CN108904585A - 一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，给雄性哺乳动物断奶后每日通过灌胃或添加到饲料中的方式补充板栗花乙酸乙酯提取物，小型雄性哺乳动物摄入剂量为0.01‑5mg/kg体重，中型雄性哺乳动物摄入剂量为0.1‑10mg/kg饲料，所述板栗花乙酸乙酯提取物是经过超声波提取后进一步超微过滤获得的冷冻干燥的粉末。本发明首次提出利用超声波提取板栗花乙酸乙酯提取物经过进一步超微过滤后，给雄性哺乳动物补饲可以显著地提高动物的精液品质，补饲时机为雄性哺乳动物断奶后即开始，本发明的技术方案使雄性哺乳动物能更好的建立生殖系统，充分挖掘公畜的遗传潜力，扩展板栗花乙酸乙酯提取物的利用范围。

Description

一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法
技术领域
本发明涉及动物生殖生理与繁殖技术领域，具体涉及一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法。
背景技术
近年来，由于农药化肥的超量或不正确应用、环境污染、气候变化等原因导致雄性动物精子活力下降、精子浓度降低、精子畸形率升高，从而导致雄性不孕不育率大幅度提高，这是一个世界性的问题，引起了全世界的广泛重视。然而现在还没有良好的方法来改善精液品质从而来治疗雄性不孕不育。因此，科学家们都在寻找有效的药物或方法来提高雄性动物的精液品质。
板栗(Castanea mollissima BL.)，又名：栗，板栗，魁栗，毛栗，风栗，素有“干果之王”、“人参果”的美誉。栗子的营养丰富，果实中含糖和淀粉高达70.1％，蛋白质7％。此外，还含脂肪、钙、磷、铁、多种维他命和微量元素，特别是维生素C、B1和胡萝卜素的含量较一般干果都高。栗子营养丰富，除富含淀粉外，含有单糖与双糖、胡罗卜素、硫胺素、核黄素、尼克酸、抗坏血酸、蛋白质、脂肪、无机盐类等营养物质。中医认为，栗有补肾健脾、强身健体、益胃平肝等功效，被称为“肾之果”。近年来研究发现板栗花里有很多有效成分，具有抗氧化、抗衰老、消炎等功效，然而不同的提取方法获得的板栗花提取物中成分也不同，板栗花里的有效成分是否也具有改善精液品质的功效还未知，也没有任何文献公开关于利用板栗花乙酸乙酯提取物来改善精液品质的方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的的方法，目的在于提供一种利用天然成分的板栗花乙酸乙酯提取物有，安全有效地提高动物精液品质的方法。
本发明的利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，关键在于，雄性哺乳动物断奶后每日通过灌胃或添加到饲料中的方式补充板栗花乙酸乙酯提取物，小型雄性哺乳动物摄入剂量为0.01-5mg/kg体重，中型雄性哺乳动物摄入剂量为0.1-10mg/kg饲料。
进一步，所述板栗花乙酸乙酯提取物的制备步骤如下：
1)采摘新鲜的盛花期的板栗雄花立即放置到乙酸乙酯中，料液比45g/L，用匀浆机充分匀浆板栗花，然后在30℃，功率820W的超声波仪器中超声提取2h，随后10000r/min离心60min，收集乙酸乙酯层溶液，把得到的乙酸乙酯层溶液旋转蒸发后冷冻干燥，得到黄色粉末；
2)将步骤1)得到的黄色粉末用50％酒精清洗3遍，然后冷冻干燥，干燥后的粉末再次溶于乙酸乙酯中，然后利用孔径为0.45μm的超微过滤膜抽滤，将抽滤得到的乙酸乙酯溶液再次冷冻干燥得到固体板栗花乙酸乙酯提取物；
3)将步骤2)得到的板栗花乙酸乙酯提取物置于4℃保存备用。
进一步，所述小型雄性哺乳动物为小鼠时，从21日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过灌胃方式进行补充。
进一步，所述雄性哺乳动物为猪时，从35日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过每天添加到饲料中的方式进行补充。
进一步，所述雄性哺乳动物为绵羊时，从55日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过每天添加到饲料中的方式进行补充。
优选地，所述小型雄性哺乳动物为小鼠时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为2.5mg/kg体重。
优选地，所述雄性哺乳动物为猪时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为5mg/kg饲料。
优选地，所述雄性哺乳动物为绵羊时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为5mg/kg饲料。
优选地，所述板栗花来源于为青岛黄岛板栗园。
本发明的有益效果如下：
