CN108815042A - 龙胆复方提取液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种龙胆复方提取液，按重量份数计由以下原料反应得到：龙胆草根10‑25份，黄芩根5‑20份，积雪草3‑10份，苦参根1‑8份，甘草根1‑5份，植物提取酶1‑5份，低分子醇10‑30份和去离子水40‑80份，还提供了其制备方法，主要包括以下步骤：对原料粉碎处理；温差法提取；再用酶解法提取；酶灭活处理及提取液过滤。本发明提供的龙胆复方提取液，五种原料及其它组分的含量控制在最佳范围，合理配伍，相须相使，对透明质酸酶活性抑制率可以达到76％，快速抗敏止痒以解除患者痛苦，同时采用温差‑酶解法联合破壁，得到龙胆苦苷含量高达2180.5ppm，大大提高有效成分的提取率，并避免传统方法提取时粘稠物质堵塞过滤设备的现象，降低了能耗和对设备的要求，适合大规模生产。

Description

龙胆复方提取液及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及天然产物提取技术领域，具体涉及龙胆复方提取液及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤过敏是指皮肤在受到过敏源刺激时，出现生理功能紊乱或机体损伤等异常特异性免疫应答。它常伴随出现皮肤瘙痒、红肿、脱屑等症状。目前公认的抗敏止痒途径有四种：(1)隔离过敏源；(2)提高皮肤保护功能，通过修复或增强皮肤屏障保护功能来降低皮肤敏感度，起到抗敏作用；(3)抑制炎症因子释放，通过抑制组胺、肝素等介质因子的生成或释放；(4)提高皮肤自身修复功能，通过外用活性物质作用，提高皮肤修复能力减弱炎症症状和炎症时间。

由于长期使用抗组胺药物容易引起严重的副作用，而传统中草药在抗敏止痒方面的有一定的治疗效果，龙胆草为龙胆科多年生草本植物条叶龙胆等的根和茎，主产东北地区，春、秋二季均可采收，以秋采者质量为佳，根及根茎入药。味苦，性寒，功专清热燥湿。其泻肝胆实火作用甚强，并可息风止痒止痛。但是目前已有的具有抗敏止痒功能的中草药提取物的抗敏效果很一般，且止痒退红时间长，恢复速度慢，不利于快速解决患者痛苦和市场推广。

此外，不同的提取方法也对中草药提提取液的效果存在很大的影响，植物提取液开发是从植物的不同部位，利用一定的提取工艺将植物蕴含的有效成分提取出来的开发技术。目前常用的提取技术包括溶剂提取法、超声提取法、微波提取法、超临界流体萃取法等，其中溶剂提取法存在提取温度高、提取率低、成本高等问题；超声提取法对容器的厚度及放置位置等要求较高，存在工程设备放大等问题；微波提取法存在只适合热稳定性物质的局限性；超临界流体萃取法存在对水溶性成分溶解能力差，设备昂贵，清洗困难等问题。

如申请号为201810033550.1的中国专利公开了“一种龙胆草提取物及其提取工艺”，虽然通过先采用水提取龙胆草中如苦甙等水溶性成分，再通过乙醇提取龙胆草中如龙胆碱等难溶或者不溶于水的成分来提高了有效成分的得率，但是由于提取时采用微波加热只适合热稳定性物质，存在一定局限性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种抗过敏效果好、有效成份含量高的龙胆复方提取液以解决现有技术中的不足。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一种龙胆复方提取液，所述龙胆复方提取液按重量份数计由以下原料反应得到：

龙胆草根10-25份；

黄芩根5-20份；

积雪草3-10份；

苦参根1-8份；

甘草根1-5份；

植物提取酶1-5份；

低分子醇10-30份；

去离子水40-80份。

上述龙胆草根的重量份为10-25份，例如11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份、21份、22份、23份和24份，龙胆草根中的龙胆苦苷对炎症的早期渗出有抑制作用，起到抗炎镇痛作用。

上述黄芩根的重量份为5-20份，例如6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份和19份，黄芩根中的黄芩素和黄芩苷有抗组胺作用。

上述苦参根的重量份为1-8份、例如2份、2.5份、3.0份、3.5份、4.0份、4.5份、5.0份、5.5份、6.0份、6.5份、7.0份和7.5份，苦参根中的苦参碱能降低过敏介质的释放。

上述甘草根的重量份1-5份，例如1.1份、1.3份、1.5份、1.8份、2.0份、2.4份、2.8份、3.0份、3.2份、3.4份、3.8份、4.0份、4.2份、4.4份、4.6份和4.8份，甘草根中的甘草黄酮和三萜类可减少促炎症因子的表达并抑制致炎因子。

上述积雪草的重量份为3-10份，例如3.5份、4.0份、4.5份、5.0份、5.5份、6.0份、6.5份、7.0份和7.5份，积雪草中的积雪草苷可促进皮肤细胞生长、镇痛安定作用。

将龙胆草根、黄芩根、积雪草、苦参根和甘草根这五种原料结合在一起，相须相使，发挥协同功效并将其各自的含量控制在最佳范围，使最终的龙胆复方提取液能快速抗敏止痒以解除患者痛苦。

上述植物提取酶的重量份为1-5份，例如1.2份、1.5份、1.8份、2.0份、2.2份、2.6份、2.9份、3.2份、3.5份、3.8份、4.0份、4.2份、4.6份和4.9份。植物细胞由细胞壁、细胞膜和细胞质组成，细胞壁主要成分是纤维素，还有半纤维素和果胶质。纤维素分子是由椅式D-β-吡喃葡萄糖通过β-1,4-葡萄糖苷键连接而成的多糖链，天然纤维素为直链式结构，链与链之间有晶状结构和排列次序较差的无定形结构；纤维素分子以结晶或非结晶方式组合成微原纤维，微原纤维集束形成微纤维，以微纤维为基本构造构成纤维素，在干燥植物体中纤维素约占总重的1/3-1/2。半纤维素的结构和组成十分复杂，主要包括木聚糖、甘露聚糖、阿拉伯聚糖、阿拉伯半乳聚糖和木聚糖等多种组分，约占植物干重的35％，含量仅次于纤维素。植物体表面形成角质，为脂类化合物，细胞壁中木质素和栓质化使细胞不透水、不透气，增强保护作用。因此，植物细胞壁是具有一定硬度的支持和保护结构，是中药材提取有效成分的主要屏障。在提取药用植物有效成分过程中，当细胞质中的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。植物提取酶的加入可以促进提高有效成分的提取率。

上述低分子醇的重量份为10-30份，例如12份、14份、15份、18份、20份、22份、24份、26份、28份和30份，龙胆复方提取液中的大部分有效成分既溶于水又溶于醇，而水提取液一般体积大，溶液中存在大量鞣质、蛋白质、粘液质、多糖、果胶等大分子物质及许多微粒、亚微粒和絮状物等，它们大部分不但没有药理作用，而且影响产品的质量，用适当浓度的低分子醇可以有效地沉淀除去。

上述去离子水的重量份为40-80份，例如42份、45份、48份、50份、52份、55份、57份、60份、63份、65份、68份、70份、72份、75份和78份，以水为主要溶剂，可以通过外部溶剂水与药材内部细胞浓度差，导致细胞吸水溶胀，有利于细胞的软化；另外，细胞吸水后，在低温时更容易结冰形成冰刺，促进细胞壁的破裂；同时水作主要溶剂可以有效地提高提取液在化妆品使用中的相容性和稳定性。

进一步地，所述植物提取酶包括果胶酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、β-1,4-葡聚糖酶，木聚糖酶或纤维二糖酶中的任一种或几种。选用适当的酶作用于药用植物材料，如纤维素酶、果胶酶等，可以使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶等物质降解，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，从而增大有效成分的扩散面积，减少细胞壁、细胞间质等传质屏障对有效成分从细胞内提取介质扩散的传质阻力，利用与非有效成分作用的酶解反应强化有效成分的传质，从传质角度促进有效成分提取率提高。

