CN108812710A - 一种甘蔗试管苗叶面喷施液及配制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及甘蔗种植技术领域，特别涉及一种甘蔗试管苗叶面喷施液及配制方法，本发明的喷施液主要成分含有吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素，发明人将上述各成分进行合理配比，能有效促进甘蔗无根试管苗生根、生长，本发明的特色还在于，配方中使用的生物除菌剂主要包含有蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物和香椿叶提取物；可起到抑制霉菌生长和驱虫作用，能保护甘蔗试管苗不受虫害侵袭从而提高试管苗的存活率加快出圃时间，不会造成农药残留。

Description

一种甘蔗试管苗叶面喷施液及配制方法
【技术领域】
本发明涉及甘蔗种植技术领域，特别涉及一种甘蔗试管苗叶面喷施液及配制方法。
【背景技术】
甘蔗是无性繁殖作物,目前国内外主要采用组培的方法对甘蔗进行培育，恢复其种性。甘蔗组织培养一般经过四个阶段，即初代培养(或建立无菌培养体系)、继代增殖培养、生根培养和炼苗移栽。目前，市面上出现了很多甘蔗试管苗的驯化方法，主要是利用生长促进液对甘蔗进行喷施，来达到提高甘蔗生根率、存活率的目的，例如，中国专利ZL201510273010.7《提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液及方法》和中国专利ZL201510273074.7《提高甘蔗试管苗光合自养生根效率的生长促进液及方法》通过配置适合甘蔗生长的生长促进液来达到促进甘蔗生根的目的，然而甘蔗试管苗在移栽生根过程中，很容易受病菌、虫害侵袭，造成试管苗腐烂、植株损伤，影响甘蔗试管苗的生长和存活。
甘蔗试管苗在培育过程中由于培养基糖分比较高，从培养室环境移栽到外界自然环境，试管苗抵抗力弱，易遭到霉菌侵袭，吸引螟虫和蚜虫为害，将会大大降低甘蔗试管苗的存活率、生长速率，延迟出圃时间，目前，主要通过施用农药来对甘蔗病虫进行防治，但是，试管苗弱小，农药会对试管苗造成毒害，甘蔗内的农药残留也会影响甘蔗的食用安全性，目前，没有公开任何一种促进液用于甘蔗试管苗生根移栽阶段喷施，不但可以促进生根、增强抵抗力、提高存活率，还可以抵抗病菌虫害的侵袭，促进生长，缩短出圃时间。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要研究一种促进液可以达到既可以促进甘蔗试管苗生根、促进生长，提高存活率又可以增强植株抵抗力、驱除虫害。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种甘蔗试管苗叶面喷施液，所述叶面喷施液包含20-50mg/L的吲哚丁酸、10-50mg/L的萘乙酸、20-70g/L的蔗糖、50-100mg/L的L脯氨酸、300-400mg/L的生物除菌剂、2-5mg/L的吐温和10-20mg/L的赤霉素。
进一步的，所述生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份-28份的蒲公英提取物、3份-43份的牛至提取物、17份-35份的薄荷提取物、11份-41份的香椿叶提取物和40份-65份蒸馏水。
进一步的，所述蒲公英提取物中蒲公英总黄酮含量为126.52mg/g-241.35mg/g；蒲公英多糖含量为172.35mg/g-183.65mg/g。
进一步的，所述牛至提取物中牛至精油的重量百分数为85.25％-91.33％。
进一步的，所述薄荷提取物中薄荷多酚含量为36.54mg/g-52.69mg/g；薄荷精油含量为234.55mg/g-305.21mg/g。
进一步的，所述香椿叶提取物中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为247.14mg/g-315.24mg/g；没食子酸含量为78.54mg/g-197.58mg/g。
一种制备叶面喷施液的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量比称取蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物和水，将水加热到60℃-70℃，恒温静置1min后依次向水中加入蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物搅拌均匀得到所述生物除菌剂；
(2)将蒸馏水在2℃-4℃的冰箱内冷藏40min-60min得到冰水；
