CN108834957A - 一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 - Google Patents
一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108834957A CN108834957A CN201811037927.7A CN201811037927A CN108834957A CN 108834957 A CN108834957 A CN 108834957A CN 201811037927 A CN201811037927 A CN 201811037927A CN 108834957 A CN108834957 A CN 108834957A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bolti
- fish
- mandarin fish
- gynogenesis
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000404975 Synchiropus splendidus Species 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 241000264847 Siniperca chuatsi Species 0.000 claims abstract description 9
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 230000034994 death Effects 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 28
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 16
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 12
- 241000276701 Oreochromis mossambicus Species 0.000 claims description 11
- 241000594011 Leuciscus leuciscus Species 0.000 claims description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 4
- 241001609213 Carassius carassius Species 0.000 claims description 3
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 claims description 3
- 241000252234 Hypophthalmichthys nobilis Species 0.000 claims description 3
- 241000755266 Kathetostoma giganteum Species 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 3
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 claims description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 3
- 101100279438 Caenorhabditis elegans egg-3 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 claims 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 7
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 2
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 25
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 18
- 238000011161 development Methods 0.000 description 14
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 14
- 241000219233 Oreochromis aureus Species 0.000 description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 4
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 4
- 241000143060 Americamysis bahia Species 0.000 description 3
