CN108676044B - 一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 - Google Patents
一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108676044B CN108676044B CN201810470678.4A CN201810470678A CN108676044B CN 108676044 B CN108676044 B CN 108676044B CN 201810470678 A CN201810470678 A CN 201810470678A CN 108676044 B CN108676044 B CN 108676044B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cells
- compound
- sialic acid
- acid derivative
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical class CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 title claims abstract description 25
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 title abstract description 29
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 title abstract description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 83
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000009420 retrofitting Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 60
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 108010047827 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Proteins 0.000 description 5
- 102000007073 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Human genes 0.000 description 5
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 3
- -1 succinimidyl Chemical group 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside K Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000863884 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000863883 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029176 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010029180 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100027164 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Human genes 0.000 description 1
- 101710143293 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 description 1
- 102100029957 Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710110535 Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100029964 Sialic acid-binding Ig-like lectin 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100029965 Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100032855 Sialoadhesin Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000023549 cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- JNGZXGGOCLZBFB-IVCQMTBJSA-N compound E Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@@H]1C(N(C)C2=CC=CC=C2C(C=2C=CC=CC=2)=N1)=O)C(=O)CC1=CC(F)=CC(F)=C1 JNGZXGGOCLZBFB-IVCQMTBJSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000040 effect on leukemia Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
- C07H7/027—Keto-aldonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
- C07H7/033—Uronic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种CD33亲和的唾液酸衍生物及其应用，其结构式为
通过对免疫细胞进行修饰，利用本发明的唾液酸衍生物经过细胞代谢表达在免疫细胞表面对于识别和清除髓系白血病细胞具有重要作用，对于治疗急性骨髓系白血病具有广阔的应用前景和市场价值。
Description
技术领域
本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种CD33亲和的唾液酸衍生物及其应用。
背景技术
免疫系统中的细胞表面富含复杂的聚糖混合物，可以被不同的聚糖结合蛋白识别，Siglecs是一种唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素家族，被认为通过糖链识别促进细胞间相互作用并调节天然和适应性免疫系统中细胞的功能。CD33相关的Siglecs主要由先天免疫系统的成熟细胞表达，如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、树突细胞和肥大细胞等。
CD33是免疫球蛋白超家族中的一员，是一种表达在髓系细胞上的跨膜受体，它在90％以上的急性髓系白血病患者都有表达。而且在造血干细胞以及其他组织没有表达,因此CD33成为髓系白血病治疗的靶点，在调节细胞增殖或分化中具有重要作用。CD33的胞外部分包含两个免疫球蛋白域(IgV和IgC2域)，胞内部分包含了一个酪氨酸依赖的信号传导基序(ITIMs)与抑制细胞活性有关，通过被相关细胞或微生物表面的唾液酸识别来行使细胞间相互作用以及信号传递和粘附内吞等功能。
生物体内的免疫细胞通过其表面的唾液酸来识别表达有CD33的髓系白血病细胞。进而引发免疫功能达到清除病变细胞的目的，但是天然的唾液酸与CD33的结合能力很弱，使得病变细胞容易逃脱免疫作用。如何寻找一种可以高选择性、高亲合力结合CD33的分子受到人们越来越多的关注。
发明内容
本发明的目的在于提供一种CD33亲和的唾液酸衍生物。
本发明的另一目的在于提供上述唾液酸衍生物的应用。
本发明的技术方案如下：
一种CD33亲和的唾液酸衍生物，其结构式为
其中，R1为OH、
R2为H或
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1为OH，所述R2为
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1为
所述R2为H。
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1为
所述R2为H。
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1为
所述R2为H。
在本发明的一个优选实施方案中，所述R1为
所述R2为
上述唾液酸衍生物在改造免疫细胞中的应用。
在本发明的一个优选实施方案中，所述免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞、B细胞和粒细胞。
一种免疫细胞的改造方法，将免疫细胞与上述唾液酸衍生物在培养基中共培养，使该唾液酸衍生物通过免疫细胞内正常代谢对免疫细胞的表面进行修饰。
在本发明的一个优选实施方案中，所述免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞、B细胞和粒细胞。
本发明的有益效果是：
1、本发明的唾液酸衍生物对CD33具有高选择性和高亲和力，可被细胞吸收经过细胞代谢作用表达在细胞膜表面糖蛋白末端。
2、通过对免疫细胞进行修饰，利用本发明的唾液酸衍生物经过细胞代谢表达在免疫细胞表面对于识别和清除髓系白血病细胞具有重要作用，对于治疗急性骨髓系白血病具有广阔的应用前景和市场价值。
附图说明
图1为本发明实施例6的实验结果图。
图2为本发明实施例7的实验结果图之一。
图3为本发明实施例7的实验结果图之二。
图4为本发明实施例8的实验结果图。
图5为本发明实施例9的实验结果图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
一种CD33亲和的唾液酸衍生物，其结构式为
下述实施例1至5制备的化合物(即上述CD33亲和的唾液酸衍生物)如下表所示：
实施例1
1.1，化合物(1)的合成路线如下：
1.1.1，将化合物A(2g,6.5mmol)溶解于30mL氯化氢的甲醇溶液里(20％，m/m)，反应在100℃下搅拌4.5h，然后冷却至室温，并用阴离子交换树脂Dowex OH-中和反应液，过滤得到滤液，把滤液旋干经C18柱纯化得到化合物B(1.2g，63％)。
1.1.2，化合物B(1.2g，4.0mmol)溶解在20mL DMF中，然后在冰浴上滴加NEt3(1.2g，12mmol)。等反应液温度降为0度后，加入化合物C(1.5g，8.16mmol)，反应温度自然升至室温，TLC检测反应完成后，为了防止过乙酰化的副产物产生，可在反应液里滴加几滴MeONa溶液，一小时后把反应液旋干。将得到的粗产品用反相C18纯化得化合物D(1.6g，80％)。
1.1.3，化合物D(1.6g，3.3mmol)溶解在10mL 1M的氢氧化钠水溶液中，反应液在40℃下搅拌0.5h，然后加入阳离子树脂Dowex H+，调节溶液的Ph为3，反应温度升至80℃，4h后冷却至室温过滤，将滤液旋干并用C18柱纯化得到化合物(1)(0.9g，60％)。
实施例2
1.2，化合物(2)的合成路线：
1.2.1，将化合物E(2.0g，6.0mmol)溶于30mL水中，然后加入100mg PdO。反应在氢气氛围下室温搅拌过夜，点板监测反应完成后，过滤反应液把滤液旋干即得粗产品F(1.3g，71％)，无需纯化可直接做下一步反应。
1.2.2，化合物F(0.4g，1.3mmol)溶于5mL DMF中，然后在冰浴上滴加0.1M碳酸氢钠水溶液2mL。等反应液温度降为0℃后，加入化合物G(373mg，1.6mmol)。反应在0度下搅拌2小时，然后升至室温，点板监测反应完成。为了防止过乙酰化的副产物产生，可在反应液里滴加几滴NaOH溶液，15分钟把反应液旋干。得到的粗产品用C18柱纯化得到化合物(2)(415mg，75％)。
实施例3
1.3，化合物(3)的合成路线如下：
1.3.1，化合物F(0.4g，1.3mmol)溶于5mL DMF中，然后在冰浴上滴加0.1M碳酸氢钠水溶液2mL。等反应液温度降为0℃后，加入化合物H(373mg，1.6mmol)。反应在0℃下搅拌2小时，然后升至室温，点板监测反应完成。为了防止过乙酰化的副产物产生，可在反应液里滴加几滴NaOH溶液，15分钟把反应液旋干。得到的粗产品用C18柱纯化得到化合物(3)(400mg，70％)。
实施例4
1.4，化合物(4)的合成路线如下：
1.4.1，化合物F(0.4g，1.3mmol)溶于5mL DMF中，然后在冰浴上滴加0.1M碳酸氢钠水溶液2mL。等反应液温度降为0℃后，加入化合物H(421mg，1.6mmol)。反应在0℃下搅拌2小时，然后升至室温，点板监测反应完成。为了防止过乙酰化的副产物产生，可在反应液里滴加几滴NaOH溶液，15分钟把反应液旋干。得到的粗产品用C18柱纯化得到化合物(4)(432mg，73％)。
实施例5
1.5，化合物(5)的合成路线如下：
1.5.1，将化合物D(2g，4mmol)溶于30mL无水吡啶中，然后在冰浴上将反应液温度将至0℃，缓慢加入对甲基苯磺酰氯(TsCl)(1.14g，6mmol)，反应温度自然升至室温并搅拌过夜。点板检测反应完成后旋干过柱纯化即得化合物J(1.8g，70％)。
1.5.2，化合物J(1.8g，2.8mmol)溶于30mL甲醇里，然后加入叠氮化钠(364mg，5.6mmol)。反应回流过夜，点板监测反应完成后旋干溶液，产物经硅胶柱纯化得到化合物K(1.0g，71％)。
1.5.3，化合物K(1.0g，1.9mmol)溶于THF/H2O(10/10mL)中，然后加入1M的PMe3的四氢呋喃溶液(4.75mL，4.75mmol)。反应于室温下搅拌3小时，然后旋干四氢呋喃溶液，剩下的水溶液经C18柱纯化得到化合物L(0.76g，80％)。
1.5.4，化合物L(0.76g，1.56mmol)溶于10mL DMF中，然后在冰浴上滴加0.1M碳酸氢钠水溶液5mL。等反应液温度降为0度后，加入化合物I(492mg，1.87mmol)。反应在0度下搅拌2小时，然后升至室温，点板监测反应完成。为了防止过乙酰化的副产物产生，可在反应液里滴加几滴NaOH溶液，15分钟把反应液旋干。得到的粗产品用C18柱纯化得到化合物M(0.74g，75％)。
1.5.5，化合物M(0.74g，1.17mmol)溶解在10mL 1M的氢氧化钠水溶液中，反应液在40℃下搅拌0.5h，然后加入阳离子树脂Dowex H+，调节溶液的Ph为3，反应温度升至80℃，4h后冷却至室温过滤，将滤液旋干并用C18柱纯化得到化合物(5)(0.49g，70％)
实施例6
化合物(1)-(5)对CD33的亲和性试验：
HeLa细胞在培养基为RPMI-1640(含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素)含有5％CO2的37℃恒温培养箱中正常培养。然后把这些细胞分成七组，第1至5组的细胞培养基中分别含有100μM的化合物(1)-(5)，第6组细胞培养基中含有100μM天然唾液酸，第7组的细胞培养基为正常培养基。然后将七组细胞在培养箱中培养24小时，用HBSS–BSA清洗三次后更换为正常的培养基，分别得到被化合物(1)-(5)和天然唾液酸修饰的七组HeLa细胞。
HL-60细胞在培养基为RPMI-1640(含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素)含有5％CO2的37℃恒温培养箱中正常培养。用CFSE(5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯，一种活细胞荧光标记物)(10μmol，30min，37℃)标记培养好的HL-60细胞。然后把标记好的HL-60细胞分别加入到上述已经处理好的七组HeLa细胞中，HL-60细胞与HeLa细胞的比例为1/10。在37℃恒温箱中孵育1小时后，用HBSS含有0.5％BSA(HBSS–BSA)清洗三次，然后用酶标仪测量各组细胞的荧光强度。实验结果如图1所示。由于HL-60细胞是人原髓细胞白血病细胞，其细胞表面表达有大量CD33。从图1的实验结果可看出，相比于用天然唾液酸处理的细胞组以及空白组细胞，经过被化合物(1)-(5)修饰后的HeLa细胞与HL-60细胞结合后的荧光强度均增强很多，说明本专利提供的化合物比天然唾液酸结合CD33的亲合力提高很多，而其中化合物(5)和化合物(4)的亲合力最高。
实施例7
化合物(1)-(5)选择性结合CD33实验
HeLa细胞在培养基为RPMI-1640(含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素)含有5％CO2的37℃恒温培养箱中正常培养。然后传代到6孔板中，分成两组，每组三孔。两组细胞均用细胞培养基中含有100μM化合物(5)进行孵育24小时，用HBSS–BSA清洗三次后更换为正常的培养基，得到被化合物(5)修饰的两组HeLa细胞。
取正常培养好的HL-60细胞分为两组，分别用CFSE(5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯，一种活细胞荧光标记物)标记(10μmol，30min，37℃)。然后把第一组标记好的HL-60细胞用抗CD33的抗体处理，另外一组加入相同体积的HBSS作为对照。然后把两组处理好的HL-60细胞分别加入到上述已经修饰了化合物(5)的两组HeLa细胞中，HL-60细胞与HeLa细胞的比例为1/10。在37℃恒温箱中孵育1小时后，用HBSS–BSA清洗三次，然后用酶标仪测量两组细胞的荧光强度。
为了检测其余四种化合物对CD33的选择性，按照上述实验步骤把化合物(5)分别换成化合物(1)-(4)重复上述实验。实验结果如图2所示。
经过抗CD33抗体处理过的HL-60细胞由于其表面的CD33已经被抗体结合，不能再与HeLa细胞上表达的化合物(1)-(5)结合，因此测量的荧光强度很弱，而用PBS处理的HL-60细胞依然可以通过其表面的CD33结合表达有化合物(1)-(5)的HeLa细胞，得到很强的荧光强度。实验结果进一步证明本专利提供的化合物(1)-(5)与CD33的结合是受CD33依赖的。
K20细胞在培养基为RPMI-1640(含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素)含有5％CO2的37℃恒温培养箱中正常培养。然后用培养基中含有100μM化合物(5)孵育细胞24小时，用HBSS-BSA清洗三次，并用CFSE(5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯，一种活细胞荧光标记物)标记(10μmol，30min，37℃)，得到已经表达有化合物(5)并且具有荧光标记的K20细胞。
选取已经表达好siglec-1、siglec-3(CD33)、siglec-5、siglec-8、siglec-9、siglec-10、hCD22的一系列CHO细胞，在培养基为RPMI-1640(含有10％的胎牛血清、1％的青霉素和链霉素)含有5％CO2的37℃恒温培养箱中正常培养。然后把上述修饰好的K20细胞分别加入已经表达了不同siglecs的CHO细胞中，K20细胞与CHO细胞的比例为1/10。在37℃恒温箱中孵育1小时后，用HBSS–BSA清洗三次，然后用酶标仪测量各组细胞的荧光强度。
同样按照上述实验步骤用化合物(1)-(4)重复上述实验得到化合物(1)-(4)对CD33的选择性数据。实验结果如图3所示：只有表达了CD33的细胞组出现很强的荧光，而表达了其他siglecs的细胞组荧光很弱。实验结果表明化合物(1)-(5)对CD33的选择性具有特异性。
实施例8
化合物(5)修饰的NK细胞对白血病细胞治疗的效果
在α-MEM培养基(含12.5％新生牛血清、12.5％马血清、100U/ml recombinant IL-2)中于37℃、5％CO2孵育箱中正常培养ATCC来源的NK-92(
CRL-2407TM)细胞系，之后更换为含100μM化合物(5)的α-MEM培养基继续培养72h。更换培养基清洗三次，即得到化合物(5)修饰NK-92细胞(NK-92+)。
将HL-60细胞或者A549细胞与NK-92细胞以数量比1：10的比例混合，然后在37℃培养箱中共孵育24h后，用乳酸脱氢酶检测试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶的含量，参照空白组计算细胞毒性。结果如图4所示。
乳酸脱氢酶LDH是存在于细胞质的一种酶，当细胞膜受到损伤时，LDH会释放到培养基中，NK细胞与靶细胞结合时，会释放穿孔素及NK细胞毒因子等，破坏靶细胞膜，从而造成LDH的释放，因此检测培养基中LDH的含量即可显示NK细胞的杀伤毒性。从图4可以看出，由于人肺癌细胞(A549)表面不表达CD33，因此原始NK-92及经化合物(5)修饰后的NK-92细胞(NK-92+)对其均没有明显的杀伤活性。而人白血病细胞HL-60高表达CD33，经化合物(5)修饰后的NK-92细胞(NK-92+)对其杀伤毒性明显增加。
实施例9
化合物(5)修饰的NK细胞对白血病小鼠模型的治疗效果
对6-8周大的NSG小鼠尾静脉注射1×103个Raji细胞，构建白血病小鼠模型，然后从第三天开始，每隔两天通过尾静脉注射1×107个NK-92细胞或者经化合物(5)修饰后的NK-92细胞。空白小鼠通过尾静脉注射PBS。每组15只小鼠，观察小鼠存活率。结果如图5所示。
从图5可以看出，白血病小鼠模型建立后小鼠最长存活期为20天左右，尾静脉输入NK-92细胞后可以稍微延长NSG小鼠的存活率，而尾静脉输入经化合物(5)修饰后的NK-92细胞后可将NSG小鼠的最长存活期延长至40天左右。表明经过化合物(5)修饰后的NK-92细胞对体内白血病细胞良好的选择性清除效果，这对于进一步的临床试验具有很好的借鉴意义。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (5)
1.一种CD33亲和的唾液酸衍生物，其特征在于：其结构式为
其中，
R1为
R2为H或
2.权利要求1所述的唾液酸衍生物在改造免疫细胞中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞、B细胞和粒细胞。
4.一种免疫细胞的改造方法，其特征在于：将免疫细胞与权利要求1所述的唾液酸衍生物在培养基中共培养，使该唾液酸衍生物通过免疫细胞内正常代谢对免疫细胞的表面进行修饰。
5.如权利要求4所述的改造方法，其特征在于：所述免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞、B细胞和粒细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810470678.4A CN108676044B (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810470678.4A CN108676044B (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108676044A CN108676044A (zh) | 2018-10-19 |
| CN108676044B true CN108676044B (zh) | 2021-03-30 |
Family
ID=63806406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810470678.4A Active CN108676044B (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108676044B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20230167149A1 (en) * | 2020-04-30 | 2023-06-01 | Glycomimetics, Inc. | Cd33 ligands suitable for incorporation into carriers |
| JP2023524457A (ja) * | 2020-04-30 | 2023-06-12 | グリコミメティクス， インコーポレイテッド | 担体への組込みに適したｃｄ３３リガンド |
| WO2023060021A1 (en) * | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Magnani John L | Polar cd33 ligands suitable for incorporation into carriers |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1656113A (zh) * | 2001-06-19 | 2005-08-17 | 偌格·凯姆 | 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素抑制剂 |
| WO2007056525A2 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-18 | James Paulson | High affinity siglec ligands |
| JP2008195667A (ja) * | 2007-02-14 | 2008-08-28 | Japan Science & Technology Agency | ２−６シアリル６−スルホラクトサミン糖鎖含有化合物 |
| CN107501291A (zh) * | 2017-10-14 | 2017-12-22 | 厦门诺康得生物科技有限公司 | 一种cd169高亲和力抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018009825A1 (en) * | 2016-07-08 | 2018-01-11 | The Scripps Research Institute | Desensitizing mast cells by co-presentation of antigens with high affinity mast cell siglec ligands |
-
2018
- 2018-05-16 CN CN201810470678.4A patent/CN108676044B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1656113A (zh) * | 2001-06-19 | 2005-08-17 | 偌格·凯姆 | 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素抑制剂 |
| WO2007056525A2 (en) * | 2005-11-10 | 2007-05-18 | James Paulson | High affinity siglec ligands |
| JP2008195667A (ja) * | 2007-02-14 | 2008-08-28 | Japan Science & Technology Agency | ２−６シアリル６−スルホラクトサミン糖鎖含有化合物 |
| CN107501291A (zh) * | 2017-10-14 | 2017-12-22 | 厦门诺康得生物科技有限公司 | 一种cd169高亲和力抗肿瘤化合物及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108676044A (zh) | 2018-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108676044B (zh) | 一种cd33亲和的唾液酸衍生物及其应用 | |
| AT504347B1 (de) | Verfahren zur herstellung von glucosederivaten | |
| Trost et al. | A versatile enantioselective strategy toward L-C-nucleosides: A total synthesis of L-Showdomycin | |
| US11033562B2 (en) | Carbohydrate derivatives used for surface modification of immune cells, use thereof and method thereof | |
| JPH09110834A (ja) | 抗接着性ピペリジン−およびピロリジンカルボン酸 | |
| JPH0559081A (ja) | 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用 | |
| AU2014239567A1 (en) | Inhibitors of leukotriene A4 hydrolase | |
| Jervis et al. | Synthesis and biological activity of α-glucosyl C24: 0 and C20: 2 ceramides | |
| WO2003087115B1 (en) | Oligomeric compounds having modified phosphate groups | |
| Tashiro et al. | RCAI-61, the 6′-O-methylated analog of KRN7000: its synthesis and potent bioactivity for mouse lymphocytes to produce interferon-γ in vivo | |
| Van Der Vliet et al. | Circulating myeloid dendritic cells of advanced cancer patients result in reduced activation and a biased cytokine profile in invariant NKT cells | |
| Dettbarn | Acetylcholinesterase activity in Nitella | |
| Oikawa et al. | One-pot preparation and activation of glycosyl trichloroacetimidates: operationally simple glycosylation induced by combined use of solid-supported, reactivity-opposing reagents | |
| JPH059193A (ja) | 新規スフインゴ糖脂質、その製造法および使用 | |
| JP2015074623A (ja) | コラーゲン産生作用を有する新規な誘導体及びその製造方法 | |
| CN108728412B (zh) | 一种nk细胞表面修改的免疫检查点抑制剂及其应用 | |
| Joo et al. | Upregulation of TLR2 expression on G-CSF-mobilized peripheral blood stem cells is responsible for their rapid engraftment after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation | |
| CN102964401A (zh) | 一种克林霉素磷酸酯的制备方法 | |
| CN108586480A (zh) | 含异硫氰酸酯基的青蒿素衍生物及其应用 | |
| CN101230079A (zh) | 噁唑类化合物的1,2-反式糖苷衍生物及其制备方法 | |
| JP6478222B2 (ja) | 未分化細胞のアポトーシス誘導剤 | |
| CN108743595B (zh) | 一种nk细胞免疫检查点抑制剂及其制备方法 | |
| CN113321633B (zh) | 槲皮素-3-o-乙酸-(3-氯-4-硫代氨基)-苯酯及在制备糖尿病药物中的应用 | |
| CN112358517B (zh) | 一种苯并咪唑衍生物bi305及其制备方法和应用 | |
| WO2009139804A3 (en) | Biologically active recombinant human saposin c and psap |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |