CN104434557A - 一种具有抗氧化作用的肽组合物及其方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗氧化作用的肽组合物及其方法与应用，所述肽组合物含有以下重量份的成分：肌肽0.1-2份、谷胱甘肽0.1-2份、胶原三肽0.5-5份和合成三肽0-0.5份。同时，本发明还涉及一种化妆品，该化妆品由肽组合物、A组分和B组分组成，其中所述A组分为甘油、丙二醇、氯化钠中的一种或两种与水组成；所述B组为杏仁油、聚甘油油酸酯、鳄梨油、羊毛脂、十六醇、硅油、PEG-100硬脂酸酯、氢化蓖麻油、辛酸/癸酸甘油酯、十六醇、凡士林、蜂蜡、一缩二乙二醇单硬脂酸酯或水中的两种以上。本发明所得化妆品适合于皮肤外用，具有显著的抗氧化效果及延缓肌肤衰老的功能。

Description

一种具有抗氧化作用的肽组合物及其方法与应用

技术领域

本发明涉及化妆品，具体涉及一种具有抗氧化作用的肽组合物及其方法与应用。

背景技术

皮肤是由三部分组成，由外往里依次为表皮、真皮、皮下组织，表皮由角质形成细胞和树枝状细胞组成，表皮内有四种类型的树枝状细胞，包括黑素细胞、朗格汉斯细胞、未定型细胞和梅克尔细胞，真皮主要由结缔组织组成，包括胶原纤维、弹力纤维及基质。

皮肤老化是由活性氧造成的损伤。当皮肤直接暴露于阳光、宇宙射线、空气及物理化学性污染物中时，就会使皮肤产生一种活性氧自由基，加速皮肤老化。

因此，如何有效地清除活性氧自由基，就成为了抵抗衰老的有力“武器”。

基于抗衰老常用的化妆品活性原料有，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、金属硫蛋白(Metallothioneie,MT)、木瓜巯基酶、Ve、Vc等。但上述活性物质，除Ve、Vc外，均为大分子蛋白，存在着活性保持和皮肤障碍两大问题，因而它们用于化妆品，效果有待于进一步验证。

目前市场上有类似产品：

谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl+glycine,GSH)，别名还原型谷胱甘肽、阿拓莫兰、古拉定，是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，具有抗氧化作用和整合解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用，有关谷胱甘肽的化妆品有28个专利，较为典型的是：

CN201110087940.5(CN102166164A)公开了一种化妆品组合物，具体涉及一种含有磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶及还原型谷胱甘肽的化妆品组合物。其特征是由0.01-1％的磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶、0.1-5％还原型谷胱甘肽、5-20％润肤剂、70-90％极性溶剂、0.1-2.5％增稠剂及0.1-5％表面活性剂组成。

胶原三肽(collagen tripeptide,CTP)，是利用先进的生物工程技术由猪皮、鱼皮为原料制备的胶原蛋白的最小结构单位，是一种含有甘氨酸、脯氨酸(或羟脯氨酸)外加一个其他氨基酸的三肽，结构可简单地表示为“Gly-X-Y”，平均分子量约为280，研究表明CTP能显著提高体内过氧化物歧化酶(SOD)活力，降低丙二醛含量(杨国燕等，食品与机械，(2010)26：75-78)。以胶原三肽为关键词进行检索，相关化妆品的报道有：

CN201110380486.2(CN102366376A)公开了一种肌肤调理液，该肌肤调理液原料包括A组分和B组分，其中A组分包括透明质酸钠、水、1.3丁二醇、卡波姆940、甘草酸二钾、蓝酮胜肽、白茶提取液、胶原三肽、硫辛酸；B组分包括精油、甲酯、浓度95％三乙醇胺、水。

合成三肽(Phe-lys-Leu)，见基于谷胱甘肽设计的抗氧化肽活性研究(顾龙建，基于谷胱甘肽设计的抗氧化肽活性研究，华南理工大学硕士论文，2013)，该文献写明了当Phe-Lys-Leu浓度为3mM时，PC12细胞的存活率上升至72％左右。

