CN108998436A - 一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法 - Google Patents
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Abstract
一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法，包括1)材料选择与预处理，2)吸附，3)洗脱，4)盐析，5)结晶等步骤，其特点是树脂：500g724树脂用氢氧化钠溶液50g浸泡1‑2小时，然后用蒸馏水冲洗至pH14；再用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡8小时；聚丙烯酸：用少许磷酸盐缓冲液溶解分析纯为38％的聚丙烯酸；选择土陶罐、陶瓷或搪瓷容器。本发明将鸡蛋清直接应用于实际生产，生产的溶菌酶晶体具有质量稳定、感观良好、酶活性较高，且晶体产量高，在提高经济效益的同时还降低了生产成本。具检验测定，本发明生产的溶菌酶晶体活力达到68.81lu/mg，是现有技术生产出来的溶菌酶活力20lu/mg的3倍多。
Description
技术领域
本发明涉及一种溶菌酶晶体的生产方法，特别是一种用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法。
背景技术
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种葡萄糖苷酶。溶菌酶作为一种天然蛋白质，在体内可以被消化和吸收，对人体无毒性，亦不会在体内残留，是一种安全性很高的食品防腐剂、营养保健品和药品。溶菌酶的来源主要有人、动物、植物、微生物和鸟类蛋清蛋白，除了这些天然原材料外，现在还可能通过基因工程的手段获得溶菌酶。其中，鸡蛋清中的溶菌酶是动植物中溶菌酶的典型代表，也是目前了解最清楚的溶菌酶之一，并已得到工业化生产。
近几年来，随着溶菌酶晶体投放市场，并取得重大的经济效益与社会效益。作为近几年发展起来的后起之秀，其发展后劲充足，发展前景广阔，充分显示其强大的生命力，其根本原因在于该溶菌酶晶体是一种天然蛋白质，抗菌、抗病毒、抗肿瘤、无毒性的优点，使得溶菌酶在食品和医药上都有广泛的应用，在生物技术中，溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程中必不可少的工具酶，这是推动该溶菌酶晶体迅速发展的原动力。天然、无害产品越来越引起人们的重视，溶菌酶晶体的市场逐步提高，许多溶菌酶生产厂家都己把生产溶菌酶晶体作为未来几年提高效益、实现发展的重要渠道，但是因为溶菌酶晶体生产工艺尚不够成熟和完善，不同厂家生产的溶菌酶晶体产量和质量都存在较大差异，有的产量很低，有的酶活性较低，造成了市场上的溶菌酶晶体良莠不齐，产量和质量的不稳定性已经成为制约溶菌酶晶体进一步发展的瓶颈，因此对现有溶菌酶晶体生产工艺进行改进，稳定和提高溶菌酶晶体产量和质量，生产具有较高活性的溶菌酶晶体成为行业内亟待解决的技术难题。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，为解决溶菌酶晶体产量低和活性不够高的问题，而提供的一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法。
本发明的具体方案之一：
a)原辅料配比：取相等重量的鸡蛋清和井水；
b)按上述配比配料，将鸡蛋清和井水加入到搅拌器中，200～300rpm下搅拌20min，至稠度均匀即可，然后用纱布过滤，以除去残余蛋壳和少量蛋黄；
c)将b)中搅拌好的料倒入经乙酸水溶液泡过的搪瓷容器内，再加入724树脂，放置2h以上，然后将弃去上清液，将724树脂用清水反复冲洗3次，晾干后移入下一个搪瓷容器；
d)在c)所得的724树脂内加入1％～5％质量浓度的磷酸盐，搅拌洗脱30min后加等质量浓度的硫酸铵溶液，使溶菌酶与蛋清完全分离，再加水1kg，升温至40～50℃，保持15min，然后降温至5～8℃，滤出洗脱液至下一个搪瓷容器；
