CN108888527A - 一种改善皮肤干燥、敏感的冻干粉剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种改善皮肤干燥、敏感的冻干粉剂及其制备方法。所述的冻干粉剂主要含有乳免疫蛋白、四氢甲基嘧啶羧酸、细胞修复因子，能通过抑制炎症信号因子IL‑1、IL‑6、IL‑7和TNF‑a来平衡抗炎作用，可有效缓解脂溢性皮炎、接触性皮炎、湿疹等皮肤炎症；抑制组胺的释放有效缓解皮肤发红和严重的皮肤瘙痒；能够强化细胞磷脂双分子层结构，重建皮肤皮脂屏障，减少皮肤经皮水分散失，正常化皮肤透皮失水率；能够重新平衡皮肤细胞的增殖，提高细胞新陈代谢能力，加速基底细胞生长，促进角质细胞更新，加速衰老死亡的角质细胞从皮肤组织的分离，从而改善皮肤粗糙状态，让皮肤表面细腻光滑。

Description

一种改善皮肤干燥、敏感的冻干粉剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种改善皮肤干燥、敏感的冻干粉剂及其制备方法。

背景技术

近年来，生物基因工程技术获得了长足的发展，美容化妆品行业迎来了全新的发展机遇，进入了生物基因美容化妆品时代，主要以一系列的细胞生长因子作为主要功效成分，直接添加至护肤霜，润肤乳，眼霜，护肤水，面膜，修复精华等化妆品中，以达到修复皮肤，抗皱，淡红血丝等美容效果。然而在现有技术中，大部分是单个或者两种细胞因子的组合产品，直接导致产品功效较为单一，无法全方位改善人的皮肤。与此同时，具有生物活性细胞生长因子由于被直接添加到含有较复杂成分的化妆品基质中，无法保证其与化妆品基质长期混合后是否还存在活性，产品的效果大打折扣。

冻干粉是在无菌环境下将药液冷冻成固态，抽真空将水分升华干燥而成的无菌粉剂。对于干燥热敏性制品和需要保持生物活性的物质，冻干是一种有效的方法。此法是将需要干燥的制品在低温下使其所含的水分冻结，然后放在真空的环境下干燥，让水分由固体状态直接升华为水蒸气并从制品中排除而使制品活性干燥。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性。如蛋白质不会发生变性和丢失其生物活性；其次，冻干制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变，加水后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化特性和生物活性。还有，由于干燥在真空条件下进行，对于一些易氧化的物质具有很好的保护作用。第四，制品经过冻干后水份含量非常低，使制品的稳定性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输还延长了制品保存期限。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于舒缓极度干燥、敏感和有皮炎皮肤的冻干粉剂，且能够有效保持生物活性成分的活性不受环境的影响，便于长期保存和使用便捷。

本发明的具体技术方案如下：

一种冻干粉剂，主要由以下质量份的原料组成的混合溶液制备而成：乳免疫蛋白0.1~2份、四氢甲基嘧啶羧酸0.1~1份、赋形剂4~6份、溶剂85~95份。

在其中一些实施例中，所述的冻干粉剂的原料还包括细胞修复因子，所述的细胞修复因子在混合溶液中的活性浓度为100~1000 IU/mL。

本发明所述的细胞修复因子是指具有刺激细胞生长和修复活性的细胞因子，可以是人表皮细胞细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子、人III型胶原蛋白的一种或一种以上的混合。在其中一些实施例中，所述的细胞修复因子为人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的混合，所述的人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的质量之比为（1-10）：（1-10）。

本发明所述的赋形剂为生物活性因子提供支架作用，当水分从冰冻状态升华为气态被抽走后，赋形剂以固定的粉状结构形成一个保护层，保护蛋白质分子空间结构的稳定。所述的赋形剂可以为甘露醇、海藻糖、甘氨酸的一种或一种以上的混合。

本发明所述的溶剂起到溶解各组分的作用，所述的溶剂可以为水、甘油、乙醇、磷酸缓冲液的一种或一种以上的混合。在其中一些实施例中，所述的溶剂为磷酸缓冲液，所述的磷酸缓冲液的pH值为6.5~7.5。

本发明所涉及的乳免疫蛋白和细胞修复因子都是属于具有生物活性的蛋白质类物质，外界环境如温度、湿度、酸碱度对它们的活性影响很大。比如，乳免疫蛋白含有α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、白蛋白、乳过氧化酶蛋白、免疫球蛋白、乳转铁蛋白等生物活性物质，它们的水溶液，在40℃环境下极短的时间内活性几乎丧失。而且酸碱度需要严格控制在6.5-7.5之间。因此当产品应用在美容护肤品中，由于酸碱度和温度的不稳定性，导致生物活性因子的活性难以保持。本发明采用冻干的方式通过甘露醇的赋形可以长期稳定蛋白质的空间结构，使得生物活性可以长期保持。当冻干粉剂使用溶媒溶解后，成分中的磷酸缓冲盐可以将溶液的酸碱度维持在6.5-7.5，且有效保证蛋白分子的分散性和均一性，有效的保持了活性物的稳定性。