1、首次提出利用板栗花乙酸乙酯提取物给雄性哺乳动物补饲可以显著地提高动物的精液品质，补饲时机为雄性哺乳动物断奶后即开始。精子的品质不仅与公畜的营养水平有关，更与公畜发育期的发育情况有关，经本申请的发明人团队多年研究发现，从公畜发育期就开始进行人工干预，能更好的建立生殖系统，充分挖掘公畜的遗传潜力。采用本发明的技术方案获得的板栗花乙酸乙酯提取物，通过采用高效液相色谱-质谱联用技术分析，发现主要成分是黄酮类、挥发油类、单宁等，目前已知黄酮类物质有增加动物性器官重量的作用，但黄酮类物质同时具有与植物雌激素相同的作用，不同来源的黄酮类物质对动物的使用效果不同。本申请的发明人发现，板栗花乙酸乙酯提取的黄酮类物质，为断奶后的哺乳动物合理补饲，到达发育中的睾丸后却具有类似雄激素的作用，可以促进精子的发证，而且同时提取的挥发油等物质，具有抗氧化的特性，可以很好的保护睾丸组织不受外界环境的干扰，从而促进精子发生。经大量试验，本申请的发明人总结出本技术方案，在常见畜牧品种猪和羊上使用，获得了动物性成熟后精液品质显著提高的技术效果。
2、扩展板栗花乙酸乙酯提取物的利用范围。现有技术领域，板栗花乙酸乙酯提取物基本用于抗氧化、抗菌抑菌。而本申请通过实验发现从哺乳动物发育期开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，可以提高动物精子活力和密度，而且不改变精子的畸形率或顶体完整性。
3、给出了完整的提取板栗花乙酸乙酯提取物的方法及用于不同动物的方法。本申请的技术方案，提出板栗花经过乙酸乙酯和超声波提取后，再经过酒精洗涤除杂，然后进一步超滤膜抽滤后才用于给动物进行补充。酒精除杂和超滤工艺去除了更多杂质，而这些杂质有可能对发育期公畜构建生殖系统有副作用。针对不同动物，板栗花乙酸乙酯提取物的使用方法和剂量均不相同。本申请经过大量试验，最终确定了在小鼠、猪和绵羊上的使用方法和剂量。
附图说明
图1为小鼠补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子密度柱状对比图
图2为小鼠补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子活力柱状对比图
图3为猪补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子密度柱状对比图
图4为猪补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子活力柱状对比图
图5为绵羊补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子密度柱状对比图
图6为绵羊补充不同补充剂量板栗花乙酸乙酯提取物的精子活力柱状对比图
具体实施方式
以下通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，但是本发明的技术方案不以实施例为限。
实施例1：制备板栗花乙酸乙酯提取物
1)采摘新鲜的盛花期的板栗雄花立即放置到乙酸乙酯中，料液比45g/L，用匀浆机充分匀浆板栗花，然后在30℃，功率820W的超声波仪器中超声提取2h，随后10000r/min离心60min，收集乙酸乙酯层溶液，把得到的乙酸乙酯层溶液旋转蒸发后冷冻干燥，得到黄色粉末；
2)将步骤1)得到的黄色粉末用50％酒精清洗3遍，然后冷冻干燥，干燥后的粉末再次溶于乙酸乙酯中，然后利用孔径为0.45μm的超微过滤膜抽滤，将抽滤得到的乙酸乙酯溶液再次冷冻干燥得到固体板栗花乙酸乙酯提取物；
3)将步骤2)得到的板栗花乙酸乙酯提取物置于4℃保存备用。
实施例2：小鼠饲养试验
健康ICR品系的3周龄小鼠(体重均匀一致)240只，随机平均分配到8组(30只/组)，小鼠都是正常的进食和饮水，而且在统一的SPF级鼠房进行饲养。每天按表1设计称取一定量的实施例1步骤3)所得板栗花乙酸乙酯提取物粉末，溶于DMSO中，配制成高浓度的母液，然后利用生理盐水稀释到所需的浓度，最终DMSO<0.5％。每天按时通过灌胃的方式，给每只小鼠灌服与体重相匹配的板栗花乙酸乙酯提取物溶液。每只小鼠灌胃0.1mL板栗花乙酸乙酯提取物溶液。灌胃5周后，收取小鼠的精液，运用精液品质分析仪对精子活力和密度进行分析。试验结果如表1所示：
表1小鼠补充板栗花乙酸乙酯提取物对精液品质的影响
研究发现在0.01-2.5mg/kg范围内具有剂量依赖性(随着浓度增加，效果越明显，2.5mg/kg是最好的剂量)，5mg/kg与2.5mg/kg效果没有差异，如图1小鼠精子密度和图2小鼠精子活力所示。
实施例3：猪饲养试验
在本校合作实验基地，选取70头健康断奶(35日龄)公猪，随机分成7组(10头/组)。所有猪在一个大饲养房内，都是正常的进食和饮水，而且在统一管理。每天按表2设计称取一定量的实施例1步骤3)所得板栗花乙酸乙酯提取物粉末，把称取的动物精料和板栗花乙酸乙酯提取物粉末充分混合均匀。每天按时把配制好的含有板栗花乙酸乙酯提取物的饲料精料饲喂猪。饲喂到6个月龄，收取猪的精液，运用精液品质分析仪对精子活力和密度进行分析。
