CN108938927A - 复方手参丸及其联合其他药物在治疗神经损伤中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及复方手参丸在治疗神经损伤及联合其他药物的应用,属于医药领域。本发明通过动物实验发现,复方手参丸能显著改善ASCI模型小鼠的BBB评分与Rivilin斜板评分、Nrf2蛋白表达及IL‑6、TNF‑α水平等指标,并显著改善细胞超氧化物歧化酶活性,降低PC12神经细胞受损伤程度,降低大量一氧化氮所致神经细胞的损伤,对谷氨酸所致神经细胞损伤具有一定的修复保护作用。临床资料则显示,复方手参丸对于帕金森病患的精神、行为和情绪评分、日常生活活动评分及生活质量评分量表评分均有显著改善,其中联合用药及长期用药的效果尤为显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方手参丸及其联合其他药物在治疗神经损伤中的应用,属于医药领域。
背景技术
神经系统支配着我们身体的各个器官和活动,神经系统损伤一定会造成相应的症状,而且神经系统损伤后很难恢复。目前学术界认为,周围神经有一定修复再生能力,但中枢神经系统是否可以再生修复,仍有相当大的争议。所以,保护神经免受损伤显得非常重要。脊髓损伤为暴力损伤导致脊柱骨折、损伤,进而压迫脊髓和马尾神经,引起出血、挫伤和水肿等。临床表现有感觉、运动障碍,四肢不协调,不完全性运动等。脊髓损伤伤后会引发诸多后遗症,具有高度的致残性。谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递质,但是细胞间隙中谷氨酸浓度过高时会对神经元产生毒性,导致神经元的退化、衰老及死亡,而氧化应激是谷氨酸神经毒性作用的主要机制,谷氨酸的神经毒性可能通过氧化应激和自由基机制引起神经细胞的变性、凋亡和丢失。帕金森病(PD)是常见的神经退行性疾病,其临床表现为运动迟缓、静止震颤和强直自主神经功能的障碍和痴呆。研究发现氧自由基对帕金森病的发病起重要作用。目前临床上以多巴胺类替代治疗为主,但会产生运动障碍、强直、不可预期的“开-关”现象等副作用,且无法阻止神经元继续死亡及修复已损伤的神经元。因此保护及修复已损伤的多巴胺神经细胞是治疗PD病的核心问题。
复方手参丸为一种藏药,可温肾助阳。用于肾阳不足,阴精亏虚,阳萎遗精,或有失眠健忘。但文献、专利等方面均未发现其具有神经保护作用及用于治疗帕金森病的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种复方手参丸及其联合其他药物在治疗神经损伤中的应用。
术语说明:
复方手参丸是《中华人民共和国卫生部药品标准》中记载的药品名称,标准号为WS-11040(ZD-1040)-2002,市场可购。
本发明是通过如下技术方案实现的:
复方手参丸在治疗神经损伤的应用。
所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,应用法为口服,日用剂量为1.5g/次,日用剂量次数为2次。
所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,神经损伤中疾病为急性脊髓损伤。
所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,神经损伤中疾病为谷氨酸所致神经损伤。
所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,神经损伤中疾病为自由基所致神经损伤。
所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,神经损伤中疾病为治疗帕金森病。
复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用。
所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,其他具有治疗神经损伤的药物为美多芭片。
所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,神经损伤中疾病为治疗帕金森病。