本发明还提供了冻干粉剂的制备工艺，具体包括如下步骤：

（1）将乳免疫蛋白在甘油中预分散，加入磷酸缓冲液，搅拌0.5~1小时，待溶液呈半透明并无颗粒状物质后，再加入赋形剂、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解；最后加入细胞修复因子，并搅拌均匀；

（2）将搅拌均匀的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻24~48小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，24~48小时后关闭机器取出冻干粉，即可。

与现有技术相比，本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：

（1）本发明提供的冻干粉能通过抑制炎症信号因子IL-1、IL-6、IL-7和TNF-a来平衡抗炎作用，可有效缓解脂溢性皮炎、接触性皮炎、湿疹等皮肤炎症；

（2）本发明提供的冻干粉能够通过抑制组胺的释放有效缓解皮肤发红和严重的皮肤瘙痒；

（3）本发明提供的冻干粉能够强化细胞磷脂双分子层结构，重建皮肤皮脂屏障，减少皮肤经皮水分散失，正常化皮肤透皮失水率；

（4）本发明提供的冻干粉能够重新平衡皮肤细胞的增殖，提高细胞新陈代谢能力，加速基底细胞生长，促进角质细胞更新；

（5）本发明提供的冻干粉加速皮肤细胞代谢，促进基底层细胞增殖，加速衰老死亡的角质细胞从皮肤组织的分离，从而改善皮肤粗糙状态，让皮肤表面细腻光滑。

说明书附图

图1 皮肤屏障修复结果

图2 过敏抑制结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的作更详细的描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数或条件，可参照常规技术进行。

本发明所述的磷酸缓冲液其来源可以是市售产品，也可以自制。如北京索莱宝科技有限公司货号为P1031的PBST缓冲液。如pH值6.8的磷酸缓冲液的制备方法为：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。如pH值7.4的磷酸盐缓冲液的制备方法为：取磷酸二氢钾1.36g， 加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。

本发明中设计的冻干粉剂的使用方法：可使用无菌注射用水进行溶解，盖上盖子或者插入喷头。轻轻摇匀水溶液。水溶液呈半透明状或无色透明状。溶解后的溶液需在4℃环境下冷藏保存，为了保持蛋白类分子在水溶液中的活性和避免微生物的污染，在一周内需使用完。使用者一天早晚各一次，取1ml左右涂抹在皮肤表面，或者使用喷头在面部喷四次。

实施例1

一种冻干粉剂，其制备步骤如下：

（1）称取以下原料：乳免疫蛋白0.1g、四氢甲基嘧啶羧酸1g、甘露醇6g、pH值6.8的磷酸缓冲液85g；

（2）将乳免疫蛋白在等量的甘油中预分散，然后加入磷酸缓冲液，搅拌1小时，待溶液呈半透明并无颗粒状物质后；再加入甘露醇、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解，制得混合溶液；

（3）将配制好的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻24小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，48小时后关闭机器，取出冻干粉，即可。

实施例2

一种冻干粉剂，其制备步骤如下：

（1）称取以下原料：乳免疫蛋白2g、四氢甲基嘧啶羧酸0.1g、甘露醇4g、pH值7.4的磷酸缓冲液95g；

（2）将乳免疫蛋白在等量的甘油中预分散，然后加入磷酸缓冲液，搅拌0.5小时，待溶液呈半透明装并无颗粒状物质后；再加入甘露醇、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解，制得混合溶液；

（3）将配制好的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻48小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，24小时后关闭机器，取出冻干粉，即可。

实施例3

（1）称取以下原料：乳免疫蛋白1g、四氢甲基嘧啶羧酸0.5g、甘露醇4g、海藻糖1g、甘氨酸1g、pH值6.8的磷酸缓冲液92.5g；

（2）将乳免疫蛋白在等量的甘油中预分散，然后加入磷酸缓冲液，搅拌0.5小时，待溶液呈半透明装并无颗粒状物质后；再加入甘露醇、海藻糖、甘氨酸、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解；最后加入细胞修复因子，并搅拌均匀，制得混合溶液，其中所述的细胞修复因子在溶液中的活性浓度为100 IU/mL；

（3）将配制好的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻48小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，24小时后关闭机器，取出冻干粉，即可；

本实施例所述的细胞修复因子为人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的混合，所述的人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的质量之比为10：1。

实施例4

（1）称取以下原料：乳免疫蛋白1g、四氢甲基嘧啶羧酸0.5g、甘露醇4g、海藻糖1g、甘氨酸1g、pH值6.8的磷酸缓冲液92.5g；

（2）将乳免疫蛋白在等量的甘油中预分散，然后加入磷酸缓冲液，搅拌0.5小时，待溶液呈半透明装并无颗粒状物质后；再加入甘露醇、海藻糖、甘氨酸、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解；最后加入细胞修复因子，并搅拌均匀，制得混合溶液，其中所述的细胞修复因子在溶液中的活性浓度为1000 IU/mL；

（3）将配制好的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻48小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，24小时后关闭机器，取出冻干粉，即可；

本实施例所述的细胞修复因子为人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的混合，所述的人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的质量之比为1：10。

试验一 皮肤屏障修复

经皮水分散失（TEWL）表示人体通过角质层蒸发的水分，通常被用来评价皮肤的屏障功能，表皮屏障越完整，TEWL值就越低。角质层的完整性是屏障强度或屏障储水能力的一个指标，通过连续6次胶带剥离试验法测定的TEWL值进行评估。如果该方法测试后TEWL仍处于低值，则证明皮肤具有良好的屏障完整性。

本实例中试验操作如下：第0天，测定基线TEWL值，并在一侧脸颊做6次胶带剥离试验。每隔2次测定TEWL值。从第0天至28天，每天2次在整个脸部涂抹实例产品或空白对照组。第28天，在另外一侧脸颊测定基线TEWL值。对实施例1进行测试，并以纯水为空白对照组，具体测试结果见图1，其中图1的横坐标为天数，纵坐标为TEWL值。

由图1可见，6次胶带剥离试验的测量值显示，TEWL值显著下降，表明本发明中使用的冻干粉可有效提高皮肤屏障，减少皮肤水分散失，提高皮肤锁水能力。

试验二 过敏抑制试验

本实例试验操作如下： 用0.15%丙酮溶液的2，4-二硝基氟苯对试验鼠耳郭进行2次/周的涂覆，诱导出接触性皮炎的症状（过敏性皮炎）。同时使用实例1涂抹在耳郭处，2次/天。结果发现：独自使用本发明的冻干粉的试验鼠，其耳郭的肥厚化被抑制10%，表明冻干粉能抑制慢性过敏性皮肤炎。定量RT-PCR解析结果显示：试验鼠使用冻干粉后，部分炎症相关的细胞因子（IL-7和IL-1）受到显著抑制。以纯水为空白组，2mg/mL地塞米松作为对照组，具体测试结果见图2，其中纵坐标为抑制率，抑制率=实验组细胞因子读数（对照组或测试组）/空白组细胞因子读数*100%。

由图2可知，本发明使用的冻干粉会使与T细胞自身活化、分化相关的细胞因子受到影响，抑制过敏性皮肤炎症，缓解皮肤瘙痒。

试验三 敏感肌志愿者测试

对实施例1-4所制备的冻干粉进行功效评价。测试对象：各实验组均为80名志愿者，18-55岁，均为敏感性肌肤，能够按规范使用化妆品，并配合工作人员按要求完成评价工作，具有一定表述能力，能真实反应使用后的感受；测试区域：皮肤过敏处；使用：每天使用两次，连续使用4周，考察其干燥缓解、去红消炎、收敛止痒效果。具体测试结果见表3。

表3 测试记录表

由表3可见，本发明实施例提供的产品能够干燥缓解、去红消炎、收敛止痒，对敏感肌肤具有良好的修护作用。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种冻干粉剂，其特征在于，主要由以下质量份的原料组成的混合溶液制备而成：乳免疫蛋白0.1~2份、四氢甲基嘧啶羧酸0.1~1份、赋形剂4~6份、溶剂85~95份。

2.根据权利要求1所述的冻干粉剂，其特征在于，所述的冻干粉剂的原料还包括细胞修复因子，所述的细胞修复因子在混合溶液中的活性浓度为100~1000 IU/mL。

3.根据权利要求2所述的冻干粉剂，其特征在于，所述的细胞修复因子为人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的混合，所述的人碱性成纤维细胞生长因子、人角质细胞生长因子的质量之比为（1-10）：（1-10）。

4.根据权利要求1所述的冻干粉剂，其特征在于，所述的赋形剂为甘露醇、海藻糖、甘氨酸的一种或一种以上的混合。

5.根据权利要求1所述的冻干粉剂，其特征在于，所述的溶剂为水、甘油、乙醇、磷酸缓冲液的一种或一种以上的混合。

6.根据权利要求5所述的冻干粉剂，其特征在于，所述的溶剂为磷酸缓冲液，所述的磷酸缓冲液的pH值为6.5~7.5。

7.权利要求1-6任一项所述的冻干粉剂的制备工艺，具体包括如下步骤：

将乳免疫蛋白在甘油中预分散，加入磷酸缓冲液，搅拌0.5~1小时，待溶液呈半透明并无颗粒状物质后，再加入赋形剂、四氢甲基嘧啶羧酸，搅拌溶解；最后加入细胞修复因子，并搅拌均匀；

将搅拌均匀的混合溶液放入-80℃冰箱中进行预冻24~48小时，然后转移到真空冷冻干燥机中进行冻干，24~48小时后关闭机器取出冻干粉，即可。