肌肽，全称L-肌肽，(L-Carnosine)，别名N-beta-丙氨酰-L-组氨酸，具有显著的抗氧化能力，能够消除活性氧并去除细胞膜上脂肪酸过氧化形成的α-β不饱和醛，另外肌肽还有促进皮肤愈合的功能，有关肌肽的化妆品较为典型的是：

CN200780001933.0(CN101365417A)提供了含有下述成分(A)、(B)、(C)且满足(D)的条件的皮肤化妆品。(A)β-丙氨酰-L-组氨酸和/或其盐；(B)含有微凝胶的增稠剂，该微凝胶是在以有机溶剂或油分作为分散介质、以水作为分散相的组合物中，将水溶性烯键式不饱和单体溶解于分散相中，在分散相中自由基聚合得到的；(C)无机酸和/或有机酸；(D)皮肤化妆品在25℃下的pH为5.0或以上、低于8.0。

有关二肽、三肽合用的专利有：

CN93121024.0(CN1103068A)公开了一种多种氨基酸低肽产品的制备方法，具体为：在氮气保护下，将畜皮进行3-5次高温水解，然后过滤分离水解液和剩余残渣，蒸发滤液至一定浓度，干燥，制得。制成的低肽的分子量均在700以下，是二肽、三肽乃至氨基酸的混合物，低肽中含有18种标准氨基酸单元亦即含有全部必须氨基酸单元。

目前，尚未见到肌肽、谷胱甘肽、胶原三肽和合成三肽中的三种或四种成分混合使用的报道。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种适合皮肤外用的抗氧化活性小肽组合物，用于延缓肌肤衰老功能的化妆品。

本发明涉及一种具有抗氧化作用的肽组合物，所述肽组合物含有以下重量份的成分：肌肽0.1-2份、谷胱甘肽0.1-2份、胶原三肽0.5-5份和合成三肽0-0.5份。

优选地，所述肽组合物含有以下重量份的成分：肌肽0.2-1.5份、谷胱甘肽0.5-2份、胶原三肽0.5-5份和合成三肽0.06-0.4份。

上述肽组合物中：

所述肌肽、谷胱甘肽、胶原三肽和合成三肽，均为已知产品，可以通过市售购得。

具体而言，所述合成三肽为Phe-lys-Leu。

本发明第二目的在于提供了含上述肽组合物的化妆品，其由肽组合物、A组分和B组分组成。

其中：

所述A组分为甘油、丙二醇、氯化钠中的一种或两种与水组成。

所述B组为杏仁油、聚甘油油酸酯、鳄梨油、羊毛脂、十六醇、硅油、PEG-100硬脂酸酯、氢化蓖麻油、辛酸/癸酸甘油酯、十六醇、凡士林、蜂蜡、一缩二乙二醇单硬脂酸酯或水中的两种以上。

优选地，所述化妆品中：按照与肽组合物相同的重量单位，A组分由以下重量份的成分组成：甘油3-8份和水80-99份；B组分由以下重量份的成分组成：杏仁油0.5-5份、硅油2-4份、PEG-100硬脂酸酯0.5-1.5份、十六醇2-4份和凡士林4-8份。

或作为另一技术方案，优选地，所述化妆品中，按照与肽组合物相同的重量单位，其中A组分由以下重量份的成分组成：丙二醇1-5份和水80-98.5份；B组分由以下重量份的成分组成：鳄梨油0.5-5份、羊毛脂5-10份、十六醇0.5-3份和一缩二乙二醇单硬脂酸酯2-10份。

或作为另一技术方案，优选地，所述化妆品中，按照与肽组合物相同的重量单位，其中A组分由以下重量份的成分组成：甘油1-15份，氯化钠0.1-1份和水78-90份；B组分由以下重量份的成分组成：聚甘油油酸酯2-4份、氢化蓖麻油0.5-1.5份、蜂蜡2-4份和辛酸/癸酸甘油酯4-8份。