(3)按所述质量浓度分别计算并称量相应质量的吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素；
(4)将步骤(3)的各原料依次加入步骤(2)的冰水中，混合均匀后放入冰箱-20℃-0℃温度条件下急冻60min-70min，然后放置在室温条件下，直至溶液恢复到室温，得到所述叶面喷施液。
进一步的，该喷施液应用于无根继代甘蔗试管苗。
本发明具有如下有益效果：
本申请喷施液主要成分含有吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素；吲哚丁酸和萘乙酸配比，可用于生根，促进甘蔗试管苗生根，从而增强试管苗的生根存活；L脯氨酸是合成蛋白质的重要原料，而且为促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础；赤霉素是一种植物激素，可促进了甘蔗试管苗伸长和基部节间的发育,同时促进了甘蔗试管苗腋芽的生长和根原基的发育,甘蔗试管苗根原基的形成和伸长是甘蔗试管苗瓶外生根成功的关键前提条件；上述各成分合理配比，能有效提高甘蔗试管苗的存活率，本申请的特色还在于，配方中使用的生物除菌剂主要包含有蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物和香椿叶提取物；提取物中含有丰富的蒲公英总黄酮、蒲公英多糖、薄荷多酚、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、没食子酸等活性成分可有效抑制细菌生长；牛至精油和薄荷精油中含有丰富的酚类、萜醇、萜烯类成分，具有很好的抑菌功效，而且精油成分挥发后可有效驱除蚜虫和螟虫；具有浓烈气味，可驱除蚜虫和螟虫，同时还具有抑菌效果。由于喷施液能有效抑制霉菌生长，提高甘蔗生长速率，并起到有效驱虫作用，可保证甘蔗试管苗不受虫害侵袭，提高出圃时间；同时，本申请配方中的生物除菌剂来源于植物源，不会造成农药残留，经申请人多次实验研究对比发现，生物除菌剂中，其主要活性成分：蒲公英总黄酮含量为126.52mg/g-241.35mg/g；蒲公英多糖含量为172.35mg/g-183.65mg/g；牛至精油的重量百分数为85.25％-91.33％；薄荷提取物中薄荷多酚含量为36.54mg/g-52.69mg/g；薄荷精油含量为234.55mg/g-305.21mg/g；槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为247.14mg/g-315.24mg/g；没食子酸含量为78.54mg/g-197.58mg/g的情况下，对甘蔗试管苗的抑菌效果最好，而且，上述抑菌的活性物质必须联合使用，单独使用任何一种活性成分都达不到联合使用的效果。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：
本实施例的甘蔗试管苗叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
其中，本实施例的生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份的蒲公英提取物、3份的牛至提取物、17份的薄荷提取物、11份的香椿叶提取物和40份蒸馏水。
①生物除菌剂中，蒲公英提取物的制备方法为：将含水率为3％的蒲公英粉末均分成两份，其中一份与体积百分数为90％乙醇溶液进行提取，过滤收集滤液进行旋转蒸发浓缩、干燥得到蒲公英提取物I；另一份与石油醚按照重量比为1:10进行混合，然后在索氏提取器中回流8h脱去脂肪，提取液用活性炭进行脱色，Sevag法除蛋白，离心，取上清液浓缩后以体积百分数为95％的乙醇沉淀，离心取沉淀物，无水乙醇洗涤数次，干燥，即得蒲公英提取物II，将蒲公英提取物I与蒲公英提取物II混合得到蒲公英提取物，提取物中蒲公英总黄酮含量为126.52mg/g；蒲公英多糖含量为172.35mg/g。
②生物除菌剂中，牛至提取物的制备方法为：将含水率为3％的牛至粉末与水按照质量比为1:10进行混合，然后放入冰箱冰冻层在温度为-10℃条件下冰冻30min，然后放入烘箱中进行干燥直至牛至粉含水率为5％，冷却到室温后平铺在平皿中，平铺厚度为1mm，放置在微波炉转盘上用微波进行间隔处理，微波处理的频率为2450MHZ,功率为800W，并采用间隔提取方式进行提取；所述间隔提取的处理方式为“打开微波炉进行微波提取30s—关闭微波炉1min—打开微波炉进行微波提取30s”，所述间隔提取的微波提取总时长为180s；将微波处理后的牛至粉放置在萃取釜中进行CO2的超临界萃取，所述超临界萃取的流量为25L/min，萃取压力为30MPa，萃取温度为40℃、解析温度35℃，萃取时间为2h；萃取结束后CO2进行气化并循环使用；萃取物进入分离罐进行离心分离得到牛至提取物；提取物中牛至精油的重量百分数为85.25％。
