CN108728551A - 一种保持中华鲟优良性状的育种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种保持中华鲟优良性状的育种方法，属于动物分子育种领域，具体涉及一种保持中华鲟优良性状的育种方法。通过选择亲本、建立家系、孵化和育苗、选育出子一代性状优良的家系，计算不同家系之间的亲缘关系重新选择亲本进行培育，按照上述方法经过多代选育，可培育出优良性状稳定的中华鲟。
Description
技术领域
本发明涉及动物分子育种领域，具体涉及一种保持中华鲟优良性状的育种方法。
背景技术
中华鲟是全世界20余种鲟科鱼类中分布纬度最低，体型最大的鱼，为我国特有的的物种。上世纪70年代，长江里的繁殖群体能达到1万余尾，由于环境污染、过度捕捞、栖息地丧失等诸多因素影响中华鲟濒临灭绝。2013年中国长江三峡集团公司中华鲟研究所首次中华鲟雌核发育成功，实现了中华鲟的单性繁殖，这对中华鲟的保护起到了巨大的作用。然而由于中华鲟近亲繁殖、缺乏有效的育种措施，中华鲟已经出现严重的种质退化。所以，对中华鲟进行良种选育迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是提供了一种保持中华鲟优良性状的育种方法，利用本方法可以得到大量的具有优良性状的中华鲟。
本发明技术方案如下：
一种保持中华鲟优良性状的育种方法，所述方法包括以下选育步骤：
1)亲本的选择：选择10个中华鲟家系，每个家系的个体数为2000-5000尾2-3月龄中华鲟幼鱼，分别测量体长体重，挑选出具有明显生长优势的中华鲟，具体指体长和体重生长最快的中华鲟。每个家系挑选出中华鲟雌鱼和雄鱼各1尾作为备选亲本；
2)建立家系：把选择出的中华鲟做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％，待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系，随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，按照此步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖；
3)孵化和育苗：将所述步骤2)产生的子一代中华鲟进行人工孵化，每个家系单独放置在一个养殖池内，同等条件下饲养，中华鲟幼鱼时投喂水蚯蚓，待两个月后投喂鲟鱼饲料，每天投喂三次，投喂量为鱼体重的5％；
4)中华鲟的选育：所有步骤3)子一代中华鲟保证处于相同生活环境，待养殖一年后，测量每个家系所有中华鲟的体长和体重，挑选出具有明显生长优势的中华鲟，每个家系挑选一条中华鲟雌鱼和雄鱼作为亲本，；
5)重新建立家系：把选择出的中华鲟重新做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％，待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系，随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，按照此步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖；
按照上述步骤2)-步骤5)操作经过3-5代连续选育，即可获得优良性状稳定的中华鲟。
优选地，所述的微卫星标记技术所用的10个微卫星引物指标参数如下：
进一步优选地，所述利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系的步骤为：
A：取中华鲟组织样品；提取中华鲟样品DNA；
B：利用微卫星引物对中华鲟样品进行PCR扩增；
C：把PCR扩增产物在10％的聚丙烯酰胺胶上进行电泳分离；
D：根据分离结果统计PCR扩增产物的基因型；
E：根据各个个体的基因分型结果利用NTsys软件计算挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系。
进一步优选地，所述PCR扩增反应体系是15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/LdNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.2ul，DNA模板2ul，超纯水8.3ul。
进一步优选地，所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
本发明有益效果如下：
第一，本发明通过微卫星标记技术计算雌雄个体之间的亲缘关系，避免个体之间近亲繁殖，有效防止中华鲟个体种群退化，保存中华鲟群体遗传多样性。第二，利用表型性状选择亲本，选育性状直观，鉴定准确，能够快速筛选出符合选育目标的亲本个体。第三，首次把传统选育方法和分子选育方法结合在一起应用到中华鲟的遗传育种上，为其他鱼类品种的遗传育种提供借鉴。第四，利用本发明提供的方法可规模化培育出优良性状稳定的中华鲟。
具体实施方式
下面结合实施例来进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。
实施例1
一种保持中华鲟优良性状的育种方法，包括以下选育步骤：
1、亲本的选择：选择10个中华鲟家系，每个家系的个体数为2000-5000尾2-3月龄中华鲟幼鱼，分别测量体长体重，挑选出具有明显生长优势的中华鲟，每个家系挑选出中华鲟雌鱼和雄鱼各1尾作为备选亲本。
2、建立家系：把选择出的中华鲟做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％。待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系，随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖。再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖。按照上述步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖。
3、孵化和育苗：将产生的子一代中华鲟进行人工孵化。每个家系单独放置在一个养殖池内，同等条件下饲养，中华鲟幼鱼时投喂水蚯蚓，待两个月后投喂鲟鱼饲料，每天投喂三次，投喂量为鱼体重的5％。
