CN108997184A - 一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其步骤如下：将贻贝洗净干燥并压碎后，加入蛋白酶进行酶解，然后将酶解液过滤，取滤液离心，再将过滤所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，加入有机提取剂进行浸提，然后将浸提液抽滤所得滤液浓缩，即得类胡萝卜素粗提物；再将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇复溶后，加入树脂进行吸附，将达到吸附平衡的树脂过滤后，用乙酸乙酯进行解吸，再取解吸液经过滤后的滤液，吹干溶剂，冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。本发明所提供的贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其工艺简单易行，操作性强，可重复性高，具有操作温度低、提取效率高、溶剂用量少、回收得率高的优点。

Description

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法

技术领域

本发明涉及水产品深加工技术领域，尤其是涉及一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法。

技术背景

类胡萝卜素，通常是指C₄₀的碳氢化合物(胡萝卜素)和它们的氧化衍生物(叶黄素)两大类色素的总称，由高等植物、藻类和微生物合成，以色素形式存在于自然界，至2004年已发现750种，现在仍以每年20多种的速度在增加。类胡萝卜素是一类脂溶性的大分子量的有机化合物，它们在结构上都含有一个带有九个双键的异戊二烯链，在链的两端各有一个β-紫萝酮环，环上不同位置的氢原子可被羟基、羰基、环氧基取代，能溶于丙酮、酒精、乙酸乙酯及氯仿等大部分有机试剂，但不溶于水。类胡萝卜素色泽鲜亮、着色力强，已被广泛地应用于着色剂、饲料添加剂；类胡萝卜素具有生物活性，除了作为功能食品外，β-胡萝卜素可降解为两分子的维生素A，还是维生素A的丰富来源；类胡萝卜素有抗氧化的功能，如清除氧自由基抗氧化延缓衰老、猝灭单线态氧防癌抗癌、增加免疫系统中B细胞的活力、增强机体免疫；还可治疗光敏性疾病和防止白内障发生等等。目前，类胡萝卜素的应用领域也从最初的着色功能逐步转向营养食品、保健品及药品三大领域。

海产贝类多板纲、腹足纲、双壳纲、头足纲均含有类胡萝卜素，特别是牡蛎、扇贝、贻贝、蛤蜊等双壳纲中含量更高。海产贝类也是海洋鱼类、海鸟、海洋哺乳动物及人类的重要食物源，它在将类胡萝卜素传入高等脊椎动物这条食物链中起着重要的作用。

中国出产的贻贝有贻贝、厚壳贻贝、翡翠贻贝等好几种。贻贝主要是以藻类和有机碎屑做饵料的，而藻类中富含类胡萝卜素，从而使贻贝肉质中的类胡萝卜素累积富有。迄今为止，在软体动物中已经发现的类胡萝卜素有60多种，从多板纲、腹足纲、双壳纲到头足纲都有类胡萝卜素的存在，主要有β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、硅藻黄质、岩藻黄质、异黄素、虾青素、扇贝酮、扇贝醇等，其中，β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、岩藻黄质基本存在每个物种中。由于类胡萝卜素的重要商业价值和广阔的应用前景，因此从贻贝中提取类胡萝卜素是提高贻贝附加利用值的重要技术之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺简单易行、可重复性高、操作温度低、提取效率高、溶剂用量少、回收得率高的贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，包括：预处理、酶解处理、有机溶剂提取、吸附纯化、解吸，其中有机溶剂提取具体步骤为：将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，按料液重量比为1:3～6加入提取剂，在25～38℃下水浴振荡2～4h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在35～45℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得类胡萝卜素粗提物。类胡萝卜素通常不溶于水，但具有良好的脂溶性，易溶于多种有机溶剂，因此可使用有机溶剂提取类胡萝卜素，通常提取后可将溶剂蒸发，从而将类胡萝卜素浓缩，得到浓度较大的类胡萝卜素粗提物，同时溶剂也可回收循环利用。