进一步地，所述植物提取酶包括果胶酶和蛋白酶，以及纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、β-1,4-葡聚糖酶，木聚糖酶或纤维二糖酶中的任一种或几种。在酶活性最适条件下，加入一定的蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶等，消化细胞壁从而使其中的内容物释放出来，可提高植物中有效成分在水中的溶解度，单独使用纤维素酶、果胶酶和蛋白酶中的任何一种，所得破壁效果都较差，而先用纤维素酶或半纤维素酶和果胶酶一起处理，然后再用蛋白酶处理则可得到比较高的破壁率。原因如下：植物细胞的细胞壁由三部分组成：胞间层、初生壁、次生壁。胞间层位于两个细胞间，主要成分为果胶，作用为黏连细胞并缓冲细胞间的挤压；初生壁位于胞间层内侧，形成后不再变化，主要成分为纤维素、半纤维素、结构蛋白，作用是可以保持细胞一定的形状和机械强度；次生壁位于细胞内质膜和初生壁之间，主要成分为纤维素、木质等，作用是赋予细胞一定的机械强度。先用纤维素酶和果胶酶处理细胞壁，使得细胞间的胞间层、初生壁等结构降解，降低细胞间的黏连，并使得细胞壁初步破壁，再用蛋白酶处理使得初生壁结构蛋白等成分进一步降解，使得细胞壁进一步破裂降解，以大大提高破壁效果。

进一步地，所述低分子醇为丙二醇、丁二醇或甘油中的任一种或几种，加入低分子醇可以提取龙胆草中如龙胆碱等难溶或者不溶于水的成分从而提高有效成分的得率。

进一步优选地，所述龙胆复方提取液按重量份数计由以下原料反应得到：

龙胆草根20份；

黄芩根10份；

积雪草5份；

苦参根5份；

甘草根2份；

植物提取酶3份；

低分子醇20份；

去离子水50份。

本发明的第二目的在于提供一种破壁率高、能最大限度地保留有效成分、龙胆苦苷含量高的龙胆复方提取液的制备方法。

一种上述龙胆复方提取液的制备方法，包括以下步骤：

(1)按比例称取干燥的龙胆草根、黄芩根、积雪草、苦参根和甘草根，用粉碎机高速粉碎成150-250目的龙胆草根混合粉末，待用；

(2)按体积比1：10～20加入低分子醇和去离子水至所述步骤(1)的龙胆草根混合粉末中混合均匀，于水浴中将龙胆草根混合液经低温-高温至少两次冷冻和解冻温差循环浸泡，每个温度阶段浸泡时间为2～5h；

(3)将植物提取酶加入至所述步骤(2)的龙胆草根混合液中，于一定温度下搅拌提取2～5h；

(4)将所述步骤(3)中的龙胆草根混合液加热至90℃以上，用200-400目纱布或慢速定量滤纸进行粗过滤，再经0.45μm滤膜进行细过滤得到龙胆复方提取液。

上述技术方案中，先利用温差变化产生的热胀冷缩，促进细胞壁结构疏松、膨胀等，降低有效成分溶出的传质阻力，再通过含纤维素酶、果胶酶等物质的酶液将细胞壁组成成分如多糖、纤维素、果胶等粘液质降解成小分子避免粘液质堵塞滤膜，大大提高有效成分的提取率，能避免传统提取工艺如水煎煮方法出现的提取分离困难，消耗能量大，活性成分破坏性大和污染环境等问题。

使用温差-酶解破壁技术可以有效的保护活性成分，解决传统方法中植物粘液质如多糖和果胶等吸水膨胀成粘稠物质堵塞过滤设备，导致过滤困难的难题，同时还可以提高提取效率，降低能耗和对设备的要求，适合植物提取液的大规模生产。

进一步地，所述步骤(2)中提取低温为-5℃-15℃，提取高温为40～60℃，循环次数为2～5次。

上述提取低温为-5℃-15℃，例如低温为-4℃、-3℃、-2℃、-1℃、0℃、1℃、2℃、3℃、5℃、7℃、8℃、10℃、12℃、13℃和14℃，提取高温为40～60℃，例如42℃、43℃、44℃、46℃、48℃、50℃、52℃、55℃、57℃和59℃，循环次数为2～5次，例如3次和4次，低温可以让植物细胞结冰形成冰刺，以利于刺穿细胞壁，-5℃已经能达到实际生产中所需要求，温度过低会增加设备成本和能耗；而升温至40～60℃可以使酶解效率最高，过高温度会导致酶失活，同时，温度过高会使粘液质溶出导致堵塞过滤设备影响过滤效果。

进一步地，所述步骤(3)中加入植物提取酶前先加入柠檬酸缓冲液调节pH值为5.0～6.0，提取温度为50-60℃。

上述pH值为5.0～6.0，例如5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8和5.9，由此，使植物提取酶处于适宜的pH值范围内，具有最佳活性，且酸性条件能促进粘液质中多糖、果胶等的降解，避免堵塞设备。

本发明的第三目的在于提供上述龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在乳液的应用。

本发明的第四目的在于提供上述龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在面膜中的应用。

本发明提供的龙胆复方提取液及制备方法，具有以下优点：

1、利用龙胆草根、黄芩根、积雪草、苦参根和甘草根这五种原料各自的功效并将其含量控制在最佳范围内进行合理配伍制备复方提取液，相须相使，使其最大限度地发挥协同作用能快速抗敏止痒以解除患者痛苦，仅使用5mg/mL对透明质酸酶活性抑制率可以达到76％，远高于其它单一药材提取液50％的透明质酸酶活性抑制率；

2、采用温差-酶解破壁法，首先利用温差变化产生的热胀冷缩，促进细胞壁结构疏松、膨胀等，降低有效成分溶出的传质阻力，再通过酶液降解细胞壁组成成分，大大提高有效成分的提取率，得到龙胆苦苷含量高达2180.5ppm，同时能避免统提取工艺出现的如水煎煮方法提取分离困难，消耗能量大，活性成分破坏性大和污染环境等问题，且能有效地保护活性成分，解决传统方法中植物粘液质如多糖、果胶等吸水膨胀成粘稠物质堵塞过滤设备，导致过滤困难的难题，降低能耗和对设备的要求，适合植物提取液的大规模生产；

3、制备的龙胆复方提取液可以在10分钟内达到完全止痒退红的效果，恢复速度远远快于市面已有的产品，可以快速解除患者病痛，利于市场推广。

附图说明

图1是本发明龙胆复方提取液与其它提取液对透明质酸酶活性抑制率的比较图；

图2是本发明龙胆复方提取液在乳液中应用时与其它乳液对透明质酸酶活性抑制率的比较图；

图3是本发明龙胆复方提取液在面膜中应用时与其它面膜对透明质酸酶活性抑制率的比较图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。

如无具体说明，本发明的各种原料均可市售购得，或根据本技术领域的常规方法制备得到。

实施例1

称取干燥的20g龙胆草根、10g黄芩根、5g积雪草、5g苦参根和2g甘草根，用粉碎机高速粉碎成150目的龙胆草根混合粉末，待用；将龙胆草根混合粉末加入到加入到20g丙二醇和50g去离子水的混合溶剂中混合均匀，将龙胆草根混合液先放入-10℃冰箱冷冻2h，取出迅速放入55℃蒸馏水中解冻2h，如此循环3次；再加入柠檬酸调节龙胆草根提取液PH为5.5，将提取液置于55℃水浴中，加入3g纤维素酶，搅拌提取2h后，用300目纱布粗过滤，再用0.45μm滤膜细过滤，得到黄色液体。