作为本发明的最优实施方式(抗氧化效果尤为显著)，所述化妆品中，肽组合物由以下重量份的成分组成：肌肽0.5份、谷胱甘肽2份、胶原三肽2.5份和合成三肽0.1份；A组分由以下重量份的成分组成：甘油5份，氯化钠0.5份和水89.4份；B组分由以下重量份的成分组成：聚甘油油酸酯2份、氢化蓖麻油1份、蜂蜡3份和辛酸/癸酸甘油酯5份。

此外，本发明还进一步提供了上述化妆品的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)将A组分和肽组合物混合均匀，得到混合物备用；

2)B组分加热至70-80℃，使得固形物完全分散，搅拌冷却到20-40℃，加入步骤1)得到的混合物，均质，即得。

优选地，所述步骤2)中，冷却温度为30-40℃。

上述涉及的化妆品为日霜、晚霜、眼霜、精华或护手霜。

本发明提供的具有抗氧化作用的肽组合物具有以下优点：

1、本发明提供的肽组合物中，选取了具有抗氧化活性的肌肽、谷胱甘肽、胶原三肽和合成三肽(Phe-lys-Leu)，并确定配比关系，得到的肽组合物可以通过角质层障碍，被皮肤吸收，起到抗氧化、清除自由基的作用。

2、本发明提供的化妆品适合于皮肤外用，具有显著的抗氧化效果及延缓肌肤衰老的功能，且明显优于现有技术。

3、除抗氧化效果外，本发明通过对配方的优化(尤其对于B组分的选择)，使所得化妆品具有理想的稳定性，保质期可高达1年以上，部分优选配方，在室温状态下保存1年半，清除自由基和抗氧化活性均高达60％以上，真正可用于成熟化妆品中使用，具备广阔的应用前景。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：含肽组合物的化妆品

1、组成

2、制备方法：

1)按处方量，将肽组合物与A组分混合，配制成溶液；

2)将B组分混合加热到70℃，使固形物完全分散，搅拌冷却到40℃，加入肽组合物和A组分的混合溶液，均质处理。

实施例2：含肽组合物的化妆品

1、组成

2、制备方法：

1)按处方量，将肽组合物与A组分混合，配制成溶液；

2)将B组分混合加热到75℃，使固形物完全分散，搅拌冷却到40℃，加入肽组合物和A组分的混合溶液，均质处理。

实施例3：含肽组合物的化妆品

1、组成

2、制备方法：

1)按处方量，将肽组合物与A组分混合，配制成溶液；

2)将B组分混合加热到80℃，使固形物完全分散，搅拌冷却到30℃，加入肽组合物和A组分的混合溶液，均质处理。

实施例4：含肽组合物的化妆品

1、组成

2、制备方法：

1)按处方量，将肽组合物与A组分混合，配制成溶液；

2)将B组分混合加热到70℃，使固形物完全分散，搅拌冷却到35℃，加入肽组合物和A组分的混合溶液，均质处理。

实施例5：含肽组合物的化妆品

1、组成

2、制备方法：

1)按处方量，将肽组合物与A组分混合，配制成溶液；

2)将B组分混合加热到80℃，使固形物完全分散，搅拌冷却到40℃，加入肽组合物和A组分的混合溶液，均质处理。

实验例1：自由基清除试验

1、试验原理：DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其孤对电子在517nm附近有强吸收(显深紫色)。当有机清除剂存在时，孤对电子被配对，吸收消失或减弱，通过测定吸收减弱的程度，可评价自由基清除剂的活性。

2、试验样品：

样品1-5：分别是本发明实施例1-5所制备的化妆品。

对照品1-5，参考实施例2配方及制备方法，根据下面的内容对肽组合物的组成进行调整：

对照品1为删除谷胱甘肽、胶原三肽和合成三肽，仅使用肌肽，其用量2g；

对照品2为删除肌肽、胶原三肽和合成三肽，仅使用谷胱甘肽，其用量为2g；

对照品3为删除肌肽、谷胱甘肽和合成三肽，仅使用胶原三肽，其用量为5g；

对照品4为删除肌肽、谷胱甘肽和胶原三肽，仅使用合成三肽，其用量为0.5g；

对照品5为采用CN93121024.0(CN1103068A)的方法得到的多肽，替换实施例2中的肽组合物，其用量也与肽组合物的用量同。

3、试验方法：在0月、6个月、12个月、18个月，分别取各样品溶液2mL和浓度为100μmoL/L的DPPH溶液2mL，先后加入同一具塞试管中，摇匀；室温下静置30min，于517nm波长下测定样品吸光度。

