CN108802391A - 一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电化学发光及对卵巢癌标记物的免疫传感方法 - Google Patents

一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电化学发光及对卵巢癌标记物的免疫传感方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电化学发光及对卵巢癌标记物的免疫传感方法，特点是基于锐钛矿TiO2介晶和Envision复合物，分别引入钌联吡啶及核/壳量子点作为能量供体/受体对。锐钛矿TiO2介晶不仅可以承载大量钌联吡啶，而且可以加速激发态钌联吡啶的产生从而促进核/壳状量子点的共振能量转移；富含辣根过氧化物酶的Envision复合物作为免疫传感平台可以承载大量信号探针，同时催化H2O2产生活性氧化物种，促进核/壳状量子点发光。ECL‑RET免疫传感器，具有灵敏度高、检测限低等优点，用于卵巢癌标记物，脂多糖刺激脂蛋白受体的检测，在早期卵巢癌诊断和监控方面具有较为重要的价值。

Description

一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电化学发光及对卵 巢癌标记物的免疫传感方法
技术领域
本发明属于新型功能材料与免疫传感检测技术领域，具体涉及一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感方法及应用。
背景技术
电致化学发光(ECL)是由电化学反应引起的化学发光，因其灵敏度高、反应可控性强、仪器设备简单等优点引起了广泛的关注。共振能量转移是一种新兴的分子光谱分析方法，具体是指电子激发能在适当的能量供体和能量受体对之间的传递。而电致化学发光-共振能量转移(ECL-RET)结合了两者的优点，是一个很具有发展潜力的新领域。它既不需要激发光源，背景噪音较小，也避免了散射光的影响，己广泛地应用于生物传感器的构建。本发明制备了一种基于锐钛矿TiO2介晶诱导的增强型电致化学发光-共振能量转移对新型卵巢癌标记物的免疫传感器，实现对卵巢癌新型标记物的高灵敏检测。
TiO2纳米材料因其独特的光催化活性、无毒性，优异的化学和物理稳定性，使其成为光催化和光电化学传感器的理想材料，其性能一般受晶型、晶粒大小、晶面、结晶度、比表面积、微结构等的影响。TiO2介晶是晶体亚单元有序排列而成，相比于传统的TiO2单晶，TiO2介晶具有更加高度的结晶形态及更加优良的光催化活性等性能。Envision复合物是一种由许多抗体和辣根过氧化物酶(HRP)偶联到右旋糖酐骨架上的新型聚合物，表面具有较多的活性位点，并且表现出良好的催化性能，在构建良好的电化学传感器中得到了广泛关注。本发明基于锐钛矿TiO2介晶（CAMs）和Envision复合物，分别引入钌联吡啶及核/壳量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）作为能量供体/受体对，制备一种锐钛矿TiO2介晶（CAMs）诱导的ECL-RET免疫传感器，用于卵巢癌标记物（LSR）的检测。具有较高孔隙率的锐钛矿TiO2介晶（CAMs）不仅可以承载大量钌联吡啶，而且可以加速激发态钌联吡啶的产生从而促进CdZnSe/ZnSe QDs的ECL-RET；富含辣根过氧化物酶的Envision复合物作为免疫传感平台可以承载大量信号探针，同时催化微量过氧化氢（H2O2）产生活性氧化物种（ROS），促进CdZnSe/ZnSe QDs发光。因此，所制得的ECL-RET免疫传感器，具有灵敏度高、检测限低等优点，用于卵巢癌标记物（LSR）的检测，在早期卵巢癌诊断和监控方面具有非常重要的价值。
发明内容
本发明的目的之一是基于锐钛矿TiO2介晶（CAMs）和Envision复合物作为传感平台，钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+）和核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）作为能量供体/受体对，构建一种稳定性好，灵敏度高的电致化学发光-共振能量转移免疫传感器。
本发明的目的之二是将该电致化学发光免疫传感器应用于卵巢癌新型标记物（LSR）的高灵敏检测。
为实现发明目的，本发明采用如下技术方案：
1. 一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器的制备方法，其特在于，包括以下步骤：
（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；
（2）取50 μL浓度为1.0×10-2 M的钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+）溶液与50 μL浓度为5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入浓度为50 μL 100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物；滴加3μL上述所得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极；
（3）将步骤（2）制备的修饰电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；
（4）取20 μL浓度比为4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到50 μL浓度为0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSeQDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的；然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL浓度为10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；
（5）将步骤（4）制得的Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液与不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液等体积混合后，取3 μL上述混合液于步骤（2）制备的修饰电极界面，并在37 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR/Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。
2. 上述锐钛矿TiO2介晶（CAMs）由下述方法制备的：9 g 对苯二甲酸，18 mL 无水甲醇，162 mL 无水N, N-二甲基甲酰胺（DMF）以及5 ml 钛酸四丁酯混合后转移至200 mL反应釜中，在150 °C 下加热48 h，待反应物冷却后用甲醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在400 °C 下煅烧5 h，自然冷却即可。
3. 上述核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）由下述方法制备的：将1.5 mM氧化镉溶液, 15 mM醋酸锌溶液，9 mL十八烯酸（OA）和20 mL十八烯（ODE）依次加入100 mL三颈圆底烧瓶中，在100 °C真空条件下加热30 min；随后，混合液在氮气保护作用下加热到290 °C。取3 mM硒溶解于1.5 mL三丁基膦（TBP）与1.5 mL十八烯混合溶液中，形成硒-三丁基膦（Se-TBP）溶液，然后快速加入圆底烧瓶中，经8分钟反应之后，形成CdZnSe核；之后，当温度升高到300 °C时，取3 mM上述Se-TBP溶液缓慢加入到圆底烧瓶中以形成ZnSe壳；待反应达到平衡，取出反应物分散于体积比为1:3的正己烷/丙酮混合溶液中，经离心、洗涤三次，得到最终产物CdZnSe/ZnSe QDs，重新分散于三氯甲烷中备用。
4. 上述Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物由下述方法制备的：取50 μL 钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+, 1.0×10-2 M）溶液与50 μL 5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL 100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物。
5. 上述Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液由下述方法制备的：取20 μL浓度比为4:1的（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到50 μL 0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的。然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL 10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用。
6. 脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）的检测步骤：