4、重新建立家系：把选择出的中华鲟做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％。待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系。随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖。再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖。按照上述步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖。按照上述方法经过3-5代连续选育，即可获得优良性状稳定的中华鲟。
微卫星标记技术所用的10个微卫星引物指标参数如下：
利用微卫星标记技术计算挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系的步骤为：取中华鲟组织样品；提取中华鲟样品DNA；利用权力要求2所示的微卫星位点对中华鲟样品进行PCR扩增；把PCR扩增产物在10％的聚丙烯酰胺胶上进行电泳分离；根据分离结果统计PCR扩增产物的基因型；根据各个个体的基因分型结果利用NTsys软件计算挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系。PCR反应体系是15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/LdNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.2ul，DNA模板2ul，超纯水8.3ul。所述的PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
上述的实施例仅为本发明的优选技术方案，而不应视为对于本发明的限制，本申请中的实施例及实施例中的特征在不冲突的情况下，可以相互任意组合。本发明的保护范围应以权利要求记载的技术方案，包括权利要求记载的技术方案中技术特征的等同替换方案为保护范围。即在此范围内的等同替换改进，也在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国长江三峡集团公司中华鲟研究所
<120> 一种保持中华鲟优良性状的育种方法
<130> 20
<160> 20
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
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Claims (5)
1.一种保持中华鲟优良性状的育种方法，其特征在于：所述方法采用微卫星标记技术，所述微卫星标记技术所用的微卫星引物指标参数如下：
2.根据权利要求1所述的一种保持中华鲟优良性状的育种方法，其特征在于：所述方法包括以下选育步骤：
1)亲本的选择：选择10个中华鲟家系，每个家系的个体数为2000-5000尾2-3月龄中华鲟幼鱼，分别测量体长体重，挑选出具有明显生长优势的中华鲟，每个家系挑选出中华鲟雌鱼和雄鱼各1尾作为备选亲本；
2)建立家系：把选择出的中华鲟做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％，待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系，随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，按照此步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖；
3)孵化和育苗：将所述步骤2)产生的子一代中华鲟进行人工孵化，每个家系单独放置在一个养殖池内，同等条件下饲养，中华鲟幼鱼时投喂水蚯蚓，待两个月后投喂鲟鱼饲料，每天投喂三次，投喂量为鱼体重的5％；
4)中华鲟的选育：所有步骤3)子一代中华鲟保证处于相同生活环境，待养殖一年后，测量每个家系所有中华鲟的体长和体重，挑选出具有明显生长优势的中华鲟，每个家系挑选一条中华鲟雌鱼和雄鱼作为亲本，；
5)重新建立家系：把选择出的中华鲟重新做好PIT标记，养殖在环境适宜的养殖池内，投喂鲟鱼配合饲料，每天投喂3次，投喂量为中华鲟体重的5％，待中华鲟性成熟后，利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系，随机选择其中一尾雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，再随机选择一条雌鱼，根据微卫星标记技术计算出和这尾雌鱼亲缘关系最远的雄鱼，然后让两者进行配对繁殖，按照此步骤依次给每条中华鲟进行配对，建立8-10个家系进行中华鲟人工繁殖；
按照上述步骤2)-步骤5)操作经过3-5代连续选育，即可获得优良性状稳定的中华鲟。
3.根据权利要求2所述的一种保持中华鲟优良性状的育种方法，其特征在于：所述利用微卫星标记技术计算被挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系的步骤为：
A：取中华鲟组织样品；提取中华鲟样品DNA；
B：利用微卫星引物对中华鲟样品进行PCR扩增；
C：把PCR扩增产物在10％的聚丙烯酰胺胶上进行电泳分离；
D：根据分离结果统计PCR扩增产物的基因型；
E：根据各个个体的基因分型结果利用NTsys软件计算挑选出来的每个雌鱼和雄鱼之间的亲缘关系。
4.根据权利要求3所述一种保持中华鲟优良性状的育种方法，其特征在于：所述PCR扩增反应体系是15ul：10×PCR Buffer 1.5ul，2.5mmol/L dNTP 0.5ul，MgCl2 1.5ul，上下游引物各0.5ul，Taq酶0.2ul，DNA模板2ul，超纯水8.3ul。
5.根据权利要求3所述一种保持中华鲟优良性状的育种方法，其特征在于：所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，退火温度复性30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。
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| CN101518213A (zh) * | 2008-02-25 | 2009-09-02 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 中华鲟高效育苗工艺 |
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-
2018
- 2018-04-09 CN CN201810312500.7A patent/CN108728551B/zh active Active
Patent Citations (7)
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