注：在6个月、12个月和18个月内的化妆品的保存条件：用玻璃瓶密封，室内阴凉处常规放置，勿置于阳光下直射。

4、检测结果：

抑制率：K(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％

Ai：2mLDPPH溶液+2mL待测品溶液的吸光度

Aj：2mL待测品溶液+2mL溶剂的吸光度

Ac：2mLDPPH溶液+2mL溶剂的吸光度

5、实验结果：

5.10个月检测样品对DPPH的清除率：见表1-1。

表1-1：0个月不同样品对DPPH的清除率(％)

表1-1结果显示，分别与对照品1-5相比，样品1-5组具有极其显著的DPPH的清除率，其中样品2-4效果最为理想，尤其以样品2最佳。

5.26个月检测样品对DPPH的清除率：见表1-2。

表1-2：6个月不同样品对DPPH的清除率(％)

表1-2结果显示：分别与对照品1-5相比，样品1-5组具有极其显著的DPPH的清除率，其中样品2-4效果最为理想，尤其以样品2最佳；较0个月相比，样品1、5的清除自由基的功能降低明显。

5.312个月检测样品对DPPH的清除率：见表1-3。

表1-3：12个月不同样品对DPPH的清除率(％)

表1-3结果显示：分别与对照品1-5相比，样品1-5组具有极其显著的DPPH的清除率，其中样品2-4效果最为理想，尤其以样品2最佳；较0个月相比，样品1、5的清除自由基的功能降低明显。

5.418个月检测样品对DPPH的清除率：见表1-4。

表1-4：18个月不同样品对DPPH的清除率(％)

表1-4结果显示：分别与对照品1-5相比，样品2-4组具有极其显著的DPPH的清除率，其中以样品2最佳；较0个月相比，样品1、5的清除自由基的功能降低明显。

结果表明：本发明提供的化妆品清除自由基的能力较强，具有明显的协同效果，且通过对配方的优化，能够使协同效果更为显著；但是，本发明提供的配方中，以实施例2-4的辅料能较好的维持肽组合物的清除自由基功能，保质期能达到18个月以上，而实施例1、5的配方清除自由基的功能随着时间的延长，其清除自由基的功能降低，超过12个月后，其品质降低。

实验例2：MTT活性试验

1、试验样品：样品1-5、对照品1-5同实验例1，另增设空白组。

2、试验方法：取对数生长期的人表皮细胞HEK-n，按照1×10⁵cells/mL的浓度接种96孔板，每孔体积200μL，正常培养24h后，向保护组细胞培养液中，分别加入样品1-5和对照品1-5，空白组为实施例2中未加肽组合物的其他成分，5min后，分别采用1mM H₂O₂进行氧化损伤处理6h。氧化损伤处理结束后，取出96孔培养板，弃上清，小心用PBS冲2-3遍后，再加入200μL含0.5mg/mL MTT的新鲜培养液，继续在37℃，5％CO₂条件下培养4h。培养结束后，弃去MTT溶液，每孔加入100μL DMSO，振荡混匀，测波长为490nm的各孔吸光度值(A490)，计算细胞存活率。

分别按照上述方法在0个月、6个月、12个月、18个月进行检测，其保存方法同实验例1。

3、试验结果：

3.10个月的MTT活性检测：见表2-1。

表2-1：0个月MTT活性试验(％)

表2-1结果显示，分别与对照品1-5相比，样品1-5可以极大地提高细胞活力，其中样品2-4效果最为理想，尤其以样品2最。

3.26个月的MTT活性检测：见表2-2。

表2-2：6个月MTT活性试验(％)