（1）使用电化学工作站采用三电极体系进行测定，上述的基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极，在pH 8.0的 PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）采用电位范围0 V-1.6 V，扫描速率0.05 V/s电位窗口，电致化学发光设备光电倍增管800 V对不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，通过电致化学发光设备采集1.1 V的ECL信号强度，通过ECL信号强度与脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；
（3）待测样品溶液代替脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。
本发明的显著优点为：
（1）电致化学发光-共振能量转移(ECL-RET)，同时结合电致化学发光和共振能量转移两者的优点，它既不需要激发光源，背景噪音较小，也避免了散射光的影响，己广泛地应用于免疫传感器的构建。
（2）具有较高孔隙率和良好导电性的锐钛矿TiO2介晶（CAMs）及富含辣根过氧化物酶（HRP）的Envision复合物作为免疫传感器平台可以承载大量的免疫分子及信号探针；锐钛矿TiO2介晶（CAMs）特殊的半导体结构可以加速激发态钌联吡啶的产生从而诱导增强核/壳量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）的ECL-RET，同时，辣根过氧化物酶（HRP）催化微量过氧化氢（H2O2）产生活性氧化物种（ROS），促进核/壳量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）的ECL，从而提高该电致化学发光免疫传感器的灵敏度。
（3）本发明利用抗原、抗体的免疫反应，提高了检测方法的特异性。
附图说明
图1 为电镜比较图，图1中的A为核/壳量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）的透射电镜图（插图为CdZnSe/ZnSe QDs的能谱图）；图1中的B为核/壳量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）的高分辨透射电镜图（插图为CdZnSe/ZnSe QDs的选区电子衍射图谱）；图1中的C为锐钛矿TiO2介晶（CAMs）的扫描电镜图；图1中的D为锐钛矿TiO2介晶（CAMs）的透射电镜图（插图为CAMs的高分辨透射电镜图）。
图2为免疫传感器的电致化学发光响应信号与脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度的线性关系图。
具体实施方式
本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
实施例1
一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器的制备方法：
（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；
（2）取50 μL 浓度为1.0×10-2 M的钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+）溶液与50 μL浓度为5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL浓度为100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物；滴加3μL上述所得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极；
（3）将步骤（2）制备的修饰电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；
（4）取20 μL浓度比为4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液（即1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的浓度比为4:1的混合液）加入到50 μL浓度为0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的；然后将50 mLEnvision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50μL浓度为10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；
（5）将步骤（4）制得的Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液与不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液等体积混合后，取3 μL上述混合液于步骤（2）制备的修饰电极界面，并在37 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR/Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。
实施例2
上述实施例1所用的锐钛矿TiO2介晶（CAMs）的制备：9 g 对苯二甲酸，18 mL 无水甲醇，162 mL 无水N, N-二甲基甲酰胺（DMF）以及5 ml 钛酸四丁酯混合后转移至200 mL反应釜中，在150 °C 下加热48 h，待反应物冷却后用甲醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在400 °C 下煅烧5 h，自然冷却即可。
实施例3
上述实施例1所用的核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）的制备：将1.5 mM氧化镉溶液,15 mM醋酸锌溶液，9 mL十八烯酸（OA）和20 mL十八烯（ODE）依次加入100 mL三颈圆底烧瓶中，在100 °C真空条件下加热30 min；随后，混合液在氮气保护作用下加热到290 °C。取3mM硒溶解于1.5 mL三丁基膦（TBP）与1.5 mL十八烯混合溶液中，形成硒-三丁基膦（Se-TBP）溶液，然后快速加入圆底烧瓶中，经8分钟反应之后，形成CdZnSe核；之后，当温度升高到300°C时，取3 mM上述Se-TBP溶液缓慢加入到圆底烧瓶中以形成ZnSe壳；待反应达到平衡，取出反应物分散于体积比为1:3的正己烷/丙酮混合溶液中，经离心、洗涤三次，得到最终产物CdZnSe/ZnSe QDs，重新分散于三氯甲烷中备用。
实施例4
上述实施例1所用的Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物的制备：取50 μL 钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+, 1.0×10-2 M）溶液与50 μL 5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL 100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物。
实施例5
上述实施例1所用的Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液的制备：取20 μL浓度比为4:1的（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到50 μL 0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的。然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用。
实施例6
上述实施例1所用的钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+）购买于上海化学科技有限公司；Envision复合物购买于上海基因科技有限公司；脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）、抗体（Ab）标准品购买于武汉三鹰生物技术有限公司。
实施例7
脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）的检测步骤：
（1）使用电化学工作站采用三电极体系进行测定，以实施例1制备的基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极，在pH 8.0的 PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）采用电位范围0 V-1.6 V，扫描速率0.05 V/s电位窗口，电致化学发光设备光电倍增管800 V对不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，通过电致化学发光设备采集1.1 V的ECL信号强度，通过ECL信号强度与脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；
（3）待测样品溶液代替脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。