作为优选，提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为9～11:0.5:0.5～1，邻苯基苯酚和羟甲基脲的加入，既可以破坏残渣和沉淀混合物中的分子表面黏度，加快了丙酮分子向混合物中的渗透、扩散，从而提高丙酮对目标提取物的吸附提取，加快有机溶剂提取的速率，又使得提取剂穿透力变强，提取液表面张力下降，因而目标提取物在提取剂中的溶解和扩散速度加快，提高了目标提取物的分散度，进而使有机溶剂与混合物之间保持较大的浓度差，使得提取一直以较快的速率进行，达到高效提取的目的。

作为优选，预处理步骤为：取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再进行机械破碎即可。机械破碎旨在破坏贻贝细胞的结构，可增大贻贝肉的表面积，使溶剂与贻贝的接触面积增大，能大幅度提高类胡萝卜素在有机溶剂中的溶解度，同时也可除去部分杂质，从而提高提取效率，以及简化后序的提取纯化操作。

作为优选，酶解处理步骤为：将预处理后的贻贝按料液重量比1:3～5加水混匀后加入蛋白酶，在40～50℃下搅拌酶解1.5～2.5h后，煮沸灭酶3～8min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液在10～15℃、3000～4000r/min条件下离心10～20min，得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用。动物的类胡萝卜素一般与蛋白质结合在一起，如虾青蛋白含有虾青素，虾卵绿蛋白是虾青素与一种富含的的复合物。酶解处理是向贻贝中添加蛋白酶分解蛋白质，破坏贻贝中蛋白质与虾青素的结合，有利于类胡萝卜素的释放，从而提高有机溶剂对类胡萝卜素的提取率，酶解后的蛋白肽主要存在于酶解液中，可以对蛋白质进行回收利用，加强资源的综合利用。

进一步优选，蛋白酶为木瓜蛋白酶，其加酶量为1000～1500U/g。木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，是一种低特异性的蛋白水解酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键，同时木瓜蛋白酶中还含有一定的溶菌酶，因此也兼具溶菌的作用。

作为优选，吸附纯化步骤为：将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇按料液重量比1:3～4复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附在25～35℃、60～80r/min的条件下摇床振荡3～4h，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用。大孔吸附树脂是一类具有大孔结构的、不溶于酸、碱及各种有机溶剂的高分子吸附树脂，其不含交换基团，比表面积较大，内部具有三维空间立体孔结构，可以通过物理作用选择性吸附有机物，大孔吸附树脂具有较高的理化稳定性，而且具有吸附选择性强、富集效果好、解吸条件温和、使用周期长和再生性能高等优点，应用于天然产物的分离纯化。

进一步优选，树脂的预处理步骤为：取树脂用无水乙醇浸泡2～4h后，醇洗至流出液与水1:4～5(v:v)不浑浊，再用去离子水冲洗至无醇味，然后用浓度为4～6％的盐酸溶液浸泡2～4h，再用去离子水冲洗至中性，最后用浓度为2～3％的氢氧化钠溶液浸泡2～4h，再用去离子水冲洗至中性，湿法保存备用。新树脂常含有溶剂、未参加聚合反应的物质和少量低聚合物，还可能吸附有铁、铝、铜等重金属离子，当树脂与水、酸、碱或其他溶液相接触时，以上可溶性杂质就会转入溶液中，在使用初期会污染出液液体，因此新树脂在投运前要进行预处理。

进一步优选，树脂为AB-8、LX-10G、LX-16中的一种。由于类胡萝卜素是弱极性分子，更容易与极性相似的树脂大分子形成π-π共轭，而AB-8、LX-10G和LX-16属于弱极性或非极性树脂，因此成为树脂吸附类胡萝卜素的主力。

