CN108935653A - 一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用 - Google Patents

一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，其步骤是：（1）多菌灵母液的配置：称取多菌灵粉末，用无菌水稀释，得到多菌灵母液；（2）高良姜素母液的配置：称取高良姜素，加入二甲亚砜溶解，用无菌水定容得高良姜素母液；（3）多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的配置：将多菌灵母液和高良姜素母液按等体积比例混合，得到多菌灵和高良姜素复合杀菌剂；（4）将多菌灵和高良姜素复合杀菌剂涂抹在柑橘表面。方法简单，使用方便，可以缓解因为长期使用单一药物造成的微生物耐药性问题，降低了目前杀菌剂的使用剂量，更加绿色无污染。有效的抑制了柑橘采后的青霉病害，延长了采后柑橘的保鲜期。

Description

一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用
技术领域
本发明涉及水果保鲜技术领域，更具体涉及一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，该复合杀菌剂可防止采后柑橘货架期过程中的腐烂变质，有效延长果实的保鲜期。
背景技术
柑橘品种多样，营养丰富，口味酸甜，深受人们喜爱。目前我国的柑橘90％都以鲜销为主，但是柑橘果实在贮藏和运输过程中容易感染青绿霉病，导致果实腐烂变质，严重影响产品销售。市场上常见的防腐保鲜手段为物理、化学和生物防治三类，此外还有一些新研发的复合保鲜剂等。由于物理防治和生物防治自有的局限性，目前在生产中应用最广泛的是采用化学手段。常用的化学杀菌剂最早开发于20世纪60年代，由于化学杀菌剂的长期使用，果蔬表面的微生物已经发现具有一定抗药性，目前单一化学杀菌剂的效果在减弱，复合杀菌剂受到人们的关注。
天然的黄酮类化合物存在于多种植物果蔬中，种类多样，对心血管疾病的预防、免疫功能调节以及抗氧化等方面都有作用，抗菌性几乎在所有类型的黄酮化合物中都有体现。黄酮类化合物的抗菌活性与其取代基C5-OH和C7-OH有着重要的联系。黄芩素，白杨素，松属素，高良姜素，香叶木素等都具有一定的抗菌能力，高效无毒，生理活性较强。研究发现蜂胶提取物对柑橘青霉病菌有一定的抑制作用，而蜂胶中含量较多的是5，7-二羟基类黄酮。高良姜素，松属素，白杨素均属于5，7-二羟基类黄酮，研究表明有一定的抗菌能力。目前还没有具体的应用咪酰胺，多菌灵和黄酮物质复合保鲜的研究，因此本发明以咪酰胺，多菌灵，高良姜素，松属素，白杨素为原料，利用复合物对柑橘采后意大利青霉的抑菌活性，制备复合保鲜剂，减少杀菌剂咪酰胺，多菌灵的使用量，开发出一种能够有效延长柑橘采后货架期的防腐保鲜方法。
发明内容
本发明的目的在于避免目前柑橘保鲜频繁使用杀菌剂造成的环境危害，降低杀菌剂的使用剂量，本发明的目的是提供了一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用。多菌灵和天然黄酮高良姜素复合对意大利青霉的抑制效果和单独使用多菌灵的抑制效果相似，复合使用可以显著减少多菌灵的使用剂量，有效防止采后柑橘青霉菌的发生，保持柑橘果实品质，达到延长果实保鲜期的目的。
为了实现上述的目的，本发明采用以下技术方案：
一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，其步骤是：
(1)多菌灵母液的配置：称取0.6892g的多菌灵粉末(50％可湿性粉剂)，用无菌水稀释2400-2600倍，得到132.54μg/mL-143.58μg/mL的多菌灵母液；
(2)高良姜素母液的配置：称取0.385g的高良姜素(99％)，加入1mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到30-60mL可得0.00642g/mL-0.0128g/mL的高良姜素母液；
(3)多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的配置：将步骤(1)的多菌灵母液和步骤(2)的高良姜素母液按等体积比例混合，即得到多菌灵和高良姜素复合杀菌剂，其中，多菌灵的浓度为：66.27-71.79μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00321-0.0064g/mL；
(4)将步骤(3)的多菌灵和高良姜素复合杀菌剂涂抹在柑橘表面，或喷雾在柑橘表面。
通过上述技术措施，能缓解柑橘采后青霉病菌因长期使用单一杀菌剂而产生的抗药性，对柑橘采后的青霉病害有一定的抑制效果(能有效抑制柑橘损伤接种部位的病斑直径)。和高良姜素复合，能减少多菌灵的使用剂量，高良姜素是天然黄酮类化合物，对环境无污染，复合剂比单独使用多菌灵更加绿色健康。上述技术为柑橘采后提供了一种更加绿色的化学保鲜方法。本发明保鲜方法能有效抑制柑橘采后青霉病的发生，延长柑橘采后保鲜期，并对柑橘的食用品质无显著影响。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
方法简单，使用方便，可以缓解因为长期使用单一药物造成的微生物耐药性问题，降低了目前杀菌剂的使用剂量，更加绿色无污染。有效的抑制了柑橘采后的青霉病害，延长了采后柑橘的保鲜期。