③生物除菌剂中，薄荷提取物的制备方法为：将新鲜薄荷烘干到水分含量为3％，然后进行粉碎，然后与体积百分数为20％(v/v)的丁醇溶液混合，放入冰柜中在-20℃条件下冷冻30min，在超声提取器中进行超声提取，提取时间为60min提取功率为500w，按照质量比为1:3加入有机提取剂(有机提取剂由体积百分数为80％(v/v)的乙醇、体积百分数为10％(v/v)的丁醇和体积百分数为20％(v/v)的醋酸乙酯按照质量比为1:1:1混合)，与有机溶剂混合均匀后在90℃的温度下水浴30min，残渣反复提取3次。过滤，离心、浓缩、透析、冻干得到薄荷提取物，提取物中薄荷多酚含量为36.54mg/g；薄荷精油含量为234.55mg/g。
④生物除菌剂中，香椿叶提取物的制备方法为：将新鲜香椿叶均分成两份，其中一份与体积百分数为20％(v/v)的丁醇按照质量比为1:3进行混合，然后放入回流提取器中进行回流提取，提取时间为6h，过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物I；另一份与体积百分数为10％(v/v)的丙酮按照质量比为1:5进行混合，然后放回流提取8h、过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物II；将香椿叶I和香椿叶II混合得到槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为247.14mg/g；没食子酸含量为78.54mg/g的香椿叶提取物。
一种制备叶面喷施液的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量比称取蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物和水，将水加热到60℃，恒温静置1min后依次向水中加入蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物搅拌均匀得到所述生物除菌剂；
(2)将蒸馏水在2℃的冰箱内冷藏40min得到冰水；
(3)按所述质量浓度分别计算并称量相应质量的吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素；
(4)将步骤(3)的各原料依次加入步骤(2)的冰水中，混合均匀后放入冰箱-20℃温度条件下急冻60min，然后放置在室温条件下，直至溶液恢复到室温，得到所述叶面喷施液。
本实施例的喷施液应用于无根继代甘蔗试管苗。
本实施例甘蔗试管苗的育苗方法为：
步骤1：将无根继代甘蔗试管苗移到阴凉处，并向甘蔗苗叶面喷加喷施液，喷施液的配方为实施例1的配方，喷加喷施液后，炼苗24小时。
步骤2：炼苗24小时候后，得到甘蔗幼苗，将甘蔗幼苗放入清水内清洗，大丛的苗将其分成2丛。
步骤3：使用15％的托布津对步骤2清洗后的甘蔗幼苗进行浸泡消毒15分钟。
步骤4：将步骤3消毒后的甘蔗幼苗种植到托盘上，其中，托盘规格为6×9孔，三盘一排，约1.2米长，苗圃5米长。
步骤5：在苗圃四个角立4根木桩，在两边每隔2米长，立一根木桩。使用塑料薄膜绕着木棍围一圈，薄膜底部用土封起来，上部要绳子绑在木桩上。
步骤6：在围棚内安装高度为0.5米的喷淋系统，并用定时器控制喷淋的时间和次数。
步骤7：严格进行光照控制，当光照过于强烈时，在围棚顶部加盖遮阳网，光照弱时除去遮阳网。
实施例2：
本实施例的甘蔗试管苗叶面喷施液包含50mg/L的吲哚丁酸、50mg/L的萘乙酸、70g/L的蔗糖、100mg/L的L脯氨酸、400mg/L的生物除菌剂、5mg/L的吐温和20mg/L的赤霉素。
其中，本实施例的生物除菌剂由如下质量份的成份组成：28份的蒲公英提取物、43份的牛至提取物、35份的薄荷提取物、41份的香椿叶提取物和65份蒸馏水。
①生物除菌剂中，蒲公英提取物的制备方法为：将含水率为3％的蒲公英粉末均分成两份，其中一份与体积百分数为95％乙醇溶液进行提取，过滤收集滤液进行旋转蒸发浓缩、干燥得到蒲公英提取物I；另一份与石油醚按照重量比为1:12进行混合，然后在索氏提取器中回流12h脱去脂肪，提取液用活性炭进行脱色，Sevag法除蛋白，离心，取上清液浓缩后以体积百分数为85％的乙醇沉淀，离心取沉淀物，无水乙醇洗涤数次，干燥，即得蒲公英提取物II，将蒲公英提取物I与蒲公英提取物II混合得到蒲公英提取物，提取物中蒲公英总黄酮含量为241.35mg/g；蒲公英多糖含量为183.65mg/g。
