CN108947970A

CN108947970A - 吲唑类衍生物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN108947970A
Application number: CN201810475094.6A
Authority: CN
Inventors: 余洛汀; 魏于全
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2017-05-18
Filing date: 2018-05-17
Publication date: 2018-12-07
Anticipated expiration: 2038-05-17
Also published as: CN108947970B; CN108947961A; CN108947961B

Abstract

本发明属于化学医药制备领域，具体涉及作为激酶抑制剂的吲唑类衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一类作为激酶抑制剂的吲唑类衍生物，结构如式I所示。本发明还提供上述作为激酶抑制剂的吲唑类衍生物的制备方法和用途。本发明提供的作为激酶抑制剂的吲唑类衍生物，具有激酶抑制的作用，具有治疗乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、急性髓系白血病等多种实体瘤以及血液瘤等多种肿瘤疾病的用途，具有较好的抗肿瘤活性和较低的毒性，为抗肿瘤的药物开发和应用提供了新的选择。

Description

吲唑类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于化学医药领域，特别涉及吲唑类衍生物及其制备方法和用途。

背景技术

肿瘤是机体细胞在内外致瘤因素长期协同作用下导致其基因水平的突变和功能调控异常，从而促使细胞持续过度增殖并导致发生转化而形成的新生物。目前我国每年新生肿瘤患者总数约212.7万人左右，其中，每年有100万左右的恶性肿瘤新生患者；同时，全国约有268.5万左右的肿瘤现有患者，其中，恶性肿瘤现有患者约148.5万左右，良性肿瘤现有患者约120万左右。全国肿瘤死亡人数每年约有154万人左右，也就是说肿瘤患者人群正以每年约60万人的速度膨胀。目前用于肿瘤治疗的主要手段有手术、放疗、化疗和生物治疗，其他有效手段还包括内分泌治疗、中医中药治疗、热疗和射频消融治疗等。由于现有各种治疗手段各有其最佳适应症，也各有其不足，所以，为了提高治愈率，仍需开发安全有效的靶向治疗方法。

蛋白激酶(Kinase)是细胞生命活动重要的信号使者，可催化将ATP末端的γ-磷酸基团转移至底物上，从而将各种信号进行传递。蛋白激酶参与了众多的生理过程，包括细胞增殖、存活、凋亡、代谢、转录以及分化等。药理学及病理学研究表明，对于很多疾病，如肿瘤、炎症性疾病、中枢神经系统疾病、心血管疾病及糖尿病等，蛋白激酶都是一个理想的药物靶点。

迄今为止，在人体中发现了518种蛋白激酶，而编码具有激酶活性蛋白的基因则高达900多种。与之相对应，有关激酶抑制剂的研究也逐步发展，并在激酶作用机制的阐明过程中扮演了重要角色，并成为重要的药物研究热点。该领域研究的文献数量也是逐年上升，从侧面反映了其在基础研究和药物发现中的重要性。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一类吲唑类衍生物，其结构如式I所示：

其中，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C8芳基、取代或未取代的5～8元杂芳基甲酰基、C1～C8羰基或C1～C8烷基；所述5～8元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C8芳基或5～8元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₃为取代或未取代的C5～C12芳基、取代或未取代的5～12元芳杂基、所述5～12元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C12芳基或5～12元芳杂基的取代基为a为0～1；R₆为取代或未取代的5～12元饱和杂环烷基，所述5～12元饱和杂环烷基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代5～12元饱和杂环烷基的取代基为-H或C1～C8烷基；

R₄、R₅独立的为取代或未取代的C5～C12芳基或取代或未取代的5～12元饱和或不饱和杂环；所述5～12元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C12芳基或5～12元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、b为0～2，c为0～2；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C8烷基、C1～C8羰基或C1～C8氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的C5～C12芳基或取代或未取代的5～12元饱和或不饱和杂环；所述5～12元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述取代C5～C12芳基或5～12元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C8烷基、C1～C8羰基或C1～C8氧羰基；n为0～4；

X为N或CR_11x，R_11x为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN或C1～C8烷酰胺基；

Y为N或CR_11y，R_11y为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C8烷酰胺基。

优选的，上述吲唑类衍生物，当X为N、Y为CR_11y，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺类衍生物，结构式如下式Ⅲ所示：

其中，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C6烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₄为取代或未取代的C5～C10芳基或取代或未取代的5～10元饱和或不饱和杂环；所述5～10元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C10芳基或5～10元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～10元饱和或不饱和杂环；所述5～10元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述5～10元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；n为0～3；

R_11y为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C6烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C6烷酰胺基。

优选的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₄为取代或未取代的C5～C8芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C8芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～8元饱和或不饱和杂环；所述5～8元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述5～8元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；n为0～3；

R_11y为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基。

进一步的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₄为取代或未取代的C5～C6芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～6元饱和或不饱和杂环；所述5～6元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O，杂原子个数为1～4个；所述5～6元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；n为0～3；

更进一步的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₄为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～8元芳杂基、所述5～8元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代苯基或5～8元芳杂基的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；R₉、R₁₀独立的为

R_11y为-H。

最优选的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₄为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基、所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、

R_11y为-H。

优选的，上述吲唑类衍生物，当X为CR_11x，Y为N，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-6-胺类衍生物，结构式如下式Ⅳ所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

R_11x为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C6烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C6烷酰胺基。

R₄为取代或未取代的C5～C8芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代C5～C8芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_11x为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基。

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为 R_11x为-H。

最优选的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₄为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基、所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 R_11x为-H。

优选的，上述吲唑类衍生物，当X为CR_11x，Y为N，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-6-胺类衍生物，结构式如下式Ⅴ所示：

R₅为取代或未取代的C5～C10芳基或取代或未取代的5～10元饱和或不饱和杂环；所述5～10元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C10芳基或5～10元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

R₅为取代或未取代的C5～C8芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C8芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

进一步的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₅为取代或未取代的C5～C6芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₅为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～8元芳杂基、所述5～8元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代苯基或5～8元芳杂基的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为

R_11x为-H。

最优选的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c为-H；R₅为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基、所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 R_11x为-H。

优选的，上述吲唑类衍生物，当X为N，Y为CR_11y，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺类衍生物，结构式如下式Ⅵ所示：

其中，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C6烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～10元饱和或不饱和杂环；所述5～10元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述5～10元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基n为0～3；

优选的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a、R_2b、R_2c独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₅为取代或未取代的C5～C8芳基或取代或未取代的5～10元不饱和杂环；所述5～10元不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代C5～C8芳基或5～10元不饱和杂环的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～8元饱和或不饱和杂环；所述5～8元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述5～8元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；n为0～3；R_11y为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基。

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～6元饱和或不饱和杂环；所述5～6元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O，杂原子个数为1～4个；所述5～6元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；n为0～3；R_11y为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基。

更进一步的，R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为 R_11y为-H。

R₅为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基、所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、 R_11y为-H。

上述吲唑类衍生物的结构式如下：

本发明还提供了上述吲唑类衍生物的制备方法，其合成路线为：

反应条件：(a)Fe，NH₄Cl，CH₃OH︰H₂O＝3︰1，回流；(b)亚硝酸异戊酯，乙酸酐，乙酸钾，甲苯，100℃；(c)HCl(6N)，CH₃OH，回流；(d)Dppf，乙酸钾，联硼酸频哪醇酯，二氧六环，95℃；(e)Dppf，碳酸钾，二氧六环：水＝4：1，100℃；(f)I₂，碳酸钾，DMF，65℃；(g)Dppf，碳酸钾，二氧六环：水＝4：1,100℃

合成步骤：

步骤a：

化合物1和氯化铵(3.0-4.0eq.)溶于甲醇/水(2/1-4/1)混合溶剂中，加热至接近回流温度时分批加入还原铁粉(3.0-4.0eq.)，回流0.5-2h得化合物2。

步骤b：

化合物2溶于甲苯中，加入乙酸钾(1.05-1.5eq.)，乙酸酐(2.0-3.0eq.)，室温下反应1-4h，加入18-冠-6(0.5-0.8eq.)，亚硝酸异戊酯(2.0-4.0eq.)，回流3-6h得化合物3。

步骤c：

化合物3溶于甲醇中，加入HCl，60℃下回流，反应0.5-2h后得化合物4。

步骤d：

化合物4和联硼酸频哪醇酯(1.05-1.3eq.)溶于1,4-二氧六环中，加入碱(2.0-3.0eq.)，催化剂(3-8mmol％)，N₂保护下升温至80-100℃反应6-10h得化合物5。碱的例子包括但不限于碳酸钾、磷酸钾、碳酸钠、碳酸铯。催化剂的例子包括但不限于醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基茚丙酮)二钯。

步骤e：

化合物5和卤代物溶于1,4-二氧六环中，加入碱(2.0-3.0eq.)，催化剂(3-8mmol％)，N₂保护下升温至90-110℃反应3-8h得化合物6。碱的例子包括但不限于碳酸钾、磷酸钾、碳酸钠、碳酸铯。催化剂的例子包括但不限于醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基茚丙酮)二钯。

步骤f：

化合物6溶于DMF中，加入碱(2.0eq.)，将I₂(1.5-2.0eq.)溶于DMF(5mL)中滴加至反应液，60-80℃下反应8-12h得化合物7。碱的例子包括但不限于碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾。

步骤g：

化合物7和R₃-硼酸频哪醇酯(例如：(杂)芳乙烯基硼酸频哪醇酯)(1.05-1.3eq.)，碱(1.5-2.0eq.)，加入1,4-二氧六环:水(4:1-6:1)的混合溶剂中，加入催化剂(3-8mmol％)，N₂保护下升温至90-110℃反应6-10h得化合物8。碱的例子包括但不限于碳酸钾、磷酸钾、碳酸钠、碳酸铯。催化剂的例子包括但不限于醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基茚丙酮)二钯。

R₇、R₈独立的为-H、C1～C8烷基、C1～C8羰基或C1～C8氧羰基；

X为N或CR_11x，R_11x为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C8烷酰胺基；

步骤g的中间体(杂)芳乙烯基硼酸频哪醇酯的合成路线如下：

合成方法：

化合物9(相应的芳乙基溴或杂芳乙基溴)和乙烯基硼酸频哪醇酯(1.05-1.3eq.)溶于甲苯中，加入催化剂(3-8mmol％)、配体(5-10mmol％)、碱(1.5-3eq.)，N₂保护下升温至90-105℃反应3-10h得(杂)芳乙烯基硼酸频哪醇酯。催化剂为三(二亚苄基茚丙酮)二钯。配体为三叔丁基膦四氟硼酸盐。

当R₃为时，采用类似的合成方法制备中间体。

本发明上述吲唑类衍生物包括其互变异构体、立体异构体及其所有比例的混合物，还包括其同位素取代的化合物。

本发明还提供了上述吲唑类衍生物药学上可接受的盐。

本发明所用的术语“药学上可接受的”是指在在合理的医学判断范围，能适于用来与人类和其他哺乳动物的组织接触，而没有不当毒性、刺激、过敏反应等，其在对受者给药时能直接或间接地提供本发明的化合物或化合物的前药。

本发明还提供了上述吲唑类衍生物药学上可接受的水合物或溶剂化物。术语“水合物”表示进一步通过非共价分子间作用力结合化学计量或非化学计量的水的化合物。

本发明还提供了上述吲唑类衍生物药学上可接受的前药。

本发明还提供了上述吲唑类衍生物药学上可接受的多晶型物。术语“多晶型物”表示化合物或其复合物的固体结晶形式，其可以通过物理方法，例如X.射线粉末衍射图或红外光谱进行表征。

本发明还提供了上述吲唑类衍生物药学上可接受的药物组合物，这种药物组合物是由式I、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ所示的化合物及其盐或水合物、前药添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。

上述药物组合物可以为液体形式或固体形式。其中，所述的液体形式可以为水溶液形式。所述的固体形式可以为粉末、颗粒、片剂或冻干粉形式。该药物组合物还含有注射用水、盐水溶液、葡萄糖水溶液、注射/输注用盐水、注射/输注用葡萄糖、格林氏溶液或含有乳酸盐的格林氏溶液。

式I、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ所示的化合物及其盐、水合物或药物组合物、前药在制备激酶抑制剂中的用途。

式I、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ所示的化合物及其盐、水合物或药物组合物、前药在制备治疗肿瘤药物中的用途。所述的肿瘤包括乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌等实体瘤。

本发明还提供了上述式I、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ所示的及其盐、水合物或药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。所述的口服或静脉注射制剂至少包含一种式I、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ所示的化合物及其盐、水合物或药物组合物以及任意的赋形剂和/或佐剂。

本发明涉及吲唑类衍生物作为激酶抑制剂，其具有能够治疗乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌、急性髓系白血病等多种实体瘤以及血液瘤等多种肿瘤疾病的用途。这些化合物作为激酶抑制剂用于治疗人的多种肿瘤。本发明提供的一系列化合物具有较好的抗肿瘤活性和较低的毒性。

附图说明

图1 F20对MDA-MB-468和MDA-MB-231中心粒紊乱的相对细胞数统计柱状图。统计结果以平均值±方差表示(n＝3)，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001。

图2 F20对体内移植瘤模型MDA-MB-468和MDA-MB-231的抗肿瘤效果图。MDA-MB-468细胞(A)和MDA-MB-231细胞(B)分别接种到小鼠的右侧背部皮下，每三天测量一次肿瘤体积大小。N＝6，统计结果以平均值±方差表示，***代表t检验P值小于0.001。

图3 F20在肿瘤组织中对相关蛋白表达的影响。在MDA-MB-231模型治疗终点，我们将肿瘤组织进行了包埋切片，并进行免疫组化染色，其中Ki67为细胞增殖相关蛋白，cleavedcaspase 3为凋亡激活相关蛋白，cyclinB1为周期相关蛋白，通过软件Gradprism分析统计而来，统计结果以平均值±方差表示(n＝3)，*代表P<0.05，**代表P<0.01，***代表P<0.001。

具体实施方式

实施例1化合物F1：反式-4-(3-苯乙烯基-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

中间体4-2c，4-3c，4-4c的合成

化合物F1～F20的中间体4-2b，G4～G6的中间体4-3b，G7～G8的中间体4-4b合成路线及方法如下：

第一步，4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(4-2a)的制备

将2-氨基-4-氯嘧啶(1.62g,12.5mmol,1.0eq.),1H-吲唑-6-硼酸频哪醇酯(3.66g,15mmol,1.2eq.)溶于1,4-二氧六环(100mL)中，加入乙酸钾(2.34g,30mmol,2.4eq.)，Pd(dppf)Cl₂(1.46g,2mmol,5mmol％)。N₂保护下升温至100℃反应3h。TLC监测反应完毕后将反应液减压蒸除，剩余物用EA溶解后经硅藻土过滤，滤液依次用水和饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁干燥后浓缩，柱层析(DCM:CH₃OH＝12:1)后得到棕色固体1.74g(收率55％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.17(s,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝5.1Hz,1H),8.10(s,1H)7.86(d,J＝8.6Hz,1H),7.71(d,J＝8.6Hz,1H),7.64(d,J＝5.3Hz,1H),6.73(s,2H)；MS m/z(ESI)：234.6[M+Na]⁺。

4-3a与4-4a采用相似的反应条件制得。

4-(5-甲基-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(4-3a)，棕色固体(收率49.7％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.06(s,1H),8.30(d,J＝5.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.63(s,1H),7.50(s,1H),6.73(d,J＝5.1Hz,1H),6.66(s,2H),2.40(s,3H)；MS m/z(ESI)：226.1[M+H]⁺。

4-(1H-吲唑-6-基)-N-甲基嘧啶-2-胺(4-4a)，棕色固体(收率41.4％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.35–8.24(m,2H),8.02(s,1H)7.86(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.64(d,J＝5.3Hz,1H),2.88(s,3H)；MS m/z(ESI)：248.3[M+Na]⁺。

第二步，4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(4-2b)的制备

将4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(1.7g,8.0mmol,1.0eq.)溶于DMF(15mL)中，加入碳酸钾(2.24g,16mmol,2.0eq.)。将I₂溶于于DMF(2mL)中滴加至反应液，65℃下反应10小时。TLC监测反应完毕后将反应液倒入保险粉(3.0g)和碳酸钾(1.1g)的水溶液(50mL)中，有白色固体析出。搅拌30min后过滤，得浅黄色固体2.37g(收率88％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.20(s,1H),8.30(d,J＝5.0Hz,1H),7.85(d,J＝8.6Hz,1H)；7.66(s,1H),7.41(s,1H),6.79(d,J＝5.1Hz,1H),6.74(s,2H)；MS m/z(ESI)：360.4[M+Na]⁺。

4-3b与4-4b采用相似的反应条件制得。

4-(3-碘-5-甲基-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(4-3b)，黄色固体(收率73.7％).¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.26(s,1H),8.30(d,J＝5.0Hz,1H),7.63(s,1H),7.50(s,1H),6.83(d,J＝5.1Hz,1H),6.71(s,2H),2.39(s,3H)；MS m/z(ESI):352.0[M+H]⁺。

4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)-N-甲基嘧啶-2-胺(4-4b)，白色固体(收率81.0％).¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.41(d,J＝5.2Hz,1H),8.35–8.24(m,2H),7.96(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(d,J＝5.3Hz,1H),2.91(s,3H)；MS m/z(ESI):352.1[M+H]⁺。

中间体4-5c合成

化合物G1～G3的中间体4-5c合成路线及方法如下：

第一步，N-(4-氯嘧啶-2-基)乙酰胺(4-5a)的合成

将2-氨基-4-氯嘧啶(1.94g,15mmol)和乙酸酐(100mL)加入反应瓶中，140℃下回流，反应液澄清后继续反应0.5h，TLC监测反应完毕。将反应液减压浓缩，剩余物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，EA萃取。有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，柱层析(Pet:EA＝2:1)得到浅黄色固体1.37g(收率53.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.83(s,1H),8.61(d,J＝5.3Hz,1H),7.32(d,J＝5.2Hz,1H),2.18(s,3H).MS m/z(ESI)：172.1[M+H]⁺。

第二步，N-(4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(4-5b)的合成

将N-(4-氯嘧啶-2-基)乙酰胺(858mg,5mmol,1.0eq.)，1H-吲唑-6-硼酸频哪醇酯(1.46g,6mmol,1.2eq.)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入乙酸钾(1.18g,12mmol,2.4eq.)，Pd(dppf)Cl₂(180mg,0.25mmol,5mmol％)。N₂保护下升温至100℃反应3h。TLC监测反应完毕后将反应液减压蒸除，剩余物用EA溶解后经硅藻土过滤，滤液依次用水和饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁干燥后浓缩，柱层析(Pet:EA＝1:1)后得到棕色固体697mg(收率55.1％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.37(s,1H),10.61(s,1H),8.72(d,J＝5.3Hz,1H),8.43(s,1H),8.17(s,1H),7.94–7.85(m,2H),7.82(d,J＝5.2Hz,1H),2.29(s,3H)；MS m/z(ESI)：254.1[M+H]⁺。

第三步，N-(4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(4-5c)的合成

将N-(4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(0.94g,3.7mmol,1.0eq.)溶于DMF(8mL)中，加入碳酸钾(1.02g,7.4mmol,2.0eq.)。将I₂溶于于DMF(2mL)中滴加至反应液，65℃下反应10小时。TLC监测反应完毕后将反应液倒入保险粉和碳酸钾的水溶液(20mL)中，有白色固体析出。搅拌30min后过滤，得浅黄色固体1.12g(收率80.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.85(s,1H),10.63(s,1H),8.73(d,J＝5.2Hz,1H),8.43(s,1H),8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.84(d,J＝5.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),2.28(s,3H)；MS m/z(ESI)：402.0[M+Na]⁺。

将4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺(120mg,0.36mmol,1.0eq.)，反式-β-苯乙烯硼酸频哪酯(99mg,0.43mmol,1.2eq.)，碳酸铯(234mg,0.72mmol,2.0eq.)，加入1,4-二氧六环:水＝4:1(15mL)的混合溶剂中，加入Pd(dppf)Cl₂(29mg,0.04mmol,10mmol％)，N₂保护下升温至100℃反应8h。TLC监测反应完毕后将反应液减压蒸除，剩余物用EA溶解后经硅藻土过滤，滤液依次用水和饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁干燥后浓缩，柱层析(DCM:CH₃OH＝10:1)后得到浅黄色固体(收率33.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.42(s,1H),8.38(d,J＝5.1Hz,1H),8.34–8.25(m,2H),7.96–7.87(m,1H),7.75(d,J＝7.7Hz,2H),7.59(d,J＝3.2Hz,2H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.31(t,J＝7.3Hz,1H),7.26(d,J＝5.1Hz,1H),6.73(s,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.32,164.12,159.53,142.84,142.04,137.55,135.66,130.15,129.19,128.20,126.95,122.32,121.40,120.79,120.05,109.28,106.77；HRMS m/z(ESI-TOF):314.1395[M+H]⁺。

反式-苯乙烯基硼酸频哪醇酯采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色油状液体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.60–7.54(m,2H),7.41–7.30(m,4H),6.16(d,J＝18.4Hz,1H),1.24(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ149.68,137.34,129.61,129.16,127.49,83.49,25.10；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₄H₂₀BO₂[M+H]⁺:231.1557,found:231.1537.

