CN108841898A - 一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法 - Google Patents

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宋建民
王德海
宛荣生
黄祥君
张琴
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Anhui Min Zhen Biotechnology Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/12—Disaccharides

Abstract

本发明涉及海藻糖生产技术领域，具体是公开了一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，包括以下步骤：步骤一，酵母的处理与活化，步骤二，菌株筛选，步骤三，酵母透性化处理，步骤四，合成海藻糖，步骤五，海藻糖的提取。本发明克服了现有技术的不足，筛选出活性较高，海藻糖含量高的酵母细胞，透性化酵母细胞对胞内酶进行保护，提高海藻糖的产量。

Description

一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法
技术领域
本发明涉及海藻糖生产技术领域，具体属于一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法。
背景技术
海藻糖是两个葡萄糖残基由α-1，1糖苷键连接的一种非还原性二糖，可用于医药产品的保存(如细胞、疫苗、抗血清等)，在食品、保健品、化妆品行业也广泛应用。
现有的生产海藻糖的方法主要是从啤酒生产的废酵母提取，提取海藻糖时需要先破坏细胞结构，这样造成酵母内的海藻糖合成酶失活，降低了海藻糖的产量。
发明内容
本发明的目的是提供了一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，克服了现有技术的不足，筛选出活性较高，海藻糖含量高的酵母细胞，透性化酵母细胞对胞内酶进行保护，提高海藻糖的产量。
为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：
一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，包括以下步骤：
步骤一，酵母的处理与活化，取适量的啤酒废酵母加入蒸馏水稀释后，经100目的筛过滤两次得酵母悬浮液，离心获得酵母纯液，将酵母纯液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养30小时，选择纯净的酵母菌株；
步骤二，菌株筛选，将几个纯净的酵母菌菌株分别培养24小时后，分别取100g培养液进行海藻糖浓度测试，选取海藻糖浓度最高的菌株；
步骤三，酵母透性化处理，取适量的湿酵母细胞悬浮于磷酸盐缓冲液，调节PH为7，温度为30℃，添加0.5%的吐温60溶液中，振荡培养1-1.5小时，离心冷却后收集细胞，细胞再用磷酸盐缓冲液洗涤，获得细胞悬浮液；
步骤四，合成海藻糖，将细胞悬浮液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养50小时；
步骤五，海藻糖的提取，将培养好的酵母采用煮沸提取的方式提取海藻糖，依次经过脱色、除蛋白、离子去杂、浓缩、离心、结晶、烘干后获得海藻糖晶体。
进一步，所述步骤二中海藻糖浓度测试采用磷酸-蒽酮法测定海藻糖的浓度。
进一步，所述步骤三中磷酸盐缓冲液的浓度为50mmol/L。
进一步，所述步骤四中培养基重量份为：葡萄糖30g，酵母膏5g，蛋白胨20g，硫酸镁2g。
进一步，所述步骤五中煮沸提取是在酵母中加入蒸馏水，搅拌均匀后加热混合液至沸腾，继续加热2小时。
进一步，所述步骤五中脱色采用活性炭分离柱，在海藻糖提取液中添加1%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，离心分离实现除蛋白。
本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：
本发明所述一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，筛选出活性较高，海藻糖含量高的酵母细胞，透性化酵母细胞对胞内酶进行保护，提高海藻糖的产量，实现了工业化的生产，具有实用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明不仅限于这些实例，在为脱离本发明宗旨的前提下，所为任何改进均落在本发明的保护范围之内。
实施例1
本发明所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，包括以下步骤：
步骤一，酵母的处理与活化，取适量的啤酒废酵母加入蒸馏水稀释后，经100目的筛过滤两次得酵母悬浮液，离心获得酵母纯液，将酵母纯液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养30小时，选择纯净的酵母菌株；
步骤二，酵母透性化处理，取适量的湿酵母细胞悬浮于磷酸盐缓冲液，调节PH为7，温度为30℃，添加0.5%的吐温60溶液中，振荡培养1-1.5小时，离心冷却后收集细胞，细胞再用磷酸盐缓冲液洗涤，获得细胞悬浮液；
步骤三，合成海藻糖，将细胞悬浮液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养50小时；
步骤四，海藻糖的提取，将培养好的酵母采用煮沸提取的方式提取海藻糖，依次经过脱色、除蛋白、离子去杂、浓缩、离心、结晶、烘干后获得海藻糖晶体。
进一步，所述步骤二中磷酸盐缓冲液的浓度为50mmol/L。
进一步，所述步骤三中培养基重量份为：葡萄糖30g，酵母膏5g，蛋白胨20g，硫酸镁2g。
进一步，所述步骤四中煮沸提取是在酵母中加入蒸馏水，搅拌均匀后加热混合液至沸腾，继续加热2小时。
进一步，所述步骤四中脱色采用活性炭分离柱，在海藻糖提取液中添加1%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，离心分离实现除蛋白。
实施例2
本发明所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，包括以下步骤：