实施例2

称取干燥的15g龙胆草根、15g黄芩根、3g积雪草、8g苦参根和3g甘草根，用粉碎机高速粉碎成200目的龙胆草根混合粉末，待用；将龙胆草根混合粉末加入到加入到15g丁二醇和55g去离子水的混合溶剂中混合均匀，将龙胆草根混合液先放入-10℃冰箱冷冻2h，取出迅速放入50℃蒸馏水中解冻2h，如此循环4次；再加入柠檬酸调节龙胆草根提取液PH为6.0，将提取液置于55℃水浴中，加入2g纤维素酶和1g果胶酶，搅拌提取3h后，再加入1g蛋白酶搅拌提取1小时，然后用300目纱布粗过滤，再用0.45μm滤膜细过滤，得到深黄色液体。

实施例3

称取干燥的25g龙胆草根、10g黄芩根、10g积雪草、6g苦参根和4g甘草根，用粉碎机高速粉碎成250目的龙胆草根混合粉末，待用；将龙胆草根混合粉末加入到加入到10g丙二醇和80g去离子水的混合溶剂中混合均匀，将龙胆草根混合液先放入-10℃冰箱冷冻2h，取出迅速放入55℃蒸馏水中解冻2h，如此循环5次；再加入柠檬酸调节龙胆草根提取液PH为6.5，将提取液置于55℃水浴中，加入3g纤维素酶和1g果胶酶，搅拌提取2h后，再加入1g蛋白酶提取1小时，然后用300目纱布粗过滤，再用0.45μm滤膜细过滤，得到深黄色液体。

实施例4

称取干燥的20g龙胆草根、15g黄芩根、8g积雪草、3g苦参根和5g甘草根，用粉碎机高速粉碎成200目的龙胆草根混合粉末，待用；将龙胆草根混合粉末加入到加入到10g丙二醇、10g丁二醇和50g去离子水的混合溶剂中混合均匀，将龙胆草根混合液先放入-10℃冰箱冷冻2h，取出迅速放入60℃蒸馏水中解冻2h，如此循环5次；再加入柠檬酸调节龙胆草根提取液PH为6.5，将提取液置于55℃水浴中，加入2g果胶酶，搅拌提取3h后，先用300目纱布粗过滤，再用0.45μm滤膜细过滤，得到深黄色液体。

试验1透明质酸酶活性抑制试验

采用透明质酸酶活性抑制试验分别来评价实施例1制备得到的龙胆复方提取液、黄芩提取液、苦参提取液、甘草提取液、龙胆提取液和积雪草提取液的抗敏效果，该方法原理为过敏源初次与人体接触后，产生抗体IgE，当过敏源再次与人体接触时，与抗体IgE结合，发生FceRI交联，从而启动过敏信号，使得胞内透明质酸酶活化，产生过敏反应。透明质酸作为皮肤的天然保湿剂，可有效限制水分，当被透明质酸酶降解后，引起细胞脱颗粒和合成介质渗出，导致过敏反应，抗过敏药物一般都能抑制透明质酸酶活性，透明质酸酶活性越高，组胺的释放量越高。如图1所示，黄芩提取液、苦参提取液、甘草提取液、龙胆提取液和积雪草提取液中黄芩提取液的抑制率为50％效果最好，而龙胆复方提取液的浓度为5mg/mL时对透明质酸酶活性的抑制率可达到75％以上，最高远远高于黄芩提取液50％的抑制率。

对实施例2-4进行试验，也得到相近的实验结果。

试验2不同提取方法对龙胆苦苷含量影响

通过龙胆苦苷含量测试来分别评价不同提取方法的有效性和提取率，参照《中国药典2015版》龙胆苦苷含量测试方法进行测定，对比例1为高温溶剂提取法，对比例2为低温溶剂提取法，对比例3为超声提取法，结果如表1：

表1不同提取方法对龙胆苦苷含量影响

由表1可知本发明实施例1至实施例4使用温差-酶解法对龙胆苦苷的提取含量可高达2550.0ppm，远远高于对比例1-3等传统提取工艺对龙胆苦苷的提取含量，大大提高龙胆苦苷有效活性物的提取率。

试验3破壁率检测

将实施例1制备得到的龙胆复方提取液与对比例4和对比例5进行破壁率检测，对比例4传统溶剂法提取液，对比例5为微波提取法提取液，试验检测步骤如下：分别对实施例1、对比例4和对比例5取各自提取前细粉与提取后细粉，精密称定，制片，于显微镜下观察分别观察25个视野，根据两者完整薄壁细胞个数、混悬液体积、称样量，按公式(1)计算山药细粉和微粉的显微特征个数：显微特征个数(/mg)＝XV/V¹W(1)。公式(1)中：X为每个的特征数，V为药材混悬液总体积(mL)，V¹为盖玻片下混悬液体积(mL)，W为药材称取量(mg)；再根据提取前细粉与提取后细粉的显微特征个数，按公式(2)计算细胞破壁率：Y＝(A-B)/A×100％(2)，其中，Y:细胞破壁率，A:提取前细粉显微特征个数，B:提取后细粉粉的显微特征个数。

表2不同提取方法的破壁率检测

由表2可知实施例1的细胞破壁率高达93％，同样的方法检测实施例2至实施例4的破壁率也均达到了90％以上，而对比例4和对比例5的破壁率只有50％左右，因此使用本发明提供的温差破壁法的破壁率远远高于传统方法。

试验4人体功效性评价

将实施例1制备得到的龙胆复方提取液与对比例4和对比例6进行人体功效性评价，对比例4传统溶剂法提取液，对比例6为市售样品，先用组胺对人体手臂小臂段进行刺激，之后涂抹提取液，观察被刺激部位的皮肤恢复情况，结果如表3：

表3龙胆复方提取液人体功效性评价

测试时间	0min刺激部位外观	10min刺激部位外观
			实施例1	皮肤红肿、瘙痒	皮肤退红、止痒
实施例2	皮肤红肿、瘙痒	皮肤退红、止痒
			实施例3	皮肤红肿、瘙痒	皮肤退红、止痒
实施例4	皮肤红肿、瘙痒	皮肤退红、止痒
			对比例4	皮肤红肿、瘙痒	皮肤有红、轻微瘙痒
对比例6	皮肤红肿、瘙痒	皮肤有红、轻微瘙痒

由表3可知，实施例1制备的提取液止痒退红效果好，10分钟内红肿和痒痛感可以完全消失，速度远远快于对比例4和对比例6，实施例2至实施例4也得到与实施例1近似的结果。

一种上述的龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在乳液中的应用。乳液的详细制备工艺如下：

(1)称取A相原料，将原料加热到80℃，搅拌使A相原料溶解；

(2)称取B相原料，将原料加热到80℃，搅拌使B相原料溶解；

(3)A相原料加入到B相，80℃搅拌均匀，趁热用均质机均质，转速3000r·min^-1，时间3min；

(4)均质完成后，搅拌下降温；

(5)40℃以下C相依次加入，搅拌均匀，冷却后得产品。

其中，A配方中加入上述实施例制备的龙胆复方提取液，B配方中加入市售龙胆提取液，C配方中未加入龙胆复方提取液，各原料及加入量见表4。

表4护肤乳液配方

将A、B、C三组配方制备得到的乳液均分别进行透明质酸酶活性抑制试验和人体功效性评价试验，两个试验结果分别如图2和表5所示。

表5乳液人体功效性评价

由图2可以看出，B配方采用市售龙胆提取液制备的面膜对透明质酸酶活性抑制率为32％左右，C配方没有加入具有抗敏止痒成分的龙胆液制取的面膜对透明质酸酶活性抑制率不到5％，A配方中加入龙胆复方提取液制备的面膜对透明质酸酶活性抑制率高达48％，远远高于B和C配方。同时由表5可以看出A配方可以在50min内使刺激部位的皮肤基本退红并且止痒，而B和C配方均不能达到此效果。

一种根据上述的龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在面膜中的应用。面膜制备工艺如下：

(1)称取A相原料，将原料加热到80℃，搅拌使A相原料溶解；

(2)降温到60℃，B相原料逐步加入到A相中，搅拌均匀；

(3)C相先预分散好，加入到A相；

(4)40℃以下D相依次加入，搅拌均匀，用无纺布面膜浸润后，装袋，密封备用。

其中，A配方中加入上述实施例制备的龙胆复方提取液，B配方中加入市售龙胆提取液，C配方中未加入龙胆复方提取液，各原料及加入量见表6。

表6面膜配方

将A、B、C三组配方制备得到的面膜均分别进行透明质酸酶活性抑制试验和人体功效性评价试验，两个试验结果分别如图3和表7所示。

表7面膜人体功效性评价

测试时间	0min刺激部位外观	50min刺激部位外观
			A配方	皮肤红肿、瘙痒	皮肤退红、止痒
B配方	皮肤红肿、瘙痒	皮肤微红、微痒
			C配方	皮肤红肿、瘙痒	皮肤红肿、瘙痒

由图3可以看出，B配方采用市售龙胆提取液制备的面膜对透明质酸酶活性抑制率为30％左右，C配方没有加入具有抗敏止痒成分的龙胆液制取的面膜对透明质酸酶活性抑制率不到5％，A配方中加入龙胆复方提取液制备的面膜对透明质酸酶活性抑制率达40％，高于B和C配方。同时由表7可以看出A配方可以在50min内使刺激部位的皮肤退红和止痒，而B和C配方均不能达到此效果。

以上实施例仅用来说明本发明的详细方法，本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明白，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种龙胆复方提取液，其特征在于，所述龙胆复方提取液按重量份数计由以下原料反应得到：

龙胆草根10-25份；

黄芩根5-20份；

积雪草3-10份；

苦参根1-8份；

甘草根1-5份；

植物提取酶1-5份；

低分子醇10-30份；

去离子水40-80份。

2.根据权利要求1所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述植物提取酶包括果胶酶、蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、β-1,4-葡聚糖酶，木聚糖酶或纤维二糖酶中的任一种或几种。

3.根据权利要求1所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述植物提取酶包括果胶酶和蛋白酶，以及纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、β-1,4-葡聚糖酶，木聚糖酶或纤维二糖酶中的任一种或几种。

4.根据权利要求1所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述低分子醇为丙二醇、丁二醇或甘油中的任一种或几种。

5.根据权利要求1所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述龙胆复方提取液按重量份数计由以下原料反应得到：

龙胆草根20份；

黄芩根10份；

积雪草5份；

苦参根5份；

甘草根2份；

植物提取酶3份；

低分子醇20份；

去离子水50份。

6.根据权利要求1～5任一项权利要求所述的龙胆复方提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按比例称取干燥的龙胆草根、黄芩根、积雪草、苦参根和甘草根，用粉碎机高速粉碎成150-250目的龙胆草根混合粉末，待用；

(2)按体积比1：10～20加入低分子醇和去离子水至所述步骤(1)的龙胆草根混合粉末中混合均匀，于水浴中将龙胆草根混合液经低温-高温至少两次冷冻和解冻温差循环浸泡，每个温度阶段浸泡时间为2～5h；

(3)将植物提取酶加入至所述步骤(2)的龙胆草根混合液中，搅拌提取2～5h；

(4)将所述步骤(3)中的龙胆草根混合液加热至90℃以上，用200-400目纱布或慢速定量滤纸进行粗过滤，再经0.45μm滤膜进行细过滤得到龙胆复方提取液。

7.根据权利要求6所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述步骤(2)中低温为-5℃-15℃，高温为40～60℃，循环次数为2～5次。

8.根据权利要求6所述的龙胆复方提取液，其特征在于，所述步骤(3)中加入植物提取酶前先加入柠檬酸缓冲液调节pH值为5.0～6.0，提取温度为50-60℃。

9.一种根据权利要求1～8中任一项权利要求所述的龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在乳液中的应用。

10.一种根据权利要求1～8中任一项权利要求所述的龙胆复方提取液作为化妆品添加剂在面膜中的应用。