e)将步骤d)中所得的洗脱液加入硫酸铵溶液和氯化钠，放置2h以上，以使溶菌酶从洗脱液中析出来；
f)将步骤e)中所得的洗脱液中加入纯碱调pH值至10，再加入10％～15％质量浓度的聚丙烯酸，在5～8℃下放置一周；
g)将步骤f)中沉淀出来的晶体晾干，获得溶菌酶晶体成品，于5～8℃下储存。
本发明的具体方案之二：
1)材料选择与预处理：
a)树脂：500g724树脂用氢氧化钠溶液50g浸泡1-2小时，然后用蒸馏水冲洗至pH14；再用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡8小时；所述的磷酸盐缓冲液配制方法为：取磷酸二氢钠8g，磷酸氢二钠18g,加水搅溶，测的pH值为6.5，即为磷酸盐缓冲液；
b)聚丙烯酸：用少许磷酸盐缓冲液溶解分析纯为38％的聚丙烯酸；
c)选择土陶罐、陶瓷或搪瓷容器；
2)吸附：取1000g鸡蛋清兑1000g蒸馏水，加入预处理后的724树脂，慢慢搅拌半小时至均匀，升温到70℃，保持10-20分钟，冷却；
3)洗脱：在冷却后的吸附有溶菌酶的树脂中加入适量的32％硫酸铵粉末，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，升温到50℃，保持10-15分钟，冷却；
4)盐析：在前一步冷却后的洗脱液中加入适量的10％的硫酸铵溶液，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，然后用滤布过滤去渣，盐析物待用；
5)结晶：将前一步获得的盐析物升温至40℃，将预处理后的聚丙烯酸溶液逐渐渗入，一边渗入一边轻轻搅动，加入聚丙烯酸溶液的量以达到溶菌酶与蒸馏水分汁为度，然后冷却至0℃，结晶完成，取出晶块，破碎装瓶。
本发明的有益效果是在现有技术溶菌酶生产工艺基础上优化改进，将鸡蛋清直接应用于实际生产，利用本发明生产的溶菌酶晶体具有质量稳定、感观良好、酶活性较高，且晶体产量高，在提高经济效益的同时还降低了生产成本。具检验测定，本发明生产的溶菌酶晶体活力达到68.81lu/mg，是现有技术生产出来的溶菌酶活力20lu/mg的3倍多。
具体实施方式：
实施例1：
a)原辅料配比：鸡蛋清约lkg，井水约lkg；
b)按上述配比配料，将鸡蛋清和井水加入到搅拌器中，200～300rpm下搅拌20min，至稠度均匀即可，然后用纱布过滤，以除去残余蛋壳和少量蛋黄；
c)将b)中拌好的料拌入经乙酸水溶液泡过的搪瓷容器，加入724树脂放置2h以上，然后将弃去上清液的树脂用清水反复冲洗3次，晾干移入下一个搪瓷容器；
d)在c)所得的树脂加入1％～5％质量浓度的磷酸盐(浓度38度以上的生物化学试剂)，搅拌洗脱30min后加等质量浓度的硫酸铵溶液，以使溶菌酶与蛋清完全分离，再加水约lkg，升温至40～50℃，保持15min，立即降温至5～8℃，滤出洗脱液至下一个搪瓷容器；
e)将步骤d)中所得的洗脱液加入硫酸铵溶液和氯化钠(浓度为38度以上的氯化钠、食用盐或酸菜盐生物化学试剂)，放置2h以上，以使溶菌酶从洗脱液中析出来；
f)将步骤e)中所得的洗脱液中加入纯碱调pH值至1 0左右，再加入10％～15％质量浓度的聚丙烯酸，在5～8℃下放置一周；
g)将步骤f)中沉淀出来的晶体晾干，于5～8℃下储存。
实施例2：
1)材料选择与预处理：
a)树脂：500g724树脂用氢氧化钠溶液50g浸泡1-2小时，然后用蒸馏水冲洗至pH14；再用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡8小时；所述的磷酸盐缓冲液配制方法为：取磷酸二氢钠8g，磷酸氢二钠18g,加水搅溶，测的pH值为6.5，即为磷酸盐缓冲液；
b)聚丙烯酸：用少许磷酸盐缓冲液溶解分析纯为38％的聚丙烯酸；
c)选择土陶罐、陶瓷或搪瓷容器；
2)吸附：取1000g鸡蛋清兑1000g蒸馏水，加入预处理后的724树脂，慢慢搅拌半小时至均匀，升温到70℃，保持10-20分钟，冷却；
