CN108982432A - 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法 - Google Patents

基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108982432A
CN108982432A CN201710413862.0A CN201710413862A CN108982432A CN 108982432 A CN108982432 A CN 108982432A CN 201710413862 A CN201710413862 A CN 201710413862A CN 108982432 A CN108982432 A CN 108982432A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cluster
bovine serum
heparin
copper nano
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710413862.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108982432B (zh
Inventor
李妍
吴晓曼
李欣格
张菲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Normal University
Original Assignee
Tianjin Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Normal University filed Critical Tianjin Normal University
Priority to CN201710413862.0A priority Critical patent/CN108982432B/zh
Publication of CN108982432A publication Critical patent/CN108982432A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108982432B publication Critical patent/CN108982432B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明公开基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，以磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系和待测样品组成肝素检测体系，检测加入待测样品前后的荧光强度变化，对比标准曲线，得到待测样品中肝素的含量。本发明采用“一锅法”合成以变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇，合成的材料粒径尺寸均一，荧光性能好、性质稳定，发光位置在642.04nm，属于近红外区，避免了自体荧光的干扰，可直接快速地检测肝素含量，检测线性范围宽，检出限低，在生物体系检测和临床应用等方面具有很好的应用前景。

Description

基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法
技术领域
本发明属于金属纳米簇的制备及其在荧光传感方面的应用领域，具体涉及一种基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的水相合成方法及其采用荧光猝灭“turn off”模式免标记、高效、选择性检测肝素方面的应用。
背景技术
肝素是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的肝、肾、胸腺、血液中，在生理学及食品分析方面有其独特的性能，在心血管疾病及治疗凝血方面具有重要应用，如防治血栓栓塞性疾病，弥漫性血管内凝血，及体外抗凝等。在心血管手术或避免血栓形成方面，监测肝素的水平是至关重要的，因为过量的肝素会引起一些负面影响，如大出血或血小板减少，因此在手术和抗凝治疗过程中密切监测和量化血清中肝素浓度具有重要意义。由于其生物应用性和药理的重要性，灵敏、快速的测定肝素含量已经引起了人们的广泛关注，目前已有几种方法可用于肝素的检测，分别是血浆法，化学测定法，生物底色法，染料比色法。但由于其检测步骤的复杂性、检测纯度的较高要求、检测价格昂贵等苛刻的条件均限制了这些方法的应用。目前，利用荧光分光光度法检测肝素的报道还相对较少，众所周知，荧光检测法灵敏、简单、价格低廉，具有较低的检出限。传统的纳米材料如量子点和金属纳米簇作为荧光探针均得到了很好的应用，然而，量子点中重金属的存在使得其安全性和生物相容性还有待商榷，进而使其在生物检测方面受到限制。金属纳米簇由于其具有独特的荧光性质，无毒性，尺寸较小且均匀，水溶性好等优点使得其相比于量子点在生物检测方面有更好的应用性。
过去几十年，纳米技术的快速发展催生了各种金属纳米材料，金属纳米簇更因其超小尺寸、低毒性、高荧光量子产率、良好的稳定性已经引起了国内外学者的广泛关注。随着一段时间的发展，金、银纳米簇的合成及应用已逐渐变得成熟，但因其昂贵的前驱限制了其发展，而铜纳米簇更因其制备成本低、原料易得、工业应用更广泛、与金银相似的性能等优点在生物传感、生物成像、蛋白检测等方面具有很好的应用前景。因此，相比于贵金属纳米簇，铜纳米簇在复杂的应用中具有更好的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法,以变性的牛血清蛋白为模板水相合成了一种具有独特荧光性能的铜纳米簇，采用荧光猝灭“turn off”模式实现了对肝素免标记、高效、选择性的检测。
