CN117981776A - 粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防治方法 - Google Patents

粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防治方法 Download PDF

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Abstract

本发明“粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防治方法”属于生物防治技术领域。本发明提供粘毛香青的生物防治用途以及制备生防制剂的用途，并基于这些用途，本发明进一步提供以粘毛香青精油为活性成分的生防制剂及其制备方法和生物防治方法。本发明提供的粘毛香青精油可高效杀灭西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨，同时无毒无害、又不产生污染，安全可靠、成本低廉、环保高效。

Description

粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防 治方法
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及尖粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防治方法。
背景技术
从古到今，病虫害一直是农业发展的重要限制性因素，人们一直在寻找理想的防治方法。粮食生产包括产前(种子)、产中(种植)和产后(储存)过程。据世界粮农组织FAO估计，种植过程中病虫害造成的损失约占世界农业产量的1/3(虫害14％；病害10％；草害11％)。而世界平均每年的贮粮损耗占粮食产量的10％，有些不发达国家甚至高达30％。我国国家粮食局摸底调查显示，目前我国农户储粮约为5000亿斤，由于存储不当，每年损耗平均在8％左右，高达400亿斤，相当于一个中等粮食主产省一年的产量。因此虫口夺粮成为重要的研究课题。目前农业生产上控制病虫害，仍然主要依靠化学农药，而粮食储存主要使用熏蒸剂处理，如磷化氢。
由于化学农药长期不合理的滥用，污染环境，破坏了自然界生态平衡，危害了人体健康，即所谓的“3R”危害。即产生农药残留(Residue)；导致了害虫对化学农药产生抗性(Resistance)；造成害虫再猖獗(Resurgence)。同时许多剧毒农药也对生产者和使用者也产生严重毒害。因此迫切需要研究开发高效低毒、环境有好的绿色农药。从植物中筛选并发现有活性的植物源农药成为世界科学界研究的热点。植物源农药是从植物中提取出的具有农药活性的物质，活性物质可成为创新农药的开发模板，进一步开发研制为新的农药。
西花蓟马也称苜蓿蓟马(Frankliniella occidentalis)属缨翅目蓟马科昆虫，是一种世界性的危险害虫，也是国际上重要的检疫性有害生物。原产于北美洲，其寄主范围广，食性杂，寄主植物包括马铃薯、茄子、番茄、辣椒、黄瓜、豆类、香蕉、芒果、李、桃、苹果、葡萄、草莓、花卉(兰花、菊花)等500多种重要经济作物和粮食作物，随着西花蓟马的不断扩散蔓延，其寄主种类仍然在持续增加。西花蓟马以锉吸式口器取食植物的茎、叶、花、果，导致花瓣退色、叶片皱缩，茎和果则形成伤疤，最终可能使植株枯萎，同时还传播番茄斑萎病毒在内的多种植物病毒，对农业生产造成严重威胁。由于西花蓟马虫体小，危害活动隐秘，能进行孤雌生殖，繁殖能力强，种群增长迅速。由于西花蓟马对有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯类及多杀菌素等杀虫剂产生了不同程度的抗药性。生产中迫切需要发现对西花蓟马有效的绿色无公害杀虫剂。
二斑叶螨(Tetranychus urticae)是一种世界性农业害螨，属于蛛形纲真螨目螨属，又名棉红蜘蛛、白蜘蛛。主要在地面早春绿色植物上活动。凭借风力、流水、昆虫、鸟兽、人畜、各种农具和花卉苗木携带传播。二斑叶螨寄主植物十分广泛，包括各种蔬菜、果树以及玉米、豆类等50多科1000多种植物。二斑叶螨成、若螨均可产生为害，发生初期害螨多聚集在叶背主脉两侧，抑制光合作用的正常进行，受害叶片正面叶脉两侧表现失绿；当虫口密度达到一定数量时，会在植株顶端吐丝结网，并通过细丝向外扩散，为害叶片表面和寄主植物的嫩茎、花蕊、果柄等绿色部分，使整株植物黄化枯死。另外，该螨还释放毒素或生长调节物质，引起植物生长失衡，以致有些幼嫩叶呈现凹凸不平的受害状，大发生时树叶、杂草、农作物叶片一片焦枯现象。防治二斑叶螨的主要依靠施用化学合成的杀螨剂，由于长期使用，目前二斑叶螨对常用杀螨剂，如阿维菌素、哒螨灵、唑螨酯、噻螨特等多种药剂均产生较高抗性，推荐剂量基本无效。同时化学药剂的使用，对非靶标生物也具有杀伤作用，破坏生态平衡，引起害螨的再猖獗。迫切需要发现高效环境友好的杀螨剂。
嗜虫书虱(Liposcelis entomophila)是一种重要的储粮害虫，昆虫纲啮虫目。嗜虫书虱可以生活在谷物间、植物间、树皮下、地衣及旧木上，个体微小(1-10毫米)，发育历期短，成虫寿命长，食性杂，抗饥饿能力强，繁殖速度极快，大量发生时可引起严重的经济损失，对粮食、食品、饲料及药材等储藏物危害极大，甚至引起局部粮食水分升高而导致发热霉变；由于其身体上粘附的排泄物能携带传播病菌和引起过敏，加之活动性极强，引起人类感染皮炎和哮喘等疾病，对人类的健康带来威胁。采用传统的磷化铝熏蒸不仅不能够彻底消灭书虱，往往还造成书虱抗性的增强，造成害虫再猖獗。实践证明,书虱的防治非常困难,无论是气调处理还是药剂熏蒸处理的粮仓,最后留下和最先发现的害虫,都以书虱为主。因此寻找新型安全环保的杀虫剂替代物是亟需解决的问题。
黏毛香青(Anaphalis bulleyana)也称五香草、粘毛香青，菊科一年或二年生草本植物，具厚的直根、莲座丛叶和单生或少数丛生的花茎，全部蛛网状长棉质被绒毛，具生锈的棕色粘附柄腺毛。茎直立，具沟，通常分枝，下部通常无毛，上部密被毛。莲座状叶倒卵圆形，长达9厘米，下部渐窄成翅状短柄；茎下部叶花期枯萎，中部和上部叶倒披针形或倒卵状匙形，长3.5-10厘米，沿茎下延成楔形宽翅：上部叶线状披针形；头状花序多数，在茎枝端密集成复伞房状；总苞倒卵圆状，长5-6毫米，总苞片4-5层，直立，膜质、透明，下部浅黄色，不开展；外层卵状长圆形，内层长匙形，长5-6毫米，最内层宽线形，有长爪；瘦果长圆形，有微腺体。花期8-9月，果期9-10月。产自四川西部、云南西北部和北部(丽江、中甸、昆明、东川等)至贵州中部的亚高山阴湿坡地及低山草地(1180-3300m)。
该植物的全草也为中药材午香草，《云南中草药》性味辛，温。功能主治：消炎止痛，健胃行气。治扁桃体炎，急牲胃肠炎，膀胱炎，尿道炎，小儿疳积。
目前本领域还没有粘毛香青精油化学成分的研究报道，也尚未出现粘毛香青可用于生物防治领域杀灭害虫害螨的报道。
发明内容
为了解决本领域现有技术存在的上述化学农药的危害和缺陷的问题，提供防治害虫/害螨的新型生物农药，同时填补本领域上述粘毛香青的应用空白，本发明提供粘毛香青的生物防治用途及其生防制剂、制备方法与生物防治方法。
本发明的技术内容如下：
粘毛香青的生物防治用途。
所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
粘毛香青制备生防制剂的用途。
以粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分；
优选地，所述生防指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
一种生防制剂，包括：活性成分，所述活性成分包括粘毛香青精油。
所述的一种生防制剂，还包括：辅料。
一种生防制剂的制备方法，包括：将粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分。
所述粘毛香青精油为粘毛香青植株地上部分水煮法得到的油水混合物经萃取得到的精油；
优选地，所述水煮法蒸馏的时间为6h；
优选地，萃取之前，油水混合物经冷凝回收再萃取；
优选地，萃取的温度为25-30℃，优选25℃；
优选地，萃取完毕进行干燥；
优选地，所述干燥指加无水硫酸钠脱水干燥；
优选地，干燥后用旋转蒸发仪于40℃蒸发、浓缩，除去萃取剂；
优选地，所述萃取的萃取剂为石油醚；
优选地，所述一种生防制剂的制备方法还包括：添加辅料。
一种生物防治方法，采用粘毛香青精油进行生物防治。
所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述防治指用粘毛香青精油通过熏蒸或触杀的方式致死害虫或害螨，或者，用粘毛香青精油驱避害虫；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨；
优选地，粘毛香青精油对二斑叶螨的半致死浓度为8.23mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对西花蓟马的半致死浓度为5.01mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱熏蒸的半致死浓度为0.27mg/L，对嗜虫书虱触杀的半致死剂量为157.41μg/cm2；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱的驱避浓度为1.0-8.0μg/cm2。
本发明的有益效果如下：
本发明意外发现植物粘毛香青对西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨的致死作用，并验证了其在生物防治领域的突出效果，因此本发明请求保护粘毛香青的生物防治用途、粘毛香青制备生防制剂的用途、以粘毛香青精油为活性成分的生防制剂及其制备方法，以及一种生物防治方法。粘毛香青精油制备以粘毛香青植物的地上部分为原料，粘毛香青精油采用水煮、萃取、蒸馏等步骤制备而得。同时本发明还提供一种基于粘毛香青精油的生防制剂，该生防制剂可高效杀灭西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨，同时无毒无害、又不产生污染，是安全可靠、成本低廉、环保高效的新型生防制剂。粘毛香青在四川西部、云南西北部和北部(丽江、中甸、昆明、东川等)、贵州中部一带分布甚广，能轻易大量获取，利用粘毛香青精油进行害虫害螨的防治，符合绿色环保的生物防治理念。
具体实施方式
下面结合具体实施例、实验例对本发明的详细内容做进一步描述，但并不以此限制本发明的保护范围。
生物材料的来源
一、本发明实验例1使用的粘毛香青采集自云南省玉溪市红塔区龙马山，并由北京师范大学生命科学学院刘全儒教授鉴定。公众可以在四川西部，云南中部及西北部，西藏东南部获取野生的粘毛香青植株，将其用于重现本发明的技术方案、验证本发明的技术效果。
二、本发明实验例2使用的二斑叶螨来自申请人实验室人工饲养，公众可以从发生二斑叶螨病害的任一区域采集获取二斑叶螨并重现本发明的技术方案、验证本发明的技术效果。
三、本发明实验例3使用的西花蓟马来自申请人实验室人工饲养，公众可以从发生西花蓟马虫害的任一区域采集获取西花蓟马并重现本发明的技术方案、验证本发明的技术效果。
四、本发明实验例4、实验例5、实验例6使用的嗜虫书虱来自申请人实验室人工饲养，公众可以从发生嗜虫书虱虫害的任一场所采集获取嗜虫书虱并重现本发明的技术方案、验证本发明的技术效果。
第1组实施例、本发明的粘毛香青的新用途
本组实施例提供粘毛香青的生物防治用途。
在一些实施例中，所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
本领域技术人员出于本发明的教导，可以选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行防治害虫/害螨，或，对粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质进行防治害虫/害螨。
任何选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行防治害虫/害螨的行为，或，任何对粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质进行防治害虫/害螨的行为，或，任何选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子制备获得的防治害虫/害螨产品的行为或使用、销售、许诺销售、进口该防治害虫/害螨产品的行为，或，任何采用粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质制备得到的防治害虫/害螨产品或使用、销售、许诺销售、进口该防治害虫/害螨产品的行为，均落入本发明的保护范围。
所述防治害虫/害螨不仅限于西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨，也可以是西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨以外的其他害虫/害螨。
第2组实施例、本发明粘毛香青制备生防制剂的用途
本组实施例提供粘毛香青制备生防制剂的用途。
在具体的实施例中，以粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分；
优选地，所述生防指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
本领域技术人员出于本发明的教导，可以选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子防治害虫/害螨、防治西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨或西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨以外的害虫/害螨，或，对粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质防治害虫/害螨、防治西花蓟马、嗜虫书虱、二斑叶螨以外的害虫/害螨。
任何选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子防治害虫/害螨的行为，或，任何对粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质防治害虫/害螨的行为，或，任何选择粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子制备获得的生物防治产品的行为或使用、销售、许诺销售、进口该生物防治产品的行为，或，任何采用粘毛香青植株的任意组织、部位，包括但不限于：根、茎、叶、花、果实、种子进行提取或萃取得到的物质制备得到的生物防治产品或使用、销售、许诺销售、进口该生物防治产品的行为，均落入本发明的保护范围。
第3组实施例、本发明的生防制剂
本组实施例提供一种生防制剂。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述生防制剂包括：活性成分，所述活性成分包括粘毛香青精油。
在进一步的实施例中，所述的一种生防制剂还包括：辅料。
在具体的实施例中，所述辅料为药剂学上可接受的辅料，包括但不限于：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。
第4组实施例、本发明生防制剂的制备方法
本组实施例提供一种生防制剂的制备方法。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述一种生防制剂的制备方法包括：将粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分。
在具体的实施例中，所述粘毛香青精油为粘毛香青植株地上部分水煮法得到的油水混合物经萃取得到的精油；
优选地，所述水煮法蒸馏的时间为6h；
优选地，萃取之前，油水混合物经冷凝回收再萃取；
优选地，萃取的温度为25-30℃，优选25℃；
优选地，萃取完毕进行干燥；
优选地，所述干燥指加无水硫酸钠脱水干燥；
优选地，干燥后用旋转蒸发仪于40℃蒸发、浓缩，除去萃取剂；
优选地，所述萃取的萃取剂为石油醚；
优选地，所述一种生防制剂的制备方法还包括：添加辅料。
在具体的实施例中，所述辅料为药剂学上可接受的辅料，包括但不限于：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。
第5组实施例、本发明的生物防治方法
本组实施例提供一种生物防治方法。本组所有的实施例都具备如下共同特征：采用粘毛香青精油进行生物防治。
在具体的实施例中，所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述防治指用粘毛香青精油通过熏蒸或触杀的方式致死害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨；
优选地，粘毛香青精油对二斑叶螨的半致死浓度为8.23mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对西花蓟马的半致死浓度为5.01mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱熏蒸的半致死浓度为0.27mg/L，对嗜虫书虱触杀的半致死剂量为157.41μg/cm2；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱的驱避浓度为1.0-8.0μg/cm2。
实验例1、本发明的粘毛香青精油的制备
1、试虫来源：西花蓟马、二斑叶螨和嗜虫书虱系人工饲养。
2、植物来源:粘毛香青为野生植株，其地上部分(3kg)于2022年8月采集于云南省玉溪市，并由北京师范大学生命科学学院刘全儒教授鉴定为黏毛香青(Anaphalisbulleyana)。
3、粘毛香青精油的制备
采集新鲜的粘毛香青地上部分(花期)，剪成3-5cm的小段，用水煮法处理6h，得到的油水混合物冷凝回收后用正己烷萃取，加无水硫酸钠干燥后，使用旋转蒸发仪除去正己烷，所得成分为粘毛香青精油。其中，水浴温度为40℃。
新鲜的粘毛香青精油得率0.25％(w/w)，即100g新鲜的粘毛香青植株可提取出0.25g粘毛香青精油。测定精油比重为0.92g/mL。
实验例2、粘毛香青精油对二斑叶螨触杀活性测定
采用叶碟法测定粘毛香青精油对二斑叶螨毒性，具体操作如下：12孔细胞培养板，在培养板内壁涂聚四氟乙烯，用电吹风吹干；水和琼脂以100:1.5的比例在微波炉中加热混匀，倒入12孔细胞培养板中(每孔约2-3mL)高度约0.5mm，冷却至凝固；取新鲜未施用农药的芸豆叶片，用直径19mm的打孔器将叶片打孔，制成圆形叶碟；取一定量的粘毛香青精油加无水乙醇(量不超过药液体系的1％)溶解，加二甲基亚砜(不超过药液体系的1％)助溶，配制成母液，后用蒸馏水稀释至所需浓度并得到所述药液体系；将叶碟浸入药剂10s后取出，晾干，将沾过药液的芸豆叶片背面朝上放在倒有琼脂的培养板上，每孔接入10只二斑叶螨成螨；用宣纸将培养板有孔的一面粘贴牢固并放进培养箱中，温度26-28℃，相对湿度为65％-75％，光周期L:D＝16:8；24h后在体视镜下观察记录死亡数量，用毛笔接触动者为活，不动者为死，计算LD50。
死亡率(％)＝死亡数/试虫数*100
校正死亡率(％)＝(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)*100
半致死浓度(LC50)：指能引起50％供试个体死亡的所需浓度。利用Probit软件计算而得。
结果如下表1所示：
表1.叶碟法测定粘毛香青精油对二斑叶螨的毒性
粘毛香青精油对二斑叶螨的半致死浓度为LC50＝8.23mg/mL，95％的置信区间为(7.18-9.455)回归方程y＝2.90x–2.66。该半致死浓度的含义为：每毫升药液体系(包括蒸馏水、溶剂-酒精和助溶剂-二甲基亚砜)中含有8.23mg粘毛香青精油，以这样的浓度处理，半数供试个体死亡。
实验例3、粘毛香青精油对农业害虫西花蓟马活性测定
采用叶碟法测定绣球粘毛香青对西花蓟马毒性，具体操作如下：取一定量粘毛香青精油加无水乙醇(量不超过药液体系的1％)溶解，加吐温80(不超过药液体系的0.5％)助溶，配制成母液，后用蒸馏水稀释至所需浓度并得到所述药液体系备用；将1mL药液放入容积为22mL玻璃闪烁瓶中，均匀滚动数圈，形成药膜，将药液倒出，闪烁瓶晾干备用。取新鲜未施用农药的扁豆(豆荚)，将扁豆制成1cm见方长段浸入药剂10s后取出，晾干，放置于闪烁瓶中；每个处理设置5个重复，每个重复接入10头西花蓟马的二龄若虫，150目防虫网封瓶口；放置于室温下，24h后观察结果，以毛笔拨动虫体，虫体不动记为死亡。
死亡率(％)＝死亡数/试虫数*100
校正死亡率(％)＝(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)*100
半致死浓度(LC50)：指能引起50％供试个体死亡的所需浓度。利用Probit软件计算而得。
结果如表2所示：
表2.粘毛香青精油对西花蓟马毒杀活性
粘毛香青精油对西花蓟马二龄若虫的半致死浓度为LC50＝5.01mg/mL，95％的置信区间为(4.37-5.78)回归方程y＝2.82x-1.97。上表2的半致死浓度LC50的含义为：24小时内，每毫升药液体系(以酒精、吐温80、蒸馏水为溶剂)中含有的粘毛香青精油的毫克数，以这样的浓度处理，供试个体死亡率可以达到50％。
实验例4、粘毛香青精油对仓储害虫嗜虫书虱熏蒸活性测定
粘毛香青精油对嗜虫书虱的熏蒸活性测定：用毛笔挑取10头试虫放入直径为0.5cm，高1.6cm的小玻璃瓶中(易于观察试虫的死亡情况)，瓶口内壁涂聚四氟乙烯以防止试虫逃逸，小玻璃瓶置于高12cm直径4cm的大磨口玻璃瓶(290mL)，丙酮作为溶剂稀释药剂成等比系列，用移液枪吸取10微升的药剂稀释液(6个浓度)滴于滤纸条上(长7.5cm，宽1.5cm)，将滤纸片用固体胶粘在磨口瓶盖内，迅速拧紧磨口瓶盖，并用封口膜缠绕一周密封。24小时后，观察和记录试虫的死亡情况。每个浓度重复5次，每个重复10头试虫，丙酮不加药剂作为空白对照。24小时后观察，将小玻璃瓶内的试虫倒在一张白纸上，用毛笔拨动虫体，虫体不动即为死亡。
死亡率(％)＝100×死虫数/试虫数。
校正死亡率(％)＝100×(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)。
半致死剂量(LC50)即引起50％嗜虫书虱死亡率的剂量，使用Probit软件包计算得到半致死剂量。
结果如表3所示：
表3.密闭空间法测定粘毛香青精油对嗜虫书虱熏蒸活性
粘毛香青精油对嗜虫书虱成虫的熏蒸活性，半致死浓度为LC50＝0.27mg/L air,95％的置信区间为(0.23-0.32)，回归方程y＝1.44+2.52x。该半致死剂量的含义为：每升密闭空间内含有0.27mg精油，以这样的浓度处理，半数供试个体死亡。
实验例5、粘毛香青精油对仓储害虫嗜虫书虱触杀活性测定
药膜法测定粘毛香青精油嗜虫书虱的触杀活性，具体操作如下：用丙酮作溶剂配制通过预试验得到的5个浓度的精油溶液；剪裁直径为3.5cm的滤纸片；将150μL待测溶液分别均匀地打在直径为3.5cm的圆形滤纸片上，待丙酮挥发后，利用固体胶棒将滤纸片粘在涂有聚四氟乙烯水溶液的塑料六孔板内，5个重复；每个孔作为一个重复，每孔接入10头嗜虫书虱，丙酮作为空白对照。后置于黑暗培养箱(28-30℃,70-75％ RH)。24小时后观察，将小玻璃瓶内的试虫倒在一张白纸上，用毛笔拨动虫体，虫体不动即为死亡。
死亡率(％)＝100×死虫数/试虫数。
校正死亡率(％)＝100×(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)。
半致死剂量(LD50)即引起50％嗜虫书虱死亡率的剂量，使用Probit软件包计算得到半致死剂量。
结果如表4所示：
表4.药膜法测定粘毛香青精油对嗜虫书虱触杀活性
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粘毛香青对嗜虫书虱成虫的触杀活性，半致死剂量为LD50＝157.41μg/cm2,95％的置信区间为(111.36,189.63)，y＝2.34x-5.13。该半致死剂量的含义为：每平方厘米含有157.41μg精油，以这样的剂量处理，半数供试个体死亡。
实验例6、粘毛香青精油对仓储害虫嗜虫书虱驱避活性测定
粘毛香青精油对嗜虫书虱驱避活性测定方法如下，选择大小一致的玻璃培养皿(直径为5.8cm)，内壁均匀涂抹一圈聚四氟乙烯，用吹风机吹干，形成厚度均匀光滑的薄膜；将滤纸剪成与培养皿内径大小一致的圆形纸片(直径5.8cm)，从中间剪成大小相同的两半；用丙酮稀释粘毛香青挥发油，配制梯度浓度(8μg/cm2、4μg/cm2、2μg/cm2和1μg/cm2)，用移液枪吸取150μL的药液，均匀滴于半边滤纸上，另一半滤纸片滴加150μL的丙酮作为空白对照组，避蚊胺作为阳性对照；静置一分钟左右，待溶剂挥发后将滤纸片粘贴于培养皿底部；挑取20头成虫于培养皿的中间，2h后观察记录实验组与空白对照组上试虫的虫数，用毛笔将试虫轻轻拨于培养皿中间位置，4h后再次观察记录试虫的分布情况，计算驱避率。
驱避率PR(％)＝(对照组虫数-实验组虫数)/试虫总数×100％。
粘毛香青精油驱避活性的表5标准进行分级
表5.精油驱避活性分级标准
表6.粘毛香青精油对嗜虫书虱驱避活性
粘毛香青精油对嗜虫书虱具有较强的驱避活性，在浓度＝8.0μg/cm2，2小时和4小时的驱避率与避蚊胺相当均为最强的V级；在浓度＝4.0μg/cm2，2小时对嗜虫书虱的驱避率为最强的V级，4小时的驱避率为IV级；而在测试的低浓度1.0μg/cm2，2小时对嗜虫书虱的驱避率达到III级，4小时的仍然达到III级。

Claims (10)

1.粘毛香青的生物防治用途。
2.根据权利要求1所述的粘毛香青的生物防治用途，其特征在于，所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
3.粘毛香青制备生防制剂的用途。
4.根据权利要求3所述的粘毛香青制备生防制剂的用途，其特征在于，以粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分；
优选地，所述生防指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨。
5.一种生防制剂，包括：活性成分，其特征在于，所述活性成分包括粘毛香青精油。
6.根据权利要求5所述的一种生防制剂，其特征在于，还包括：辅料。
7.一种生防制剂的制备方法，其特征在于，包括：将粘毛香青精油作为生防制剂的活性成分。
8.根据权利要求7所述的一种生防制剂的制备方法，其特征在于，所述粘毛香青精油为粘毛香青植株地上部分水煮法得到的油水混合物经萃取得到的精油；
优选地，所述水煮法蒸馏的时间为6h；
优选地，萃取之前，油水混合物经冷凝回收再萃取；
优选地，萃取的温度为30℃；
优选地，萃取完毕进行干燥；
优选地，所述干燥指加无水硫酸钠脱水干燥；
优选地，干燥后用旋转蒸发仪于40℃蒸发、浓缩，除去萃取剂；
优选地，所述萃取的萃取剂为石油醚；
优选地，所述一种生防制剂的制备方法还包括：添加辅料。
9.一种生物防治方法，其特征在于，采用粘毛香青精油进行生物防治。
10.根据权利要求9所述的一种生物防治方法，其特征在于，所述生物防治指用粘毛香青精油防治害虫或害螨；
优选地，所述防治指用粘毛香青精油通过熏蒸或触杀的方式致死害虫或害螨，或者，用粘毛香青精油驱避害虫；
优选地，所述害虫选自：西花蓟马、嗜虫书虱；
优选地，所述害螨为二斑叶螨；
优选地，粘毛香青精油对二斑叶螨的半致死浓度为8.23mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对西花蓟马的半致死浓度为5.01mg/mL；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱熏蒸的半致死浓度为0.27mg/L，对嗜虫书虱触杀的半致死剂量为157.41μg/cm2；
优选地，粘毛香青精油对嗜虫书虱的驱避浓度为1.0-8.0μg/cm2。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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