CN108982458B - 一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法 - Google Patents

一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，该方法是将生物素和荧光基团标记的底物链(Zn‑Sub)装配在磁珠(MBs)上作为检测探针。在分析过程中，Zn2+特异性DNA酶链(Zn‑Enz)与Zn‑Sub链杂交。在目标Zn2+存在下，Zn‑Sub链被剪切，导致含有荧光基团的较短DNA片段的释放和Zn‑Enz链的解离。解离的Zn‑Enz链将与其他未被剪切的Zn‑Sub链杂交，并同样地进行剪切，从而建立一个目标Zn2+循环放大机制，累积信号得以放大。相对于现有技术，本发明方法降低了背景信号干扰，检测限制降低至32fM，线性范围为100fM至10nM(r2>0.992)。该方法可用于测定自来水或婴幼儿奶粉样品中的Zn2+，具有流程少、操作简单、检测效率高等优点。

Description

一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光 方法
技术领域
本发明涉及一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，属于生物分析技术领域。
背景技术
Zn2+在人体正常生长、免疫系统、基因表达等多种生理过程中发挥着关键性作用，因此对Zn2+的检测十分重要。此外，游离的Zn2+也是中枢神经系统的神经调节剂和神经递质，多种神经系统疾病如阿尔茨海默氏症和中风，都与Zn2+代谢紊乱有关。锌摄入的推荐量为男性每天11毫克，女性每天8毫克。婴儿和儿童推荐低锌摄入量，分别是2-3毫克/天和5-9毫克/天。过量摄入锌会刺激胃肠道使人恶心。摄取过量锌后的直接症状包括腹痛、恶心和呕吐。其他影响包括嗜睡，贫血和眩晕等。此外，口服28克硫酸锌甚至会导致死亡。因此，对Zn2+的检测和对其在日常饮食中浓度的准确计算，特别是对自来水和婴儿奶粉中锌含量的分析，是非常重要且必要的。
为了监测Zn2+，多种有效的检测方法，如原子吸收光谱(AAS)和电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)已经被开发出来。然而，这些方法通常需要昂贵的仪器、繁琐的样品制备和复杂但必不可少的操作步骤，以便从基质中分离出该分析物，这些缺点限制了现有方法的广泛应用。近几十年来，许多基于新材料的新技术，如电化学传感器、基于材料的探针(如金纳米颗粒)、量子点和特定的荧光传感器，已经被开发出来用于Zn2+的检测。然而，这些方法有不少缺点，包括操作或合成步骤复杂且耗时等。其中，选择性电极虽相比AAS或ICP-MS具有仪器简单和检测限低的优势，然而，对于每一种金属离子都需要一个特定的电极，其制备步骤繁琐，因此其效率相对较低。
发明内容
发明目的：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法。
技术方案：为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，包括以下步骤：
(1)取链霉亲和素包被磁珠(MBs)，离心，磁力架放置，将沉淀物用偶联缓冲液洗涤后，分散在偶联缓冲液中，加入生物素和荧光素双标记的Zn-Sub链，涡旋，离心，磁力架放置，分离出沉淀物，得Zn-Sub-MB缀合物；
(2)用剪切缓冲液将Zn-Sub-MB缀合物洗涤后，分散在剪切缓冲液中，配制成Zn-Sub-MB缀合物溶液；
(3)将Zn-Enz链和不同浓度的ZnCl2溶液加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，磁力架放置，取上清液，在荧光素的最大激发波长检测荧光强度，绘制锌离子与荧光强度相关的标准曲线；
(4)检测时，将Zn-Enz链和含有锌离子的待测物加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，取上清液，检测其中荧光素的荧光强度，从上述标准曲线上计算待测物中锌离子浓度。
步骤(1)中所述偶联缓冲液为：0.01M PBS，30mM NaCl，0.1％tween-20，pH 7.4。
步骤(1)中所述荧光素为FAM荧光素。
步骤(1)中所述Zn-Sub链的寡核苷酸序列为：5’-/5Biotin/TTTTTTTTTACTCACTAT/rA/GGAAGAGATG-FAM-3’。
步骤(2)中所述剪切缓冲液为：0.01M PBS，70.53mM NaCl，0.1％tween-20，pH7.85。
步骤(3)中Zn-Enz链的寡核苷酸序列为：5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’。
本发明中采用的DNAzymes(DNA酶)是具有某些特异功能的DNA序列，如切割、DNA/RNA连接、胸腺嘧啶二聚体光反转。通过体内选择性分离的一些脱氧核酶，表现出对特定金属离子的催化活性和结合活性。在所有DNA酶中，具有RNA切割活性的DNA酶因其在治疗学和众多传感器中的广泛应用而备受关注。一些DNA酶的催化活性对二价金属离子具有特异性，类似于某些依赖金属离子辅因子的蛋白酶的催化活性。与有机荧光蛋白和基因编码蛋白传感器相比，设计具有金属离子结合位点的DNA酶不需要特别专业的知识，因此合成、修饰和组装DNA酶也较容易。
本发明方法原理如下(如图1所示)：首先，将生物素和荧光基团标记的底物链(Zn-Sub)装配在磁珠(MBs)上作为检测探针。在分析过程中，Zn2+特异性DNA酶链(Zn-Enz)与Zn-Sub链杂交。在目标Zn2+存在下，Zn-Sub链被剪切，导致含有荧光基团的较短DNA片段的释放和Zn-Enz链的解离。解离的Zn-Enz链将与其他未被剪切的Zn-Sub链杂交，并同样地进行剪切，从而建立一个目标Zn2+循环放大机制，累积信号得以放大。由于所有未被剪切的Zn-Sub链可以随着MBs通过使用磁力架方便地从溶液中分离出来，所以MBs的应用降低了背景信号干扰。
更具体地，本发明是一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于Zn2+高效灵敏检测的荧光方法，方法验证及检测包括以下步骤：
在离心管中加入300～400μL购买的粒径为300nm的链霉亲和素包被磁珠，并离心90秒。将离心管放在磁力架上90秒。丢弃溶剂并将MBs保留在管中。在用偶联缓冲液仔细洗涤三次后，将MBs分散在90μL偶联缓冲液中，加入60～100μL 10μM的双标记(生物素+FAM荧光素)Zn-Sub链以形成携带探针的MBs作为实验组；同时，将90μL偶联缓冲液和相同量的Zn-Sub链添加至另一离心管作为对照组。将两个离心管在室温下轻轻涡旋30分钟以确保生物素和链霉亲和素之间的偶联完成。实验组离心管离心90秒，置于磁场架上90秒。然后取出上清液，分离出沉淀物，得Zn-Sub-MB缀合物。Zn-Sub链与MBs的偶联效率可以通过实验组上清液和对照组的荧光强度来估量。最后，用剪切缓冲液将Zn-Sub-MB缀合物洗涤三次，分散在1220～1520μL剪切缓冲液中，配成0.4μM的Zn-Sub-MB缀合物溶液，并在4℃下储存备用。据估算，约有1.1×104个DNA检测探针偶联到每个MB上，占MB总容量的16％，为Zn-Enz链杂交和Zn2+切割留有足够的空间。为了防止暴露于可能对荧光基团的荧光性质产生不利影响的光照下，所有与荧光基团相关的步骤均在铝箔包裹的离心管中进行。
用荧光光谱仪测定实验组上清液和对照组的荧光强度。通过使用492nm处的最大激发波长在510到650nm之间获取FAM荧光素的荧光发射光谱。可以通过上清液和对照组的荧光强度估算Zn-Sub链与MBs的偶联效率。
在离心管中，将5μL Zn-Enz链(1.2μM)和5μL ZnCl2(不同浓度)加入到25μL 0.4μMZn-Sub-MB缀合物溶液中以形成实验组。同时，将5μL Zn-Enz链(1.2μM)和5μL剪切缓冲液添加到25μL的0.4μM Zn-Sub-MB缀合物溶液中以形成对照组。两个离心管在47℃下孵化3.5小时。然后将两个离心管离心90秒，并放入磁力架中90秒，分离出实验组和对照组的上清液。通过使用492nm处的最大激发波长在510到650nm之间收集实验组和对照组的上清液中FAM荧光素的荧光。可以通过实验组和对照组的上清液的荧光强度来估计检测的检测效率。
名称 寡核苷酸序列
Zn-Sub 5’-/5Biotin/TTTTTTTTTACTCACTAT/rA/GGAAGAGATG-FAM-3’
Zn-Enz 5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’
所述偶联缓冲液为：0.01M PBS，30mM NaCl，0.1％tween-20，pH 7.4。
所述剪切缓冲液为：0.01M PBS，70.53mM NaCl，0.1％tween-20，pH 7.85。
有益效果：相对于现有技术，本发明方法大大降低了背景信号干扰，检测限降低至32fM，线性范围为100fM至10nM(r2>0.992)。可用于测定自来水或婴幼儿奶粉样品中的Zn2+，具有流程少、操作简单、检测效率高等优点。
附图说明
图1为本发明方法基于脱氧核酶检测Zn2+方法机理图。
图2为将Zn-Sub连接到MBs之前和之后的剩余的Zn-Sub荧光强度光谱图，条件：5μMZn-Sub，20mg/mL MB，pH 7.4,50mM Na+，25℃。
图3为各种条件的优化图，其中：
a为Zn-Enz链的浓度从0.04μM到0.21μM的优化图，条件：0.29μM Zn-Sub-MB,1.0nMZnCl2,pH 7.4,50mM Na+,26℃,孵育3小时；
b为反应介质(0.01M PBS缓冲液)中Na+浓度从20至120mM的优化图，条件：0.29μMZn-Sub-MB，0.17μM Zn-Enz，1.0nM ZnCl2，pH 7.4,26℃，孵育3小时；
c为孵化温度从35℃到50℃的优化图。条件：0.29μM Zn-Sub-MB，0.17μM Zn-Enz，1.0nM ZnCl2，pH 7.4,90mM Na+，孵育3小时；
d为反应介质(0.01M PBS缓冲液)的pH从6.4到8.42的优化图，条件：0.29μM Zn-Sub-MB，0.17μM Zn-Enz，1.0nM ZnCl2，90mM Na+，47℃，孵育3小时。
图4为孵化时间从0.5小时到5小时的优化图。条件：0.29μM Zn-Sub-MB，0.17μMZn-Enz，1.0nM ZnCl2，pH 7.85,90mM Na+，47℃温育。
图5为Zn2+的浓度与荧光强度关系图，其中：
a为Zn2+的校准曲线，条件：0.29μM Zn-Sub-MB，0.17μM Zn-Enz,pH 7.85,90mM Na+,47℃孵化3.5小时；
b为不同浓度的Zn2+对应的荧光光谱图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例，对本发明做出进一步说明。
实施例1具体检测方法：
(1)在离心管中加入300～400μL购买的粒径为300nm的链霉亲和素包被磁珠，并离心90秒。将离心管放在磁力架上90秒。丢弃溶剂并将MBs保留在管中。在用偶联缓冲液仔细洗涤三次后，将MBs分散在90μL偶联缓冲液中，加入60～100μL 10μM的双标记(生物素+FAM荧光素)Zn-Sub链以形成携带探针的MBs，将离心管在室温下轻轻涡旋30分钟以确保生物素和链霉亲和素之间相互作用的完成。离心管离心90秒，置于磁场架上90秒。然后取出上清液，分离出沉淀物，得Zn-Sub-MB缀合物。
(2)用剪切缓冲液将Zn-Sub-MB缀合物洗涤三次，分散在1220～1520μL剪切缓冲液中，配成0.4μM的Zn-Sub-MB缀合物溶液，并在4℃下储存备用。
(3)在离心管中，将5μL Zn-Enz链(1.2μM)和5μL ZnCl2(不同浓度)加入到25μL0.4μM Zn-Sub-MB缀合物溶液中以形成实验组。同时，将5μL Zn-Enz链(1.2μM)和5μL剪切缓冲液添加到25μL的0.4μM Zn-Sub-MB缀合物溶液中以形成对照组。两个离心管在47℃下孵化3.5小时。然后将两个离心管离心90秒，并放入磁力架中90秒。然后分离出实验组和对照组的上清液。通过使用492nm处的最大激发波长在510到650nm之间收集实验组和对照组的上清液中FAM荧光素的荧光。可以通过实验组和对照组的上清液的荧光强度来估计检测的检测效率，绘制锌离子与荧光强度相关的标准曲线。
名称 寡核苷酸序列
Zn-Sub 5’-/5Biotin/TTTTTTTTTACTCACTAT/rA/GGAAGAGATG-FAM-3’
Zn-Enz 5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’
所述偶联缓冲液为：0.01M PBS，30mM NaCl，0.1％tween-20，pH 7.4。
所述剪切缓冲液为：0.01M PBS，70.53mM NaCl，0.1％tween-20，pH 7.85。
(4)检测时，将Zn-Enz链和含有锌离子的待测物加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，取上清液，检测其中荧光素的荧光强度，从上述标准曲线上计算待测物中锌离子浓度。
如图2所示，表明在偶联孵化30分钟后，MBs表面已经偶联了绝大多数Zn-Sub链。
如图3所示，图a表明0.171μM的Zn-Enz链足以在当前条件下检测Zn2+。图b表明反应介质(0.01M PBS缓冲液)中Na+浓度为90mM时，可以获得最大的剪切效率。图c表明最优剪切孵化温度为47℃。图d表明剪切缓冲液的最优pH为7.85。
如图4所示，表明最优剪切孵化时间为3.5小时。
如图5所示，图a表明该法的检测范围为100fM至10nM，图b表明检测不同浓度锌离子对应的荧光光谱图。
实施例2自来水中Zn2+的检测：
为了与常规方法(即ICP-MS)进行比较，采用实施例1方法对自来水样品中的Zn2+进行了测定，并将结果与来自ICP-MS分析的结果进行比较。在自来水中检测到0.14pM的Zn2+。ICP-MS测定值为0.1pM。为了评估基质效应，这些样品还分别添加入10和50pM的Zn2+。如表1所示，该方法获得了较好的回收率(96.76-97.76％)，结果与ICP-MS检测结果相当。
表1测定自来水样品中的Zn2+
Figure BDA0001764118940000061
a相对回收率＝(总浓度-空白浓度)/掺入浓度
实施例3婴幼儿奶粉中Zn2+的检测：
(1)湿法消化法预处理奶粉样品(婴幼儿奶粉含锌量：3.5mg/100mg)：首先，准确称量0.5g婴儿奶粉放入250毫升锥形瓶中，然后将10毫升硝酸-高氯酸(5:1)溶液加入锥形瓶中。最后，将混合物放置一夜。该混合物经油浴加热，使有机物完全分解，直到溶液澄清。将20毫升超纯水加入锥形瓶后，冷却，煮沸以去除残留酸。随着大部分水被蒸发，高氯酸的白色薄雾开始形成并逐渐被除去。当雾几乎消失时，锥形瓶底部有一些淡黄色残留物。此时，停止加热，用PBS缓冲液将残留物溶解到一定的体积内，然后将其混合以测量。奶粉样品的湿消化预处理(婴幼儿奶粉Zn2+含量：3.5mg/100mg)：首先将0.5g婴幼儿奶粉准确称量至250mL锥形瓶中，然后将10.0mL硝酸-高氯酸(5：1)混合物加入锥形瓶中。最后，将混合物放置过夜。通过油浴加热混合物以使有机物完全分解并使溶液澄清。让它们冷却后，将20mL超纯水加入锥形瓶中，煮沸除去残留的酸。随着大部分水被蒸发，高氯酸的白色薄雾开始形成并逐渐被除去。当雾几乎消失时，锥形瓶底部有不同量的白色或淡黄色残余物。此时，停止加热并用剪切缓冲液溶解残留物至一定体积，然后稀释至一定浓度进行测量。
(2)采用实施例1方法，在婴幼儿奶粉溶液(3.6×10-8g，500mL)中检测到Zn2+的水平为35.42pM，并且实际的Zn2+浓度为38.54pM。为了评估基质效应，这些样品还分别添加入10和50pM的Zn2+。如表2所示，通过该测定在加标样品中获得了良好的回收率(93.49-98.03％)。所有的结果都表明该方法适合实际样品中Zn2+的检测。
表2测定婴幼儿奶粉样品中的Zn2+
Figure BDA0001764118940000071
a相对回收率＝(总浓度-空白浓度)/掺入浓度。
以上实施例只是对本发明的技术构思起到说明示例作用，并不能以此限制本发明的保护范围，本领域技术人员在不脱离本发明技术方案的精神和范围内，进行修改和等同替换，均应落在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取链霉亲和素包被磁珠(MBs)，离心，磁力架放置，将沉淀物用偶联缓冲液洗涤后，分散在偶联缓冲液中，加入生物素和FAM荧光素双标记的寡核苷酸序列为5’-/5Biotin/TTTTTTTTTACTCACTAT/rA/GGAAGAGATG-FAM-3’的Zn-Sub链，涡旋，离心，磁力架放置，分离出沉淀物，得Zn-Sub-MB缀合物；
(2)用剪切缓冲液将Zn-Sub-MB缀合物洗涤后，分散在剪切缓冲液中，配制成Zn-Sub-MB缀合物溶液；
(3)将寡核苷酸序列为5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’的Zn-Enz链和不同浓度的ZnCl2溶液加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，磁力架放置，取上清液，在荧光素的最大激发波长检测荧光强度，绘制锌离子与荧光强度相关的标准曲线；
(4)检测时，将寡核苷酸序列为5’-CATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’的Zn-Enz链和含有锌离子的待测物加入到上述Zn-Sub-MB缀合物溶液中，孵化，离心，取上清液，检测其中荧光素的荧光强度，从上述标准曲线上计算待测物中锌离子浓度。
2.根据权利要求1所述的基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，步骤(1)中所述偶联缓冲液为：0.01M PBS，30mM NaCl，0.1％tween-20，pH7.4。
3.根据权利要求1所述的基于脱氧核酶修饰的磁珠颗粒用于锌离子检测的荧光方法，其特征在于，步骤(2)中所述剪切缓冲液为：0.01M PBS，70.53mM NaCl，0.1％tween-20，pH7.85。
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CN110016146B (zh) * 2019-05-10 2021-08-06 华东理工大学 一种磁功能化稀土荧光探针溶液的制备方法与应用
CN110241181A (zh) * 2019-06-12 2019-09-17 中国药科大学 一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA-21方法
CN117434263B (zh) * 2023-08-16 2024-07-19 江南大学 基于磁分离的3d-dna步行器适配体传感器及克罗诺杆菌检测方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102021229A (zh) * 2009-09-14 2011-04-20 中国科学院宁波材料技术与工程研究所 水溶液中阳离子的检测方法
CN107764813A (zh) * 2017-09-01 2018-03-06 杨蕾 一种基于适配体DNAzyme对铅离子检测的方法
CN107860765B (zh) * 2017-11-06 2020-08-04 首都医科大学 一种金属离子检测用探针、试剂盒、制备方法、应用

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