Claims (5)

1.一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感方法，其特在于，包括以下步骤：
（1） 玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；
（2）取50 μL 浓度为1.0×10-2 M的钌联吡啶（Ru(bpy)3 2+）溶液与50 μL浓度为5 mg/mL锐钛矿TiO2介晶（CAMs）溶液混合，室温震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物溶液；在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL 浓度为100 ng/mL抗体（Ab），在37 ºC下震荡40 min，后经洗涤、离心、再分散，最终制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物；滴加3 μL上述所得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极；
（3）将步骤（2）制备的修饰电极置于浓度为1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4°C冰箱中备用；
（4）取20 μL浓度比为4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合液加入到50 μL 浓度为0.6 mg/mL核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSeQDs）溶液中，室温震荡1 h，以达到活化羧基的目的；然后将50 mL Envision复合物加入到上述溶液中，在室温下混合震荡2 h，经洗涤、离心、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs复合物溶液；随后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的辅助作用下加入50 μL浓度为10 ng/mL脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），在37 ºC下震荡30 min，经离心、洗涤、再分散制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液，然后在上述溶液中加入1 % BSA封闭非特异性吸附位点，储存在4°C冰箱中备用；
（5）将步骤（4）制得的Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR复合物溶液与不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液等体积混合后，取3 μL上述混合液于步骤（2）制备的修饰电极界面，并在37 ºC下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得Envision-CdZnSe/ZnSe QDs/LSR/Ab-Ru(bpy)3 2+@CAMs修饰玻碳电极, 并保存在4 °C冰箱中备用。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的锐钛矿TiO2介晶（CAMs）由下述方法制备的：9 g 对苯二甲酸，18 mL 无水甲醇，162 mL 无水N, N-二甲基甲酰胺（DMF）以及5ml 钛酸四丁酯混合后转移至200 mL反应釜中，在150 °C 下加热48 h，待反应物冷却后用甲醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在400 °C 下煅烧5 h，自然冷却即可。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核/壳状量子点（CdZnSe/ZnSe QDs）由下述方法制备的：将1.5 mM氧化镉溶液, 15 mM醋酸锌溶液，9 mL十八烯酸（OA）和20 mL十八烯（ODE）依次加入100 mL三颈圆底烧瓶中，在100 °C真空条件下加热30 min；随后，混合液在氮气保护作用下加热到290 °C，取3 mM硒溶解于1.5 mL三丁基膦（TBP）与1.5 mL十八烯混合溶液中，形成硒-三丁基膦（Se-TBP）溶液，然后快速加入圆底烧瓶中，经8分钟反应之后，形成CdZnSe核；之后，当温度升高到300 °C时，取3 mM上述Se-TBP溶液缓慢加入到圆底烧瓶中以形成ZnSe壳；待反应达到平衡，取出反应物分散于体积比为1:3的正己烷/丙酮混合溶液中，经离心、洗涤三次，得到最终产物CdZnSe/ZnSe QDs，重新分散于三氯甲烷中备用。
4.权利要求1-3任一所述的方法制备的一种基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器。
5.权利要求4所述的基于TiO2介晶诱导的共振能量转移型电致化学发光及其对卵巢癌标记物的免疫传感器，其特征在于，用于脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR），检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站采用三电极体系进行测定，以权利要求4所述的一种基于锐钛矿TiO2介晶诱导的增强型电致化学发光共振能量转移对新型卵巢癌标记物的免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极，在pH 8.0的 PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）采用电位范围0 V-1.6 V，扫描速率0.05 V/s电位窗口，电致化学发光设备光电倍增管800 V对不同浓度的脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，通过电致化学发光设备采集1.1 V的ECL信号强度，通过ECL信号强度与脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；
（3）待测样品溶液代替脂多糖刺激脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。
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