所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,复方手参丸的应用法为口服,日用剂量为1.5g/次,日用剂量次数为2次,应用时间不少于3个月。
本发明所述的美多芭片为常规市场可购产品。
有益效果:
在复方手参丸的应用治疗领域,人们熟知其温肾助阳。用于肾阳不足,阴精亏虚,阳萎遗精,或有失眠健忘。
本发明克服了上述应用方面的技术偏见。本发明通过实验研究发现,复方手参丸可显著改善ASCI模型小鼠的BBB评分与Rivilin斜板评分、Nrf2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平等指标,显著保护谷氨酸造成的PC12细胞损伤,可显著降低受损伤PC12细胞培养液中LDH的漏出量,增强SOD活性,对谷氨酸所致PC12细胞损伤后产生的自由基具有一定的清除作用。临床研究发现,复方手参丸对于帕金森病患的精神、行为和情绪(UPDRS-I)评分、日常生活活动(UPDRS-II)评分及生活质量评分量表(PDQ)评分均有显著改善,特别对日常活动和生活质量提升尤为显著,其中联合用药及长期用药的效果更好。
附图说明
图1为各组ASCI模型小鼠Nrf2蛋白表达比较图。其中,1为模型组,2为甲强龙组,3为高剂量复方手参丸组,4为中剂量复方手参丸组,5为低剂量复方手参丸组
具体实施方式
为了更好地理解本发明的实质,下面将通过药理和临床研究来进一步说明复方手参丸具有神经保护作用的用途及其对帕金森病的改善作用。
实验例1:对急性脊髓损伤(ASCI)模型小鼠神经功能保护作用
1材料与方法
1.1实验动物:健康小白鼠50只,饲养环境为清洁级,雌雄皆有。6~8周龄,体质量22~27(24.1±3.3)g,由陕西省医学实验动物中心提供,动物许可证号:SCXK(陕)2016-003。在室温18~22℃,湿度50%~60%的环境中适应性生活1周,自由饮食饮水。1周后进行实验,本研究对小鼠的处置符合相关动物伦理学要求。
1.2试剂与器材:复方手参丸,批号:20161220,金诃藏药股份有限公司(临用前用水煎煮1h,滤过,滤液浓缩成1ml含5g的浓缩液)。注射用甲泼尼龙琥珀酸钠(甲强龙),批准文号:H20080284,购于辉瑞制药有限公司;聚乙烯比咯烷酮K-30购于上海钰化实业有限公司;质量浓度9g•L-1氯化钠注射液,批号:20156626,购于四川科伦药业股份有限公司;100mg•L-1水合氯醛购于武汉远成共创科技有限公司;Nrf2(N端)多克隆抗体,购于美国Cayman公司。多功能酶标仪SpectraMax M5/M5e,购于美谷分子仪器(上海)有限公司;GTR16-2低温离心机购于北京时代北利离心机有限公司;稳压稳流电泳仪购于上海天能科技有限公司;DHG-9031A电热恒温干燥箱购于上海恒勤仪器设备有限公司;IH-0400脊髓击打器购于香港友诚生物科技有限公司;SZX16显微镜购于日本奥林巴斯公司。
1.3实验方法
1.3.1制作小鼠ASCI模型:用质量浓度100mg•L-1水合氯醛对实验组50只小鼠进行麻醉,充分暴露T9-T11锥板和脊髓,使用脊髓击打器,以3g重量的平头撞击器,3cm高处的自由落体的致伤能量,造成小鼠ASCI。小鼠尾巴痉挛摆动,呈现瘫痪状态,双后肢及躯干扑动回缩,后双后肢呈现迟缓性瘫痪状态,硬脊膜显示有明显的瘀紫色表示小鼠ASCI模型造模成功。将造模成功的小鼠饲养于18~22℃,湿度50%~60%的环境下,每日早晚各进行人工排尿1次,直到形成膀胱反射。
1.3.2给药方法:实验组小鼠均腹腔注射0.5mL9g•L-1氯化钠。将小鼠分为5组,分别为复方手参丸的高剂量组、中剂量组、低剂量组、甲强龙组和模型组。复方手参丸高剂量组、中剂量组和低剂量组在ASCI30min后分别给予复方手参丸浓缩液150mg•kg-1、80mg•kg-1、10mg•kg-1腹腔注射,甲强龙组同时间给予50g甲强龙腹腔注射,模型组在相同时间给予生理盐水腹腔注射。按照小鼠剂量相对人体剂量计算,低中高剂量分别为1、8、15倍。
1.4观察指标
1.4.1行为学观察:采用BBB分级法对小鼠运动功能进行评分,内容分为3项,包括后肢各关节活动度、后肢步态和协调功能、运动时爪子的精细运动,每项7分,满分为21分。采用改良Rivlin斜板实验对小鼠后肢功能进行评价,方法为:在斜板表面垫上5mm橡胶垫,按照小鼠身体轴线和斜板纵轴垂直方向放置,逐步增加斜板与水平面之间的夹角,直到小鼠能够正好停留在斜板上5s,对角度进行记录,所有小鼠均进行3次测试,以3次平均值为准。
1.4.2TNF-α及IL-6水平测定:采用ELISA对小鼠血清TNF-α、IL-6进行测定。ASCI后对小鼠进行麻醉,摘除眼球取血,4℃条件下迅速离心分离血清,每管60μL低温保存。遵照ELISA试剂盒操作指示,对血清中TNF-α、IL-6水平进行检测。
1.4.3Nrf2蛋白表达:采用Westernblot检测Nrf2蛋白表达量。取80~100mg小鼠脊髓组织,匀浆后裂解液裂解,使用BCA法检测蛋白浓度。各组取相同蛋白量,SDS-PAGE电泳分离蛋白,转移到PVDF膜,室温下用50mg•L-1脱脂奶粉封闭2h。Nrf2一抗稀释比例为1∶500,4℃孵育过夜;二抗稀释比例为1∶1000,37℃孵育1h;以ECL化学发光法显影。
1.5统计学方法
采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间两两比较采用t检验和LSD检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组ASCI模型小鼠BBB评分与Rivilin斜板评分比较:复方手参丸高剂量组BBB评分与Rivilin斜板评分均高于其他组,其中与甲强龙组、模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复方手参丸中剂量组、低剂量组及甲强龙组BBB评分与Rivilin斜板评分显著高于模型组(P<0.05),复方手参丸各剂量组与甲强龙组比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表1。
表1各组ASCI模型小鼠BBB评分与Rivilin斜板评分比较(n=10)
注:与甲强龙组比较,*P<0.05;与模型组比较,#P<0.05
2.2各组ASCI模型小鼠Nrf2蛋白表达比较:模型组仅有少量Nrf2表达,复方手参丸的各剂量组及甲强龙组表达均明显,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量复方手参丸组表达最为明显。
2.3各组ASCI模型小鼠IL-6、TNF-α水平比较:复方手参丸高剂量组IL-6、TNF-α表达水平分别为(0.92±0.06)μg•L-1和(42.54±12.41)ng•L-1,明显低于其他组(P<0.05);复方手参丸中剂量组、低剂量组及甲强龙组表达比较,差异无统计学意义(P>0.05),均低于模型组(P<0.05)
表2各组ASCI模型小鼠IL-6、TNF-α水平比较
注:与甲强龙组比较,*P<0.05;与模型组比较,#P<0.05
3、实验结论
复方手参丸对ASCI模型小鼠的BBB评分与Rivilin斜板评分、Nrf2蛋白表达及IL-6、TNF-α水平等指标均有显著改善作用,尤其高剂量组效果更是显著优于阳性对照药。提示复方手参丸对ASCI模型小鼠有较好的神经保护作用。
实验例2、对谷氨酸导致PC12细胞株化学损伤后的保护作用
一、实验材料
1、样品及其制备
细胞系:PC12细胞系(来源:Rattusnorvegicus肾上腺嗜铬细胞瘤,南京凯基生物科技发展有限公司);
试剂:H-DMEM细胞培养基(Hyclone,赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司);胎牛血清(以色列Bioind);胰酶细胞消化液(碧云天),青霉素链霉素混合液双抗,注射用顺铂(齐鲁制药有限公司),柠檬酸盐缓冲液(北京中杉金桥生物技术有限公司),多聚甲醛(solarbio),L-谷氨酸(Klonetech,Japan),复方丹参滴丸(天津天士力制药股份有限公司)。
复方手参丸各样品简称对照如下:
复方手参丸(青海金诃藏药,批号20160619)
复方手参丸石油醚提取部位(FS醚,自制)
复方手参丸乙醇提取部位(FS醇,自制,小鼠口服给药后取血清为样品“FS血”)
复方手参丸水提部位(FS水,自制)
复方手参丸超微粉300目(FS粉,自制)
1)复方手参丸石油醚提取部位的制备:
取复方手参丸40g,置于索氏提取器中加500ml石油醚提取2h,药渣A待用,石油醚提取液减压浓缩并继续干燥,得到复方手参丸石油醚提取部位0.75g。
2)复方手参丸乙醇提取部位的制备:
取上述药渣A,加入350ml70%乙醇提取2次,第一次1.5h,第二次1h,所得药渣B待用,合并两次乙醇提取液,滤过后减压浓缩并继续干燥,得到复方手参丸乙醇提取部位4.88g。
3)复方手参丸水提部位的制备:
取上述药渣B,加入350ml水提取2次,第一次1.5h,第二次1h,合并两次水提液,滤过后减压浓缩并继续干燥,得到复方手参丸水提部位6.44g。
4)复方手参丸超微粉的制备:
取复方手参丸,超微粉碎成300目,即得。
5)含药血清的制备:
取复方手参丸乙醇提取部位,制成最大浓度水混悬液,口服喂饲小鼠5只,给药量为0.0236g/g体重,30min后摘取眼球,不抗凝取血,3000rpm离心15分钟分离血清备用,即为样品(FS血)。
2、实验仪器
立式压力蒸汽灭菌锅(LDZX-50FBS,上海申安);双人单面净化工作台(SW-CJ-1C,苏州净化);二氧化碳培养箱(BB16μV/BB5060μV,HERAEUS);台式离心机(H3,Sigma);酶标仪(MultiskanMK3,ThermoScientific);电热恒温鼓风干燥箱(101,上海鹏顺科学仪器有限公司);倒置显微镜(XDS-1B,重庆光学仪器厂);水浴恒温振荡器(SHZ-82,金坛市医疗仪器厂);移液器(Gilson,Eppendorf);培养瓶(Corning);96孔板(Costar,USA)。
二、实验方法
以谷氨酸制备PC12细胞化学损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法于570nm处测定吸收值,观察候选药物对PC12细胞损伤的修复作用。使用SOD、NO、LDH、MDA试剂盒检测各指标含量,阐明各药的作用机理。
造模:30mmol/l的谷氨酸(此为加样终浓度,溶于不完全培养基中)作用于PC12细胞24h。
分组:空白组、化学损伤模型组、化学损伤+药物组、化学损伤+阳性对照药组。因96孔板数目限制,样品量较大时采用两个板同时培养检测,每板各设模型组空白组和阳性对照组,以保证结果的可靠性和一致性。
三、实验内容和步骤
1、细胞培养
从超低温冰箱中取冻存的PC12细胞复苏于培养瓶中,以含10%胎牛血清的H-DMEM培养基
培养。待PC12细胞生长至80%融合时,以0.25%的胰酶细胞消化液(含0.02%EDTA)进行消化,
以1×104个细胞每孔接种于96孔板中,调零孔不加细胞。
2、细胞损伤
待96孔板中的细胞长满单层后,弃掉培养基,无菌PBS液清洗2遍,除调零组、空白对照组外,每孔加入终浓度为30mmol/l的谷氨酸(溶于不完全培养基中)于培养箱内培养24h,即造成PC12细胞损伤模型。
3、加药修复
弃掉培养基,用无菌PBS液清洗2遍,给药组每孔分别加入含筛选药物终浓度依次为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml的DMEM培养基100μl,每个浓度的药物加6孔。以不含药物的DMEM培养基为空白对照组,阳性对照组加入不同浓度的复方丹参滴丸的无血清DMEM培养基100μl。然后将细胞置入37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h。
4、指标测定
4.1MTT法测定细胞存活率
弃掉培养基后每孔加入100μl无血清DMEM培养基,再于每孔加入5mg/mlMTT溶液20μl于培养箱内避光反应4h。弃掉培养基加入100μlDMSO用酶标仪于570nm测定OD值,计算细胞存活率:
计算公式:细胞存活率(%)=(用药组或模型组A570/对照组A570)×100%。
4.2一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量测定
给药后24小时用无菌管收集细胞上清液,离心20分钟(2000r/min),仔细收集上清液,按试剂盒说明书操作测定LDH、NO含量。
给药后24小时弃去上清,加2%Trion-100X,于4℃静置12小时后混匀细胞悬液,离心20分钟(2000r/min),仔细收集上清液,按试剂盒说明书操作测定MDA、SOD含量。
四、实验结果
所有数据以X±SD表示,单因素方差分析及LSD多组均数两两比较组间差异的显著性,P<0.05为差异显著
1、复方手参丸对损伤的PC12细胞存活率的影响
表3复方手参丸对损伤的PC12细胞存活率影响的结果(n=8)
注:*表示P<0.05
表3结果表明,终浓度为1μg/ml的候选药物中,FS醇,FS粉,舒水,FS醚的细胞存活率与相应模型组相比,有显著性差异。在终浓度10μg/ml的候选药物中,FS醇,FS粉的细胞存活率和模型组相比,有显著性差异。
2、复方手参丸对LDH、NO、MDA、SOD含量的影响
2.1复方手参丸对体外培养的PC12细胞NO含量的影响
表4复方手参丸各提取部位及含药血清对PC12细胞的NO含量测定结果(n=3)
注:*P<0.05
表4结果表明,终浓度1μg/ml以及10μg/ml的FS醇和FS醚以及10μg/ml的舒水与模型组有显著性差异;给药血清中,舒浸与空白血清组相比,有显著差异。
2.2复方手参丸对体外培养的PC12细胞LDH含量的影响
表5复方手参丸各提取物及含药血清LDH含量测定结果(n=3)
注:*P<0.05
表5结果表明,FS粉1μg/ml、10μg/ml、FS醇10μg/ml、舒水10μg/ml及含药血清舒浸可显著降低受损伤PC12细胞培养液中LDH的漏出量。
2.3复方手参丸对体外培养的PC12细胞SOD含量的影响
表6复方手参丸各提取物及含药血清SOD含量测定结果(n=3)
注:*P<0.05
表6结果表明,FS醚1μg/ml、舒水1μg/ml、FS醚10μg/ml、舒水10μg/ml与模型组比较,均有显著性差异。
2.4复方手参丸对体外培养的PC12细胞MDA含量的影响
表7复方手参丸各提取物及含药血清MDA含量测定结果(n=3)
注:*P<0.05
表7结果表明,各组与模型组比较,均无显著性差异。
3、复方手参丸体外药理试验研究结论
表8复方手参丸各制剂结果一览表
+表示该制剂或提取物与模型组相比,有显著的统计学意义(P<0.05)。
3.1对细胞存活率的影响
MTT法测定PC12细胞存活率结果表明,终浓度为1μg/ml的候选药物中,FS醇,FS粉,舒水,FS醚的细胞存活率与相应模型组相比,有显著性差异。在终浓度10μg/ml的候选药物中,FS醇,FS粉的细胞存活率与相应模型组相比,有显著性差异。阳性对照药复方丹参滴丸以27mg/ml终浓度给药,在各组别中细胞存活率最高。其它各组未见显著性差异,或者显著低于模型对照组。
3.2对SOD含量的影响
FS醚1μg/ml、舒水1μg/ml、FS醚10μg/ml及舒水10μg/ml与模型组比较,均有显著性差异。
3.3对MDA含量的影响
各样品与模型组比较未见显著性差异。
3.4对NO含量的影响
终浓度1μg/ml以及10μg/mlFS醇、FS醚、10μg/ml舒水与模型组有显著性差异;含药血清舒浸与空白血清组相比,有显著差异。
3.5对LDH含量的影响
FS粉1μg/ml、10μg/ml,FS醇10μg/ml、舒水10μg/ml,以及含药血清舒浸与模型组比较均有显著性差异。
3.6复方手参丸的综合结论
MTT法细胞活性筛选结果证实:与模型组比较,复方手参丸醇提部位、超微粉、水提部位在适合浓度下对谷氨酸导致的PC12细胞损伤具有显著的修复作用。与模型组比较,复方手参丸石油醚提取部位和水提部位能显著增强细胞SOD活性。提示以上药物,对谷氨酸所致PC12细胞损伤后产生的自由基具有一定的清除作用。
FS粉1μg/ml、10μg/ml、舒水10μg/ml,FS醇10μg/ml浓度的样品,以及含药血清舒浸可降低培养液中LDH的漏出量,提示以上各筛选药物可降低PC12神经细胞受损伤程度,对谷氨酸所致神经细胞损伤具有一定的修复保护作用。
复方手参丸乙醇提取部位含药血清能显著减少细胞培养液中NO含量,降低大量NO所致神经细胞的损伤。
实验例3:临床资料
1、一般资料
自2012年5月至2014年3月,筛选收治帕金森病(简称PD)患者97例,病程1年到21年。全部病例均经体格检查及头颅CT或核磁等多项检查,并结临床症状确诊,且无严重肝、肾、心等脏器功能不良。随机分为联合组33例,其中,男21例,女12例,年龄:49-76岁,平均年龄63.2±5.8岁,平均病程13±7.6年;对照组32例,其中,男20例,女12例,年龄:49-76岁,平均年龄62.1±7.7,平均病程11.1±5年;单独组34例,其中,男21例,女13例,年龄:49-76岁,平均年龄63.3±8.8年,平均病程11.1±5.6年。
PD认知障碍入选标准:
(一)入选标准:1、符合英国PD脑库帕金森病的诊断标准。2、在已明确PD诊断的基础上,由患者本人/知情者提供或临床医师观察到的认知功能的逐渐下降。3、基于正式的神经心理测试或总体认知功能量表明确的认知功能损害。4、认知功能损害并不足以显著干扰功能独立性,尽管执行复杂的功能性任务时可能会出现轻微的困难。
(二)排除标准:1、符合运动障碍协会(MDS)特别小组提出的帕金森病痴呆的诊断。2、其他可引起认知功能障碍的原因(如:谵妄,卒中,严重抑郁,代谢异常,药物副作用,头部外伤)。3、PD相关的共患病(如:运动障碍或严重的焦虑,抑郁,白天过度嗜睡,或精神障碍),从临床医师的角度,这些状态严重影响认知功能测试。
二、疗效评价标准:评定标准:用PD统一评分量表(UPDRS)第III部分和Heohn-Yahr(HY)分级量表评估患者的运动症状严重程度。用PD统一评分量表(UPDRS)第II部分和日常生活能力问卷(ADCS-ADL)评估患者的日常生活能力。用PD统一评分量表(UPDRS)第I部分评估患者精神、行为和情绪。应用简易智能量表(MMSE)作为筛选手段,蒙特利尔认知评估量表(MOCA)对轻度认知功能障碍进行评定。Fuld物体记忆测验(FOM)评定短时记忆,言语流畅性测验(RVR)评定长时记忆和语言功能;积木测验(BD)评定空间结构能力;数字广度测验(DS)评定注意与瞬间记忆。用汉密尔顿抑郁量表(HRSD)和汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评估患者的抑郁和焦虑状况。
(三)治疗方法:联合组以美多芭片(每片0.25g,每次服1/2片,每日3次,一周后改为每次1/2片,每日2次,餐后1个半小时服)为基础治疗,同时加服复方手参丸,一次1.5g,一日2次。具有发热、颅压高、严重感染、高血压、糖尿病等症状或体征者给予相应处理;对照组以美多芭片(每片0.25g,每次服1/2片,每日3次,一周后改为每次1/2片,每日2次,餐后1个半小时服)为基础治疗,同时加服安慰剂;单独组服用复方手参丸,同时加服安慰剂。分别于治疗后1个月、3个月和6个月进行评定。
(四)治疗效果:
1、精神、行为和情绪(UPDRS-I)评分:治疗组经治疗后,精神、行为和情绪积分较对照组有明显改善,统计学具有显著性意义(P<0.05),见表7。
2、日常生活活动(UPDRS-II)评分:治疗组经治疗后,日常生活活动积分较对照组有明显改善,统计学具有显著性意义(P<0.05),见表8。
3、帕金森病生活质量评分量表(PDQ)评分:治疗组经治疗后,帕金森病生活质量评分量表积分较对照组有明显改善,统计学具有显著性意义(P<0.05),见表9。
表9精神、行为和情绪(UPDRS-I)评分比较(x±s)
注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与单独组比较,#P<0.05,##P<0.01
表10日常生活活动(UPDRS-II)评分比较(x±s)
注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与单独组比较,#P<0.05,##P<0.01
表11帕金森病生活质量评分量表(PDQ)评分比较(x±s)
注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与单独组比较,#P<0.05,##P<0.01
(五)小结:
使用复方手参丸治疗后,对于帕金森病患的精神、行为和情绪(UPDRS-I)评分、日常生活活动(UPDRS-II)评分及生活质量评分量表(PDQ)评分均有显著改善,特别对日常活动和生活质量提升尤为显著,其中联合用药的效果明显好于单用西药或单用复方手参丸。整体而言,服用1个月后,单独组、联合组效果与对照组比较,效果并不明显;而3个月乃至6个月后,单独组及联合组的效果优势非常突出,个别指标上单独组的效果甚至优于对照组,这也与中药治本但起效慢的常识相一致。
以下实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例所使用的复方手参丸为金诃藏药股份有限公司生产的产品。
实施例1、复方手参丸在治疗帕金森病中的应用
其用法用量为:口服,一次1.5克,一日2次,同时联合服用美多芭片。
实施例2、复方手参丸在治疗帕金森病中的应用
其用法用量为:口服,一次1.5克,一日2次。
实施例3、复方手参丸在治疗急性脊髓损伤神经中的应用
其用法用量为:口服,一次1.5克,一日2次。
实施例4、复方手参丸在治疗谷氨酸所致神经损伤中的应用
其用法用量为:口服,一次1.5克,一日2次。
实施例5、复方手参丸在治疗自由基所致神经损伤中的应用
其用法用量为:口服,一次1.5克,一日2次。
Claims (10)
1.复方手参丸在治疗神经损伤的应用。
2.根据权利要求1所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,其特征在于:应用法为口服,日用剂量为1.5g/次,日用剂量次数为2次。
3.根据权利要求1所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,其特征在于:神经损伤中疾病为急性脊髓损伤。
4.根据权利要求1所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,其特征在于:神经损伤中疾病为谷氨酸所致神经损伤。
5.根据权利要求1所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,其特征在于:神经损伤中疾病为自由基所致神经损伤。
6.根据权利要求1所述的复方手参丸在治疗神经损伤的应用,其特征在于:神经损伤中疾病为治疗帕金森病。
7.复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用。
8.根据权利要求7所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,其特征在于:其他具有治疗神经损伤的药物为美多芭片。
9.根据权利要求7或8所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,其特征在于:神经损伤中疾病为治疗帕金森病。
10.根据权利要求9所述的复方手参丸联合其他具有治疗神经损伤的药物的应用,其特征在于:复方手参丸的应用法为口服,日用剂量为1.5g/次,日用剂量次数为2次,应用时间不少于3个月。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102961595A (zh) * | 2012-11-30 | 2013-03-13 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 一种温肾助阳的药物组合物及其制备方法和制剂 |
CN105311387A (zh) * | 2014-05-27 | 2016-02-10 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 复方手参丸在制备治疗原发性震颤药物中的应用 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102961595A (zh) * | 2012-11-30 | 2013-03-13 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 一种温肾助阳的药物组合物及其制备方法和制剂 |
CN105311387A (zh) * | 2014-05-27 | 2016-02-10 | 山东阿如拉药物研究开发有限公司 | 复方手参丸在制备治疗原发性震颤药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
李水琴等: "温肾助阳益精填髓结合神经生长因子治疗脊髓损伤疗效观察 ", 《现代中西医结合杂志》 * |
王锦鹏: "《现代中医诊疗基本功与临床》", 31 May 2016, 吉林科学技术出版社 * |
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