CN108949604B - 一株链霉菌属菌株及其培养方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株链霉菌属菌株（Streptomyces）“TY‑001#”。该菌株是从土壤中分离筛选获得。该菌株已于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC No.：60152。该菌株能够适应高渗透压下通气发酵培养。该菌株在豆浆蔗糖培养基中进行发酵培养后获得的微生物有机肥对植物的生长有显著的促进作用。例如，喷施微生物有机肥后能促进小青菜生长，叶绿素合成较多，叶片肥、大，茎粗，营养物质积累多，抗高温、抗病虫等能力增强，长势旺盛，可见“TY‑001#”菌株在制备微生物有机肥料方面具有广阔的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域。更具体地，涉及一株链霉菌属菌株及其培养 方法和应用。
背景技术
链霉菌属(streptomyces)是放线菌目的一属。基内菌丝不断裂，气生菌丝通 常发育良好，形成长(有时短)的孢子丝。孢子不能运动，外鞘上常有疣、刺 或毛发等状饰物。链霉菌广泛存在于土壤中，是丝状的革兰氏阳性细菌，主要 通过孢子繁殖，绝大多数链霉菌对人体无害。链霉菌是产生各种抗生素的主要 来源，源于链霉菌的抗生素包括红霉素、四环素、链霉素、氯霉素、新霉素、 制霉菌素、卡那霉素、放线菌酮和两性霉素等，因此，对于链霉菌的已有研究 主要集中于菌株产生抗菌活性物质的能力和大小等方面。
土壤中的链霉菌大都无法适应通气敞开的环境下进行培养，培养体系要求 十分严格。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有链霉菌无法适应通气敞开的环境下进 行培养，以获得有效成分高的微生物有机肥，提供一株链霉菌属菌株 (Streptomyces.)。
本发明的另一目的是提供链霉菌属菌株(Streptomyces.)的培养方法和应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一株链霉菌属菌株(Streptomyces)，所述菌株为链霉菌属菌株“TY-001#”， 该菌株已于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号 为GDMCCNo.：60152。
优选地，该菌株的形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有 炼乳状光泽；孢子革兰氏染色呈阳性。
一种所述链霉菌属菌株(Streptomyces)的培养方法，包括以下步骤：
S1.取链霉菌属菌株“TY-001#”划线于固体培养基上，25～30℃倒置活化 培养3～7天，制得活化后菌株；
S2.取步骤S1制得的活化后菌株接种至液体培养基中，在温度为25～30℃、 转数为150～220转/分钟的条件下，摇床培养3～7天，得到菌液。
优选地，所述液体培养基每升组分如下：取大豆、豆粕或花生粕100g磨成 豆浆或花生浆过滤，弃渣；白砂糖、蔗糖或红糖100g；水定容至1升，pH为 7.4～7.6。
优选地，所述液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化 钠5.0g，水定容至1升，pH为7.4～7.6。
优选地，所述固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化 钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，pH为7.4～7.6。
一种所述链霉菌属菌株(Streptomyces)在制备具有耐高渗透压通气发酵生 产微生物有机肥方面的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的链霉菌属菌株“TY-001#”，该菌株能够适应高渗透压下通气 发酵培养。该菌株在豆浆蔗糖培养基中进行发酵培养后获得的微生物有机肥对 植物的生长有显著的促进作用。例如，喷施微生物有机肥后能促进小青菜生长， 叶绿素合成较多，叶片肥、大，茎粗，营养物质积累多，抗高温、抗病虫等能 力增强，长势旺盛。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形 式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试 剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1链霉菌属菌株(Streptomyces)的分离与鉴定
1.实验材料和条件
(1)在湖南省郴州市某地采集到的土壤样品。
(2)液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g， 水定容至1升，pH为7.4～7.6。
固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂 15～25g，水定容至1升，pH为7.4～7.6。
培养基分装，高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)。
(3)无菌操作条件：所有器皿和用具均须经高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)， 接种等操作均在超净工作台内进行。
(4)菌株培养条件：置于25±1℃光照恒温箱(14L：10D)中培养，待菌 落形成后，转移到PDA斜面，再转入5℃冰箱内保存。
2.菌株分离与筛选
(1)从湖南省郴州市某地的土壤样品中分离获得一株链霉菌属菌株T0。
(2)将分离得到的链霉菌属菌株T0接入固体培养基中斜面继代培养，再 转入5℃冰箱内保存。
(3)将继代培养的菌株T0于液体培养基中，在振荡摇床上220转/分钟， 25℃条件下培养5天。
(4)培养5天后的T0液体菌，放置于20瓦紫外线灯20～30cm处照射2 小时。
(5)将照射后的T0液体菌接入固体斜面培养基中25℃下培养5天，然后 挑出长得最好的存活菌落接入固体培养基继代培养。
(6)重复若干遍步骤(2)～(5)的过程循环。在每一遍重复过程循环中， 固体培养基和液体培养基中的氯化钠用量都增加1克，直至固体培养基和液体 培养基中的氯化钠用量达到25克。将最终存活的健壮菌株进行继代培养，再转 入5℃冰箱内保存。