- 241000276618 Perciformes Species 0.000 description 3
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000009599 head growth Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000003458 notochord Anatomy 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 241001454694 Clupeiformes Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 235000019513 anchovy Nutrition 0.000 description 2
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 2
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 2
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 241001441694 Callichthyidae Species 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276703 Oreochromis niloticus Species 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 241000269978 Pleuronectiformes Species 0.000 description 1
- 241000264848 Siniperca Species 0.000 description 1
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000003464 cuspid Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000002196 ecbolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000012214 genetic breeding Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- -1 iginates Species 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000002050 maxilla Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K61/00—Culture of aquatic animals
- A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K61/00—Culture of aquatic animals
- A01K61/10—Culture of aquatic animals of fish
- A01K61/17—Hatching, e.g. incubators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/20—Animal feeding-stuffs from material of animal origin
- A23K10/22—Animal feeding-stuffs from material of animal origin from fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Birds (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
Abstract
本发明提出了一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法，该方法以尼罗罗非鱼为母本，以翘嘴鳜为父本，进行雌核发育，过程中，不需要对尼罗罗非鱼和翘嘴鳜注射催产剂，也不需要对鳜鱼精子进行灭活处理，更不需要对受精卵进行二倍化处理，尼罗罗非鱼卵子与翘嘴鳜精子受精后，有10％左右个体可以开口摄食，经过流式细胞仪检测倍性发现其中2～3％左右的个体为二倍体尼罗罗非鱼，其余为单倍体。由于单倍体存在严重的畸形，在后续培育过程中会自然死亡，不需要对二倍体个体进行再次筛选，即可获得雌核发育的尼罗罗非鱼二倍体个体。
Description
技术领域
本发明涉及鱼新品系育种技术领域，特别涉及一种尼罗罗非鱼(♀)与翘嘴鳜(♂)雌核发育的方法。
背景技术