作为优选，解吸步骤为：取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:2～4进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-10～-15℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。所得提取物为橙红色至深红色粉末，色泽鲜亮、着色力强，属于天然抗氧化剂之一，能够有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，尤其是可作为保护眼睛的最好补充剂，其可用于着色剂、饲料添加剂、营养食品、保健品及药品领域。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1)本发明中将贻贝通过酶解的方法促进蛋白质分解，使类胡萝卜素-蛋白质复合结构得到较完全的破坏，促使类胡萝卜素处于游离状态，然后再采用有机溶剂充分提取，整个过程不需要使用会引起类胡萝卜素损失的高温或酸碱性处理，保证并提高了类胡萝卜素的提取效率和得率；2)本发明中利用高分子吸附树脂吸附纯化类胡萝卜素，通过物理作用选择性的吸附，使类胡萝卜素进一步富集纯化，树脂解吸条件温和，再生性能高，用于天然类胡萝卜素的分离纯化效果优良，有效降低了类胡萝卜素氧化变质的风险，提升了类胡萝卜素提取物的纯度和质量；3)本发明中的贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，工艺简单易行，操作性强，可重复性高，具有操作温度低、提取效率高、溶剂用量少、回收得率高的优点。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，包括：预处理、酶解处理、有机溶剂提取、吸附纯化、解吸，其中有机溶剂提取具体步骤为：将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，按料液重量比为1:3加入提取剂，在25℃下水浴振荡2h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在35℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得类胡萝卜素粗提物。类胡萝卜素通常不溶于水，但具有良好的脂溶性，易溶于多种有机溶剂，因此可使用有机溶剂提取类胡萝卜素，通常提取后可将溶剂蒸发，从而将类胡萝卜素浓缩，得到浓度较大的类胡萝卜素粗提物，同时溶剂也可回收循环利用。

提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为9:0.5:0.5，邻苯基苯酚和羟甲基脲的加入，既可以破坏残渣和沉淀混合物中的分子表面黏度，加快了丙酮分子向混合物中的渗透、扩散，从而提高丙酮对目标提取物的吸附提取，加快有机溶剂提取的速率，又使得提取剂穿透力变强，且溶液表面张力下降，因而目标提取物在提取剂中的溶解和扩散速度加快，提高了目标提取物的分散度，进而使有机溶剂与混合物之间保持较大的浓度差，使得提取一直以较快的速率进行，达到高效提取的目的。

预处理步骤为：取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再进行机械破碎即可。机械破碎旨在破坏贻贝细胞的结构，可增大贻贝肉的表面积，使溶剂与贻贝的接触面积增大，能大幅度提高类胡萝卜素在有机溶剂中的溶解度，同时也可除去部分杂质，从而提高提取效率，以及简化后序的提取纯化操作。

酶解处理步骤为：将预处理后的贻贝按料液重量比1:3加水混匀后加入蛋白酶，在40℃下搅拌酶解1.5h后，煮沸灭酶3min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液在10℃、3000r/min条件下离心10min，得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用。动物的类胡萝卜素一般与蛋白质结合在一起，如虾青蛋白含有虾青素，虾卵绿蛋白是虾青素与一种富含的的复合物。酶解处理是向贻贝中添加蛋白酶分解蛋白质，破坏贻贝中蛋白质与虾青素的结合，有利于类胡萝卜素的释放，从而提高有机溶剂对类胡萝卜素的提取率，酶解后的蛋白肽主要存在于酶解液中，可以对蛋白质进行回收利用，加强资源的综合利用。

蛋白酶为木瓜蛋白酶，其加酶量为1000U/g。木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，是一种低特异性的蛋白水解酶，可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键，同时木瓜蛋白酶中还含有一定的溶菌酶，因此也兼具溶菌的作用。

吸附纯化步骤为：将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇按料液重量比1:3复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附在25℃、60r/min的条件下摇床振荡3h，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用。大孔吸附树脂是一类具有大孔结构的、不溶于酸、碱及各种有机溶剂的高分子吸附树脂，其不含交换基团，比表面积较大，内部具有三维空间立体孔结构，可以通过物理作用选择性吸附有机物，大孔吸附树脂具有较高的理化稳定性，而且具有吸附选择性强、富集效果好、解吸条件温和、使用周期长和再生性能高等优点，应用于天然产物的分离纯化。

树脂的预处理步骤为：取树脂用无水乙醇浸泡2h后，醇洗至流出液与水1:4(v:v)不浑浊，再用去离子水冲洗至无醇味，然后用浓度为4％的盐酸溶液浸泡2h，再用去离子水冲洗至中性，最后用浓度为2％的氢氧化钠溶液浸泡2h，再用去离子水冲洗至中性，湿法保存备用。新树脂常含有溶剂、未参加聚合反应的物质和少量低聚合物，还可能吸附有铁、铝、铜等重金属离子，当树脂与水、酸、碱或其他溶液相接触时，以上可溶性杂质就会转入溶液中，在使用初期会污染出液液体，因此新树脂在投运前要进行预处理。

树脂为AB-8。由于类胡萝卜素是弱极性分子，更容易与极性相似的树脂大分子形成π-π共轭，而AB-8属于弱极性树脂，因此成为树脂吸附类胡萝卜素的主力。

解吸步骤为：取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:2进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-10℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。所得提取物为橙红色至深红色粉末，色泽鲜亮、着色力强，属于天然抗氧化剂之一，能够有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，尤其是可作为保护眼睛的最好补充剂，其可用于着色剂、饲料添加剂、营养食品、保健品及药品领域。

实施例2：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其具体步骤为：

1)取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再进行机械破碎即可；

2)将预处理后的贻贝按料液重量比1:4加水混匀后加入蛋白酶，在48℃下搅拌酶解2.5h后，煮沸灭酶8min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液在15℃、4000r/min条件下离心18min，得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用，上述蛋白酶为木瓜蛋白酶，其加酶量为1500U/g；

3)将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，按料液重量比为1:6加入提取剂，在35℃下水浴振荡4h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在44℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得类胡萝卜素粗提物，上述提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为11:0.5:1；

4)将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇按料液重量比1:3复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附在35℃、80r/min的条件下摇床振荡4h，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用，上述树脂为AB-8；

5)取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:3进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-15℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。

步骤4)中树脂的预处理步骤为：取AB-8树脂用无水乙醇浸泡4h后，醇洗至流出液与水1:5(v:v)不浑浊，再用去离子水冲洗至无醇味，然后用浓度为5％的盐酸溶液浸泡4h，再用去离子水冲洗至中性，最后用浓度为2％的氢氧化钠溶液浸泡4h，再用去离子水冲洗至中性，湿法保存备用。

实施例3：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其具体步骤为：

1)取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再进行机械破碎即可；

2)将预处理后的贻贝按料液重量比1:5加水混匀后加入蛋白酶，在44℃下搅拌酶解2h后，煮沸灭酶5min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液在15℃、4000r/min条件下离心15min，得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用，上述蛋白酶为木瓜蛋白酶，其加酶量为1300U/g；

3)将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，按料液重量比为1:5加入提取剂，在33℃下水浴振荡3h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在40℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得类胡萝卜素粗提物，上述提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为10:0.5:0.8；

4)将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇按料液重量比1:4复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附在30℃、70r/min的条件下摇床振荡3.5h，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用，上述树脂为AB-8；

5)取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:4进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-10℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。

步骤4)中树脂的预处理步骤为：取AB-8树脂用无水乙醇浸泡3.5h后，醇洗至流出液与水1:5(v:v)不浑浊，再用去离子水冲洗至无醇味，然后用浓度为6％的盐酸溶液浸泡3.5h，再用去离子水冲洗至中性，最后用浓度为3％的氢氧化钠溶液浸泡3h，再用去离子水冲洗至中性，湿法保存备用。

实施例4：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其步骤可进一步优化为：

1)取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再进行机械破碎即可；

2)将预处理后的贻贝按料液重量比1:5加水混匀后，加入激活剂和木瓜蛋白酶，蛋白酶的加酶量为1300U/g，在44℃下搅拌酶解2h后，煮沸灭酶5min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液在15℃、4000r/min条件下离心15min，得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用，上述激活剂为半胱氨酸和乳酸，其添加量为木瓜蛋白酶重量的0.77％，乳酸在激活剂中的重量占比为0.35％，乳酸中D-乳酸和L-乳酸的比例为：3:73，加入该特殊配比的乳酸，可以在激活蛋白酶的同时，将类胡萝卜素与蛋白质结合时形成的键间域打破，使得原本紧密结合的类胡萝卜素和蛋白质结构疏松，并释放出类胡萝卜素和蛋白质分子各自的疏水域，因而增加了蛋白酶和酶切位点的接近机会，进而提高酶解效率，后续加入的酶、有机溶剂都能很容易地与目标底物接触并发生相应反应，降低了反应物总消耗量，加快了提取进程，且有利于提高类胡萝卜素的回收率和得率；

3)将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，按料液重量比为1:5加入提取剂，在33℃下水浴振荡3h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在40℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得类胡萝卜素粗提物，上述提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为10:0.5:0.8；

4)将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇按料液重量比1:4复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附在30℃、70r/min的条件下摇床振荡3.5h，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用，上述树脂为AB-8；

5)取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:4进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-10℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。

对比例：

一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，包括：预处理、酶解处理、有机溶剂提取、吸附纯化、解吸，其中有机溶剂提取步骤中的提取剂仅为丙酮，其他与实施例3中的步骤一样，最终提取得到类胡萝卜素提取物。

贻贝类胡萝卜素的数据统计与分析

表1贻贝类胡萝卜素在提取与纯化中的含量变化

由表1可知，在有机溶剂提取步骤中，实施例1～3的回收率和纯度平均数值分别明显高于对比例4.9％和3.8％，尤其是实施例4的回收率和纯度分别显著高于对比例7.1％和8.4％；类胡萝卜素粗提物经吸附纯化及解吸后，实施例1～4的回收率与对比例的差异并不显著，但纯度上实施例1～3高于对比例3.4％，实施例4纯度则显著高于对比例4.6％；最终经冷冻干燥得到类胡萝卜素粉末，取实施例1～4的平均数值，可得相对于贻贝中总类胡萝卜素的回收率为97.37％，最终得率为，每100g贻贝得122.57μg类胡萝卜素。

综上可得，本发明中所提供的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，工艺简单易行，具有操作温度低、提取效率高、溶剂用量少、回收得率高的特点，所得提取物为橙红色至深红色粉末，着色力强，属于天然抗氧化剂之一，能够有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，尤其是可作为保护眼睛的最好补充剂，可用于着色剂、饲料添加剂、营养食品、保健品及药品领域。

本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，包括预处理，酶解处理，有机溶剂提取，吸附纯化，解吸，其特征在于：所述有机溶剂提取步骤为：将酶解步骤中所得贻贝残渣和离心沉淀混合后，加入提取剂进行浸提，再将浸提液抽滤所得滤液浓缩，即得类胡萝卜素粗提物。

2.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述浸提条件是：提取剂的加入量与底物的重量比为1:3~6，温度为25~38℃，时间为2~4h。

3.根据权利要求1或2所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述提取剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，所述丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲的重量比为9~11:0.5~1:0.5。

4.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述预处理步骤为：取贻贝肉洗涤干净后，干燥，再压碎即可。

5.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述酶解处理步骤为：将预处理后的贻贝按料液重量比1:3~5加水混匀后加入蛋白酶，在40~50℃下搅拌酶解1.5~2.5h后，煮沸灭酶3~8min，再将酶解液过滤得到贻贝残渣和滤液，然后将滤液离心得到上清液和沉淀，取贻贝残渣和离心沉淀备用。

6.根据权利要求5所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述蛋白酶为木瓜蛋白酶，其加酶量为1000~1500U/g。

7.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述吸附纯化步骤为：将类胡萝卜素粗提物用无水乙醇复溶后，再加入预处理后的树脂进行吸附，达到吸附平衡后，过滤取树脂备用。

8.根据权利要求7所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述树脂的预处理步骤为：取树脂用无水乙醇浸泡2~4h后，醇洗至流出液与水不浑浊，再用去离子水冲洗至无醇味，然后用盐酸溶液浸泡，再用去离子水冲洗至中性，最后用氢氧化钠溶液浸泡，再用去离子水冲洗至中性，湿法保存备用。

9.根据权利要求7所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述树脂为AB-8、LX-10G、LX-16中的一种。

10.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素的高效提取与纯化方法，其特征在于：所述解吸步骤为：取吸附后的树脂用乙酸乙酯按料液重量比为1:2~4进行解吸，过滤后取滤液，然后用氮气吹干溶剂，再在-10~-15℃下冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物。