步骤一，酵母的处理与活化，取适量的啤酒废酵母加入蒸馏水稀释后，经100目的筛过滤两次得酵母悬浮液，离心获得酵母纯液，将酵母纯液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养30小时，选择纯净的酵母菌株；
步骤二，菌株筛选，将几个纯净的酵母菌菌株分别培养24小时后，分别取100g培养液进行海藻糖浓度测试，选取海藻糖浓度最高的菌株；
步骤三，酵母透性化处理，取适量的湿酵母细胞悬浮于磷酸盐缓冲液，调节PH为7，温度为30℃，添加0.5%的吐温60溶液中，振荡培养1-1.5小时，离心冷却后收集细胞，细胞再用磷酸盐缓冲液洗涤，获得细胞悬浮液；
步骤四，合成海藻糖，将细胞悬浮液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养50小时；
步骤五，海藻糖的提取，将培养好的酵母采用煮沸提取的方式提取海藻糖，依次经过脱色、除蛋白、离子去杂、浓缩、离心、结晶、烘干后获得海藻糖晶体。
进一步，所述步骤二中海藻糖浓度测试采用磷酸-蒽酮法测定海藻糖的浓度。
进一步，所述步骤三中磷酸盐缓冲液的浓度为50mmol/L。
进一步，所述步骤四中培养基重量份为：葡萄糖30g，酵母膏5g，蛋白胨20g，硫酸镁2g。
进一步，所述步骤五中煮沸提取是在酵母中加入蒸馏水，搅拌均匀后加热混合液至沸腾，继续加热2小时。
进一步，所述步骤五中脱色采用活性炭分离柱，在海藻糖提取液中添加1%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，离心分离实现除蛋白。
以上内容仅仅是对本发明构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一，酵母的处理与活化，取适量的啤酒废酵母加入蒸馏水稀释后，经100目的筛过滤两次得酵母悬浮液，离心获得酵母纯液，将酵母纯液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养30小时，选择纯净的酵母菌株；
步骤二，菌株筛选，将几个纯净的酵母菌菌株分别培养24小时后，分别取100g培养液进行海藻糖浓度测试，选取海藻糖浓度最高的菌株；
步骤三，酵母透性化处理，取适量的湿酵母细胞悬浮于磷酸盐缓冲液，调节PH为7，温度为30℃，添加0.5%的吐温60溶液中，振荡培养1-1.5小时，离心冷却后收集细胞，细胞再用磷酸盐缓冲液洗涤，获得细胞悬浮液；
步骤四，合成海藻糖，将细胞悬浮液接种到培养基上，30℃条件下在振荡培养箱中培养50小时；
步骤五，海藻糖的提取，将培养好的酵母采用煮沸提取的方式提取海藻糖，依次经过脱色、除蛋白、离子去杂、浓缩、离心、结晶、烘干后获得海藻糖晶体。
2.根据权利要求1所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤二中海藻糖浓度测试采用磷酸-蒽酮法测定海藻糖的浓度。
3.根据权利要求1所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤三中磷酸盐缓冲液的浓度为50mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤四中培养基重量份为：葡萄糖30g，酵母膏5g，蛋白胨20g，硫酸镁2g。
5.根据权利要求1所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤五中煮沸提取是在酵母中加入蒸馏水，搅拌均匀后加热混合液至沸腾，继续加热2小时。
6.根据权利要求1所述的一种透性化酵母细胞生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤五中脱色采用活性炭分离柱，在海藻糖提取液中添加1%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，离心分离实现除蛋白。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010124387A1 (en) * 2009-05-01 2010-11-04 Micropharma Limited Bacterial compositions for prophylaxis and treatment of degenerative disease
CN102634470A (zh) * 2012-04-10 2012-08-15 宋建民 一种纤维化纤维微细菌及渗透发酵生产海藻糖的方法
CN103146779A (zh) * 2013-04-02 2013-06-12 南京工业大学 一种利用全细胞催化合成海藻糖的方法
CN105886573A (zh) * 2016-05-16 2016-08-24 齐鲁工业大学 一种连续胞外酶生物法制备海藻糖的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010124387A1 (en) * 2009-05-01 2010-11-04 Micropharma Limited Bacterial compositions for prophylaxis and treatment of degenerative disease
CN102634470A (zh) * 2012-04-10 2012-08-15 宋建民 一种纤维化纤维微细菌及渗透发酵生产海藻糖的方法
CN103146779A (zh) * 2013-04-02 2013-06-12 南京工业大学 一种利用全细胞催化合成海藻糖的方法
CN105886573A (zh) * 2016-05-16 2016-08-24 齐鲁工业大学 一种连续胞外酶生物法制备海藻糖的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NILEEMA R.DIVATE等: "Engineering Saccharomyces cerevisiae for improvement in ethanol tolerance by accumulation of trehalose", 《BIOENGINEERED》 *
余伯良编著: "《微生物饲料生产技术》", 30 November 1993 *
张建双等: "透性化酒精酵母细胞产海藻糖方法的研究", 《中国酿造》 *
田青等: "从啤酒废酵母中提取海藻糖的工艺研究及效益分析", 《农产品加工》 *

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