尼罗罗非鱼，Oreochromis niloticus(Linnaeus,1758)，属于鲈形目丽鱼科，原产于非洲，已广泛为其他地区所引进。由于罗非鱼食性杂、生长快、抗病力强，易于在各种养殖模式下养殖，因而罗非鱼养殖业发展迅猛，目前已成为世界性的主要养殖鱼类，也是我国最大宗的出口淡水养殖品种，产量和出口量分别占全球总量的40％和70％左右。尼罗罗非鱼是罗非鱼中最大型的品种，而且骨刺少，肉质细嫩且富于弹性，味道鲜美，其风味可与海洋鲷鱼、比目鱼媲美。
翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为鲈形目，鮨科，鳜亚科，鳜属鱼类，生活适温7℃～32℃，最适温度18℃～25℃，自开食起终生以活鱼虾为食，是鲈形目中的淡水底栖凶猛鱼类。翘嘴鳜从低纬度的越南经云南中部至四川抵秦岭以东过黄河至东北黑龙江流域均有分布，向东扩及朝鲜半岛。翘嘴鳜头后及背前部隆起较高，眼较小(头长为眼径的5.4～6.8倍)，上颌骨后端伸达眼后缘之下或更后，上下颌前段犬牙明显。
在已有技术中，申请人中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，2004年5月25日申请的名称“一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法”的发明专利涉及一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法，其主要采用纯种奥利亚罗非鱼作为杂交母本，杂交父本为有乳白色精液流出的雄鳜鱼；采用催产剂进行人工注射，奥利亚罗非鱼雌、雄个体均采用一次注射，雄鳜鱼注射催产剂也可不注射催产剂；把奥利亚罗非鱼雌、雄鱼分开饲养，当罗非鱼排出卵子时，迅速挤入鳜鱼精液，在孵化过程中，将死亡的卵吸去，并摇动培养皿，当杂交鱼出膜后，转入水族箱中饲养，再移入野外池塘继续培养获得杂交鱼。该发明培育出来的杂交鱼比对照奥利亚罗非鱼生长快10％以上，体型短、厚，适于加工。该方法过程繁琐，要求高，条件苛刻，尤其是罗非鱼需要人工注射催产剂，不方便操作。
此外，申请人湖南文理学院，2017年06月21日申请的名称为“一种鳜鱼与罗非鱼杂交新品系育种方法”的发明专利，其涉及通过亲本的选择、亲本的强化培育、催产、人工授精、孵化这些步骤，利用鳜鱼与罗非鱼杂交，综合鳜鱼和罗非鱼的优良性状，经养殖试验，该杂交F1代表现出了性子较为温和、食性广等特点。但是其操作中同样需要对两种亲本进行催产处理，增加了操作的难度。
雌核发育(gynogenesis)，是一种发育方式，在这种发育方式中，精子虽正常进入激活卵子，但其细胞核在染色体中很快消失，并不参与胚胎的发育，胚胎的发育仅受母体遗传控制。鱼类雌核发育一般用灭活的精子，而未灭活的异种精子在一些鱼类中也可以激活其卵子的发育产生部分雌核发育个体。与传统的同胞近亲交配选择育种技术相比，由于雌核发育后代的遗传物质完全来自母本，因而可以作为快速建立高纯合度品系的有效手段。此外，开展人工诱导罗非鱼雌核发育的研究，对于快速建立纯系，在纯系中选育个体大、生长迅速和抗病能力强的优良新品种，以及进行性别控制和开展遗传学的研究等，都具有非常重大的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处，从而提供一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法，该方法不需要对尼罗罗非鱼和翘嘴鳜注射催产剂，也不需要对鳜鱼精子进行灭活处理，更不需要对受精卵进行二倍化处理，尼罗罗非鱼卵子与翘嘴鳜精子受精后，有10％左右个体可以开口摄食，经过流式细胞仪检测倍性发现其中2～3％左右的个体为二倍体尼罗罗非鱼，其余为单倍体。由于单倍体存在严重的畸形，在后续培育过程中会自然死亡，不需要对二倍体个体进行再次筛选，即可获得雌核发育的尼罗罗非鱼个体。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜鱼雌核发育的方法，包括如下步骤：
S1、在水温25-28℃时，选择后腹部饱满、生殖孔突出明显，体格健壮体形较好的纯种尼罗罗非鱼作为杂交母本，杂交父本则挑选轻按腹部即有乳白色精液流出的雄性翘嘴鳜，将上述亲鱼分别放入室内循环水养殖系统中分开饲养，同时充气以保证溶氧；
S2、把尼罗罗非鱼雌鱼单个分开饲养，调节循环水养殖系统水温稳定在26～28℃，每日按体重3％投喂高蛋白饲料；
S3、把翘嘴鳜雄鱼单个分开饲养，调节循环水养殖系统水温稳定在26～28℃，且在亲鱼放养的同时投入饵料鱼，投饵量为亲鱼重量的1倍～3倍，以后定期检查养殖缸内饵料鱼情况，根据饵料鱼的存量调整投饵量，保持饵料鱼与鳜亲鱼重量之比为1︰1～1.5，饵料鱼以细长的鲮、麦鲮、野鲮、鲢、鲫、鳙、鲤鱼鱼仔等为主，规格小于亲鱼的口径；
S3、当尼罗罗非鱼雌鱼生殖乳突明显突出，且颜色发红时表明卵子成熟，从养殖系统中立即捞出，将成熟卵子挤入洗净的烧杯中，然后挤入翘嘴鳜精液，用干净、柔软的家禽羽毛快速拌匀，倒入少量养殖系统水，使卵受精3～5分钟，然后继续倒入大量养殖系统的水，以冲洗掉多余的精子；
S4、将受精卵倒入孵化系统中孵化，孵化系统的水为循环水，且24h不间断曝气，水温在27℃～28℃；