表2猪补充板栗花乙酸乙酯提取物对精液品质的影响
实验发现在0.1-5mg/kg范围内具有剂量依赖性(随着浓度增加，效果越明显，5mg/kg是最好的剂量)，10mg/kg与5mg/kg效果没有差异，如图3猪精子密度和图4猪精子活力所示。
实施例4：绵羊饲养试验
在本校合作实验基地，选取70只健康断奶(55日龄)公绵羊，随机分成7组(10只/组)。所有绵羊在一个大饲养房内，都是正常的进食和饮水，而且在统一管理。每天按表3设计称取一定量的实施例1步骤3)所得板栗花乙酸乙酯提取物粉末，把称取的动物精料和板栗花乙酸乙酯提取物粉末充分混合均匀。每天按时把配制好的含有板栗花乙酸乙酯提取物的饲料精料饲喂绵羊，保证每只动物吃到与采食量相匹配的板栗花乙酸乙酯提取物饲料。饲喂到7.5-8个月龄，收取羊的精液，运用精液品质分析仪对精子活力和密度进行分析。
表3绵羊补充板栗花乙酸乙酯提取物对精液品质的影响
实验发现在0.5-5mg/kg范围内具有剂量依赖性(随着浓度增加，效果越明显，5mg/kg是最好的剂量)，7.5-10mg/kg与5mg/kg效果没有差异，如图5绵羊精子密度和图6绵羊精子活力所示。
以上对本发明所提供的一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法进行了详细介绍。本文通过具体实施方式对本发明的原理和实施方式进行了阐述，以上说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.一种利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，雄性哺乳动物断奶后每日通过灌胃或添加到饲料中的方式补充板栗花乙酸乙酯提取物，小型雄性哺乳动物摄入剂量为0.01-5mg/kg体重，中型雄性哺乳动物摄入剂量为0.1-10mg/kg饲料。
2.根据权利要求1所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述板栗花乙酸乙酯提取物的制备步骤如下：
1)采摘新鲜的盛花期的板栗雄花立即放置到乙酸乙酯中，料液比45g/L，用匀浆机充分匀浆板栗花，然后在30℃，功率820W的超声波仪器中超声提取2h，随后10000r/min离心60min，收集乙酸乙酯层溶液，把得到的乙酸乙酯层溶液旋转蒸发后冷冻干燥，得到黄色粉末；
2)将步骤1)得到的黄色粉末用50％酒精清洗3遍，然后冷冻干燥，干燥后的粉末再次溶于乙酸乙酯中，然后利用孔径为0.45μm的超微过滤膜抽滤，将抽滤得到的乙酸乙酯溶液再次冷冻干燥得到固体板栗花乙酸乙酯提取物；
3)将步骤2)得到的板栗花乙酸乙酯提取物置于4℃保存备用。
3.根据权利要求1所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述小型雄性哺乳动物为小鼠时，从21日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过灌胃方式进行补充。
4.根据权利要求1所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述雄性哺乳动物为猪时，从35日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过每天添加到饲料中的方式进行补充。
5.根据权利要求1所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述雄性哺乳动物为绵羊时，从55日龄开始补充板栗花乙酸乙酯提取物，所述板栗花乙酸乙酯提取物通过每天添加到饲料中的方式进行补充。
6.根据权利要求1或3所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述小型雄性哺乳动物为小鼠时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为2.5mg/kg体重。
7.根据权利要求1或4所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述雄性哺乳动物为猪时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为5mg/kg饲料。
8.根据权利要求1或5所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述雄性哺乳动物为绵羊时，所述板栗花乙酸乙酯提取物每日摄入量为5mg/kg饲料。
9.根据权利要求2所述利用板栗花乙酸乙酯提取物提高动物精液品质的方法，其特征在于，所述板栗花来源于为青岛黄岛板栗园。
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