②生物除菌剂中，牛至提取物的制备方法为：将含水率为3％的牛至粉末与水按照质量比为1:10进行混合，然后放入冰箱冰冻层在温度为-20℃条件下冰冻20min，然后放入烘箱中进行干燥直至牛至粉含水率为5％，冷却到室温后平铺在平皿中，平铺厚度为3mm，放置在微波炉转盘上用微波进行间隔处理，微波处理的频率为2030MHZ,功率为700W，并采用间隔提取方式进行提取；所述间隔提取的处理方式为“打开微波炉进行微波提取15s—关闭微波炉1min—打开微波炉进行微波提取15s”，所述间隔提取的微波提取总时长为200s；将微波处理后的牛至粉放置在萃取釜中进行CO2的超临界萃取，所述超临界萃取的流量为15L/min，萃取压力为25MPa，萃取温度为45℃、解析温度30℃，萃取时间为3h；萃取结束后CO2进行气化并循环使用；萃取物进入分离罐进行离心分离得到牛至提取物；提取物中牛至精油的重量百分数为91.33％。
③生物除菌剂中，薄荷提取物的制备方法为：将新鲜薄荷烘干到水分含量为3％，然后进行粉碎，然后与体积百分数为25％(v/v)的丁醇溶液混合，放入冰柜中在-10℃条件下冷冻40min，在超声提取器中进行超声提取，提取时间为50min提取功率为700w，按照质量比为1:2加入有机提取剂(有机提取剂由体积百分数为75％(v/v)的乙醇、体积百分数为15％(v/v)的丁醇和体积百分数为10％(v/v)的醋酸乙酯按照质量比为1:1:1混合)，与有机溶剂混合均匀后在80℃的温度下水浴50min，残渣反复提取5次。过滤，离心、浓缩、透析、冻干得到薄荷提取物，提取物中薄荷多酚含量为52.69mg/g；薄荷精油含量为305.21mg/g。
④生物除菌剂中，香椿叶提取物的制备方法为：将新鲜香椿叶均分成两份，其中一份与体积百分数为30％(v/v)的丁醇按照质量比为1:5进行混合，然后放入回流提取器中进行回流提取，提取时间为8h，过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物I；另一份与体积百分数为20％(v/v)的丙酮按照质量比为1:7进行混合，然后放回流提取12h、过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物II；将香椿叶I和香椿叶II混合得到槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为315.24mg/g；没食子酸含量为197.58mg/g的香椿叶提取物。
一种制备叶面喷施液的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量比称取蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物和水，将水加热到70℃，恒温静置1min后依次向水中加入蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物搅拌均匀得到所述生物除菌剂；
(2)将蒸馏水在4℃的冰箱内冷藏60min得到冰水；
(3)按所述质量浓度分别计算并称量相应质量的吲哚丁酸、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温；
(4)将步骤(3)的各原料依次加入步骤(2)的冰水中，混合均匀后放入冰箱0℃温度条件下急冻70min，然后放置在室温条件下，直至溶液恢复到室温，得到所述叶面喷施液。
本实施例的喷施液应用于无根继代甘蔗试管苗。
本实施例甘蔗试管苗的育苗方法为：
步骤1：将无根继代甘蔗试管苗移到阴凉处，并向甘蔗苗叶面喷加喷施液，喷施液的配方为实施例2的配方，喷加喷施液后，炼苗24小时。
步骤2：炼苗24小时候后，得到甘蔗幼苗，将甘蔗幼苗放入清水内清洗，大丛的苗将其分成3丛。
步骤3：使用15％的托布津对步骤2清洗后的甘蔗幼苗进行浸泡消毒15分钟。
步骤4：将步骤3消毒后的甘蔗幼苗种植到托盘上，其中，托盘规格为6×9孔，三盘一排，约1.2米长，苗圃20米长。
步骤5：在苗圃四个角立4根木桩，在两边每隔2米长，立一根木桩。使用塑料薄膜绕着木棍围一圈，薄膜底部用土封起来，上部要绳子绑在木桩上。
步骤6：在围棚内安装高度为0.5米的喷淋系统，并用定时器控制喷淋的时间和次数。
步骤7：严格进行光照控制，当光照过于强烈时，在围棚顶部加盖遮阳网，光照弱时除去遮阳网。
实施例3：
本实施例的甘蔗试管苗叶面喷施液包含30mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的萘乙酸、50g/L的蔗糖、70mg/L的L脯氨酸、350mg/L的生物除菌剂、3mg/L的吐温和15mg/L的赤霉素。
其中，本实施例的生物除菌剂由如下质量份的成份组成：20份的蒲公英提取物、20份的牛至提取物、21份的薄荷提取物、24份的香椿叶提取物和45份蒸馏水。
①生物除菌剂中，蒲公英提取物的制备方法为：将含水率为3％的蒲公英粉末均分成两份，其中一份与体积百分数为80％乙醇溶液进行提取，过滤收集滤液进行旋转蒸发浓缩、干燥得到蒲公英提取物I；另一份与石油醚按照重量比为1:7进行混合，然后在索氏提取器中回流6h脱去脂肪，提取液用活性炭进行脱色，Sevag法除蛋白，离心，取上清液浓缩后以体积百分数为90％的乙醇沉淀，离心取沉淀物，无水乙醇洗涤数次，干燥，即得蒲公英提取物II，将蒲公英提取物I与蒲公英提取物II混合得到蒲公英提取物，提取物中蒲公英总黄酮含量为141.35mg/g；蒲公英多糖含量为173.65mg/g。
②生物除菌剂中，牛至提取物的制备方法为：将含水率为3％的牛至粉末与水按照质量比为1:7进行混合，然后放入冰箱冰冻层在温度为-5℃条件下冰冻50min，然后放入烘箱中进行干燥直至牛至粉含水率为5％，冷却到室温后平铺在平皿中，平铺厚度为2mm，放置在微波炉转盘上用微波进行间隔处理，微波处理的频率为2150MHZ,功率为750W，并采用间隔提取方式进行提取；所述间隔提取的处理方式为“打开微波炉进行微波提取30s—关闭微波炉1min—打开微波炉进行微波提取30s”，所述间隔提取的微波提取总时长为180s；将微波处理后的牛至粉放置在萃取釜中进行CO2的超临界萃取，所述超临界萃取的流量为15L/min，萃取压力为25MPa，萃取温度为50℃、解析温度40℃，萃取时间为2h；萃取结束后CO2进行气化并循环使用；萃取物进入分离罐进行离心分离得到牛至提取物；提取物中牛至精油的重量百分数为88.33％。
③生物除菌剂中，薄荷提取物的制备方法为：将新鲜薄荷烘干到水分含量为3％，然后进行粉碎，然后与体积百分数为15％(v/v)的丁醇溶液混合，放入冰柜中在-15℃条件下冷冻15min，在超声提取器中进行超声提取，提取时间为50min提取功率为750w，按照质量比为1:4加入有机提取剂(有机提取剂由体积百分数为75％(v/v)的乙醇、体积百分数为15％(v/v)的丁醇和体积百分数为25％(v/v)的醋酸乙酯按照质量比为1:1:1混合)，与有机溶剂混合均匀后在95℃的温度下水浴40min，残渣反复提取3次。过滤，离心、浓缩、透析、冻干得到薄荷提取物，提取物中薄荷多酚含量为39.69mg/g；薄荷精油含量为259.21mg/g。
④生物除菌剂中，香椿叶提取物的制备方法为：将新鲜香椿叶均分成两份，其中一份与体积百分数为25％(v/v)的丁醇按照质量比为1:4进行混合，然后放入回流提取器中进行回流提取，提取时间为7h，过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物I；另一份与体积百分数为15％(v/v)的丙酮按照质量比为1:6进行混合，然后放回流提取10h、过滤取溶剂进行减压蒸馏、干燥直至含水率为3％得到香椿叶提取物II；将香椿叶I和香椿叶II混合得到槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为293.11mg/g；没食子酸含量为103.54mg/g的香椿叶提取物。
一种制备叶面喷施液的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量比称取蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物和水，将水加热到65℃，恒温静置1min后依次向水中加入蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物搅拌均匀得到所述生物除菌剂；
(2)将蒸馏水在3℃的冰箱内冷藏45min得到冰水；
(3)按所述质量浓度分别计算并称量相应质量的吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素；
(4)将步骤(3)的各原料依次加入步骤(2)的冰水中，混合均匀后放入冰箱-10℃温度条件下急冻65min，然后放置在室温条件下，直至溶液恢复到室温，得到所述叶面喷施液。
本实施例的喷施液应用于无根继代甘蔗试管苗。
本实施例甘蔗试管苗的育苗方法为：
步骤1：将无根继代甘蔗试管苗移到阴凉处，并向甘蔗苗叶面喷加喷施液，喷施液的配方为实施例3的配方，喷加喷施液后，炼苗24小时。
步骤2：炼苗24小时候后，得到甘蔗幼苗，将甘蔗幼苗放入清水内清洗，大丛的苗将其分成2-3丛。
步骤3：使用15％的托布津对步骤2清洗后的甘蔗幼苗进行浸泡消毒15分钟。
步骤4：将步骤3消毒后的甘蔗幼苗种植到托盘上，其中，托盘规格为6*9孔，三盘一排，约1.2米长，苗圃10米长。
步骤5：在苗圃四个角立4根木桩，在两边每隔2米长，立一根木桩。使用塑料薄膜绕着木棍围一圈，薄膜底部用土封起来，上部要绳子绑在木桩上。
步骤6：在围棚内安装高度为0.5米的喷淋系统，并用定时器控制喷淋的时间和次数。
步骤7：严格进行光照控制，当光照过于强烈时，在围棚顶部加盖遮阳网，光照弱时除去遮阳网。
对照组1：
本对照组的叶面喷施液中的除菌成分使用土菌消替代生物除菌剂，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的土菌消、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
对照组2：
本对照组的生物除菌剂成分不含蒲公英提取物，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
其中，生物除菌剂由如下质量份的成份组成：3份的牛至提取物、17份的薄荷提取物、11份的香椿叶提取物和40份蒸馏水。
对照组3：
本对照组的生物除菌剂成分不含牛至提取物，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
其中，生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份的蒲公英提取物、17份的薄荷提取物、11份的香椿叶提取物和40份蒸馏水。
对照组4：
本对照组的生物除菌剂成分不含薄荷提取物，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含220mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
其中，生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份的蒲公英提取物、3份的牛至提取物、11份的香椿叶提取物和40份蒸馏水。
对照组5：
本对照组的生物除菌剂成分不含香椿叶提取物，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
其中，生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份的蒲公英提取物、3份的牛至提取物、17份的薄荷提取物和40份蒸馏水。
对照组6：
本对照组的叶面喷施液不含赤霉素，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂和2mg/L的吐温。
对照组7：
本对照组的叶面喷施液不含吲哚丁酸，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
对照组8：
本对照组的叶面喷施液不含萘乙酸，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
对照组9：
本对照组的叶面喷施液不含L脯氨酸，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、300mg/L的生物除菌剂、2mg/L的吐温和10mg/L的赤霉素。
对照组10：
本对照组的叶面喷施液不含吐温，其它实施方式与实施例1相同，即：
本对照组的叶面喷施液包含20mg/L的吲哚丁酸、10mg/L的萘乙酸、20g/L的蔗糖、50mg/L的L脯氨酸、300mg/L的生物除菌剂和10mg/L的赤霉素。
测试试验1：
按照实施例1-3、对照组1和对照组6-10的种植方式种植甘蔗试管苗，种植第20d、第30d，统计并计算出甘蔗幼苗的存活率，监测并记录甘蔗幼苗的平均出圃时间(从试管苗到出圃的时间)具体见表1：
表1
组别 20d存活率(％) 30d存活率(％) 平均出圃时间(d)
实施例1 97.55 94.36 71
实施例2 97.65 94.58 73
实施例3 96.98 93.97 76
对照组1 83.05 79.06 86
对照组6 83.24 79.35 92
对照组7 79.54 71.25 87
对照组8 78.96 72.31 88
对照组9 79.05 72.54 89
对照组10 79.11 71.24 88
实施例1-3的20d存活率和30d存活率均大于对照组1和对照组6-10，说明本申请喷施液的配方可明显提高无根继代甘蔗试管苗的存活率，其喷施液成分缺一不可；实施例1-3的甘蔗试管苗平均出圃时间低于对照组1、对照组6-10，说明本申请的喷施液可明显降低甘蔗试管苗的平均出圃时间；而对照组6的平均出圃时间高于实施例1-3、对照组1和对照组7-10，说明配方中的赤霉素可明显提高甘蔗试管苗的平均出圃时间。
测试试验2：
试验在本单位的实验基地进行,供试品种为同一品种(新台糖22)，按如下处理方式进行处理
处理1：按照实施例1的方法种植甘蔗试管苗；
处理2：按照实施例2的方法种植甘蔗试管苗；
处理3：按照实施例3的方法种植甘蔗试管苗；
处理4：按照对照组1的方法种植甘蔗试管苗；
处理5：按照对照组2的方法种植甘蔗试管苗；
处理6：按照对照组3的方法种植甘蔗试管苗；
处理7：按照对照组4的方法种植甘蔗试管苗；
处理8：按照对照组5的方法种植甘蔗试管苗；
处理9：用蒸馏水替代本申请的生物除菌剂，其它种植方法与实施例1一致。
处理1-9同一天进行，喷施喷施液前以拍网法采集数据(拍网法采集方法为：戴手套拍甘蔗苗下拍网时以纱网承接,注意网口与蓬面平行靠紧,网体垂下伸展为一网前行一步再拍为第二网到网时将网拿出左右扫两下,使拍到的虫体堕入网底,捏紧网中部,分次取出网内虫统计以防逃逸,分成、若虫数记载),统计的虫类为(蚜虫和螟虫)所有数据采集均参考相关国标方法进行，处理结果见表2。
表2
注：表中所列数据为三次重复的平均值,同列数值后不同字母表示差异达显著水平。
由上表可以看出，处理1-3防效要高于处理4-8，说明本发明的生物除菌剂可有效驱除螟虫和蚜虫，而且其中的提取物成分缺一不可；而空白对照(处理9)由于虫口数据上升过快,无实际意义,未做统计。
测试试验3：
试验在本单位的实验室进行,将实施例1-3、对照组1-5的喷施液应用于霉菌培养基，并测试霉菌的4h、8h、12h、24h和48h的抑菌圈直径，具体见表3。
表3
由上表可以看出，实施例1-3的霉菌抑菌圈要大于对照组1-5，说明本发明的生物除菌剂可有效抑制霉菌生长，而且其中的提取物成分缺一不可。
综上所述，使用本发明生产的叶面喷施液，能有效提高无根继代甘蔗试管苗的存活率、加快甘蔗试管苗的出圃时间，提高对蚜虫、螟虫的驱虫率、提高对霉菌的抑菌率。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述叶面喷施液包含20-50mg/L的吲哚丁酸、10-50mg/L的萘乙酸、20-70g/L的蔗糖、50-100mg/L的L脯氨酸、300-400mg/L的生物除菌剂、2-5mg/L的吐温和10-20mg/L的赤霉素。
2.根据权利要求1所述一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述生物除菌剂由如下质量份的成份组成：15份-28份的蒲公英提取物、3份-43份的牛至提取物、17份-35份的薄荷提取物、11份-41份的香椿叶提取物和和40份-65份蒸馏水。
3.根据权利要求2所述一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述蒲公英提取物中蒲公英总黄酮含量为126.52mg/g-241.35mg/g；蒲公英多糖含量为172.35mg/g-183.65mg/g。
4.根据权利要求2所述一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述牛至提取物中牛至精油的重量百分数为85.25％-91.33％。
5.根据权利要求2所述一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述薄荷提取物中薄荷多酚含量为36.54mg/g-52.69mg/g；薄荷精油含量为234.55mg/g-305.21mg/g。
6.根据权利要求2所述一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，所述香椿叶提取物中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷含量为247.14mg/g-315.24mg/g；没食子酸含量为78.54mg/g-197.58mg/g。
7.一种制备权利要求2-6所述叶面喷施液的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)按所述重量比称取蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物和水，将水加热到60℃-70℃，恒温静置1min后依次向水中加入蒲公英提取物、牛至提取物、薄荷提取物、香椿叶提取物搅拌均匀得到所述生物除菌剂；
(2)将蒸馏水在2℃-4℃的冰箱内冷藏40min-60min得到冰水；
(3)按所述质量浓度分别计算并称量相应质量的吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖、L脯氨酸、生物除菌剂、吐温和赤霉素；
(4)将步骤(3)的各原料依次加入步骤(2)的冰水中，混合均匀后放入冰箱-20℃-0℃温度条件下急冻60min-70min，然后放置在室温条件下，直至溶液恢复到室温，得到所述叶面喷施液。
8.根据权利要求1所述的一种甘蔗试管苗叶面喷施液，其特征在于，该喷施液应用于无根继代甘蔗试管苗。
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