3)洗脱：在冷却后的吸附有溶菌酶的树脂中加入适量的32％硫酸铵粉末，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，升温到50℃，保持10-15分钟，冷却；
4)盐析：在前一步冷却后的洗脱液中加入适量的10％的硫酸铵溶液，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，然后用滤布过滤去渣，盐析物待用；
5)结晶：将前一步获得的盐析物升温至40℃，将预处理后的聚丙烯酸溶液逐渐渗入，一边渗入一边轻轻搅动，加入聚丙烯酸溶液的量以达到溶菌酶与蒸馏水分汁为度，然后冷却至0℃，结晶完成，取出晶块，破碎装瓶。
Claims (2)
1.一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法，其特征在于：
a)原辅料配比：取相等重量的鸡蛋清和井水；
b)按上述配比配料，将鸡蛋清和井水加入到搅拌器中，200～300rpm下搅拌20min，至稠度均匀即可，然后用纱布过滤，以除去残余蛋壳和少量蛋黄；
c)将b)中搅拌好的料倒入经乙酸水溶液泡过的搪瓷容器内，再加入724树脂，放置2h以上，然后将弃去上清液，将724树脂用清水反复冲洗3次，晾干后移入下一个搪瓷容器；
d)在c)所得的724树脂内加入1％～5％质量浓度的磷酸盐，搅拌洗脱30min后加等质量浓度的硫酸铵溶液，使溶菌酶与蛋清完全分离，再加水1kg，升温至40～50℃，保持15min，然后降温至5～8℃，滤出洗脱液至下一个搪瓷容器；
e)将步骤d)中所得的洗脱液加入硫酸铵溶液和氯化钠，放置2h以上，以使溶菌酶从洗脱液中析出来；
f)将步骤e)中所得的洗脱液中加入纯碱调pH值至10，再加入10％～15％质量浓度的聚丙烯酸，在5～8℃下放置一周；
g)将步骤f)中沉淀出来的晶体晾干，获得溶菌酶晶体成品，于5～8℃下储存。
2.一种利用鸡蛋清生产溶菌酶晶体的方法，其特征在于：
1)材料选择与预处理：
a)树脂：500g724树脂用氢氧化钠溶液50g浸泡1-2小时，然后用蒸馏水冲洗至pH14；再用pH6.5的磷酸盐缓冲液浸泡8小时；所述的磷酸盐缓冲液配制方法为：取磷酸二氢钠8g，磷酸氢二钠18g,加水搅溶，测的pH值为6.5，即为磷酸盐缓冲液；
b)聚丙烯酸：用少许磷酸盐缓冲液溶解分析纯为38％的聚丙烯酸；
c)选择土陶罐、陶瓷或搪瓷容器；
2)吸附：取1000g鸡蛋清兑1000g蒸馏水，加入预处理后的724树脂，慢慢搅拌半小时至均匀，升温到70℃，保持10-20分钟，冷却；
3)洗脱：在冷却后的吸附有溶菌酶的树脂中加入适量的32％硫酸铵粉末，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，升温到50℃，保持10-15分钟，冷却；
4)盐析：在前一步冷却后的洗脱液中加入适量的10％的硫酸铵溶液，搅拌半小时至均匀，加入硫酸铵溶液的量以使pH值达到6.0-6.5之间为度，然后用滤布过滤去渣，盐析物待用；
5)结晶：将前一步获得的盐析物升温至40℃，将预处理后的聚丙烯酸溶液逐渐渗入，一边渗入一边轻轻搅动，加入聚丙烯酸溶液的量以达到溶菌酶与蒸馏水分汁为度，然后冷却至0℃，结晶完成，取出晶块，破碎装瓶。
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| CN101348778A (zh) * | 2007-01-28 | 2009-01-21 | 雷文彩 | 溶菌酶结晶生产技术 |
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|---|
| JIANG ET AL.: "Isolation of Lysozyme from Hen Egg Albumen by Alcohol-Insoluble Cross-Linked Pea Pod Solid Ion-Exchange Chromatography.", 《JOURNAL OF FOOD SCIENCE》 * |
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