CN108827860A - 一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及网织红细胞计数的技术领域，特别是涉及一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，建立了一种用改良Neubauer计数板直接进行网织红细胞计数的常规化操作，其结果与权威机构认可的方法一致，获得了满意的效果；减少用Miller窥盘制备血涂片的麻烦，避免网织红细胞分布不均带来的误差；简化了操作程序，具有简捷价廉、快速实用、准确可靠、常规化、标准化操作等优点，临床广为普及。对贫血的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和骨髓移植成功与否的判断具有重要的意义；包括以下步骤：(1)制备细胞悬液；(2)选择网织红细胞计数板；(3)计数。
Description
技术领域
本发明涉及网织红细胞计数的技术领域，特别是涉及一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法。
背景技术
网织红细胞是晚幼红细胞到成熟红细胞之间的过渡型，是未完全成熟的红细胞，由于胞质中残存有核糖体等嗜碱性物质，与煌焦油蓝或新亚甲蓝染料活体染色后，呈蓝色网状物定位于红细胞胞浆内，故称网织红细胞。
网织红细胞通常在显微镜下进行人工计数，此外还有流式细胞仪和血细胞分析仪法，但是它们均需要昂贵的仪器，不适用于基层医院。人工计数法包括玻片法、试管法和Miller窥盘法。血液与染料在玻片或试管内混合，于室温25℃左右，染色8-10min，制成血涂片，计数1000个红细胞分布区域内的Ret数量，计算Ret的百分率，同时进行红细胞计数，可计算Ret的绝对值。我国卫生部临床检验中心强调废除玻片染色法，而采用试管染色法。
国际血液学标准化委员会接受国际临床实验室标准委员会对Ret所下的定义，即任何没有核的含有两个或两个以上的相当于核糖粒RNA蓝染物质颗粒的红细胞为Ret。卫生部临床检验中心和国际血液标准化委员会推荐用Miller窥盘法进行网织红细胞计数。
但是Miller窥盘法由于其价格较高，并且操作较为复杂，在国内多数实验室中基本不被采用。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种可以简化操作过程，并且价格低廉的用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，包括以下步骤：
(1)制备细胞悬液：取小试管1支，加血液100μl，加1％煌焦油蓝生理盐水染色液100μl，混匀后37℃恒温水浴箱静置10min，摇匀；也可用生理盐水进行100倍稀释，直接进行网织红细胞计数；
(2)选择网织红细胞计数板：将改良Neubauer计数板和盖玻片擦干净，并将盖玻片盖在改良Neubauer计数板上，用微量吸管吸取已经混匀后的细胞悬液冲入改良Neubauer计数板中，静置2-3min，使血细胞下沉；
(3)计数：将改良Neubauer计数板放入高倍显微镜下观察，并用高倍镜计数9个大方格内的网织红细胞数，同时计数中间1个大方格内的红细胞数。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，所述步骤(1)中，1％煌焦油蓝生理盐水染色液的制备方法包括以下步骤：
a、取煌焦油蓝1g、枸橼酸三钠0.4g和氯化钠0.85g放入配置瓶内；
b、向其中加入双重蒸馏水至100ml；
c、完全溶解后对其进行过滤，过滤后备用。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，所述步骤(2)中的盖玻片为改良Neubauer计数板专用盖玻片，其厚度为0.4-0.7mm。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，所述步骤(2)中的盖玻片大小为24mm×20mm×0.6mm。
与现有技术相比本发明的有益效果为：用Neubauer计数板和Miller窥盘法分别对网织红细胞高值(＞1.5％)、中值(0.5％～1.5％)和低值(＜1.5％)各10份标本进行检测，经q检验，其结果差异无统计学意义(P＞0.05)，其重复性试验结果，Neubauer计数板和Miller窥盘法的变异系数(CV)分别为11％和14％，提示用Neubauer计数板的精密度比Miller窥盘法更好，均符合卫生部临检中心的要求，即CV在15％之内，并且改良Neubauer计数板法价格低廉，省略了制备血涂片的程序，简化了操作，可以作为实验室常用的网织红细胞计数的方法。也可按照显微镜进行红细胞计数的方法直接获得网织红细胞的绝对值，省略了网织红细胞绝对值＝红细胞数量(×1012/L)×网织红细胞％的计算，即简化了程序，其结果更为准确可靠，值得推广和应用。
附图说明
图1是Neubauer计数板的示意图；
图2是Neubauer计数板俯视图；
图3是Neubauer计数板的结构示意图；
图4是Miller窥盘结构示意图；
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，包括以下步骤：
(1)制备细胞悬液：取小试管1支，加血液100μl，加1％煌焦油蓝生理盐水染色液100μl，混匀后37℃恒温水浴箱静置10min，摇匀；也可用生理盐水进行100倍稀释，直接进行网织红细胞计数；
(2)选择网织红细胞计数板：将改良Neubauer计数板和盖玻片擦干净，并将盖玻片盖在改良Neubauer计数板上，用微量吸管吸取已经混匀后的细胞悬液冲入改良Neubauer计数板中，静置2-3min，使血细胞下沉；
(3)计数：将改良Neubauer计数板放入高倍显微镜下观察，并用高倍镜计数9个大方格内的网织红细胞数，同时计数中间1个大方格内的红细胞数。1个大方格的面积是9个大方格面积的1/9，如果1个大方格区域内有1000个红细胞，则9个大方格区域可认为有9000个红细胞，当1个大方格内的红细胞达1110时，即相当于观察了10000个红细胞，9个大方格内网织红细胞数量除以10000，即为网织红细胞占红细胞的百分率，也可以按照以下公式计算：
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，步骤(1)中，1％煌焦油蓝生理盐水染色液的制备方法包括以下步骤：
a、取煌焦油蓝1g、枸橼酸三钠0.4g和氯化钠0.85g放入配置瓶内；
b、向其中加入双重蒸馏水至100ml；
c、完全溶解后对其进行过滤，过滤后备用。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，步骤(2)中的盖玻片为改良Neubauer计数板专用盖玻片，其厚度为0.4-0.7mm。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，步骤(2)中的盖玻片大小为24mm×20mm×0.6mm。
如图1至图3所示，Neubauer计数板是用优质厚玻璃制成的，每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池划有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm，容积为0.1mm，其中，中央大方格用双线双成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。中间一个大方格为红细胞计数区，9个大方格为网织红细胞计数区。
如图4所示，Miller窥盘为厚度1mm，直径19mm的圆形玻片，玻片上以微细刻线划分成大、小两个方形格子，A为小正方形，位于B之内，B为大正方形，内含A小正方形，A的边长为B边长的1/3，方格B的面积为小方格A面积的9倍，计数时用小方格A计数红细胞，并用大方格B(包含A)计数网织红细胞。
Miller窥盘与改良Neubauer计数板的1个大方格与9个大方格的比例一致，均为1/9，因此，用改良Neubauer计数板进行Ret计数的结果基本与Miller窥盘一致，且改良Neubauer计数板常用，价格低廉，省略了制备血涂片的程序，简化了操作，而Miller窥盘多数实验室不用，且价格为改良Neubauer计数板的50倍。
本发明的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，建立了一种用改良Neubauer计数板直接进行网织红细胞计数的常规化操作，其结果与权威机构认可的方法一致，获得了满意的效果；减少用Miller窥盘制备血涂片的麻烦，避免网织红细胞分布不均带来的误差；简化了操作程序，具有简捷价廉、快速实用、准确可靠、常规化、标准化操作等优点，临床广为普及。对贫血的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和骨髓移植成功与否的判断具有重要的意义。
用Neubauer计数板和Miller窥盘法分别对网织红细胞高值(＞1.5％)、中值(0.5％～1.5％)和低值(＜1.5％)各10份标本进行检测，经q检验，其结果差异无统计学意义(P＞0.05)，其重复性试验结果，Neubauer计数板法和Miller窥盘法的变异系数(CV)分别为11％和14％，提示Neubauer计数板法的精密度比Miller窥盘法更好，均符合卫生部临检中心的要求，即CV在15％之内，并且改良Neubauer计数板法价格低廉，省略了制备血涂片的程序，简化了操作，可以作为实验室常用的网织红细胞计数的方法。也可按照显微镜进行红细胞计数的方法直接获得网织红细胞的绝对值，省略了网织红细胞绝对值＝红细胞数量(×1012/L)×网织红细胞％的计算，简化了程序，其结果更为准确可靠，值得推广和应用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备细胞悬液：取小试管1支，加血液100μl，加1％煌焦油蓝生理盐水染色液100μl，混匀后37℃恒温水浴箱静置10min，摇匀；也可用生理盐水进行100倍稀释，直接进行网织红细胞计数；
(2)选择网织红细胞计数板：将改良Neubauer计数板和盖玻片擦干净，并将盖玻片盖在改良Neubauer计数板上，用微量吸管吸取稀释混匀后的细胞悬液冲入改良Neubauer计数板中，静置2-3min，使血细胞下沉；
(3)计数：将改良Neubauer计数板放入高倍显微镜下观察，并用高倍镜计数9个大方格内的网织红细胞数，同时计数中间1个大方格内的红细胞数。
2.如权利要求1所述的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，1％煌焦油蓝生理盐水染色液的制备方法包括以下步骤：
a、取煌焦油蓝1g、枸橼酸三钠0.4g和氯化钠0.85g放入配置瓶内；
b、向其中加入双重蒸馏水至100ml；
c、完全溶解后对其进行过滤，过滤后备用。
3.如权利要求1所述的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的盖玻片为改良Neubauer计数板专用盖玻片，其厚度为0.4-0.7mm。
4.如权利要求3所述的一种用改良Neubauer计数板进行网织红细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的盖玻片大小为24mm×20mm×0.6mm。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181116 |
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