本发明的技术目的通过下述技术方案予以实现：
基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，以磷酸缓冲水溶液(PBS)、铜纳米簇分散体系和待测样品组成肝素检测体系，检测加入待测样品前后的荧光强度变化，对比标准曲线，得到待测样品中肝素的含量，线性方程为ΔF＝164.66798+0.49882x，ΔF为加入待测样品前后的荧光强度变化值，x为肝素浓度。
在上述技术方案中，线性范围为2.5ng/mL～250ng/mL，检出限是0.64ng/mL，选择642.02nm处荧光强度进行检测。
在上述技术方案中，待测样品中肝素与铜纳米簇充分作用，使得荧光发生猝灭并检测荧光发射光谱，通过荧光发射光谱强度的变化值证明该铜纳米簇检测肝素的可行性，即待测样品中存在肝素，则荧光发生淬灭，强度下降。
在上述技术方案中，磷酸缓冲水溶液(PBS)浓度为10nmol/L，25℃，pH＝7.4。
在上述技术方案中，肝素检测体系由2.4mL磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系1.5mL和100μL待测样品组成。
在上述技术方案中，肝素检测体系由0.5～3.5mL磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系0.5～3.5mL和100μL待测样品组成，其中磷酸缓冲水溶液和铜纳米簇分散体系的体积之和为4ml。
在上述技术方案中，在加入待测样品组成肝素检测体系后，充分反应10—20min后，再进行荧光强度检测。
铜纳米簇分散体系为一锅合成法予以制备的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇，在室温20-25摄氏度条件下按照如下步骤进行：向变性的牛血清蛋白水溶液中加入CuCl2水溶液，充分反应后，加入水合肼，铜纳米簇分布在变性牛血清蛋白基体上，即铜离子与蛋白表面的氨基、羟基等功能基团进行配位，在水合肼作用下实现原位还原形成铜纳米簇。
制备的铜纳米簇粒径集中在1.5-2nm，优选1.8—2nm。
其中氯化铜水溶液的配置为称取1.7050g CuCl2溶于100mL高纯水中，充分溶解后备用；变性牛血清蛋白水溶液的配置为称取牛血清蛋白0.0700～0.1700g，加30mL水溶解，加入NaBH4 0.0010～0.0060g反应1h，70℃加热10～40min，冷却至室温20—25摄氏度；加入水合肼之前反应时间为10—30min，加入水合肼后反应1～10h，水合肼加入量为0.3～1.0mL，水合肼为水合肼水溶液，其中水合肼的质量百分数为80％。
在制备后，使用截留分子量为6000-8000，直径为25mm透析袋对制得铜纳米簇进行纯化，每3-5h换一次高纯水，透析20-30h。
在加入水合肼时，水合肼的滴加速度为0.05-0.1mL/min。
在具体进行检测时，首先配置各个溶液如下：
(1)肝素钠母液的配制：称取0.0080g肝素钠溶于8mL高纯水中，低温保存待用。
(2)磷酸缓冲盐(PBS)溶液的配制
母液配制：0.2M Na2HPO4：称取0.7160g Na2PO4·12H2O，溶于10mL高纯水中；0.2MNaH2PO4：称取0.3120g NaH2PO4·2H2O，溶于10mL高纯水中。
0.2M PBS(pH＝7.4，1mL)：取0.19mL 0.2mol/L NaH2PO4，0.81mL 0.2mol/LNa2HPO4，然后将其稀释至10nM(pH＝7.4)。
(3)一系列浓度肝素的配制：
将1g/L肝素溶液分别稀释到0.0001g/L、0.0005g/L、0.001g/L、0.0025g/L、0.01g/L，配制成4mL溶液。
然后采用基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇检测肝素，按如下步骤进行：
(1)向离心管中加入2.5mL 10nM PBS缓冲溶液，1.5mL铜纳米簇溶液，混合均匀组成溶液检测体系，此时溶液检测体系具有较高的荧光强度；
(2)向离心管中加入2.4mL 10nM PBS缓冲溶液，1.5mL铜纳米簇溶液，混合均匀后，向混合溶液中加入100μL高纯水，测试体系的荧光强度；
(3)向离心管中加入2.4mL 10nM PBS缓冲溶液，1.5mL铜纳米簇溶液，混合均匀后，向混合溶液中加入100μL肝素溶液，
(4)向离心管中加入分别0.5～3.5mL 10nM PBS缓冲溶液，0.5～3.5mL铜纳米簇溶液，向混合溶液中分别加入100μL不同浓度0.0001g/L～0.01g/L肝素溶液，充分反应10min后用荧光分光光度计检测体系的荧光强度，即可获得不同肝素溶液浓度下的荧光淬灭值(即荧光减小量)，将肝素浓度和荧光淬灭值进行作图即获得用于对比的标准曲线。
本发明采用“一锅法”合成以变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇，利用合成的具有独特荧光性能的铜纳米簇实现对肝素的简便、快速、直接检测。利用合成的具有独特光学性能的铜纳米簇作为荧光探针高效选择性检测肝素(Hep)含量，方法简单、快捷、不需要复杂的功能化过程，就可以直接实现对肝素(Hep)的痕量检测；同时，合成过程中不需要加热、调节pH等复杂的过程，合成方法简便，易于控制；合成的材料粒径尺寸均一，荧光性能好、性质稳定，合成材料发光位置在642.04nm，属于近红外区，避免了自体荧光的干扰，可直接快速地检测肝素含量，检测线性范围宽，检出限低，在生物体系检测和临床应用等方面具有很好的应用前景。
附图说明
图1为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的透射电镜图(TEM)。
图2为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇荧光激发光谱和发射光谱图。
图3为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的紫外吸收谱图(UV-vis)。
图4为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的圆二色光谱图(CD)。
图5为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇检测不同浓度肝素的线性荧光光谱图。
图6为基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇检测肝素的线性范围示意图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，上述特征和优点将会变得更加清晰和容易理解。本发明所用试剂均为分析纯，本发明中所述的高纯水购买于哇哈哈纯净水，牛血清蛋白购买于北京鼎国昌盛生物技术有限公司，水合肼购买于天津光复精细化工有限公司，氯化铜(99％)购买于天津光复精细化工有限公司。
实施例1
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.1200g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.7mL，搅拌条件下反应2h，至溶液呈淡黄色；
实施例2
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.1200g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.7mL，搅拌条件下反应6h，至溶液呈淡黄色；
实施例3
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.0800g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.7mL，搅拌条件下反应6h，至溶液呈淡黄色；
实施例4
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.1600g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.7mL，搅拌条件下反应6h，至溶液呈淡黄色；
实施例5
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.1200g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.4mL，搅拌条件下反应6h，至溶液呈淡黄色；
实施例6
0.1M CuCl2溶液的配制：称取1.7050g CuCl2溶于适量高纯水中，转移到100mL容量瓶中定容，贴标签待用；
牛血清蛋白的变性：称取0.1200g牛血清蛋白溶于30mL高纯水中，搅拌条件下充分溶解，称取0.0040g NaBH4加入到上述牛血清蛋白溶液中，充分反应1h，将上述混合溶液在70℃条件下加热30min，冷却至室温；
铜纳米簇的合成：搅拌条件下向上述变性的牛血清蛋白溶液中加入配制好的CuCl2溶液250μL，充分反应后，向上述混合溶液中加入水合肼0.7mL，搅拌条件下反应6h，至溶液呈淡黄色；
对上述实施例制备的铜纳米簇进行表征(实施例表现出基本一致的性质)，如附图1所示，基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的透射电镜图(TEM)，说明了合成的铜纳米簇粒径尺寸均一、且分布均匀,粒径集中在1.5-2nm。使用圆二色光谱(Jasco J-715spectropolarimeter，Jasco,Japan)、日本岛津公司紫外分光光度计UV-2600和美国安捷伦荧光光度计进行测试，如附图所示，表明铜纳米簇的成功合成，基于变性的牛血清蛋白为模板的铜纳米簇荧光最大激发波长为326nm，最大发射波长为642.02nm。
实施例7
肝素的检测：分别取2支空离心管，编号①、②，分别移取10nM PBS缓冲溶液2.4mL加入到①、②号离心管中，再移取1.5mL铜纳米簇溶液加入到上述缓冲溶液中，混合均匀后，继续向①号离心管中加入100μL高纯水作为空白对照组，向②号离心管中加入100μL肝素溶液，反应5min,使得荧光发生猝灭并用荧光光度计检测荧光发射强度；实施例8
肝素的检测：分别取2支空离心管，编号①、②，分别移取10nM PBS缓冲溶液2.4mL加入到①、②号离心管中，再移取1.5mL铜纳米簇溶液加入到上述缓冲溶液中，混合均匀后，继续向①号离心管中加入100μL高纯水作为空白对照组，向②号离心管中加入100μL肝素溶液，反应15min,使得荧光发生猝灭并用荧光光度计检测荧光发射强度；实施例9
肝素的检测：分别取2支空离心管，编号①、②，分别移取10nM PBS缓冲溶液2.9mL加入到①、②号离心管中，再移取1.0mL铜纳米簇溶液加入到上述缓冲溶液中，混合均匀后，继续向①号离心管中加入100μL高纯水作为空白对照组，向②号离心管中加入100μL肝素溶液，反应15min,使得荧光发生猝灭并用荧光光度计检测荧光发射强度；实施例10
肝素的检测：分别取2支空离心管，编号①、②，分别移取10nM PBS缓冲溶液1.9mL加入到①、②号离心管中，再移取2.0mL铜纳米簇溶液加入到上述缓冲溶液中，混合均匀后，继续向①号离心管中加入100μL高纯水作为空白对照组，向②号离心管中加入100μL肝素溶液，反应15min,使得荧光发生猝灭并用荧光光度计检测荧光发射强度，根据其荧光强度的变化检测肝素的含量；
在实施例制备的铜纳米簇分散体系中，分布在卵清蛋白上的铜纳米簇表现出荧光特性，但当加入肝素后，肝素作为淬灭剂使得荧光强度下降，此时加入肝素的多少直接影响荧光强度下降程度。
因此，以100μL不同浓度的肝素溶液分别与10nM PBS溶液2.4mL、1.5mL铜纳米簇分散体系形成4.0mL肝素检测体系，测定肝素溶液加入前后的荧光强度变化，根据荧光强度相对变化建立标准曲线。本方法的分析特征量如下表所示，说明了本方法有较宽的检测范围和较低的检出限，线性范围为2.5ng/mL～250ng/mL，检出限是0.64ng/mL。
其中ΔF为不加入肝素时的荧光强度检测值与加入肝素后的荧光强度检测值的差值，如附图5所示，在肝素浓度为2.5ng/mL～250ng/mL范围内，随着肝素浓度的递增使得铜纳米簇的荧光强度呈线性递减。
本专利受到国家自然科学基金面上项目21375089、天津市“131”创新型人才培养工程第一层次项目ZX110185的资助。
以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，以磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系和待测样品组成肝素检测体系，检测加入待测样品前后的荧光强度变化，对比标准曲线，得到待测样品中肝素的含量，线性方程为ΔF＝164.66798+0.49882x，ΔF为加入待测样品前后的荧光强度变化值，x为肝素浓度，线性范围为2.5ng/mL～250ng/mL，检出限是0.64ng/mL，选择642.02nm处荧光强度进行检测。
2.根据权利要求1所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，磷酸缓冲水溶液(PBS)浓度为10nmol/L，25℃，pH＝7.4。
3.根据权利要求1所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，肝素检测体系由2.4mL磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系1.5mL和100μL待测样品组成。
4.根据权利要求1所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，肝素检测体系由0.5～3.5mL磷酸缓冲水溶液、铜纳米簇分散体系0.5～3.5mL和100μL待测样品组成，其中磷酸缓冲水溶液和铜纳米簇分散体系的体积之和为4ml。
5.根据权利要求1所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，在加入待测样品组成肝素检测体系后，充分反应10—20min后，再进行荧光强度检测。
6.根据权利要求1所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法，其特征在于，铜纳米簇分散体系为一锅合成法予以制备的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇，在室温20-25摄氏度条件下按照如下步骤进行：向变性的牛血清蛋白水溶液中加入CuCl2水溶液，充分反应后，加入水合肼，铜纳米簇分布在变性牛血清蛋白基体上，即铜离子与蛋白表面的氨基、羟基等功能基团进行配位，在水合肼作用下实现原位还原形成铜纳米簇，其中氯化铜水溶液的配置为称取1.7050g CuCl2溶于100mL高纯水中，充分溶解后备用；变性牛血清蛋白水溶液的配置为称取牛血清蛋白0.0700～0.1700g，加30mL水溶解，加入NaBH4 0.0010～0.0060g反应1h，70℃加热10～40min，冷却至室温20—25摄氏度；加入水合肼之前反应时间为10—30min，加入水合肼后反应1～10h，水合肼加入量为0.3～1.0mL，水合肼为水合肼水溶液，其中水合肼的质量百分数为80％。
7.基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的制备方法，其特征在于，在室温20-25摄氏度条件下按照如下步骤进行：向变性的牛血清蛋白水溶液中加入CuCl2水溶液，充分反应后，加入水合肼，铜纳米簇分布在变性牛血清蛋白基体上，即铜离子与蛋白表面的氨基、羟基等功能基团进行配位，在水合肼作用下实现原位还原形成铜纳米簇。
8.根据权利要求7所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的制备方法，其特征在于，氯化铜水溶液的配置为称取1.7050g CuCl2溶于100mL高纯水中，充分溶解后备用；变性牛血清蛋白水溶液的配置为称取牛血清蛋白0.0700～0.1700g，加30mL水溶解，加入NaBH4 0.0010～0.0060g反应1h，70℃加热10～40min，冷却至室温20—25摄氏度；加入水合肼之前反应时间为10—30min，加入水合肼后反应1～10h，水合肼加入量为0.3～1.0mL，水合肼为水合肼水溶液，其中水合肼的质量百分数为80％。
9.根据权利要求7所述的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的制备方法，其特征在于，制备的铜纳米簇粒径集中在1.5-2nm，优选1.8—2nm。
10.根据权利要求7所述的制备方法制备的基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇在检测痕量肝素中的应用，其特征在于，发光位置在642.04nm，且与肝素作用后荧光强度发生淬灭，作为荧光探针高效选择性检测肝素含量。
CN201710413862.0A 2017-06-05 2017-06-05 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法 Expired - Fee Related CN108982432B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710413862.0A CN108982432B (zh) 2017-06-05 2017-06-05 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710413862.0A CN108982432B (zh) 2017-06-05 2017-06-05 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108982432A true CN108982432A (zh) 2018-12-11
CN108982432B CN108982432B (zh) 2020-11-13

Family

ID=64502567

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710413862.0A Expired - Fee Related CN108982432B (zh) 2017-06-05 2017-06-05 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108982432B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110000395A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 天津师范大学 一步法合成荧光金属锰纳米簇的方法及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080050513A1 (en) * 2006-04-27 2008-02-28 Cambrios Technologies Corporation Prevention of quantum dot quenching on metal surfaces
CN102866139A (zh) * 2012-09-21 2013-01-09 南开大学 基于表面等离子体增强能量转移生物传感器的构建方法
CN104894222A (zh) * 2015-06-11 2015-09-09 郑州大学 一种基于荧光铜纳米颗粒免标检测t4多聚核苷酸激酶/磷酸酶及其抑制剂的新方法
CN104972135A (zh) * 2015-05-28 2015-10-14 天津师范大学 近红外荧光探针铜纳米簇的合成方法及其应用
CN105505382A (zh) * 2015-12-04 2016-04-20 安徽师范大学 一种铜纳米簇溶液的制备方法及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080050513A1 (en) * 2006-04-27 2008-02-28 Cambrios Technologies Corporation Prevention of quantum dot quenching on metal surfaces
CN102866139A (zh) * 2012-09-21 2013-01-09 南开大学 基于表面等离子体增强能量转移生物传感器的构建方法
CN104972135A (zh) * 2015-05-28 2015-10-14 天津师范大学 近红外荧光探针铜纳米簇的合成方法及其应用
CN104894222A (zh) * 2015-06-11 2015-09-09 郑州大学 一种基于荧光铜纳米颗粒免标检测t4多聚核苷酸激酶/磷酸酶及其抑制剂的新方法
CN105505382A (zh) * 2015-12-04 2016-04-20 安徽师范大学 一种铜纳米簇溶液的制备方法及应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CUNLAN GUO: "Fluorescent Ag Clusters via a Protein-Directed Approach as a Hg(II) Ion Sensor", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *
LIBING ZHANG: "Metal nanoclusters: New fluorescent probes for sensors and bioimaging", 《NANO TODAY》 *
SU-DAI MA: "One-Step Synthesis of Water-Dispersible and Biocompatible Silicon Nanoparticles for Selective Heparin Sensing and Cell Imaging", 《ANAL. CHEM.》 *
XIAOMING YANG: "Selectively assaying CEA based on a creative strategy of goldnanoparticles enhancing silver nanoclusters" fluorescence", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