实施例2化合物F2：反式-4-(3-(4-甲氧基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F2的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和反式-4-甲氧基苯乙烯基硼酸频哪醇酯为原料。黄色固体(收率40.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.31(s,1H),8.34(d,J＝5.2Hz,1H),8.26(t,J＝4.1Hz,2H),7.88(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝16.7Hz,1H),7.42(d,J＝16.7Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝8.6Hz,2H),6.72(s,2H),3.80(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.13,159.58,159.54,143.12,142.00,135.57,130.21,129.88,128.29,121.43,119.85,118.54,114.66,109.20,106.69,55.65.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₀H₁₈N₅O[M+H]⁺:344.1512,found:344.1506.

反式-4-甲氧基苯乙烯基硼酸频哪醇酯采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.58–7.47(m,2H),7.26(d,J＝18.4Hz,1H),6.99–6.84(m,2H),5.97(d,J＝18.4Hz,1H),3.77(s,3H),1.24(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ160.57,149.36,130.15,129.00,114.55,83.30,55.63,25.09；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd for C₁₅H₂₂BO₃[M+H]⁺:261.1663,found:261.1537.

实施例3化合物F3：反式-4-(3-(3-(甲胺基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F3的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和反式-3-甲胺基苯乙烯基硼酸频哪醇酯为原料。棕色固体(收率29.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.39(s,1H),8.35–8.23(m,2H),7.91(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.48(s,2H),7.25(d,J＝5.1Hz,1H),7.14(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(d,J＝7.5Hz,1H),6.88(t,J＝1.9Hz,1H),6.74(s,2H),6.53(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),5.66(d,J＝5.1Hz,1H),2.76(d,J＝4.9Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.34,164.15,159.51,150.68,143.03,142.06,138.03,135.62,131.25,129.60,122.25,121.43,119.98,119.92,114.78,112.44,109.64,109.27,106.78,30.30.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₀H₁₉N₆[M+H]⁺:343.1672,found:343.1678.

反式-3-甲胺基苯乙烯基硼酸频哪醇酯采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.21(d,J＝18.4Hz,1H),7.08(t,J＝7.8Hz,1H),6.78–6.72(m,1H),6.69(t,J＝2.0Hz,1H),6.53(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),6.03(d,J＝18.4Hz,1H),5.65(s,1H),2.69(d,J＝1.6Hz,3H),1.24(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ150.83,150.59,137.92,129.55,115.20,113.54,110.05,83.36,30.14,25.09；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd for C₁₅H₂₃BNO₂[M+H]⁺:260.1823,found:260.1531.

实施例4化合物F4：反式-4-(3-(2-(1H-吲哚-6-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F4的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-6-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吲哚为原料。棕色固体(收率41.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.30(s,1H),11.19(s,1H),8.35(d,J＝5.1Hz,1H),8.31(d,J＝8.6Hz,1H),8.27(s,1H),7.90(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.72–7.61(m,2H),7.57(d,J＝8.2Hz,1H),7.54–7.43(m,2H),7.38(t,J＝2.7Hz,1H),7.25(d,J＝5.3Hz,1H),6.72(s,2H),6.45(t,J＝2.4Hz,1H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.23,159.57,142.05,136.72,135.55,131.98,130.72,128.20,126.83,121.53,120.72,119.86,118.02,117.90,110.78,109.22,106.74,101.86；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₁H₁₆N₆Na[M+Na]⁺:375.1334,found:375.1325.

(E)-6-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吲哚采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.23(s,1H),7.58–7.47(m,2H),7.45–7.36(m,2H),7.29(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.44(d,J＝2.5Hz,1H),6.04(d,J＝18.3Hz,1H),1.25(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ151.49,136.46,130.67,129.19,127.50,120.61,118.24,111.54,101.82,83.27,25.13；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₆H₂₀BNO₂Na[M+Na]⁺:292.1485,found:292.1488.

实施例5化合物F5：反式-4-(3-(2-(吲哚啉-6-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F5的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率23.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.32(s,1H),8.37–8.32(m,1H),8.29–8.19(m,2H),7.92–7.85(m,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,2H),7.24(d,J＝5.1Hz,1H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),6.87(d,J＝7.5Hz,2H),6.72(s,2H),5.55(s,1H),3.45(t,J＝8.4Hz,2H),2.92(t,J＝8.4Hz,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.07,160.57,154.05,150.48,143.53,138.16；131.98,130.72,128.20,126.83,120.72,119.86,118.02,117.31,110.78,109.22,106.74,103.86；46.68,30.27；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd for C₂₁H₁₉N₆[M+H]⁺:355.1672,found:355.1669.

实施例6化合物F6：反式-6-(2-(6-(2-氨基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)吲哚啉-2-酮

制备化合物F6的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率22.9％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.41(s,1H),9.55(s,1H),8.37(m,1H),8.27(d,1H),7.72–7.69(m,1H),7.54(d,2H),7.39(d,J＝5.1Hz,1H),7.21(d,J＝5.1Hz,1H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),6.87(d,J＝7.5Hz,2H),6.72(s,2H),3.80(t,J＝8.4Hz,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ181.54,164.25,154.19,159.53,151.44,146.91,145.18,140.39,138.25,133.98,131.44,130.13,127.77,122.89,121.11,119.53,114.56,109.08,106.66,31.73；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₁H₁₆N₆ONa[M+Na]⁺:391.1284,found:391.1296.

实施例7化合物F7：反式-4-(3-(2-(吡啶-4-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F7的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶为原料。棕色固体(收率45.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.59(s,1H),8.49–8.23(m,3H),8.01–7.89(m,2H),7.87(s,1H),7.77(s,2H),7.54(d,J＝16.7Hz,2H),7.26(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.31,163.99,159.59,150.43,142.21,142.07,135.83,127.48,125.32,122.48,121.38,120.43,109.41,106.77；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₁₈H₁₄N₆Na[M+Na]⁺:337.1178,found:337.1171.

(E)-4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

棕褐色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.77(d,J＝2.1Hz,1H),8.53(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.05(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),7.46–7.28(m,2H),6.32(d,J＝18.5Hz,1H),1.26(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ150.32,149.36,146.24,133.83,132.84,124.23,83.64,25.08；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₃H₁₉BNO₂[M+H]⁺:232.1510,found:232.1667.

实施例8化合物F8：反式-4-(3-(2-(吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F8的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶为原料。棕色固体(收率50.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.53(s,1H),9.02(s,1H),8.59(s,1H),8.38(s,1H),8.36–8.23(m,2H),7.93(d,J＝8.6Hz,1H),7.76(d,J＝16.8Hz,1H),7.68–7.46(m,3H),7.29(d,J＝5.1Hz,1H),6.94–6.70(m,2H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.31,164.01,159.14,148.41,142.54,142.01,135.62,133.61,126.45,123.06,122.40,121.42,120.24,109.44,106.78；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₈H₁₅N₆[M+H]⁺:315.1359,found:315.1362.

(E)-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.77(d,J＝2.1Hz,1H),8.53(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.05(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),7.46–7.28(m,2H),6.32(d,J＝18.5Hz,1H),1.26(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ150.32,149.36,146.24,133.83,132.84,124.23,83.64,25.08；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₁₃H₁₉BNO₂[M+H]⁺:232.1510,found:232.1667.

实施例9化合物F9：反式-4-(3-(2-(6-吗啉基吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F9的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-4-(5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)吗啉为原料。浅黄色固体(收率54.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.31(s,1H),8.42(d,J＝2.3Hz,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.25(d,J＝8.6Hz,2H),8.03(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.44(d,J＝3.4Hz,2H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),6.90(d,J＝9.0Hz,1H),6.72(s,2H),3.72(t,J＝4.8Hz,4H),3.51(t,J＝4.8Hz,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.27,159.57,158.89,147.59,143.20,142.00,135.57,134.71,127.14,123.34,122.19,121.41,119.81,117.93,109.20,107.51,106.71,66.41,45.54；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₂H₂₂N₇O[M+H]⁺:400.1887,found:400.1904.

(E)-4-(5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)吗啉采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

白色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.26(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.21(d,J＝18.4Hz,1H),6.83(d,J＝9.0Hz,1H),5.93(d,J＝18.4Hz,1H),3.69(t,J＝4.9Hz,4H),3.57–3.45(m,4H),1.23(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ159.50,148.65,146.80,135.19,123.03,107.25,83.28,66.37,45.29,25.10；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd forC₁₇H₂₆BN₂O₃[M+H]⁺:317.2037,found:317.2035.

实施例10化合物F10：反式-4-(3-(2-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F10的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率21.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.34(s,1H),8.46–8.32(m,2H),8.32–8.19(m,2H),7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.6Hz,1H),7.51–7.38(m,2H),7.24(d,J＝5.3Hz,1H),6.86(d,J＝9.0Hz,1H),6.73(s,2H),3.58(s,1H),3.53–3.43(m,4H),2.81(s,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,164.17,159.57,158.99,147.68,143.15,142.10,135.55,134.57,127.28,122.62,122.16,121.42,119.79,117.39,109.31,107.37,106.71,46.11,45.78；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd for C₂₂H₂₂N₈Na[M+Na]⁺:421.1865,found:421.1874.

实施例11化合物F11：(E)-4-(3-(2-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F11的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率34.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.31(s,1H),8.44(d,J＝2.4Hz,1H),8.35(d,J＝5.3Hz,1H)8.21–8.19(m,2H),7.97(d,J＝8.7Hz,2.4Hz 1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.43(m,2H),7.24(d,J＝5.3Hz,1H),6.88(d,J＝9.0Hz,1H),6.75(s,2H),3.52–3.44(m,4H),2.79(s,4H),2.31(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,164.19,159.47,158.99,147.68,143.15,142.10,136.55,134.57,127.28,122.62,122.16,121.42,119.81,117.43,109.31,107.37,47.73,46.26,46.01；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₅N₈[M+H]⁺:413.2203,found:413.2212.

实施例12化合物F12：反式-4-(5-(2-(6-(2-氨基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)吡啶-2-基)叔丁基氧基-1-哌嗪

制备化合物F12的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-4-(5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)哌嗪-1-叔丁氧羰酯为原料。黄色固体(收率47.6％)¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.29(s,1H),8.41(d,J＝2.4Hz,1H),8.34(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝7.7Hz,2H),8.02(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.87(dd,J＝8.7,1.3Hz,1H),7.43(d,J＝3.6Hz,2H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.9Hz,1H),6.71(s,2H),3.56(dd,J＝6.8,3.7Hz,4H),3.44(dd,J＝6.6,3.8Hz,4H),1.43(s,9H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,164.14,159.57,158.50,154.42,147.61,143.20,141.99,135.57,134.78,127.13,123.17,122.19,119.81,117.89,109.20,107.72,106.70,79.51,44.85,28.56；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₇H₃₁N₈O₂[M+H]⁺:499.2571,found:499.2551.

(E)-4-(5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶-2-基)哌嗪-1-叔丁氧羰酯采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.25(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.20(d,J＝18.4Hz,1H),6.84(d,J＝9.0Hz,1H),5.93(d,J＝18.4Hz,1H),3.60–3.51(m,4H),3.41(dd,J＝6.6,3.8Hz,4H),1.43(s,9H),1.23(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ159.10,154.37,148.69,146.79,135.25,122.85,107.41,83.28,79.51,40.46,28.53,25.11；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₂H₃₅BN₃O₄[M+H]⁺:416.2721,found:416.2709.

实施例13化合物F13：反式-4-(3-(2-(6-(2-甲基-2H-四唑-5-基)吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F13的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率25.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.37(s,1H),8.39(d,2H),8.19(d,J＝8.3Hz,1H),7.97(d,J＝5.1Hz,1H),7.88(d,1H),7.78(s,1H),7.69(d,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),6.98(d,2H),6.72(s,2H),4.49(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.29,163.26,155.18,150.26,149.53,148.07,146.44,143.91,143.27,137.73,134.83,127.68,124.03,121.59,121.51,120.73,115.36,107.85,39.41；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₀H₁₇N₁₀[M+H]⁺:397.1638,found:397.1625.

实施例14化合物F14：反式-4-(3-(2-(6-(1-甲基-1H-四唑-5-基)吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F14的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-2-(1-甲基-1H-四氮唑-5-yl)-5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶为原料。棕色固体(收率23.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.49(s,1H),8.42(m,1H),8.36(d,J＝8.5Hz,1H),8.27(d,1H),8.07–8.02(d,J＝5.4Hz,1H),7.91(d,1H),7.80(s,1H),7.69(d,1H),7.42(d,J＝8.5Hz,1H),6.94(d,J＝5.4Hz,1H),6.90(s,1H),6.71(s,2H),4.46(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.15,163.19,155.01,150.94,149.14,146.37,143.09,142.31,137.58,135.24,134.64,125.39,124.18,122.37,121.86,115.65,108.62,37.27；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₀H₁₇N₁₀[M+H]⁺:397.1638,found:397.1631.

(E)-2-(1-甲基-1H-四氮唑-5-yl)-5-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)吡啶采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

白色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.04(d,J＝2.1Hz,1H),8.36(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),8.30–8.25(m,1H),7.48(d,J＝18.5Hz,1H),6.51(d,J＝18.5Hz,1H),4.47(s,3H),1.31(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ152.18,149.41,145.03,144.56,135.52,134.41,124.46,83.84,37.17,25.10；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₅H₂₁BN₅O₂[M+H]⁺:314.1789,found:314.1902.

实施例15化合物F15：反式-4-(3-(4-吗啉基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F15的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率47.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.18(s,1H),8.25(d,J＝8.5Hz,1H),8.00(d,J＝5.3Hz,1H),7.72(s,1H),7.59(d,J＝8.3Hz,2H),7.51–7.32(m,3H),7.03–6.94(m,2H),6.87(dd,1H),6.81(s,2H),3.75(p,J＝2.5Hz,4H),3.17(p,J＝3.2Hz,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,159.57,150.96,148.99,142.82,137.63,136.40,129.90,129.77,126.79,121.90,114.91,108.43,106.93,66.69,53.66；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₃N₆O[M+H]⁺:399.1934,found:399.1947.

实施例16化合物F16：反式-4-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F16的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率24.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.27(s,1H),8.34(d,J＝5.2Hz,1H),8.24(d,J＝8.7Hz,2H),7.87(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),7.45(d,J＝16.6Hz,1H),7.35(d,J＝16.7Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),6.72(s,2H),3.21(t,J＝4.8Hz,4H),2.50–2.42(m,4H),2.25(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.15,159.57,150.96,135.52,130.22,127.97,127.87,121.44,119.75,117.22,115.53,109.17,106.68,54.93,48.03,46.14；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₆N₇[M+H]⁺:412.2250,found:412.2243.

实施例17化合物F17：反式-4-(3-(4-(吗啉甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F17的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和反式-4-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基)吗啉为原料。浅棕色固体(收率41.7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.39(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.31–8.22(m,2H),7.90(dd,J＝8.7,1.3Hz,1H),7.69(d,J＝7.9Hz,2H),7.55(s,2H),7.34(d,J＝7.9Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),3.48(s,2H),2.37(t,J＝4.6Hz,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ160.93,148.99,142.82,142.24,137.93,137.19,136.40,129.90,129.77,126.79,121.90,120.55,120.31,110.91,108.43,105.93,66.69,62.67,53.66；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₅N₆O[M+H]⁺:413.2091,found:413.2095.

反式-4-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基)吗啉采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.52(d,J＝7.3Hz,2H),7.39–7.20(m,3H),6.21–6.00(m,1H),3.66–3.50(m,4H),3.45(s,2H),2.34(s,4H),1.39–1.13(m,12H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ149.48,139.51,136.20,129.65,127.38,83.46,66.65,62.55,53.63,25.09；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₉H₂₉BNO₃[M+H]⁺:330.2241,found:330.2074.

实施例18化合物F18：反式-4-(3-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F18的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和反式-1-甲基-4-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基)哌嗪为原料。棕色固体(收率28.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(t,J＝4.2Hz,2H),7.90(d,J＝8.6Hz,1H),7.69(d,J＝7.8Hz,2H),7.55(s,2H),7.33(d,J＝7.7Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.49(s,2H),3.33(s,4H),2.44(s,4H),2.25(s,3H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ159.52,138.02,136.35,135.63,135.28,132.07,130.01,129.81,129.33,129.25,126.81,121.42,120.08,119.30,106.78,63.20,54.68,52.23,45.41；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₅H₂₈N₇[M+H]⁺:426.2407,found:426.2410.

反式-1-甲基-4-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基)哌嗪采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

棕黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.52(d,J＝7.3Hz,2H),7.39–7.20(m,3H),6.21–6.00(m,1H),3.66–3.50(m,4H),3.45(s,2H),2.34(s,4H),1.39–1.13(m,12H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ149.34,138.85,136.49,129.75,127.50,126.56,83.50,60.99,53.10,49.63,42.62,25.11；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₀H₃₂BN₂O₂[M+H]⁺:343.2558,found:343.2562.

实施例19化合物F19：反式-4-(3-(4-((4-(甲磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F19的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-1-(甲磺酰基)-4-(4-(2-(4,4,5,5-甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)哌嗪为原料。浅棕色固体(收率31.9％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(t,J＝4.2Hz,2H),7.90(d,J＝8.7Hz,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,2H),7.56(s,2H),7.35(d,J＝7.8Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.73(s,2H),3.55(s,2H),3.13(t,J＝4.7Hz,4H),2.88(s,3H),2.48(d,J＝5.1Hz,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,159.60,142.02,135.64,129.91,129.69,126.86,122.28,121.40,120.52,120.02,109.26,106.71,61.74,52.27,45.96,34.07；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₅H₂₈N₇O₂S[M+H]⁺:490.2026,found:490.2037.

(E)-1-(甲磺酰基)-4-(4-(2-(4,4,5,5-甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)哌嗪采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅白色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.58(d,J＝7.8Hz,2H),7.39–7.29(m,3H),6.16(d,J＝18.4Hz,1H),3.57(s,2H),3.15(t,J＝4.8Hz,4H),2.91(s,3H),2.50(t,J＝4.8Hz,4H),1.29(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ149.44,139.54,136.30,129.58,127.44,83.48,61.61,52.23,45.92,34.04,25.10；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₀H₃₂BN₂O₄S[M+H]⁺:407.2177,found:407.2177.

实施例20化合物F20：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F20的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-1-(甲磺酰基)-4-(4-(2-(4,4,5,5-甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)哌嗪为原料为原料。浅棕色固体(收率36.8％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(dd,J＝4.9,3.4Hz,2H),7.90(dd,J＝8.7,1.4Hz,1H),7.70(d,J＝7.9Hz,2H),7.56(d,J＝2.3Hz,2H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),7.25(d,J＝5.3Hz,1H),6.71(s,2H),3.51(s,2H),2.23(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,164.03,159.62,142.64,142.03,138.79,135.72,131.77,129.17,127.30,122.34,122.09,121.37,120.17,109.32,106.71,60.11,42.39；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₂H₂₃N₆[M+H]⁺:371.1985,found:371.1978.

反式-4-(N,N-二甲基-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄胺采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

青绿色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.68(d,J＝8.0Hz,2H),7.59–7.53(m,2H),7.33(d,J＝18.5Hz,1H),6.23(d,J＝18.5Hz,1H),4.32(s,2H),2.72(s,6H),1.25(s,12H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ148.73,138.38,131.89,131.52,127.85,83.61,59.58,42.13,25.11；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₇H₂₇BNO₂[M+H]⁺:288.2136,found:288.2411.

实施例21化合物F21：反式-4-(3-(3-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F21的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和反式-3-(N,N-二甲基-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄胺为原料为原料。浅棕色固体(收率28.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.43(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.33–8.23(m,2H),7.90(d,J＝8.5Hz,1H),7.71–7.60(m,2H),7.57(s,2H),7.37(t,J＝7.6Hz,1H),7.31–7.18(m,2H),6.73(s,2H),3.51(s,2H),2.23(s,6H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.28,164.09,159.60,137.49,135.64,130.11,129.07,128.83,127.56,125.72,122.25,121.48,120.84,120.05,106.70,63.56,45.24；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd for C₂₂H₂₃N₆[M+H]⁺:371.1985,found:371.1981.

反式-3-(N,N-二甲基-3-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄胺采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.82(d,J＝1.8Hz,1H),7.66(dt,J＝7.3,1.7Hz,1H),7.54–7.42(m,2H),7.31(d,J＝18.4Hz,1H),6.22(d,J＝18.4Hz,1H),4.33(s,2H),2.73(s,6H),1.25(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ148.84,137.86,132.02,131.36,129.84,129.73,128.78,83.61,59.85,42.19,25.09；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcdfor C₁₇H₂₇BNO₂[M+H]⁺:288.2136,found:288.2137.

实施例22化合物F22：反式-4-(3-(3-(吗啉甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F22的反应条件与化合物F1类似。浅棕色固体(收率34.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.39(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.30(d,J＝8.6Hz,1H),8.27(d,J＝1.3Hz,1H),7.90(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.64(d,J＝9.2Hz,2H),7.56(s,2H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),7.28–7.23(m,2H),6.72(s,2H),3.60(t,J＝4.6Hz,4H),3.51(s,2H),2.40(t,J＝4.5Hz,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.25,164.11,159.60,142.85，142.04,137.48,135.65,130.14,129.10,127.74,122.25,121.49,120.88,120.06,109.27,106.73,99.98,66.59,53.62,40.49；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₅N₆O[M+H]⁺:413.2091,found:413.2087.

实施例23化合物F23：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-3-氟苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F23的反应条件与化合物F1类似。浅褐色固体(收率35.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.51(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.32–8.25(m,2H),7.91(d,J＝8.6Hz,1H),7.72–7.61(m,2H),7.60–7.52(m,2H),7.47(t,J＝7.8Hz,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.73(s,2H),3.68(s,2H),2.32(s,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.05,159.61,154.56,135.69,134.37,132.73,130.44,128.56,123.00,122.39,121.37,120.16,116.85,113.19(d,J＝24.4Hz),109.32,106.71,52.48,45.94；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd forC₂₂H₂₂FN₆[M+H]⁺:389.1891,found:389.1906.

实施例24化合物F24：反式-4-(3-(3-氯-4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F24的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率30.4％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.44(s,1H),8.42–8.20(m,3H),7.90(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.87–7.81(m,1H),7.76–7.61(m,2H),7.58–7.45(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.71(s,2H),3.53(s,2H),2.24(s,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.26,164.07,159.61,152.95,146.10,142.10,138.48,135.68,134.31,128.33,127.62,125.23,121.45,120.13,106.72,60.72,45.42；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₂H₂₂ClN₆[M+H]⁺:405.1595,found:405.1584.

实施例25化合物F25：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-3-甲基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F25的反应条件与化合物F1类似。黄色固体(收率28.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.38(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.30–8.23(m,2H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.59–7.46(m,4H),7.29–7.22(m,2H),6.72(s,2H),3.40(s,2H),2.37(s,3H),2.19(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.11,159.59,137.86,135.62,130.03,128.66,124.12,121.39,120.00,106.71,61.60,45.52,19.27；HRMS(ESI-TOF)m/z CalcdforC₂₃H₂₄N₆Na[M+Na]⁺:407.1960,found:407.1971.

实施例26化合物F26：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-3-甲氧基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F26的反应条件与化合物F1类似。浅棕色固体(收率17.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.44(s,1H),8.40–8.26(m,3H),7.91(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.67(d,J＝16.7Hz,1H),7.57(d,J＝16.7Hz,1H),7.44(s,1H),7.41–7.32(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.93(s,3H),3.83(s,2H),2.46(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.07,159.61,158.41,135.69,131.96,129.89,122.27,121.45,120.06,119.26,109.37,106.73,63.26,56.16,44.19；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₅N₆O[M+H]⁺:401.2091,found:401.2096.

实施例27化合物F27：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-2-氟苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F27的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率30.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.47(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(s,1H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.96–7.84(m,2H),7.66(d,J＝16.8Hz,1H),7.57(d,J＝16.8Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.22–7.14(m,2H),6.72(s,2H),3.44(s,2H),2.18(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.04,161.33,159.61,158.86,149.15,142.62,135.72,127.66,125.38,123.52,122.35,121.68,121.01,120.28,116.14(d,J＝22.0Hz),106.70,62.92,45.40；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₂H₂₂FN₆[M+H]⁺:389.1891,found:389.1885.

实施例28化合物F28：反式-4-(3-(2-氯-4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F28的反应条件与化合物F1类似。浅棕色固体(收率27.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,2H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.95–7.88(m,2H),7.74–7.61(m,2H),7.56(d,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.48(s,2H),2.45(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.05,159.60,158.86,142.60,142.01,135.69,134.77,134.35,131.62,128.35,127.64,125.21,122.38,122.07,121.45,120.12,109.29,106.71,66.68,46.71；Brown solid；yield 25.6％；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcdfor C₂₂H₂₂ClN₆[M+H]⁺:405.1595,found:405.1605.

实施例29化合物F29：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-2-甲基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F29的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率36.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.42(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(s,1H),8.20(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝16.4Hz,1H),7.45(d,J＝16.5Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.18(d,J＝7.1Hz,2H),6.72(s,2H),3.41(s,2H),2.46(s,3H),2.18(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.10,159.60,135.68,135.63,134.99,131.39,127.42,127.28,125.29,122.32,121.17,120.13,106.68,63.48,45.34,20.07；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₅N₆[M+H]⁺:385.2141,found:385.2157.

实施例30化合物F30：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-2-甲氧基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F30的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率28.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.35(s,1H),8.34(d,J＝5.2Hz,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.78–7.69(m,2H),7.54(d,J＝16.8Hz,1H),7.23(d,J＝5.3Hz,1H),7.00(d,J＝1.5Hz,1H),6.93(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),6.71(s,2H),3.90(s,3H),3.43(s,2H),2.19(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.24,164.13,159.59,156.98,135.61,126.61,124.69,122.31,121.66,120.99,120.06,112.16,106.72,63.62,56.07,45.27.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₄N₆ONa[M+Na]⁺:423.1910,found:423.1924.

实施例31化合物F31：反式-4-(3-(3-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F31的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(35.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.46(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.32–8.24(m,2H),7.91(d,J＝8.5Hz,1H),7.83(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝16.7Hz,1H),7.53(d,J＝16.7Hz,1H),7.48(d,J＝7.9Hz,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.57(s,2H),2.45(s,4H),2.35(s,4H),2.17(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.06,159.60,142.06,138.26,135.68,135.22,134.23,131.47,128.38,127.60,125.19,122.36,121.93,121.45,120.11,109.35,106.71,58.92,55.18,53.09,46.16.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₅H₂₇ClN₇[M+H]⁺:460.2017,found:460.2028.

实施例32化合物F32：反式-4-(3-(3-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F32的反应条件与化合物F1类似。浅黄色固体(收率33.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.44(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.33–8.26(m,2H),7.91(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),7.67(d,J＝16.7Hz,1H),7.57(d,J＝16.7Hz,1H),7.44(s,1H),7.41–7.32(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.83(s,2H),3.37(sbr,7H),2.46(s,3H),2.29(s,4H).¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.07,159.61,158.41,145.37,141.64,135.69,131.96,129.89,122.27,121.45,120.06,119.26,109.37,106.73,63.06,56.32,56.16,44.19,20.07.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₆H₂₉N₇Na[M+Na]⁺:462.2382,found:462.2398.

实施例33化合物F33：反式-4-(3-(3-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F33的反应条件与化合物F1类似。浅棕色固体(收率29.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.41(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.32–8.26(m,2H),7.90(dd,J＝8.6,1.5Hz,1H),7.57(d,J＝10.6Hz,2H),7.38–7.36(m,1H),7.32–7.28(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.89(s,3H),3.50(s,2H),3.39(s,4H),2.28(s,4H),1.23(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.09,159.60,158.16,137.73,135.65,130.58,130.24,121.47,119.99,119.17,109.14,106.71,99.98,63.26,55.99,54.81,52.48,45.52.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₆H₃₀N₇O[M+H]⁺:456.2513,found:456.2507.

实施例34化合物F34：反式-4-(3-(2-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F34的反应条件与化合物F1类似。浅黄色固体(收率25.8％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.28(s,1H),8.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.90(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.68(d,J＝16.4Hz,1H),7.44(d,J＝16.5Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.18(d,J＝9.5Hz,2H),6.71(s,2H),3.46(s,2H),3.39(s,3H),2.46(s,7H),2.29(s,4H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.08,159.61,145.87,145.75,145.29,142.97,135.69,135.64,131.78,131.55,127.41,125.33,121.16,120.14,116.72,109.34,109.28,106.68,63.26,62.03,54.74,52.34,20.09；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₆H₂₉N₇Na[M+Na]⁺:462.2382,found:462.2376.

实施例35化合物F35：反式-(4-(2-(6-(2-氨基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)-3-甲基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮

制备化合物F35的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率26.6％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.46(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(s,1H),8.22(d,J＝8.2Hz,1H),7.89(dd,J＝18.1,8.2Hz 1H),7.70(d,J＝16.5Hz,1H),7.54(d,J＝16.5Hz 2H),7.32-7.19(m,3H),6.72(s,2H),3.60(m,4H),2.46(s,3H),2.34(s,4H),2.21(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ169.29,164.27,164.05,159.62,137.44,136.52–136.01(m),135.70,135.31,129.48,126.71,125.37,122.81,122.41,121.16,120.28,109.32,106.70,46.06,19.98；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₆H₂₈N₇O[M+H]⁺:454.2356,found:454.2373.

实施例36化合物F36：反式-(4-(2-(6-(2-氨基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)-3-甲基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮

制备化合物F36的反应条件与化合物F1类似。浅黄色固体(收率22.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.43(s,1H),8.40–8.32(m,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J＝8.7Hz,1H),7.95–7.83(m,2H),7.76(dd,J＝16.8,2.8Hz,1H),7.64(dd,J＝16.8,2.7Hz,1H),7.29–7.21(m,1H),7.10–6.97(m,2H),6.72(s,2H),3.94(d,J＝2.7Hz,3H),3.60(s,4H),2.35(s,4H),2.22(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ169.06,164.27,164.07,159.61,156.77,136.70,135.67,127.04,126.74,123.91,122.97–122.31(m),120.97,120.18,119.65,110.64,109.36,106.70,56.34,46.03,30.89,25.43.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₆H₂₇N₇O₂Na[M+Na]⁺:492.2124,found:492.2136.

实施例37化合物F37：反式-4-(3-(3-氟-4-(吗啉甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F37的反应条件与化合物F1类似，采用4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺和(E)-4-(2-氟-4-(2-(4,4,5,5-甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)吗啉为原料。棕色固体(收率35.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.45(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.91(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.69–7.50(m,4H),7.42(t,J＝7.9Hz,1H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.58(t,J＝4.6Hz,4H),3.53(s,2H),2.40(t,J＝4.6Hz,4H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.93,164.27,164.05,160.45,159.61,142.00,140.11,135.69,132.33,128.71,122.89,122.38,121.99,121.39,120.12,117.41,109.30,106.71,66.64,55.35,53.45；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₄FN₆O[M+H]⁺:431.1996,found:431.2003.

(E)-4-(2-氟-4-(2-(4,4,5,5-甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)吗啉采用实施例49通用步骤的反应条件制备得到。

白色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.48–7.33(m,3H),7.28(d,J＝18.4Hz,1H),6.19(d,J＝18.4Hz,1H),3.56(t,J＝4.6Hz,4H),3.50(s,2H),2.37(t,J＝4.5Hz,4H),1.25(s,12H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ162.70,160.26,148.14,138.78,132.19,125.50,123.39,113.71,83.59,66.62,54.35,25.09；¹⁹F NMR(376MHz,DMSO-d₆)δ-114.71；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₁₉H₂₈BFNO₃[M+H]⁺:348.2147,found:348.2148.

实施例38化合物F38：反式-4-(3-(3-氯-4-(吗啉甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F38的反应条件与化合物F1类似。棕色固体(收率37.0％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.45(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.31(d,J＝8.6Hz,1H),8.28(s,1H),7.91(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.85(s,1H),7.74–7.62(m,2H),7.57–7.47(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.72(s,2H),3.60(q,J＝5.1,4.6Hz,6H),2.45(s,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.05,159.60,142.60,142.01,135.69,134.77,134.35,131.62,128.35,127.64,125.21,122.38,122.07,121.45,120.12,109.29,106.72,66.68,59.32,53.71.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₄ClN₆O[M+H]⁺:447.1701,found:447.1692.

实施例39化合物F39：反式-4-(3-(3-甲氧基-4-(吗啉甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物F39的反应条件与化合物F1类似。浅棕色固体(收率36.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.41(s,1H),8.35(d,J＝5.2Hz,1H),8.33–8.23(m,2H),7.90(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.64–7.51(m,2H),7.37(s,1H),7.35–7.27(m,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.73(s,2H),3.89(s,3H),3.59(t,J＝4.5Hz,5H),3.49(s,2H),2.40(s,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.28,164.09,159.60,158.21,142.04,135.64,130.63,130.26,122.26,121.47,120.69,119.99,119.15,109.28,109.13,106.71,66.71,56.22,55.99,53.78.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₅H₂₇N₆O₂[M+H]⁺:443.2196,found:443.2182.

实施例40化合物G1：反式-N-(4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺

将N-(4-(3-碘-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(189mg,0.5mmol,1.0eq.)，反式-N,N-二甲基-1-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)乙烯基)苯基)甲酰胺(186mg,0.65mmol,1.3eq.)，碳酸铯(326mg,1mmol,2.0eq.)，加入1,4-二氧六环:水＝4:1(15mL)的混合溶剂中，加入Pd(dppf)Cl₂(25mg,0.025mmol,5mmol％)，N₂保护下升温至100℃反应8h。TLC监测反应完毕后将反应液减压蒸除，剩余物用EA溶解后经硅藻土过滤，滤液依次用水和饱和食盐水萃取，有机相用无水硫酸镁干燥后浓缩，柱层析(DCM:CH₃OH＝12:1)后得到黄色固体(收率31.1％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.51(s,1H),10.60(s,1H),8.73(d,J＝5.3Hz,1H),8.43(s,1H),8.38–8.30(m,1H),8.07–7.99(m,1H),7.86(d,J＝5.3Hz,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,2H),7.60(d,J＝5.2Hz,2H),7.41(d,J＝7.8Hz,2H),3.76(s,2H),2.40(s,6H),2.30(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.97,162.98,157.98,137.60,136.67,136.10,130.55,129.03,128.64,127.56,125.80,121.95,120.61,119.95,115.82,64.05,43.64,28.37；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₄H₂₅N₆O[M+H]⁺:413.2091,found:413.2085.

实施例41化合物G2：反式-N-(4-(3-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)苯基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺

制备化合物G2的反应条件与化合物G1类似。浅黄色固体(收率37.2％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.40(s,1H),8.44–8.22(m,3H),7.93(d,J＝8.6Hz,1H),7.70(d,J＝7.9Hz,2H),7.56(s,2H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.17(d,J＝5.2Hz,1H),3.53(s,2H),3.37(s,4H),2.99–2.85(m,4H),2.68(s,3H),2.41(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ163.43,159.42,136.52,135.69,129.90,129.80,126.85,122.30,121.42,120.56,120.03,109.36,106.25,63.26,61.75,54.32,51.64,28.38.HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₇H₃₀N₇O[M+H]⁺:468.2513,found:468.2517.

实施例42化合物G3：反式-N-(4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)-3-氟苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺

制备化合物G3的反应条件与化合物G1类似。浅棕色固体(收率32.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.49(s,1H),10.57(s,1H),8.81(d,J＝5.3Hz,1H),8.45(s,1H),8.35(m,1H),8.03(d,1H),7.81(d,J＝5.3Hz,1H),7.76(d,1H),7.63(d,2H),7.39(d,2H),3.79(s,2H),2.38(s,6H),2.26(s,3H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.69,162.78,158.01,156.24,137.60,136.67,134.12,133.51,130.27,129.16,128.64,127.56,125.80,123.51,121.95,120.91,119.63,115.72,64.05,44.64,28.37；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₃H₂₄FN₆O[M+H]⁺:431.1996,found:431.1985.

实施例43化合物G4：反式-N-(4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-基)乙酰胺

制备化合物G4的反应条件与化合物G1类似。浅棕色固体(收率32.5％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.45(d,J＝39.6Hz,1H),8.35(d,J＝5.1Hz,1H),8.27(t,J＝4.3Hz,1H),7.88(dd,J＝14.8,7.0Hz,1H),7.70(dd,J＝8.2,2.7Hz,2H),7.56(d,J＝6.4Hz,2H),7.33(d,J＝7.8Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),6.73(s,2H),3.46(s,3H),2.30(s,2H),2.20(s,6H)；¹³CNMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.27,164.09,159.59,136.43,129.92,129.72,126.81,121.40,120.02,112.61,106.70,63.39,63.26,45.24,28.41；HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd forC₂₄H₂₅N₆O[M+H]⁺:413.2091,found:413.2081.

实施例44化合物G5：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-N-甲基嘧啶-2-胺

制备化合物G5的反应条件与化合物G1类似。棕色固体(收率34.3％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.39(s,1H),8.39(d,J＝5.1Hz,1H),8.35–8.24(m,2H),7.93(d,J＝8.7Hz,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,2H),7.56(d,J＝1.9Hz,2H),7.35(d,J＝7.8Hz,2H),7.25(d,J＝5.2Hz,1H),7.17(d,J＝4.8Hz,1H),3.52(d,J＝4.5Hz,2H),2.96–2.86(m,3H),2.24(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ163.44,159.78,156.98,142.88,137.53,136.60,135.68,129.88,126.85,124.69,121.42,120.03,118.50,106.25,67.03,45.08,28.38；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₃H₂₄N₆Na[M+Na]⁺:407.1960,found:407.1953.

实施例45化合物G6：反式-N-甲基-4-(3-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)苯基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物G6的反应条件与化合物G1类似。浅黄色固体(收率40.1％)。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.32(d,J＝5.9Hz,2H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(d,J＝7.9Hz,2H),7.52(q,J＝16.7Hz,3H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),7.19(d,J＝5.3Hz,1H),3.63(s,2H),3.03(s,3H),2.88(s,4H),2.67(s,4H)；¹³C NMR(101MHz,Methanol-d₄)δ164.63,162.75,154.13,143.76,140.76,138.29,136.92,131.45,130.2,128.67,126.85,123.30,121.42,120.86,120.03,109.36,104.52,64.41,57.62,54.75,46.61,27.26；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₅N₆[M+H]⁺:440.2563,found:440.2547.

实施例46化合物G7：反式-4-(3-(3-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-N-甲基嘧啶-2-胺

制备化合物G7的反应条件与化合物G1类似。浅棕色固体(收率29.7％)。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.32(d,J＝5.3Hz,2H),8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.96(d,J＝8.7Hz,1H),7.63(dd,J＝12.8,4.9Hz,3H),7.55(d,J＝9.3Hz,2H),7.41(t,J＝7.6Hz,2H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.19(d,J＝5.3Hz,1H),3.67(s,2H),3.04(s,3H),2.39(s,6H).¹³C NMR(101MHz,Methanol-d₄)δ164.97,162.98,157.98,137.60,136.67,136.10,130.55,129.03,128.64,127.56,125.80,120.61,119.95,105.82,63.05,43.50,27.09.HRMS(ESI-TOF)m/zCalcd forC₂₃H₂₅N₆[M+H]⁺:385.2141,found:385.2135.

实施例47化合物G8：反式-4-(3-(4-((二甲氨基)甲基)苯乙烯基)-5-甲基-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物G8的反应条件与化合物G1类似。棕色固体(收率31.5％)。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.34(d,J＝5.1Hz,1H),8.03–7.98(m,1H),7.65(s,1H),7.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.55(d,J＝16.5Hz,2H),7.47(d,J＝16.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),6.82(d,J＝5.1Hz,1H),7.65(s,1H),3.54(s,2H),2.53–2.47(m,3H),2.30(s,6H)；¹³C NMR(101MHz,Methanol-d₄)δ169.01,158.09,138.34,136.85,136.51,130.25,129.86,128.61,126.18,121.51,121.12,110.57,63.06,43.66,19.43；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd forC₂₃H₂₅N₆[M+H]⁺:385.2141,found:385.2153.

实施例48化合物G9：反式-4-(5-甲基-3-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺

制备化合物G9的反应条件与化合物G1类似。浅黄色固体(收率34.7％)。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.32(d,J＝5.9Hz,2H),8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(d,J＝7.9Hz,2H),7.52(q,J＝16.7Hz,3H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),7.19(d,J＝5.3Hz,1H),3.63(s,2H),3.03(s,3H),2.88(s,4H),2.67(s,4H).¹³C NMR(101MHz,Methanol-d₄)δ164.03,161.15,155.12,140.30,138.22,136.92,135.69,133.19,128.80,126.85,122.30,121.42,120.56,120.03,109.36,106.25,64.37,57.56,54.72,46.56,19.61；HRMS(ESI-TOF)m/z Calcd for C₂₃H₂₅N₆[M+H]⁺:440.2563,found:440.2547.

实施例49、合成(杂)芳乙烯基硼酸频哪醇酯的通用步骤

取相应的芳乙基溴或杂芳乙基溴(2.0mmol，1.0eq)，乙烯基硼酸频哪醇酯(2.2mmol，1.1eq)，DIPEA(4.0mmol，2.0eq)，Pd₂(dba)₃(0.1mmol，5mol％)以及P(t-Bu)₃·HBF₄(0.2mmol，10mol％)溶于干燥的甲苯(8mL)中，氮气保护后于95℃下反应3小时后，TLC监测反应。浓缩溶剂，加入乙酸乙酯15mL溶解残余物，硅藻土助滤，得到澄清滤液，加入15mL水，萃取，得有机相，干燥，加入适量60-100目硅胶粉，拌样，并硅胶柱层析分离得到相应的产品。

实施例50生物学实验

实验仪器及材料

本发明中生物实验所用到的仪器如下，超净工作台BHC-1000IIA/B3：苏净安泰生物技术公司；恒温水浴箱PolyScience 9505：PolyScience公司；灭菌锅MLS-3780：SANYO公司；烘箱：Binder公司；超纯水仪Milli-Q Integral 10：Millipore公司；酶标仪MultiscanMK3、细胞培养箱、低速离心机Sorvall ST1：Thermofisher公司；流式细胞仪：BD公司；pH计ORION STAR A211：ThermoScientific公司；超声破碎仪Sonic Materials Inc：Danbury公司；37℃恒温摇床Thermolyne、小型垂直电泳槽Mini-PROTEAN 3、转膜槽Mini Trans-blot：Bio-Rad公司；X射线摄影暗匣AX-Ⅱ：广东粤华医疗医械厂有限公司；全自动X光洗片机HQ-320XT：虎丘影像有限公司；切片烘片机Leica RM 2125：Leica公司；普通光学显微镜及倒置显微镜：Olympus公司；荧光倒置相差显微镜：Carl Zeiss公司；荧光正置相差显微镜：LeicaDM2500(莱卡)公司和Carl Zeiss(卡尔蔡司)公司；游标卡尺(0-150mm)：上海申韩量具有限公司。

本发明所采用的细胞株购自美国ATCC(American Type Culture Collection)公司，并由四川大学生物治疗国家重点实验室技术人员保存和培养。细胞培养用6、24、96孔板，15mL、50mL离心管、25cm²培养方瓶和75cm²培养瓶均购自成都阿比丁公司。10mL培养皿购自WHB公司。基质胶(Matrigel)购自BD公司。二甲基亚枫(DMSO)、MTT、SDS、聚山梨酸酯Tween-20、十二烷基磺酸钠SDS，甘氨酸，三羟甲基氨基甲烷Tris、PEG-400购自Sigma公司。过硫酸铵APS，氢氧化钠、过硫酸铵、浓盐酸、异丙醇、甲醇等常见分析纯化学试剂为科龙化学公司。生理盐水购自科伦制药有限公司。Annexin V-FITC/PI试剂盒、PI试剂、结晶紫染料、RIPA细胞裂解缓冲液(强)和丙烯酰胺缓冲液、苏木素染液购自碧云天生物技术公司。N,N,N',N'-四甲基乙二胺TEMED，G250蛋白定量液购自Bio-Rad公司。PVDF膜和显影发光底物购自Millipore公司。脱脂奶粉购自伊利乳业公司；自显影胶片购自Kodak公司。10％APS、1mol/L Tris-HCl(pH:6.8)、1.5mol/L Tris-HCl(pH:8.8)及电泳缓冲液转膜缓冲液、TBS缓冲液、TBST缓冲液等常见试剂由本实验配制。所有抗体均购自Cell signalingTechnology公司(Beverly,MA)。封闭用羊血清、兔血清和DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥公司。TUNEL检测试剂盒购自promega公司(Roche Applied Science)。

一、实验方法

1、激酶测试

体外激酶抑制分析采用Reaction Biology公司提供的激酶测试服务完成。实验方法简述如下：将待测小分子(0.001-10μM)或空白溶剂与待测的蛋白激酶以及相应的多肽底物共同加入到反应缓冲液中孵育，其中，反应缓冲液由8mM丙磺酸盐(MOPS，pH＝7.0)，0.2mM乙二胺四乙酸(EDTA)，10mM醋酸镁和K_m浓度的γ³³P-ATP溶液组成。整个反应在室温下进行40min后，向反应缓冲液中加入3％的磷酸盐溶液以终止反应。随后定量吸取10μL反应混合液滴在P30滤纸上，并用75mM的磷酸盐溶液清洗3次，再用甲醇清洗一次，将P30滤纸晾干后加入闪烁液进行闪烁计数。化合物的抑制活性用半数抑制浓度IC₅₀来表示，IC₅₀值由各浓度梯度对应的抑制率拟合得到。

2、细胞培养

从液氮中取出冻存保种的肿瘤细胞，迅速置于37℃恒温水浴复温融化，在无菌条件下用培养基洗涤1次。然后用完全培养基接种于培养瓶内，在37℃，5％CO₂培养箱中培养，第二天置换新鲜细胞培养液。悬浮生长细胞的传代：细胞培养2～3天后，从培养箱中取出培养瓶，收集细胞悬液于离心管中，1500rpm/min，离心3min，倒去上清液，细胞沉淀用完全培养基重悬并吹打均匀，然后分至3～5瓶培养。一般3～4天传代1次；贴壁生长细胞的传代：细胞贴壁长满至瓶底的80％左右，从培养箱中取出培养瓶，吸去培养基，用0.25％胰酶洗涤1次，然后加入0.25％的胰酶消化液消化，观察细胞收缩变圆后，加入完全培养基终止消化，并吹打使细胞分散脱落，收集细胞悬液，1500rpm/min，离心3min，倒去上清液，细胞沉淀用完全培养基重悬并吹打均匀，然后分至3～5瓶瓶培养。一般3～4天传代1次。

3、激酶测试细胞增殖抑制实验(MTT法)

收集对数生长期的细胞，以每孔2.5×10³～1×10⁴个的数量接种于96孔板中，在37℃、5％CO₂的细胞培养箱中培养过夜24小时，采用DMEM培养基稀释待测药物并加入到96孔板中，每种药物8个梯度，每个梯度含3个复孔。加药组中，按梯度(终浓度分别为1000、333、127、42.3、14.1、4.7、1.56、0.53nM)每孔加入100μL化合物的培养基溶液，每个浓度设3个复孔；阴性对照组每孔中加入含1‰DMSO的空白培养基100μL，共6个复孔；空白对照组每孔中只加入100μL培养基。将板置于37℃、5％CO₂细胞培养孵箱内培养72小时。药物处理组、隐形对照组和空白组每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL)，继续培养2-4小时，待甲瓒形成后，终止培养，倾去上清液后每孔加150μL DMSO(对于悬浮细胞则直接加入50μL 20％SDS溶液)，在摇床上摇15～20分钟。用酶标仪在570nm波长下检测每孔细胞吸光度(OD 570)，取其平均值记录结果。细胞增殖抑制率＝(对照组OD₅₇₀-实验组OD₅₇₀)/(对照组OD 570-空白OD₅₇₀)×100％。最后，使用Graphpad Prism软件拟合半数抑制浓度。

4、细胞周期及凋亡实验

将对数生长期的MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞，消化离心制成细胞悬液，用血细胞计数板计数后以5000个细胞/孔接种于六孔板中，加入不同浓度的化合物F20，将板置于37℃、5％CO₂细胞培养，待24小时后，收集细胞并离心，PBS洗一次，再用75％冷乙醇固定1h。然后用PBS溶液洗去乙醇，并加入一定量PI染液染色15min后，用2mL PBS重悬细胞，离心弃去PBS，重复洗2次，之后用流式细胞仪检测并进行数据分析。

5、克隆形成实验

取对数生长期的细胞以5000个每孔的浓度接种于6孔板中，24小时后向每孔中加入相应浓度的待测药物，并设置溶剂对照组。随后每三天更换一次含药培养基，连续作用10天后弃去培养基，甲醇固定细胞20分钟，结晶紫染色，晾干、拍照。

6、蛋白免疫印迹实验

取对数生长期的MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞，制成细胞悬液，用血细胞计数板计数后以2×10⁷个细胞/瓶的密度接种于培养瓶中，加入不同浓度的化合物F20，将培养瓶置于37℃、5％CO₂细胞培养孵箱内培养2小时。将细胞按照要求处理后弃掉培养基，用预冷的生理盐水漂洗两次，吸尽瓶中残留的液体，均匀加入适当体积的RIPA裂解液(含cocktail和PMSF蛋白酶抑制剂)覆盖细胞并置于冰上裂解约10min。随后收集方瓶中的细胞并转入1.5mL EP管中低温保存，再用超声破碎仪超声破碎细胞，离心除去细胞碎片。采用G250蛋白定量试剂按Bradford法定量统一各组蛋白样品的浓度，加入缓冲液，在高温下煮5-10min使蛋白变性。处理好的蛋白样品分装后保存于-20℃冰箱备用。然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白。电泳分离完毕后凝胶在转膜缓冲液中平衡30分钟，PVDF膜在甲醇中浸泡10秒后，以板(黑色)-纤维棉-滤纸-胶-膜-滤纸-纤维棉-板(红色)的顺序放置，排除各层间的气泡，100V电压电泳60分钟。在室温下将PVDF膜置于水平摇床上用TBS/T浸洗2分钟。室温下，PVDF膜置于水平摇床上在5％脱脂牛奶中封闭60分钟。一抗孵育4℃摇床过夜。室温下，PVDF膜置于水平摇床上TBS/T洗膜3次，5分钟/次。室温下，二抗孵育1小时。室温下，PVDF膜冲洗3次，5分钟/次。曝光显影试剂盒A液和B液以1：l混合均匀后，滴加在PVDF膜蛋白面，暗室曝光后，取出光片，置于自动光片洗片机冲洗照片。

7、小鼠皮下瘤抑制实验

本实验所采用的实验动物为6周龄BALB/c裸鼠(体重18-20g)。购自HFK实验动物有限公司，饲养条件为SPF级(温度18～22℃，湿度50～60％)。收集处于对数生长期的MDA-MB-46、MDA-MB-231细胞，并用DMEM双无培养基(不含胎牛血清和抗生素)重悬细胞并离心、清洗三次，计数，以每只老鼠注入1×10⁷/0.1mL悬液接种于SCID小鼠右侧背部皮下，接种体积为100μL。待肿瘤长至200mm³时，将动物随机分组：溶剂对照组、化合物F20 30mg/kg、90mg/kg，每组5只老鼠。动物分组后按预定方案灌胃给药，每天给药一次，每3天使用游标卡尺测量一次肿瘤长短径并称量动物体重。给药过程中同时观察小鼠的健康状况。

肿瘤体积和抑制率分别按下列公式进行计算：

肿瘤体积＝0.5×长×宽²

抑制率＝[1-(X_n-X₀)/(C_n-C₀)]×100％

其中，X₀、X_n分别为给药组在给药前和给药n天后的平均肿瘤体积，

C₀、C_n分别为对照组给药前和给药n天后的平均肿瘤体积。

8、免疫组化实验

在小鼠皮下瘤抑制实验中，给药20天后牺牲裸鼠，取出肿瘤。取空白组、化合物30mg/kg/d组中的肿瘤于中性福尔马林溶液中浸泡24小时，石蜡包埋并进行免疫组化。将肿瘤装于切片盒上固定3小时，使用超纯水冲洗；放于75％酒精在摇床上处理12小时，85％酒精按照1小时/次在摇床上处2次；95％酒精按照1小时/次在摇床上处理2次；100％酒精按照0.5小时/次在摇床上处理3次；二甲苯按照0.5小时/次在摇床上处理2次；65℃石蜡按照0.5小时/次处理3次；最后使用石蜡包埋，4μM连续切片；切片脱蜡后在高压锅内使用枸椽酸钠缓冲液进行预热抗原修复；PBS缓冲液洗3次，5分钟每次；将切片在室温下置于避光3％过氧化氢中20分钟，封闭内源性过氧化物酶；用PBS缓冲液洗2次，5分钟每次；37℃正常血清封闭20分钟；加入一抗后放于4℃冰箱内过夜；用PBS缓冲液洗2次切片，5分钟每次；吸去玻片周围液体后滴加生物素标记二抗，在37℃下孵育45分钟；用PBS缓冲液洗2次，5分钟每次。吸去玻片周围液体，滴加SAB复合物，于37℃孵育40分钟。用PBS缓冲液洗2次，5分钟每次；使用DAB显色试剂盒显色；苏木素复染；对玻片使用酒精脱水，使用中性树胶封闭玻片。最后在显微镜下观察切片并截取图像。

二、实验结果

1、化合物对细胞株和PLK4的抑制结果

表1化合物对细胞株的活性的抑制的IC₅₀值^a

^a每个化合物测试2次，表格中数值表示平均值。

表2化合物对PLK4活性的抑制的IC50值^a

^a每个化合物对PLK4的IC₅₀测试1次，每个IC₅₀设10个浓度，从10μM开始，三倍稀释。

从上表1和表2可以看出，F20展现了对PLK4最优的抑制活性，IC₅₀＝11.2nM，并且其抗乳腺癌细胞株增殖活性十分优异，其对MDA-MB-468以及MDA-MB-231的IC₅₀值分别为60nM和90nM。

2、F20的激酶选择性研究

我们采用生化方法，选取F20对具有代表性的96种激酶测试体外抑制活性，这些激酶覆盖了激酶的亚家族，其中大部分为常见的激酶，测试结果见表3。

表3F20对各种代表性激酶的活性^a

^a数值为加入F20后的激酶活性百分比(溶剂对照组为100％)，每个激酶测试2次，表格中数值表示平均值。

从上表3可以看出，整体而言，F20在100nM时对绝大部分的激酶抑制活性较差，表明F20具有一定选择性。此外100nM下F20对PLK4的抑制活性达到96.21％，但对PLK家族其他成员PLK1、2、3抑制活性较差。其对ABL1、ALK、Flt3、VEGFR2、Aurora B等多种激酶也具有较好的活性，表明F20是一个多靶点的小分子抑制剂。

3、F20对不同肿瘤细胞的增殖抑制活性

我们采用MTT实验考察了化合物F20对不同类型的乳腺癌细胞株增殖抑制活性。结果见下表4。

表4F20对不同肿瘤细胞的增殖抑制活性

由表4所示，在F20作用96h后，细胞均受到了不同程度的增殖抑制，IC₅₀值在80nM到3.1μM之间，以上实验结果表明，F20对于乳腺癌细胞具有较好的抗增殖效果。并且F20对于PTEN缺失突变的MDA-MB-468、MDA-MB-415、BT549等乳腺癌细胞株十分敏感。同时其对MDA-MB-231、MCF-7等细胞株也有优异的抑制活性。

4、F20诱导乳腺癌细胞中心体复制紊乱

PLK4是中心体复制的主要调控因子，当PLK4激酶活性受到抑制，中心体复制会发生紊乱。我们通过免疫荧光检测了F20处理后乳腺癌细胞的中心粒复制情况。如图1所示，F20处理乳腺癌细胞株MDA-MB-468以及MDA-MB-231 24h后，这两种细胞的中心粒复制出现紊乱。在F20浓度为0.5μM时候，中心粒的复制被明显抑制，且具有浓度依赖性。

5、F20抑制乳腺癌移植瘤的生长

F20展现了良好的体外抗肿瘤效果，接着我们进一步考察了F20在动物体内的抗肿瘤活性。我们构建了MDA-MB-231和MDA-MB-468两种乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，并通过灌胃口服的方式给予不同给剂量的F20(30mg/kg,90mg/kg,OD)进行处理，以评价其体内抗乳腺癌效果。如图2所示，F20很好的抑制了乳腺癌MDA-MB-468和MDA-MB-231体内肿瘤的增长。与溶剂对照组相比，给药剂量为30mg/kg的抑瘤率分别达到了68.3％和63.9％，而在高剂量组(90mg/kg)时，F20对MDA-MB-468小鼠皮下移植瘤的肿瘤生长抑制率(TGI)达到77.3％，而对MDA-MB-231移植瘤的肿瘤生长抑制率为67.8％。在给药期间，我们还观察了小鼠的体重变化情况，与溶剂对照组相比较，高剂量给药组的小鼠体重有轻微的下降，但在低剂量组，小鼠完全耐受。

6、F20对乳腺癌肿瘤组织免疫组化分析

为了进一步了解F20在小鼠体内抗肿瘤活性作用机理，我们选取了MDA-MB-231模型进行免疫组化分析，从图3我们可以发现，F20给药后高，肿瘤细胞增殖相关蛋白Ki67的表达明显下降，而凋亡激活蛋白Cleaved caspase 3的表达增加。同时，PLK4下游通路蛋白cyclinB1的表达也明显得到抑制。以上数据表明，F20可能通过扰乱肿瘤细胞有丝分裂进程，进而抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞凋亡，从而抑制裸鼠体内肿瘤生长。

Claims

1.吲唑类衍生物，其结构式如式I所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C8烷基、C1～C8羰基或C1～C8氧羰基；

2.根据权利要求1所述的吲唑类衍生物，其特征在于：当X为N、Y为CR_11y，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺类衍生物，结构式如下式Ⅲ所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

3.根据权利要求2所述的吲唑类衍生物，其特征在于：R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～8元饱和或不饱和杂环；所述5～8元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～5个；所述5～8元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_11y为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂或-CN或C1～C4烷酰胺基；n为0～3；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～6元饱和或不饱和杂环；所述5～6元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～4个；所述5～6元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_11y为-H；

R_11y为-H。

4.根据权利要求1所述的吲唑类衍生物，其特征在于：当X为CR_11x，Y为N，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-6-胺类衍生物，结构式如下式Ⅳ所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

5.根据权利要求4所述的吲唑类衍生物，其特征在于：R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_11x为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为取代或未取代的5～6元饱和或不饱和杂环；所述5～6元饱和或不饱和杂环的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～4个；所述5～6元饱和或不饱和杂环的取代基为-H、-SO₂CH₃、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；n为0～3；

R₄为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～8元芳杂基所述5～8元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～2个；所述取代苯基或5～8元芳杂基的取代基为-H、卤素、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、b为0～1，c为0～1；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为

R_11x为-H；

R_11x为-H。

6.根据权利要求1所述的吲唑类衍生物，其特征在于：当X为CR_11x，Y为N，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-6-胺类衍生物，结构式如下式Ⅴ所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

7.根据权利要求6所述的吲唑类衍生物，其特征在于：R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为

R_11x为-H；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₅为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、

R_11x为-H。

8.根据权利要求1所述的吲唑类衍生物，其特征在于：当X为N，Y为CR_11y，R₃为时，则为4-(1H-吲唑-6-基)嘧啶-2-胺类衍生物，结构式如下式Ⅵ所示：

R₇、R₈独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6羰基或C1～C6氧羰基；

9.根据权利要求8所述的吲唑类衍生物，其特征在于：R₁为-H、苯甲基、取代或未取代的C5～C6芳基、取代或未取代的5～6元杂芳基甲酰基、C1～C4羰基或C1～C4烷基；所述5～6元杂芳基甲酰基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基甲酰基的取代基为C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、-NH₂、-CF₃、C1～C4烷胺基、-OCF₃、-NO₂或-CN；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_11y为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C3～C8环烷基、C1～C4烷氨基、卤素、-NH₂、-CF₃、-OCF₃、-NO₂、-CN或C1～C4烷酰胺基；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₇、R₈独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4羰基或C1～C4氧羰基；

R₉、R₁₀独立的为

R_11y为-H；

R_2a为-H或C1～C4烷基；R_2b、R_2c独立的为-H；

R₅为取代或未取代的苯基、取代或未取代的5～6元芳杂基、所述5～6元芳杂基的杂原子为N、O、S，杂原子个数为1个；所述取代苯基或5～6元芳杂基的取代基为-H、-F、-Cl、-Br、-CF₃、-NO₂、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、

R_11y为-H。

10.吲唑类衍生物，其特征在于：结构式如下，

11.权利要求1～10任一项所述衍生物药学上可接受的盐。

12.权利要求1～10任一项所述衍生物药学上可接受的水合物或溶剂化物。

13.权利要求1～10任一项所述衍生物药学上可接受的前药。

14.药物组合物，这种药物组合物是由权利要求1～10任一项所述衍生物、权利要求11所述的盐或权利要求12所述的水合物或权利要求13所述的前药添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。

15.权利要求1～10任一项所述衍生物、权利要求11所述的盐、权利要求12所述的水合物或权利要求13所述的前药或权利要求14所述的药物组合物在制备激酶抑制剂中的用途。

16.权利要求1～10任一项所述衍生物、权利要求11所述的盐、权利要求12所述的水合物或权利要求13所述的前药或权利要求14所述的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。

17.根据权利要求16所述的吲唑类衍生物的用途，其特征在于：所述的肿瘤为乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、急性髓系白血病或血液瘤。

18.权利要求1～10任一项所述衍生物、权利要求11所述的盐、权利要求12所述的水合物或权利要求13所述的前药或权利要求14所述的药物组合物在制备口服或静脉注射制剂中的用途。