CN108888776A - 一种抗关节炎保健品 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗关节炎保健品，以EGCG和氨基葡萄糖为主要的配伍原料，添加酪蛋白作为载体，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物而得；本发明抗关节炎保健品能有效地抑制HFLS‑OA和HFLS‑RA细胞、缓解关节炎症状、预防关节结构被损伤。将EGCG与氨基葡萄糖以本发明所述的比例配伍，具有比EGCG和氨基葡萄糖单独使用更强的抗关节炎作用。本发明抗关节炎保健品不含人工化学防腐剂、对身体无任何毒副作用，可以有效预防和辅助治疗关节病变。

Description

一种抗关节炎保健品
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗关节炎保健品及其胶囊的制备方法，其可以抵抗关节炎，对于关节病变有一定的预防及辅助治疗作用。
背景技术
当今社会，人们工作压力与日俱增，生活节奏逐渐变快，而生活环境却日益恶劣。关节疾病发病率开始年轻化且有着明显的上升趋势。
EGCG对于关节炎的预防及治疗作用主要表现在：1)可抑制关节炎患者外周血和滑液中T细胞增殖；2)可抑制TNF-α、干扰素-γ、IL-6和IL-17A分泌；3)可抑制HFLS-OA及HFLS-RA细胞增殖。
氨基葡萄糖的生理功效：1)氨基葡萄糖是关节软骨的组成成分，可以特异性地作用于关节软骨，恢复软骨细胞正常的代谢功能，维护软骨基质的形态结构；2)可抑制损伤软骨基质Ⅱ型胶原的超氧化自由基、胶原酶和磷脂酶A2的生成；3)可抑制前列腺素的合成，保护皮质激素等各种有害物质对软骨细胞的破坏，从而延缓关节退变的病理过程和疾病进展，改善关节活动，缓解痛疼。氨基葡萄糖在欧洲是作为处方药出售，而在北美，则被当作饮食补充的营养品，目前所有临床资料都显示氨基葡萄糖能够长期安全地服用，它能缓解症状，减少关节结构破坏，缓解疾病的发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种能抵抗关节疾病的抗关节炎保健品，其可以抵抗关节炎，对于关节病变有一定的预防及辅助治疗作用。
为实现发明目的，本发明采取如下的技术方案：
一种抗关节炎保健品，以EGCG和氨基葡萄糖为主要的配伍原料，添加酪蛋白作为载体，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，其制备方法为：将EGCG、氨基葡萄糖和酪蛋白在室温下用水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾干燥成粉末，制成制剂。
作为优选，所述的制剂为胶囊。
作为优选，所述的EGCG、氨基葡萄糖和酪蛋白的重量比为EGCG：氨基葡萄糖：酪蛋白＝1-3：2-4：8-9。
作为优选，所述的EGCG为茶叶中提取的天然EGCG，纯度为90-99％。
作为优选，所述的氨基葡萄糖的质量含量为90-99％。
作为优选，所述的室温为10～25℃；所述的喷雾温度为50～60℃。
本发明的抗关节炎保健品胶囊(450mg/粒)的剂量为成年人服用，每日3次，每次3粒。实际食用时，成人每日早中晚各服用3粒胶囊。
经大量实验，将EGCG与氨基葡萄糖以本发明所述的比例关系配伍，并添加本发明所述比例关系的酪蛋白，能有效地防护应激对HFLS-OA和HFLS-RA细胞的损伤、减少关节结构破坏。因此，本发明的抗关节炎保健品是一种极具开发潜力的抗关节炎保健制品，其能抵抗关节肿胀，对于关节病变有一定的预防及辅助治疗作用。我们的研究表明，将EGCG与氨基葡萄糖以本发明所述的比例配伍，具有比EGCG和氨基葡萄糖单独使用更强的抗关节炎作用。
本发明抗关节炎保健品不含人工化学防腐剂、对身体无任何毒副作用，可以有效预防和辅助治疗关节病变。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为实施例1的关节炎保健品胶囊在室温放置3个月～12个月后，EGCG、氨基葡萄糖的变化对比图；
图2为实施例1至实施例4中的EGCG-氨基葡萄糖-酪蛋白纳米包合物制备的胶囊抗关节炎细胞的HFLS-OA细胞增殖结果对比图；
图3为实施例1至实施例4中的EGCG-氨基葡萄糖-酪蛋白纳米包合物制备的胶囊抗关节炎细胞的HFLS-RA细胞增殖结果对比图；
图4为关节炎模型组(CK)、塞来昔布给药组(CEL)、氨基葡萄糖给药组(GA)和实施例2的抗关节炎保健胶囊给药组(NP)的SD大鼠关节炎的抑制结果曲线图；
图5为试验周期结束后，正常组，CK组、CEL组、GA组和实施例2的抗关节炎保健胶囊NP组的SD大鼠关节炎对大鼠左右后腿截肢的影像图；
图6位试验周期结束后，CK、CE组、GA组和实施例2的NP组的SD大鼠关节炎的对大鼠左右后腿截肢的放射性评分图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例中用到的EGCG为茶叶中提取的天然EGCG：购自杭州沁源天然植物有限公司生产的食品级EGCG(纯度为90-99％)；氨基葡萄糖：购自上海麦克林生化科技有限公司生产的氨基葡萄糖，该氨基葡萄糖的质量含量为90-99％。
实施例1、一种抗关节炎保健胶囊
配方：EGCG(纯度90-99％)：氨基葡萄糖(纯度90-99％)：酪蛋白(纯度90-99％)＝1：2：8。
制备方法：称取EGCG(纯度90-99％)205g、氨基葡萄糖(纯度90-99％)410g、酪蛋白(纯度90-99％)1640g，在室温下用5L水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾(50～60℃)干燥成粉末(能过100目的筛)，再用胶囊灌装机灌制成450mg/粒的胶囊约5000粒。
实施例2、一种抗关节炎保健胶囊
配方：EGCG(纯度90-99％)：氨基葡萄糖(纯度90-99％)：酪蛋白(纯度90-99％)＝3：4：8。
制备方法：称取EGCG(纯度90-99％)615g、氨基葡萄糖(纯度90-99％)820g、酪蛋白(纯度90-99％)1640g，在室温下用6.8L水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾(50～60℃)干燥成粉末(能过100目的筛)，再用胶囊灌装机灌制成450mg/粒的胶囊约6800粒。
实施例3、一种抗关节炎保健胶囊
配方：EGCG(纯度90-99％)：氨基葡萄糖(纯度90-99％)：酪蛋白(纯度90-99％)＝1：2：9。
制备方法：称取EGCG(纯度90-99％)205g、氨基葡萄糖(纯度90-99％)410g、酪蛋白(纯度90-99％)1845g，在室温下用5.5L水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾(50～60℃)干燥成粉末(能过100目的筛)，再用胶囊灌装机灌制成450mg/粒的胶囊约5500粒。
实施例4、一种抗关节炎保健胶囊
配方：EGCG(纯度90-99％)：氨基葡萄糖(纯度90-99％)：酪蛋白(纯度90-99％)＝3：4：9。
制备方法：称取EGCG(纯度90-99％)615g、氨基葡萄糖(纯度90-99％)820g、酪蛋白(纯度90-99％)1845g，在室温下用7.3L水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾(50～60℃)干燥成粉末(能过100目的筛)，再用胶囊灌装机灌制成450mg/粒的胶囊约7300粒。
实验1、实施例1中的抗关节炎保健胶囊中EGCG和氨基葡萄糖随时间的变化
将4℃下不同保存时间的实施例1制备而得的抗关节炎保健胶囊的EGCG和氨基葡萄糖按如下方法进行测定，在室温放置12个月后都非常稳定结果如图1所示。
EGCG含量测定，采用HPLC法进行测定。33mg抗关节炎保健胶囊粉末用1ml纯水溶解，然后添加9ml甲醇混合均匀，从中取出1ml并与2ml纯水混合，涡旋1min，用PES，13mm，0.22μm过滤头过滤，滤液用HPLC进行分析。HPLC条件：色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；流速1.0mL/min；柱温40℃，进样量10μL。流动相：甲醇：水：磷酸＝300：700：1(V/V/V)，检测波长：280nm。