表2-2结果显示，分别与对照品1-5相比，样品2-4可以极显著提高细胞活力，其中样品2为最，样品1、5组也能明显提高细胞活力。

3.312个月的MTT活性检测：见表2-3。

表2-3：12个月MTT活性试验(％)

表2-3结果显示，分别与对照品1-5相比，样品2-4可以显著提高细胞活力，其中以样品2为最；较0个月和6个月相比，样品1、5的MTT活性明显降低。

3.418个月的MTT活性检测：见表2-4。

表2-4：18个月MTT活性试验(％)

表2-4结果显示，分别与对照品1-5相比，样品2-4可以显著提高细胞活力，其中以样品2为最。

综上所述：本发明提供的化妆品，在6个月内具有显著的抗氧化活性，可以延缓肌肤的衰老，可作为成熟化妆品推广应用；

肽组合物制备成化妆品时，随着时间的推移，其抗氧化功能降低，实施例2-4提供的化妆品，其抗氧化作用能够持续18个月以上，而实施例1、5超过12个月，其作用显著降低。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种具有抗氧化作用的肽组合物，其特征在于，所述肽组合物含有以下重量份的成分：肌肽0.1-2份、谷胱甘肽0.1-2份、胶原三肽0.5-5份和合成三肽0-0.5份。

2.根据权利要求1所述的肽组合物，其特征在于，所述肽组合物含有以下重量份的成分：肌肽0.2-1.5份、谷胱甘肽0.5-2份、胶原三肽0.5-5份和合成三肽0.06-0.4份。

3.含权利要求1或2所述肽组合物的化妆品，其特征在于，该化妆品由肽组合物、A组分和B组分组成，其中所述A组分为甘油、丙二醇、氯化钠中的一种或两种与水组成；所述B组为杏仁油、聚甘油油酸酯、鳄梨油、羊毛脂、十六醇、硅油、PEG-100硬脂酸酯、氢化蓖麻油、辛酸/癸酸甘油酯、十六醇、凡士林、蜂蜡、一缩二乙二醇单硬脂酸酯或水中的两种以上。

4.根据权利要求3所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中：按照与权利要求1或2所述肽组合物相同的重量单位，A组分由以下重量份的成分组成：甘油3-8份和水80-99份；B组分由以下重量份的成分组成：杏仁油0.5-5份、硅油2-4份、PEG-100硬脂酸酯0.5-1.5份、十六醇2-4份和凡士林4-8份。

5.根据权利要求3所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中：按照与权利要求1或2所述肽组合物相同的重量单位，A组分由以下重量份的成分组成：丙二醇1-5份和水80-98.5份；B组分由以下重量份的成分组成：鳄梨油0.5-5份、羊毛脂5-10份、十六醇0.5-3份和一缩二乙二醇单硬脂酸酯2-10份。

6.根据权利要求3所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中：按照与权利要求1或2所述肽组合物相同的重量单位，A组分由以下重量份的成分组成：甘油1-15份，氯化钠0.1-1份和水78-90份；B组分由以下重量份的成分组成：聚甘油油酸酯2-4份、氢化蓖麻油0.5-1.5份、蜂蜡2-4份和辛酸/癸酸甘油酯4-8份。

7.根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中，肽组合物由以下重量份的成分组成：肌肽0.5份、谷胱甘肽2份、胶原三肽2.5份和合成三肽0.1份；A组分由以下重量份的成分组成：甘油5份，氯化钠0.5份和水89.4份；B组分由以下重量份的成分组成：聚甘油油酸酯2份、氢化蓖麻油1份、蜂蜡3份和辛酸/癸酸甘油酯5份。

8.权利要求3-7任一项所述的化妆品的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)将A组分和肽组合物混合均匀，得到混合物备用；

2)B组分加热至70-80℃，使得固形物完全分散，搅拌冷却到20-40℃，加入步骤1)得到的混合物，均质，即得。

9.根据权利要求3-7任一项所述的化妆品，所述化妆品是日霜、晚霜、眼霜、精华或护手霜。