S5、经孵化后鱼苗游出孵化系统，即可转入水族箱中饲养，在随后的2周左右，存在生理缺陷的单倍体个体会自然死亡，存活个体即为翘嘴鳜精子诱导的尼罗罗非鱼雌核发育的二倍体个体，养至3-5cm后移入室外水泥池或土塘继续培育。
本发明与现有技术相比具有的有益效果为：本发明通过观察尼罗罗非鱼卵巢自然成熟时生殖乳突的表现，避免注射催产激素对亲鱼带来的影响，人工挤卵后与翘嘴鳜精子受精，受精率达95％以上，胚胎早期发育正常，孵化率在90％左右，在仔鱼平游前大量畸形个体自然死亡，有10％个体可以摄食丰年虾等开口饵料，随着单倍体的自然死亡，存活的个体经流式细胞仪检测证实都为二倍体。杂交获得的二倍体个体表型和尼罗罗非鱼一致，染色体核型也一致。由于该雌核发育鱼是尼罗罗非鱼的二倍体状态，可以认为是尼罗罗非鱼的高度纯合品系，因而可以作为尼罗罗非鱼性别控制、遗传生物学等研究的优良材料。此外，雌核发育的二倍体尼罗罗非鱼在身体花纹、体型和生长速度等方面出现了一定的分离，因此可以作为遗传育种的非常好的选育基础群体。
具体实施方式
为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明，下面将对本发明作进一步的说明。
一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜鱼雌核发育的方法，包括如下步骤：
(1)亲本选择：选取1龄以上，体质量0.5～1kg，后腹部饱满、生殖孔突出明显，性腺发育成熟且体格健壮体形较好的纯种尼罗罗非鱼雌鱼作为母本；选择1龄以上，体质量0.5～1kg，性腺发育成熟，轻按腹部即有乳白色精液流出的雄性翘嘴鳜鱼为父本。
(2)母本强化培育：将步骤(1)挑选的尼罗罗非鱼雌鱼放入室内循环水养殖系统中分开饲养，通过室内空调和养殖系统的加热设备调节循环水养殖系统水温稳定在27℃左右，每日按亲鱼体重3％投喂蛋白含量35％左右的饲料；同时循环系统24h充气以保证溶氧，维持水体中溶氧6mg/L左右。通过时控开关控制室内灯光和黑暗时间12h︰12h。
(3)父本强化培育：将步骤(1)中挑选的翘嘴鳜鱼雄鱼放入室内循环水养殖系统中分开饲养，通过室内空调和养殖系统的加热设备调节循环水养殖系统水温稳定在27℃左右，且在放养翘嘴鳜鱼雄鱼的同时投入饵料鱼，投饵量为亲鱼重量的2倍，以后定期检查翘嘴鳜养殖缸内饵料鱼情况，根据饵料鱼的存量调整饵料鱼投放量，保持池中饵料鱼与鳜亲鱼重量之比为1︰1.5，饵料鱼以细长的鲮、野鲮、麦鲮、鲢、鳙、鲫、鲤鱼鱼仔等为主，规格小于亲鱼的口径；饲养中，通过室内空调和养殖系统的加热设备调节循环水养殖系统水温稳定在27℃左右，同时循环系统24h充气以保证溶氧，维持水体中溶氧6mg/L左右。通过时控开关控制室内灯光和黑暗时间12h︰12h。
(4)人工授精：每日巡视尼罗罗非鱼的养殖系统，当观察到尼罗罗非鱼雌鱼生殖乳突明显突出，且颜色发红时表明卵子成熟，从养殖系统中立即捞出，将成熟卵子挤入洗净并擦干的烧杯中，然后挤入翘嘴鳜鱼精液，用干净、柔软的家禽羽毛快速拌匀，倒入少量养殖系统水，使尼罗罗非鱼卵受精3分钟，然后继续倒入大量养殖系统的水，以冲洗授精的胚胎。同时用上述类似的方法做一组尼罗罗非鱼卵子同尼罗罗非鱼精子人工授精的胚胎做对照。以评估尼罗罗非鱼与翘嘴鳜杂交的效果。
(5)人工孵化：将受精卵倒入孵化系统中孵化，孵化系统的水为循环水，且24h不间断曝气，水温在27℃～28℃，从受精完成开始计时，前8h每隔30分钟取出部分胚胎在解剖镜下观察受精和发育情况，8h后每隔12h做一次观察并统计胚胎发育情况。结果表明尼罗罗非鱼卵子与翘嘴鳜精子的杂交受精率都很高，在95％左右，前8h的胚胎发育与尼罗罗非鱼的胚胎发育基本同步。在继续发育的胚胎中，受精后16小时(16hpf)时杂交胚胎的发育与对照组相比较无明显差异，但杂交组胚胎中一部分胚胎停止发育并死亡。24hpf时杂交组的胚胎大部分仍然在发育，但发育进度明显慢于对照组，并且有发育异常的胚胎出现；48hpf时，杂交组胚胎仍然在发育，并且部分胚胎表现为头部发育异常，体轴较短，脊索弯曲，仍有部分个体可正常发育；到96hpf时杂交组部分胚胎因为发育停滞导致胎都死亡，大部分个体脱膜，表现为头部发育不完整、围心腔水肿、有心脏无心跳、没有血液循环、体轴缩短、脊索弯曲等，但是杂交组胚胎有15.6％可正常发育。
(6)倍性检测：取7dpf完整且存活的杂交胚胎和对照组，放入1.5ml离心管中，每管放入一个胚胎，加入100ul细胞分散液(0.25％胰酶和0.02％EDTA)，然后室温振动消化30min。消化完成后加入1ml 70％酒精，室温固定1h，然后开始后续检测，或加入酒精后放置4℃冰箱中，2个月内完成检测即可。室温固定完成后，800G离心5min，去上清后加入1ml灭菌PBS冲洗，并重复上述步骤2次。完成冲洗后加入碘化丙啶染液，终浓度为60ug/ml。室温染色5min后用流式细胞仪以对照组胚胎为二倍体检测胚胎倍性。结果表明杂交组发育正常的胚胎为二倍体，杂交组中头部发育不完整、围心腔水肿、有心脏无心跳、没有血液循环、体轴缩短、脊索弯曲等发育异常的胚胎为单倍体。
(7)鱼苗培育：在孵化系统中经9天孵化后，鱼苗可自行游出孵化系统，即可转入水族箱中饲养，开口饵料使用丰年虾，每天分别在上午10点和下午5点投喂一次，投喂量为鱼苗5分钟内吃完所有丰年虾。在随后的2周左右，存在生理缺陷的单倍体个体会自然死亡，存活个体即为翘嘴鳜精子诱导的尼罗罗非鱼雌核发育的二倍体个体，养至3-5cm后移入室外水泥池或土塘继续培育。