(7)将以上筛选出的耐高渗透压菌株T0，进行发酵生产试验。经7天25℃ 敞开有氧发酵后，测定发酵液中氨基态氮(按甲醛滴定法测定氨基氮标准检测)， 挑选出氨基态氮含量(≥0.7mg/L)最高的菌株作为最终生产用菌株，命名 “TY-001#”。
发酵生产试验所用的培养基如下：取大豆100g磨成豆浆过滤，弃豆渣；白 砂糖100g，定容至1000mL，pH为7.4～7.6。
3.菌株“TY-001#”的鉴定
(1)形态学鉴定
形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有炼乳状光泽；孢子 革兰氏染色呈阳性。
形态学鉴定显示，该菌株属于链霉菌属。
综上所述，菌株“TY-001#”为链霉菌属，于2017年3月24日保藏于广东 省微生物菌种保藏中心，分类命名为Streptomyces.，其保藏编号为GDMCC No.：60152，保藏地址是中国广州市先烈中路100号大院59号楼五楼。
实施例2链霉菌属菌株“TY-001#”在制备具有耐高渗透压通气发酵生产微生 物有机肥方面的应用
(1)一种微生物有机肥的制备方法，包括以下步骤：
称取100g的大豆，加水浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣， 将豆浆置于干净的发酵桶中。将豆渣用水浸泡后，再次过滤，滤液与豆浆混合 均匀。
往发酵桶中加入100g的白砂糖，并搅拌使白砂糖完全溶解后，定容至1L。 该培养基中的白砂糖浓度高达100g/L，属于高渗透压培养基。
接种。取60mL的“TY-001#”液体菌种(2亿个活菌/mL)，加入到发酵桶 中，搅拌均匀。
发酵。开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵 桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入 杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液。
此发酵液灌装后密闭静置15天后即为本发明所指的微生物有机肥。
(2)微生物有机肥的检测及质量评价：
按甲醛滴定法测定氨基氮标准检测微生物有机肥中的氨基态氮的含量，结 果表明，微生物有机肥中的氨基态氮的含量高达0.76mg/mL。
(3)微生物有机肥的应该效果评价：
叶面喷肥能快速补充叶类蔬菜生长所需的养分，促进叶菜生长。为验证本 发明制备的微生物有机肥在青菜上大面积示范应用的实际效果，申请人选择在 青菜上进行了试验示范。
1材料与方法
1.1供试地点试验设在郴州市某叶菜基地内，试验地面积1.85亩，土壤肥力 水平较均匀。
1.2供试肥料实施例2制得的微生物有机肥，氨基态氮含量0.76mg/mL，产 品剂型为液体。
1.3供试作物小青菜，品种为“绿优1号”，属耐热品种，杂交一代，株型 直立，叶柄宽扁，叶厚，浅绿白色，适合5～9月播种。
1.4试验处理与设计试验设3个处理：①常规对照，基追肥按当地常规使用 情况进行，不使用叶面肥和调节剂。②清水对照，每亩每次以同处理③等量清 水同时期进行叶面喷施，其他施肥措施同处理①。③微生物有机肥。每亩每次 用微生物有机肥200g兑水40kg(稀释200倍液)进行叶面喷施，出苗后15天 喷施1次，隔7天再喷1次，全生育期共喷4次，其它施肥措施同处理①。每 处理重复3次，随机区组排列，同一区组安排在同一畦中，小区面积36m2，长 宽比为2.5∶1，各小区间以小沟隔离。
2结果与分析
喷施微生物有机肥对植物性状的影响显著，见表1。处理③喷施含微生物有 机肥后，能较好地促进小青菜生长，平均株高比处理②(清水对照)、处理①(常 规对照)分别高3.4、4.6cm；百株干重为10.5g，比处理②、①分别重2.8、3.4g。 说明喷施微生物有机肥后能促进小青菜生长，叶绿素合成较多，叶片肥、大， 茎粗，营养物质积累多，抗高温、抗病虫等能力增强，长势旺盛。
表1
Claims (6)
1.一株链霉菌属菌株（Streptomyces），其特征在于，所述菌株为链霉菌属菌株“TY-001#”，该菌株已于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCCNo.：60152。
2.一种权利要求1所述链霉菌属菌株（Streptomyces）的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 取链霉菌属菌株“TY-001#”划线于固体培养基上，25～30℃倒置活化培养3～7天，制得活化后菌株；
S2. 取步骤S1制得的活化后菌株接种至液体培养基中，在温度为25～30℃、转数为150～220转/分钟的条件下，摇床培养3～7天，得到菌液。
3.根据权利要求2所述链霉菌属菌株（Streptomyces）的培养方法，其特征在于，所述液体培养基每升组分如下：
取大豆、豆粕或花生粕100g磨成豆浆或花生浆过滤，弃渣；白砂糖、蔗糖或红糖100g；水定容至1升，pH为7.4～7.6。
4.根据权利要求2所述链霉菌属菌株（Streptomyces）的培养方法，其特征在于，所述液体培养基每升组分如下：
牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g，水定容至1升，pH为7.4～7.6。
5.根据权利要求2所述链霉菌属菌株（Streptomyces）的培养方法，其特征在于，所述固体培养基每升组分如下：
牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，pH为7.4 ～7.6。
6.一种权利要求1所述链霉菌属菌株（Streptomyces）在制备具有耐高渗透压通气发酵生产微生物有机肥方面的应用。
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Denomination of invention: A Streptomyces strain and its cultivation method and application Effective date of registration: 20231011 Granted publication date: 20210629 Pledgee: Chenzhou Branch of Hunan Agricultural Credit Financing Guarantee Co.,Ltd. Pledgor: CHENZHOU TONGYUAN BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023980060709 |