在柑橘接种部位涂抹多菌灵和高良姜素复合杀菌剂(多菌灵的浓度为：66.27-71.79μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00321-0.0064g/mL，等体积复合)，在贮藏10天左右，复合杀菌剂能有效抑制菌斑生长，处理菌斑与对照菌斑相比直径减少一半以上。贮藏2天对照组菌斑直径为4.23mm，复合杀菌剂处理菌斑直径为2.14mm；贮藏4天对照组菌斑直径为15.5mm，复合杀菌剂处理菌斑直径为4.42mm；贮藏6天对照组菌斑直径为30.44mm，复合杀菌剂处理菌斑直径为13.87mm；贮藏8天对照组菌斑直径为56.97mm，复合杀菌剂处理菌斑直径为29.61mm。
附图说明
图1为一种复合保鲜剂对人工接种柑橘的防病效果；
其中横坐标为天数；纵坐标为菌斑直径。
具体实施方式
实施例1：
一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，其步骤是：
(1)多菌灵母液的配置：称取0.6892g的多菌灵粉末(50％可湿性粉剂)，用无菌水稀释2500倍，得到137.84μg/mL的多菌灵母液；
(2)高良姜素母液的配置：称取0.385g的高良姜素(99％)，加入1mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到50mL可得0.0077g/mL的高良姜素母液；
(3)多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的配置：将步骤(2)的多菌灵母液和步骤(3)的高良姜素母液按等体积比例混合，即得到多菌灵和高良姜素复合杀菌剂，其中，多菌灵的浓度为：68.92μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00385g/mL；
(4)将多菌灵和高良姜素复合杀菌剂涂抹在柑橘表面，或喷雾在人工接种30μL意大利青霉的柑橘。
通过涂抹或喷雾复合杀菌剂，接种部位的病斑被抑制，相比同期的空白对照，病斑直径小，可以有效抑制柑橘采后青霉病的发生，延长柑橘采后保鲜期，同时，可以减少多菌灵的使用浓度，降低对环境的影响。
实施例2：
本实施例对2种杀菌剂对意大利青霉的最低抑菌浓度进行了研究：
2种杀菌剂为多菌灵和咪酰胺。
每种复合杀菌剂，设定10个浓度，分别测定其最低的抑菌浓度。选取带药的PDA培养基2mL铺于载玻片上，待载玻片上培养基凝固后，吸取一滴意大利青霉孢子悬浮液(浓度为5×106cfu/mL)滴在培养基载玻片上，然后将载玻片放置在培养皿中，重复三次，26℃恒温培养10h左右，观察孢子萌发情况。
2种杀菌剂的最低抑菌浓度见表1。
表1 2种杀菌剂的最低抑菌浓度测定结果
实施例3：
本实施例对3种不同种类复合杀菌剂对意大利青霉的最低抑菌浓度进行了研究：
3种复合杀菌剂分别为：多菌灵和高良姜素复合杀菌剂、咪酰胺和松属素复合杀菌剂、咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂。
每种复合杀菌剂，设定10个浓度，分别测定其最低的抑菌浓度。选取带药的PDA培养基2mL铺于载玻片上，待载玻片上培养基凝固后，吸取一滴意大利青霉孢子悬浮液(浓度为5×106cfu/mL)滴在培养基载玻片上，然后将载玻片放置在培养皿中，重复三次，26℃恒温培养10h左右，观察孢子萌发情况。
3种复合杀菌剂的最低抑菌浓度见表2。
表2 3种复合杀菌剂的最低抑菌浓度测定结果
实施例4：
本实施例研究了3种不同种类复合杀菌剂对人工接种意大利青霉的柑橘的防病效果：
先给健康柑橘果实接种意大利青霉(接种量为：30μL)，在接种部位涂抹复合杀菌剂(空白对照组涂抹清水；阴性对照组分别涂抹杀菌剂：咪酰胺和多菌灵)，装于保鲜袋26℃贮藏，定期观察，统计菌斑直径；
实验组：
3种复合杀菌剂分别为：多菌灵和高良姜素复合杀菌剂、咪酰胺和松属素复合杀菌剂、咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂；
多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的配置方法为：称取0.6892g的多菌灵粉末(50％可湿性粉剂)，用无菌水稀释2500倍，得到137.84μg/mL的多菌灵母液；称取0.385g的高良姜素(99％)，加入1mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到50mL可得0.0077g/mL的高良姜素母液，多菌灵母液和高良姜素母液等体积比混合，即得到多菌灵和高良姜素复合杀菌剂，其中，多菌灵的浓度为：68.92μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00385g/mL。
咪酰胺和松属素复合杀菌剂的配置方法为：
取0.01mL的25％(质量比)咪酰胺乳油用无菌水稀释5600倍，即可得到0.4464μg/mL的母液，称取0.1494g的松属素，加入1mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到50mL可得0.002988g/mL的母液，咪酰胺和高良姜素等体积比混合，即得到咪酰胺和松属素复合杀菌剂，其中，咪酰胺的浓度为：0.2232μg/mL，松属素的浓度为：0.001494g/mL。
咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂的配置方法为：
取0.01mL的25％(质量比)咪酰胺乳油用无菌水稀释11200倍，即可得到0.2232μg/mL的母液，称取高良姜素0.77g，加入1mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到50mL可得0.0077g/mL的母液。咪酰胺和高良姜素等体积比混合，即得到咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂，其中，咪酰胺的浓度为：0.1116μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00385g/mL。
空白对照组：
空白对照为清水，即，空白对照组中，在接种部位涂抹复合杀菌剂，装于保鲜袋26℃贮藏，定期观察，统计菌斑直径；
阴性对照组：
阴性对照的2种杀菌剂分别为咪酰胺和多菌灵。
咪酰胺的配制方法为：取0.01mL的25％(质量比)咪酰胺乳油，用无菌水稀释8750倍，即可得到0.2857μg/mL的咪酰胺溶液。
多菌灵的配制方法为：称取0.022g多菌灵粉末(50％可湿性粉剂)，无菌水稀释100倍即可得220μg/mL的多菌灵溶液。
3种复合杀菌剂的抑菌效果如图1所示，从图中可以看到：随着贮藏时间的延长，接种后的柑橘表面的菌斑逐渐变大。
意大利青霉侵染柑橘的过程是柑橘伤口表面出现水渍状，果皮开始变软。
在贮藏初期，0-2天，菌斑直径差异不明显，实验组中的3种复合杀菌剂和阴性对照组的2种杀菌剂对意大利青霉病菌的抑制作用差别不大，都对青霉病菌有一定的抑制作用。
随着贮藏期的延长，在4天时可以看到，空白对照处理的果实病斑直径为15.5mm，而经多菌灵和高良姜素复合杀菌剂处理过的柑橘果实病斑直径为4.42mm，咪酰胺和松属素复合杀菌剂处理过的柑橘果实病斑直径为6.86mm，咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂处理过的柑橘果实病斑直径为11.6mm，多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的的抑菌效果优于咪酰胺和松属素复合杀菌剂和咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂。
第6天时可以看到空白对照组中柑橘果实病斑直径为30.44mm，而多菌灵和高良姜素复合杀菌剂处理的病斑直径13.87mm，咪酰胺和松属素复合杀菌剂处理的病斑直径为24.24mm，咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂处理过的柑橘果实病斑直径为28.59mm，多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的的抑菌效果优于咪酰胺和松属素复合杀菌剂和高良姜素复合杀菌剂。
第8天时可以看到空白对照组柑橘果实病斑直径为56.97mm，而多菌灵和高良姜素复合杀菌剂处理的病斑直径29.61mm，咪酰胺和松属素复合杀菌剂处理的病斑直径为45.78mm，咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂处理过的柑橘果实病斑直径为32.86mm，多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的的抑菌效果优于咪酰胺和高良姜素复合杀菌剂和咪酰胺和松属素复合杀菌剂。
通过多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的处理，对柑橘采后的青霉病害有一定的抑制效果。高良姜素是一种天然存在的黄酮类化合物，对环境无污染；通过和高良姜素复合，能减少多菌灵的使用浓度，复合杀菌剂相比较于单独使用多菌灵，可以缓解因为长期使用单一药物造成的微生物耐药性问题，降低目前杀菌剂的使用剂量，更加绿色无污染，多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的使用，可以有效抑制柑橘采后的青霉病害，延长采后柑橘的保鲜期。

Claims (2)

1.一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，其步骤是：
（1）多菌灵母液的配置：称取0.6892 g的多菌灵粉末，用无菌水稀释2400-2600倍，得到132.54 μg/mL-143.58 μg/mL的多菌灵母液；
（2）高良姜素母液的配置：称取0.385 g的高良姜素，加入1 mL的二甲亚砜溶解，用无菌水定容到30-60mL得0.00642g/mL-0.0128 g/mL的高良姜素母液；
（3）多菌灵和高良姜素复合杀菌剂的配置：将步骤（1）的多菌灵母液和步骤（2）的高良姜素母液按等体积比例混合，即得到多菌灵和高良姜素复合杀菌剂，其中，多菌灵的浓度为：66.27-71.79μg/mL，高良姜素的浓度为：0.00321-0.0064g/mL；
（4）将步骤（3）的多菌灵和高良姜素复合杀菌剂涂抹在柑橘表面。
2.如权利要求1所述的一种多菌灵和高良姜素复合杀菌剂在柑橘防腐保鲜中的应用，其特征在于，所述的多菌灵和高良姜素复合杀菌剂喷雾在柑橘表面。
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