2018年5月～8月期间，使用上述方法多次获得经翘嘴鳜精子诱导的尼罗罗非鱼雌核发育个体，该方法的杂交受精率在95％左右，4dpf时孵化率在90％左右，其中正常发育的二倍体胚胎有20％左右，随后有10％左右个体可以开口摄食，经过流式细胞仪检测倍性发现其中2～3％左右的个体为二倍体尼罗罗非鱼，虽然使用该方法获得的雌核发育二倍体数量较少，但是这些雌核发育的尼罗罗非鱼二倍体个体在生长速度，体型，体色花纹等性状上出现了明显的分离，可以作为后续进行遗传学研究和品种选育的优良材料。
上述对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和应用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，对于本发明做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、在水温25-28℃时，选择后腹部饱满、生殖孔突出明显，体格健壮体形较好的纯种尼罗罗非鱼作为杂交母本，杂交父本则挑选轻按腹部即有乳白色精液流出的雄性翘嘴鳜，将上述亲鱼分别放入室内循环水养殖系统中分开饲养，同时充气以保证溶氧；
S2、把尼罗罗非鱼雌鱼单个分开饲养，调节循环水养殖系统水温稳定在26～28℃，每日按体重3％投喂高蛋白饲料；
S3、把翘嘴鳜雄鱼单个分开饲养，调节循环水养殖系统水温稳定在26～28℃，且在亲鱼放养的同时投入饵料鱼，投饵量为亲鱼重量的1倍～3倍，以后定期检查养殖缸内饵料鱼情况，根据饵料鱼的存量调整投饵量，保持饵料鱼与鳜亲鱼重量之比为1︰1～1.5；
S3、当尼罗罗非鱼雌鱼生殖乳突明显突出，且颜色发红时表明卵子成熟，从养殖系统中立即捞出，将成熟卵子挤入洗净的烧杯中，然后挤入翘嘴鳜精液，用干净、柔软的家禽羽毛快速拌匀，倒入少量养殖系统水，使卵受精3～5分钟，然后继续倒入大量养殖系统的水，以冲洗掉多余的精子；
S4、将受精卵倒入孵化系统中孵化，孵化系统的水为循环水，且24h不间断曝气，水温在27℃～28℃；
S5、经孵化后鱼苗游出孵化系统，即可转入水族箱中饲养，在随后的2周左右，存在生理缺陷的单倍体个体会自然死亡，存活个体即为翘嘴鳜精子诱导的尼罗罗非鱼雌核发育的二倍体个体，养至3-5cm后移入室外水泥池或土塘继续培育。
2.根据权利要求1所述的尼罗罗非鱼与翘嘴鳜鱼雌核发育的方法，其特征在于：所述步骤S3中，饵料鱼包括细长的鲮、麦鲮、野鲮、鲫、鲢、鳙、鲤鱼仔，规格小于亲鱼的口径。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811037927.7A CN108834957B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811037927.7A CN108834957B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108834957A true CN108834957A (zh) | 2018-11-20 |
| CN108834957B CN108834957B (zh) | 2021-05-18 |
Family
ID=64188197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811037927.7A Active CN108834957B (zh) | 2018-09-06 | 2018-09-06 | 一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108834957B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115336556A (zh) * | 2022-08-03 | 2022-11-15 | 湖南师范大学 | 一种雌核发育麦瑞加拉鲮的培育方法及应用 |
| CN115349496A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-18 | 湖南师范大学 | 一种翘嘴鳜精子诱导大口黑鲈雌核发育的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1582650A (zh) * | 2004-05-25 | 2005-02-23 | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 | 一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法 |
| CN104705225A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-06-17 | 天津市宽余水产养殖专业合作社 | 一种大口鲶人工繁殖方法 |
| CN107155970A (zh) * | 2017-06-21 | 2017-09-15 | 湖南文理学院 | 一种鳜鱼与罗非鱼杂交新品系育种方法 |
| CN107372225A (zh) * | 2017-08-30 | 2017-11-24 | 浙江省淡水水产研究所 | 台湾铲颌鱼的人工繁育方法 |
-
2018
- 2018-09-06 CN CN201811037927.7A patent/CN108834957B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1582650A (zh) * | 2004-05-25 | 2005-02-23 | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 | 一种奥利亚罗非鱼与鳜鱼的杂交方法 |
| CN104705225A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-06-17 | 天津市宽余水产养殖专业合作社 | 一种大口鲶人工繁殖方法 |
| CN107155970A (zh) * | 2017-06-21 | 2017-09-15 | 湖南文理学院 | 一种鳜鱼与罗非鱼杂交新品系育种方法 |
| CN107372225A (zh) * | 2017-08-30 | 2017-11-24 | 浙江省淡水水产研究所 | 台湾铲颌鱼的人工繁育方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115336556A (zh) * | 2022-08-03 | 2022-11-15 | 湖南师范大学 | 一种雌核发育麦瑞加拉鲮的培育方法及应用 |
| CN115336556B (zh) * | 2022-08-03 | 2023-11-21 | 湖南师范大学 | 一种雌核发育麦瑞加拉鲮的培育方法及应用 |
| CN115349496A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-18 | 湖南师范大学 | 一种翘嘴鳜精子诱导大口黑鲈雌核发育的方法 |
| CN115349496B (zh) * | 2022-08-19 | 2024-01-16 | 湖南师范大学 | 一种翘嘴鳜精子诱导大口黑鲈雌核发育的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108834957B (zh) | 2021-05-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102047851B (zh) | 养殖草鱼家系的构建和良种选育方法 | |
| CN101066046B (zh) | 翘嘴鳜与斑鳜的杂交繁殖方法 | |
| CN101720698B (zh) | 团头鲂与翘嘴红鲌远缘杂交的方法 | |
| CN104145865A (zh) | 一种杂交鳜鱼的育种方法 | |
| CN101940184B (zh) | 一种改良鲫的育种与养殖方法 | |
| CN105684962B (zh) | 一种翘嘴鲌与三角鲂杂种制备方法 | |
| CN104365513B (zh) | 一种鲶鱼属内杂交育种方法 | |
| CN104381218A (zh) | 禾花鲤鱼繁殖和选育方法 | |
| CN108377936B (zh) | 一种全雌鳜鱼的规模化生产方法 | |
| CN104642212A (zh) | 白甲鱼人工繁育方法 | |
| CN104304103B (zh) | 一种提早繁育、培育大规格唇*苗种繁育方法 | |
| CN103329833A (zh) | 日本白鲫与兴国红鲤杂交育种方法 | |
| CN104719199A (zh) | 一种黄颡鱼与江黄颡鱼的杂交繁育方法 | |
| CN106212333A (zh) | 一种北方须鳅的人工繁殖方法 | |
| CN102017921A (zh) | 一种翘嘴鳜鱼与大眼鳜鱼杂交及养殖方法 | |
| CN110226535A (zh) | 细鳞鲑的人工繁育技术 | |
| CN103843710A (zh) | 一种翘嘴红鲌的繁殖培育方法 | |
| CN103798173A (zh) | 用于黄颡鱼及乌鳢超雄鱼及全雄鱼开发的后裔测定方法 | |
| CN102783445B (zh) | 一种全雌化虹鳟的培育方法 | |
| CN105075949B (zh) | 一种斑点鳟人工繁育方法 | |
| CN108834957A (zh) | 一种尼罗罗非鱼与翘嘴鳜雌核发育的方法 | |
| CN105265362A (zh) | 一种长身鳜生长性状的杂交养殖方法 | |
| CN101999332A (zh) | 一种人工授精的尼罗罗非鱼繁殖方法 | |
| CN101669451B (zh) | 一种通过与伊犁鲈杂交提高美国黄金鲈生产性能的方法 | |
| CN103688880A (zh) | 以翘嘴鳜为父本与斑鳜为母本进行的杂交繁殖方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |