CN108997330A - 一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药成分提取技术领域，尤其涉及一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法。所述提取方法至少包括以下步骤：将成方制剂取样，加入体积浓度为70‑80％的乙醇，超声提取，离心，将上清液蒸干，得到第一残渣；将第一残渣溶于氨溶液中，加入三氯甲烷进行超声提取，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，将三氯甲烷液蒸干，得到第二残渣；向第二残渣中加入体积浓度为45‑55％的甲醇，超声提取，即得含有莨菪碱和东莨菪碱的提取液。本发明提供的提取方法避免成方制剂中其他组分的影响，通过不同提取分离方法的有机结合，将成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱提取出来。

Description

一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法

技术领域

本发明涉及中药成分提取技术领域，尤其涉及一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法。

背景技术

莨菪碱亦称天仙子碱，是从中药天仙子、洋金花等中分离的颠茄生物碱之一。莨菪碱有止痛解痉功能，对坐骨神经痛有较好疗效，有时也用于治疗癫痫、晕船等。

东莨菪碱，稍一过量服用即可致命，是一种莨菪烷型生物碱，存在于茄科植物中。东莨菪碱为颠茄中药理作用最强的一种生物碱，可用于阻断副交感神经，也可用作中枢神经系统抑制剂，临床用的一般是它的氢溴酸盐，可用于麻醉镇痛、止咳、平喘，对动晕症有效，也可用于控制帕金森病的僵硬和震颤。

基于莨菪碱和东莨菪碱有毒，因此成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的含量测定就非常重要。目前《中国药典》和部颁标准中还未见对成方制剂中毒性成分莨菪碱和东莨菪碱的有效提取方法，主要原因在于成方制剂成分复杂，且莨菪碱和东莨菪碱含量较低，因此不易提取。

发明内容

针对现有成方制剂成分复杂，且莨菪碱和东莨菪碱含量较低，难以提取的问题，本发明提供一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，当成方制剂是固体制剂，所述提取方法至少包括以下步骤：

步骤a、将成方制剂取样，加入体积浓度为70-80％的乙醇，超声提取，离心，将上清液蒸干，得到第一残渣；

步骤b、将第一残渣溶于氨溶液中，加入三氯甲烷进行超声提取，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，将三氯甲烷液蒸干，得到第二残渣；

步骤c、向第二残渣中加入体积浓度为45-55％的甲醇，超声提取，即得含有莨菪碱和东莨菪碱的提取液。

相对于现有技术，本发明提供的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，采取乙醇超声提取、离心分离，氨溶液转移，三氯甲烷超声转移，通过不同提取分离方法的有机结合，避免成方制剂中其他组分的影响，相互协同作用将成方制剂中的莨菪碱和东莨菪碱提取出来。

具体的，优选地，当成方制剂是固体制剂时，将其研磨后取样；当成方制剂是液体制剂时，将其蒸干后取样。

液体制剂中因含有溶剂，可能会与后续步骤中采用的提取试剂有影响，因此将液体制剂蒸干，避免溶剂的影响。

优选地，所述步骤a中成方制剂的取样质量为0.8-1.2g。

莨菪碱和东莨菪碱带有毒性，因此成方制剂中含有量很低，因此既要保证提取效果，同时减少浪费，选择0.8-1.2g的取样量。

优选地，所述步骤a中超声提取2-3次，每次提取时间为25-35min。

优选地，所述步骤a中乙醇的加入量为取样质量的30-40倍。

采用体积浓度为70-80％的乙醇超声，超声提取不需要高温加热，避免高温破坏莨菪碱和东莨菪碱的结构，优选用量倍数浓度及用量范围的乙醇可以使成方制剂中的莨菪碱和东莨菪碱被提取出来。

所述超声提取的时间为25-35min，在该时间范围内，成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱可以被大部分提取出来，时间太短则有可能提取不完全，时间太多则增加时间成本。

优选地，氨溶液的质量浓度为2.0-2.5％，将浓氨溶液7-9mL加水至100mL所得。

优选地，所述步骤b中氨溶液的质量为取样质量的17-22倍。

优选地，所述步骤b中三氯甲烷超声提取4-6次，每次提取时间为50-70s。

优选地，所述三氯甲烷的加入量为取样质量的20-25倍。

优选地，所述步骤c中甲醇的加入量为取样质量的3-6倍。

优选地，所述步骤c中超声提取4-6次，每次提取时间为50-70s。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例提供的体积浓度为50％的甲醇的液相色谱图；

图2是本发明实施例提供的对照品溶液的液相色谱图；

图3是本发明实施例提供的供试品溶液的液相色谱图；

图4是本发明实施例提供的阴性对照品溶液的液相色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

为了更好的说明本发明实施例提供的，下面通过实施例做进一步的举例说明。

实施例1

本发明实施例提供一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，成方制剂采取胃痛宁片，其中胃痛宁片组成包括：蒲公英提取物300g、氢氧化铝300g、甘草干浸膏210g、天仙子浸膏25g、龙胆粉155g、小茴香油4mL，天仙子浸膏中含有莨菪碱和东莨菪碱。

胃痛宁片中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法：包括以下步骤：

步骤a、将胃痛宁片研磨，取样1.0g，加入34倍质量的体积浓度为75％的乙醇，超声提取3次，每次30min，离心，合并上清液，蒸干，得到第一残渣；

步骤b、将第一残渣溶于为取样质量20倍的质量浓度为2.16％的氨溶液中，加入为取样质量22倍的三氯甲烷进行超声提取5次，每次60s，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，合并三氯甲烷液，蒸干，得到第二残渣；

步骤c、向第二残渣中加入为取样质量的4.4倍，体积浓度为50％的甲醇，超声提取5次，每次60s，合并提取液，提取液即为含有莨菪碱和东莨菪碱的提取物。

其中氨溶液为浓氨溶液8mL加水至100mL所得。

将提取液的上清液转移至5mL容量瓶中，并采用体积浓度为50％的甲醇定容，摇匀，0.45μm滤膜过滤，作为胃痛宁片的供试品溶液。

胃痛宁片的对照品溶液的制备的方法为：将氢溴酸东莨菪碱和硫酸阿托品对照品同时溶于体积浓度为50％的甲醇中，得到标准储备液，再将标准储备液稀释，0.45μm滤膜过滤，得到对照品溶液，其中1mL的对照品溶液中含有0.02g的氢溴酸东莨菪碱和0.02g硫酸阿托品。

胃痛宁片的阴性对照品溶液的制备的方法为：按胃痛宁片处方量比例：蒲公英提取物300g、氢氧化铝300g、苷草干浸膏210g、龙胆粉155g、小茴香油4mL，将上述组分混合均匀，取1.0g，采取与胃痛宁片的供试品溶液相同的制备方法，得到不含莨菪碱和东莨菪碱的阴性样品溶液。

将体积浓度为50％的甲醇、胃痛宁片的供试品溶液、胃痛宁片的对照品溶液、胃痛宁片的阴性对照品溶液采取HPLC色谱分析，色谱条件为：

色谱柱：C₁₈色谱柱；

流动相A：乙腈；

流动相B：磷酸与三乙胺的混合液，其中磷酸的质量浓度为0.1％，三乙胺的体积浓度为0.02％；

梯度洗脱顺序为：

0～35min：流动相A 6％；

35～40min：流动相A 6％～30％；

40～50min：流动相A 30％～6％；

流动相流速：1.0mL/min；

检测波长：210nm；

色谱柱柱温：35℃。

体积浓度为50％的甲醇、胃痛宁片的对照品溶液、胃痛宁片的供试品溶液、胃痛宁片的阴性对照品溶液的液相色谱图分别如图1、图2、图3、图4所示。

体积浓度为50％的甲醇的色谱图如图1所示，其中标号为3的峰即甲醇的峰。

本发明提供的胃痛宁片的对照品溶液的色谱图如图2所示，峰1为氢溴酸东莨菪碱的峰，峰2为硫酸阿托品的峰。

本发明提供的胃痛宁片的供试品溶液的色谱图如图3所示，峰1为东莨菪碱的峰，峰2为莨菪碱的峰。

本发明提供的胃痛宁片的阴性对照品溶液的色谱图如图4所示，从图4中可以看出，除了体积浓度为50％的甲醇的峰，其余均为杂峰，未见东莨菪碱与莨菪碱的峰。

从图1-图4中可以看出，本发明提供的提取方法对成方制剂中的莨菪碱和东莨菪碱具有较高的特异性，能将其从成方制剂中高效提取出来，且对成方制剂中其他成分则提取较少。

实施例2

本发明实施例提供一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，成方制剂采取胃痛宁片，其中胃痛宁片组成包括：蒲公英提取物300g、氢氧化铝300g、甘草干浸膏210g、天仙子浸膏25g、龙胆粉155g、小茴香油4mL，天仙子浸膏中含有莨菪碱和东莨菪碱。

胃痛宁片中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法：包括以下步骤：

步骤a、将胃痛宁片研磨，取样1.2g，加入40倍质量的体积浓度为70％的乙醇，超声提取2次，每次35min，离心，合并上清液，蒸干，得到第一残渣；

步骤b、将第一残渣溶于为取样质量22倍的质量浓度为2.0％的氨溶液中，加入为取样质量20倍的三氯甲烷进行超声提取6次，每次50s，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，合并三氯甲烷液，蒸干，得到第二残渣；

步骤c、向第二残渣中加入为取样质量的3倍，体积浓度为45％的甲醇，超声提取4次，每次50s，合并提取液，提取液即为含有莨菪碱和东莨菪碱的提取物。

其中氨溶液为浓氨溶液7.5mL加水至100mL所得。

本实施例提供的含有莨菪碱和东莨菪碱的提取物的HPLC检测结果与实施例1的相同，不再赘述。从结果可以看出，本发明提供的提取方法对成方制剂中的莨菪碱和东莨菪碱具有较高的特异性，能将其从成方制剂中高效提取出来，且对成方制剂中其他成分则提取较少。

实施例3

本发明实施例提供一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，成方制剂采取胃痛宁片，其中胃痛宁片组成包括：蒲公英提取物300g、氢氧化铝300g、甘草干浸膏210g、天仙子浸膏25g、龙胆粉155g、小茴香油4mL，天仙子浸膏中含有莨菪碱和东莨菪碱。

胃痛宁片中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法：包括以下步骤：

步骤a、将胃痛宁片研磨，取样0.8g，加入30倍质量的体积浓度为80％的乙醇，超声提取3次，每次25min，离心，合并上清液，蒸干，得到第一残渣；

步骤b、将第一残渣溶于为取样质量17倍的质量浓度为2.5％的氨溶液中，加入为取样质量25倍的三氯甲烷进行超声提取4次，每次70s，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，合并三氯甲烷液，蒸干，得到第二残渣；

步骤c、向第二残渣中加入为取样质量的6倍，体积浓度为55％的甲醇，超声提取6次，每次70s，合并提取液，提取液即为含有莨菪碱和东莨菪碱的提取物。

其中氨溶液为浓氨溶液9mL加水至100mL所得。

本实施例提供的含有莨菪碱和东莨菪碱的提取物的HPLC检测结果与实施例1的相同，不再赘述。从结果可以看出，本发明提供的提取方法对成方制剂中的莨菪碱和东莨菪碱具有较高的特异性，能将其从成方制剂中高效提取出来，且对成方制剂中其他成分则提取较少。

试验例

本发明提供一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，成方制剂按胃痛宁片处方量比例包括：蒲公英提取物300g、氢氧化铝300g、甘草干浸膏210g、龙胆粉155g、小茴香油4mL，氢溴酸东莨菪碱19.0mg、硫酸阿托品19.4mg，将上述组分混合均匀，取1.0g，采取与胃痛宁片的供试品溶液相同的制备方法，得到含莨菪碱和东莨菪碱的供试品溶液。

将对比例制备的供试品溶液采取与实施例1提供的相同的HPLC检测条件，HPLC检测结果显示供试品溶液中的莨菪碱和东莨菪碱的总含量为38.5mg，将成方制剂中97％以上的莨菪碱和东莨菪碱都提取出来，表明本发明提供的提取方法具有特异性，能将成方制剂97％以上的莨菪碱和东莨菪碱全部提取。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：至少包括以下步骤：

步骤a、将成方制剂取样，加入体积浓度为70-80％的乙醇，超声提取，离心，将上清液蒸干，得到第一残渣；

步骤b、将第一残渣溶于氨溶液中，加入三氯甲烷进行超声提取，将提取液萃取分离得到三氯甲烷液，将三氯甲烷液蒸干，得到第二残渣；

步骤c、向第二残渣中加入体积浓度为45-55％的甲醇，超声提取，即得含有莨菪碱和东莨菪碱的提取液。

2.如权利要求1所述的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：当成方制剂是固体制剂时，将其研磨后取样；当成方制剂是液体制剂时，将其蒸干后取样。

3.如权利要求1或2所述的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：所述步骤a中成方制剂的取样质量为0.8-1.2g；和/或

所述步骤a中超声提取2-3次，每次提取时间为25-35min；和/或

所述步骤a中乙醇的加入量为取样质量的30-40倍。

4.如权利要求1或2所述的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：所述步骤b中氨溶液的质量浓度为2.0-2.5％；和/或

所述步骤b中氨溶液的质量为取样质量的17-22倍。

5.如权利要求1或2所述的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：所述步骤b中三氯甲烷超声提取4-6次，每次提取时间为50-70s；和/或

所述三氯甲烷的加入量为取样质量的20-25倍。

6.如权利要求1-2任一项所述的成方制剂中莨菪碱和东莨菪碱的提取方法，其特征在于：所述步骤c中甲醇的加入量为取样质量的3-6倍；和/或

所述步骤c中超声提取4-6次，每次提取时间为50-70s。