氨基葡萄糖含量测定，采用HPLC法进行测定。33mg抗关节炎保健胶囊粉末用1ml纯水溶解，然后添加9ml甲醇混合均匀，从中取出1ml并与2ml纯水混合，涡旋1min，从中取出10μL并与10μL衍生化试剂(1.25mL无水甲醇溶解50mg邻苯二甲醛，加3-巯基丙酸50μL和0.2mol·L-1硼砂11.2mL，轻度混匀，暗处静置30min以上备用)和40μL 0.2mol·L-1硼砂混合均匀，衍生1min后用HPLC进行分析。HPLC条件：色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；流速1.0mL/min；柱温20℃，进样量10μL。流动相：三水合乙酸钠溶液：甲醇＝80：2(V/V)，检测波长：340nm。
实验2、EGCG、氨基葡萄糖制备的胶囊损伤HFLS-OA和HFLS-RA细胞增殖测定：
将实施例1至实施例4制备所得的EGCG-氨基葡萄糖-酪蛋白纳米包合物(NP)按照如下方法进行检测，HFLS-OA和HFLS-RA细胞增殖的结果如图2所示。
检测步骤为：
1、铺板，培养HFLS-OA和HFLS-RA细胞，在显微镜下观察细胞数目及成熟度，细胞计数器计数，铺板，培养24h。
2、加药，将制备所得抗关节炎保健胶囊中的粉末配制成4.4mg/ml的浓度，添加20μl到细胞培养液中，继续培养48h，在显微镜下观察细胞数目。
3、加MTT，去除孔板中原有细胞液，新加150μl细胞液及50μl MTT，培养4h。
4、测定吸光值，去除孔板中细胞液，加150μl二甲基亚砜，酶标仪(520nm)测吸光值。
5、根据样品组与对照组吸光值计算细胞抑制率。
实验3、EGCG-氨基葡萄糖-酪蛋白纳米包合物制备的胶囊抑制SD大鼠关节炎实验测定：
将SD大鼠一共分成五组，分别是：
a：正常组；b：模型组CK；c：塞来昔布给药组(CEL)；d：氨基葡萄糖给药组(GA)；e：实施例2的抗关节炎保健胶囊给药组(NP)
对b、c、d、e这四组进行9个月的给药得到的炎症抑制结果曲线图如图4所示：
检测步骤为：
1、建立关节炎模型。牛Ⅱ型胶原蛋白于右后足掌皮下注射0.2mL诱导关节炎，两次免疫。
2、灌胃给药。根据动物与人体的每公斤体重剂量折算系数，计算浓度并制备抗关节炎保健品，通过灌胃给药的方式给予受试大鼠。
3、评价炎症得分。每周一次观察并评价炎症得分。
实验4、SD大鼠关节影像学评估：
实验周期结束后，对大鼠左(L)右(R)后腿截肢，X光照评估关节结构、关节空间及软组织状况的影像图如图5，并对骨侵蚀状况进行放射学评分如图6。
实验5、SD大鼠组织病理学评估：
实验周期结束后，对大鼠左右后腿截肢，X光片后，将后肢关节在4％的多聚甲醛中固定至少2天后，再在10％EDTA中脱钙30天，脱钙液每4天更换一次，爪子嵌入石蜡块中，用切片机纵向切开4毫米。切片放在显微镜载玻片上，盲法染色，用H&E染色法对滑膜炎和骨侵蚀的程度进行研究。
最后，还需要指出的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种抗关节炎保健品，其特征是：以EGCG和氨基葡萄糖为主要的配伍原料，添加酪蛋白作为载体，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，其制备方法为：将EGCG、氨基葡萄糖和酪蛋白在室温下用水溶解，通过超声纳米化技术制备成纳米包合物，然后喷雾干燥成粉末，制成制剂。
2.根据权利要求1所述的抗关节炎保健品，其特征是：EGCG、氨基葡萄糖和酪蛋白的重量比为EGCG：氨基葡萄糖：酪蛋白＝1-3：2-4：8-9。
3.根据权利要求1或2所述的抗关节炎保健品，其特征是：所述EGCG为茶叶中提取的天然EGCG，纯度为90-99％。
4.根据权利要求1或2所述的抗关节炎保健品，其特征是：所述氨基葡萄糖的质量含量为90-99％。
5.根据权利要求1所述的抗关节炎保健品，其特征是：所述的室温为10～30℃；所述的喷雾温度为50～60℃。
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