XUN YUAN: "Luminescent Noble Metal Nanoclusters as an Emerging Optical Probe for Sensor Development", 《CHEMISTRY-AN ASIAN JOURNAL》 *
YIZHONG LU: "Sub-nanometre sized metal clusters: from synthetic challenges to the unique property discoveries", 《CHEM SOC REV》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110000395A (zh) * 2019-04-16 2019-07-12 天津师范大学 一步法合成荧光金属锰纳米簇的方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108982432B (zh) 2020-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Liu et al. Carbon dots: synthesis, formation mechanism, fluorescence origin and sensing applications
Yan et al. Preparation of carbon quantum dots based on starch and their spectral properties
Huang et al. Carbon quantum dots: synthesis, properties, and sensing applications as a potential clinical analytical method
Liu et al. Amino-functionalized green fluorescent carbon dots as surface energy transfer biosensors for hyaluronidase
Chen et al. Cysteine-directed fluorescent gold nanoclusters for the sensing of pyrophosphate and alkaline phosphatase
CN103289684B (zh) 一种荧光银纳米团簇及其制备方法和应用
CN107573933B (zh) 一种碳量子点-铜离子荧光探针及其制备方法和应用
Pang et al. Fluorescent carbon dots sensor for highly sensitive detection of guanine
Hoan et al. A green luminescence of lemon derived carbon quantum dots and their applications for sensing of V5+ ions
Dong et al. Ratio fluorescent hybrid probe for visualized fluorescence detection of H2O2 in vitro and in vivo
Wang et al. Optical, electrochemical and catalytic methods for in-vitro diagnosis using carbonaceous nanoparticles: a review
CN107603593A (zh) 一种比率型荧光探针及其制备与检测谷胱甘肽的应用
CN109777412B (zh) 一种双发射荧光碳点及其制备方法和应用
CN107253961B (zh) 一种可比率检测半胱氨酸的水溶性荧光传感器的制备及应用
CN105798322A (zh) 银纳米簇的制备方法及其应用
CN107782704A (zh) 基于近红外荧光探针铜纳米簇的叶酸检测方法
CN107254307A (zh) 一种银纳米簇荧光囊泡及其制备方法与检测Fe3+的应用
CN111057541B (zh) 一种氮掺杂橘色荧光碳量子点及其制备方法和应用
CN108982432A (zh) 基于变性牛血清蛋白为模板的铜纳米簇的肝素检测方法
WO2017020238A1 (zh) 荧光淀粉纳米晶及其制备方法与应用
Yang et al. A novel fluorescent test papers based on carbon dots for selective and sensitive detection of Cr (VI)
Costa et al. Carbon-dots from babassu coconut (Orbignya speciosa) biomass: synthesis, characterization, and toxicity to Daphnia magna
CN111024665A (zh) 一种富硒大米或其制备的产品中有机硒含量测定的方法
CN105772740B (zh) 金纳米簇的制备方法及其应用
Wang et al. Simple aggregation-induced ratiometric emission active benzo [h] chromene derivative for detection of bisulfite in living cells

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20201113

Termination date: 20210605

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee