芽孢杆菌的磷酸脂酶活性强，有利于将肌苷酸脱磷酸化形成肌苷酸。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂及其制备方法，其免疫活性物质能增强机体免疫机能，提高动物抗应激、抗疾病能力、改善动物生产性能，还有毒副作用小、无耐药性、不易残留等优点，同时其营养丰富，富含多种氨基酸、蛋白质、和微量元素，并富含多种有机酸和酶，不但能够提高鲫鱼的成活率，而且能够有效改善鱼的肉质。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂，按重量份数计，由以下原料组成：

另一方面，本发明还提供一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂的制备方法，采用两级发酵工艺，包括以下步骤：

步骤一，枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌选育和生产制种；

步骤二，将步骤一得到的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌进行第一级发酵，获得第一级发酵产品；

步骤三，将步骤二得到的第一级发酵产品进行第二级发酵，第二级发酵产品放入沸腾干燥剂内进行干燥，将水分控制在12％以内，干燥得到的产物进行粉碎100目过筛，将得到的水分小于12％内第二级发酵产品与沸石粉、纤维素酶按比例混合，混合得到的复合产品再次100目过筛，得到粉末状的成品，密封保存。

为了优化上述的制备方法，本发明采取的技术措施还包括：

进一步地，上述步骤一中选育和生产制种包括以下步骤：

第一步，采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌通过培养基转代培养，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在0-4℃温度下保存菌种；

第二步，将筛选出来的产氨短杆菌和啤酒酵母菌分别转入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中保存。

进一步地，上述步骤二中第一级发酵包括以下步骤：

第一步，将枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌按照比例分别接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，放入搅拌机中搅拌，搅拌转速为200r/min—240r/min,培养温度为35-40℃，通气量1：0.6，发酵时间为22-26小时，得到复合菌扩大培养液；

第二步，将复合菌扩大培养液按照以下重量比例接种于培养基中：复合菌扩大培养液3-18％、培养基5-20％、水62-92％，搅拌混合均匀，搅拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1：0.6，发酵时间为34-38小时；

第三步，发酵结束后，将发酵液通过转速为2800r/min—3200/min的螺旋沉降离心机和转速为6800r/min—7200r/min的蝶式离心机进行分离，获得第一级发酵产品。

进一步地，上述第一级发酵中的培养基选自豆粕粉、尿素、硫酸铵、麦麸、酵母粉、玉米浆、玉米粉，糖蜜、消泡剂，磷酸镁，硫酸镁，无菌水中的至少两种混合得到。

进一步地，上述第一级发酵中的培养基由下述重量百分比的原料组成：豆粕粉2-6％、尿素0-1％、硫酸铵0-1％、麦麸0-5％、酵母粉0-3％、玉米浆0-1.5％、玉米粉3-10％，糖蜜1-3％、消泡剂0-1％，磷酸镁0-1％、硫酸镁0-1％、无菌水85-94％。

进一步地，上述步骤三中第二级发酵包括以下步骤：将第一级发酵产品按1：4—6的重量比例加入到营养载体中，放入高速混合机内混合，混合均匀后在放置入密封的塑料大桶内，放入温度为35-40℃的发酵房内发酵5-9，获得第二级发酵产品。

进一步地，上述第二级发酵中的营养载体由下述重量百分比的原料组成：米糠粉85-95％、蛋白粉5-15％。

进一步地，上述步骤三中第二级发酵产品与沸石粉、纤维素酶按照以下的重量比例进行混合：

第二级发酵产品 72-100％

沸石粉 0-20％

纤维素酶 0-8％。

本发明采用由多种筛选出的菌种与有机营养物质混合，通过微生物发酵技术制成，培养基和营养载体作为营养物质，在部分被菌体利用后，通过菌体代谢生产的酶对培养基中的有机物质进行分解，并在特定的条件下组合，可形成目的产物。

本发明通过微生物的发酵作用进行人工养殖鲫鱼肉质改善的饲料添加剂，其免疫活性物质能增强机体免疫机能，提高动物抗应激、抗疾病能力、改善动物生产性能，同时还有毒副作用小、无耐药性、不易残留等优点。其营养丰富，富含多种氨基酸、蛋白质、和微量元素，同时富含多种有机酸和酶，不仅提高了鱼的成活率，而且能有效改善的鱼的肉质。

本发明采用的菌种能通过参与机体脂肪酸氧化，降低体脂含量，改善肉质品质，同时发酵产生的酸香气味对鲫鱼具有良好的诱食作用，有助于提高饲料利用率，促进鲫鱼生长速度，缩短养殖周期。

本发明独特的保护技术能够耐受90度高温，制粒温度和后熟化后总菌数成活率达到80％，产品在水中散失率低，稳定性强。

本发明采用的所有菌种都是农业部658公告中允许添加的菌种，用菌种的液体复合培养方法，同时在成品中额外添加了0-20％沸石粉及0-8％的纤维素酶。产品富含发酵产物以及各类抗氧化物，有助于促进动物生长，通过加入纤维素酶、沸石粉的作用，适当地改良了人工配合中的营养成分，同时因为发酵微生物的作为显著的提高了鲫鱼肌肉中的肌苷酸含量。提高鲫鱼的瘦肉率，显著降低了脂腹率和肌间脂肪，增加鱼体可食部分体重，改善风味，提高营业价值，改善鲫鱼体表色泽，增加肌肉口感和致密度。

具体实施方式

本发明提供了一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂及其制备方法，下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。

实施例1

步骤一：菌种的选育和生产制种：

1)采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，啤酒酵母菌通过淀粉培养基传代培养，选育生长速度快，菌落特征明显的菌种，在2℃温度下保存菌种；

营养琼脂培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCL5g，琼脂15-20g，水1000ml，PH7-7.2，121℃灭菌20min；

淀粉培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000ml，琼脂15-20g，121℃灭菌20min；

2)将产氨短杆菌，啤酒酵母菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在38℃培养45小时，待茄子瓶表面菌苔布满，放入4℃的冰箱中保存。

步骤二，第一级发酵：

1)将枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌按照：枯草芽孢杆菌30％、产氨短杆菌45％、啤酒酵母菌25％的重量比例分别接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，放入搅拌机中搅拌，搅拌转速为200r/min,培养温度为37℃，通气量1：0.6，发酵时间为25小时，得到复合菌扩大培养液；

其中，上述培养基由下述重量百分比的原料组成：豆粕粉2％、尿素0.5％、硫酸铵0.2％、麦麸1％、酵母粉1％、玉米浆1％、玉米粉3％，糖蜜2％、消泡剂0.5％，磷酸镁0.3％，硫酸镁0.2％，无菌水88.3％；

2)将复合菌扩大培养液接种于培养基中，其重量比例为：复合菌扩大培养液10％、培养基10％、水80％，搅拌混合均匀，搅拌转速为200r/min,培养温度为35℃，通气量1：0.6，发酵时间为34小时；

3)发酵结束后，将发酵液通过转速为2820r/min的螺旋沉降离心机和转速为7200r/min的蝶式离心机进行分离。

步骤三，第二级发酵：

1)将离出物按1：4的重量比例加入到按照重量比例米糠粉90％和蛋白粉10％组成的营养载体中，放入高速混合机内混合，混合均匀后在放置入密封的塑料大桶内，放入温度为35℃的发酵房内发酵8天；

2)发酵结束后的产物，放入沸腾干燥剂内进行干燥，将水分控制在12％以内；

3)将干燥后的产物，进行粉碎100目过筛；

4)将水分小于12％内的发酵产品、沸石粉、纤维素酶，按以下重量比例进行混合：发酵产品80％、沸石粉15％、纤维素酶5％；

5)将混合后的复合产品再次100目过筛，即得到粉末状的产品，密封保存。

实施例2

步骤一：菌种的选育和生产制种：

1)采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌，通过营养琼脂培养基传代培养，啤酒酵母菌通过淀粉培养基传代培养，选育生长速度快，菌落特征明显的菌种，在44℃温度下保存菌种；

营养琼脂培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCL5g，琼脂15-20g，水1000ml，PH7-7.2，121℃灭菌20min；

淀粉培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000ml，琼脂15-20g，121℃灭菌20min；

2)将产氨短杆菌，啤酒酵母菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在38℃培养45小时，待茄子瓶表面菌苔布满，放入4℃的冰箱中保存。

步骤二，第一级发酵：

1)将枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌按照：枯草芽孢杆菌30％、产氨短杆菌40％、啤酒酵母菌30％的重量比例分别接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，放入搅拌机中搅拌，搅拌转速为200r/min,培养温度为35℃，通气量1：0.6，发酵时间为22小时，得到复合菌扩大培养液；

其中，上述培养基由下述重量百分比的原料组成：豆粕粉5％、尿素0.7％、硫酸铵0.5％、麦麸0.2％、酵母粉1.4％、玉米浆0.6％、玉米粉3％，糖蜜1.2％、消泡剂0.3％，磷酸镁0.8％，硫酸镁0.3％，无菌水86％；

2)将复合菌扩大培养液接种于培养基中，其重量比例为：复合菌扩大培养液10％、培养基10％、水80％，搅拌混合均匀，搅拌转速为200r/min,培养温度为35℃，通气量1：0.6，发酵时间为34小时；

3)发酵结束后，将发酵液通过转速为2800r/min的螺旋沉降离心机和转速为6800r/min的蝶式离心机进行分离。

步骤三，第二级发酵：

1)将离出物按1：6的重量比例加入到按照重量比例米糠粉93％和蛋白粉7％组成的营养载体中，放入高速混合机内混合，混合均匀后在放置入密封的塑料大桶内，放入温度为40℃的发酵房内发酵7天；

2)发酵结束后的产物，放入沸腾干燥剂内进行干燥，将水分控制在12％以内；

3)将干燥后的产物，进行粉碎100目过筛；

4)将水分小于12％内的发酵产品、沸石粉、纤维素酶，按以下重量比例进行混合：发酵产品82％、沸石粉15％、纤维素酶8％；

5)将混合后的复合产品再次100目过筛，即得到粉末状的产品，密封保存。

实施例3

本发明提供的生物制剂添加于鱼饲料中，能够提高鲫鱼的存活率和鲫鱼肌肉中的肌苷酸含量。以每亩放养体重约30克的鲫鱼鱼种2000尾的鱼塘作为实施对象，对照组喂食普通鱼饲料，实验组喂食添加了本发明的生物制剂的鱼饲料，10个月后清塘捕捞，统计亩产量、平均体重和鲫鱼肌肉中的肌苷酸含量，统计结果如下表1：

表1喂食不同鱼饲料的生产数据统计

由上表可知，本发明的生物制剂添加于鱼饲料中，鲫鱼在存活率和肉质上均远远优于对照组。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (9)

1.一种有效提升鲫鱼肌苷酸含量的生物制剂，其特征在于，按重量份数计，由以下原料组成：

2.一种如权利要求1所述的生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌选育和生产制种；

步骤二，将步骤一得到的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌进行第一级发酵，获得第一级发酵产品；

步骤三，将步骤二得到的第一级发酵产品进行第二级发酵，第二级发酵产品放入沸腾干燥剂内进行干燥，将水分控制在12％以内，干燥得到的产物进行粉碎100目过筛，将得到的水分小于12％内的第二级发酵产品与沸石粉、纤维素酶按比例混合，混合得到的复合产品再次100目过筛，得到粉末状的成品，密封保存。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中选育和生产制种包括以下步骤：

第一步，采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌通过培养基转代培养，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在0-4℃温度下保存菌种；

第二步，将筛选出来的产氨短杆菌和啤酒酵母菌分别转入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中保存。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中第一级发酵包括以下步骤：

第一步，将枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌和啤酒酵母菌按照比例分别接种于经过蒸汽灭菌的培养基中，放入搅拌机中搅拌，搅拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1：0.6，发酵时间为22-26小时，得到复合菌扩大培养液；

第二步，将复合菌扩大培养液按照以下重量比例接种于培养基中：复合菌扩大培养液3-18％、培养基5-20％、水62-92％，搅拌混合均匀，搅拌转速为200r/min—240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1：0.6，发酵时间为34-38小时；

第三步，发酵结束后，将发酵液通过转速为2800r/min—3200/min的螺旋沉降离心机和转速为6800r/min—7200r/min的蝶式离心机进行分离，获得第一级发酵产品。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一级发酵中的培养基选自豆粕粉、尿素、硫酸铵、麦麸、酵母粉、玉米浆、玉米粉，糖蜜、消泡剂，磷酸镁，硫酸镁，无菌水中的至少两种混合得到。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述第一级发酵中的培养基由下述重量百分比的原料组成：豆粕粉2-6％、尿素0-1％、硫酸铵0-1％、麦麸0-5％、酵母粉0-3％、玉米浆0-1.5％、玉米粉3-10％，糖蜜1-3％、消泡剂0-1％，磷酸镁0-1％、硫酸镁0-1％、无菌水85-94％。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中第二级发酵包括以下步骤：将第一级发酵产品按1：4—6的重量比例加入到营养载体中，放入高速混合机内混合，混合均匀后在放置入密封的塑料大桶内，放入温度为35-40℃的发酵房内发酵5-9天，获得第二级发酵产品。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第二级发酵中的营养载体由下述重量百分比的原料组成：米糠粉85-95％、蛋白粉5-15％。

9.根据权利要求2或7-8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中第二级发酵产品与沸石粉、纤维素酶按照以下的重量比例进行混合：

第二级发酵产品 72-100％

沸石粉 0-20％

纤维素酶 0-8％。