CN108659095A - 一种使唾液酸含量稳定的方法 - Google Patents

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张双健
王丹凤
孙李靖
罗明江
林世文
周伟昌
陈智胜
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Abstract

本发明公开一种使唾液酸含量稳定的方法，通过使用碱性试剂调节细胞培养澄清收获液的pH值≥8.0。本发明的方法能够使细胞培养澄清收获液中唾液酸含量在至少48h内保持稳定不变，可有效避免在下一产品捕获步骤的多个循环时间内唾液酸含量出现显著下降，有利于保持最终药物蛋白产品的较长的半衰期及活性。

Description

一种使唾液酸含量稳定的方法
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，尤其是涉及一种能使细胞培养澄清收获液中的唾液酸含量稳定的方法。
背景技术
唾液酸含量直接影响药物蛋白的半衰期，无唾液酸或唾液酸含量低的药物蛋白，在人体内很快被降解。因此，药物蛋白应当含有稳定含量的唾液酸。
在细胞培养澄清收获液中，由于存在大量唾液酸酶，唾液酸往往不稳定。由于下一产品捕获步骤需要多个循环，操作时间较长，导致唾液酸在较长时间的操作过程中含量逐渐降低，影响最终产品的质量。现有工艺条件下，细胞培养澄清收获液中唾液酸含量在下一个产品捕获步骤中一般会下降10％以上(12h)，随时间延长，下降幅度更大。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种使唾液酸含量稳定的方法，能使细胞培养澄清收获液中唾液酸含量稳定，避免在下一捕获步骤操作的多个循环时间内唾液酸的下降。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种使唾液酸含量稳定的方法，使用碱性试剂调节细胞培养澄清收获液的pH值≥8.0。
优选的，使用碱性试剂调节细胞培养澄清收获液的pH值为8.0～8.5。
具体的，所述碱性试剂为Tris-HCl缓冲液。优选的，所述Tris-HCl缓冲液的pH值为8.5、浓度为2M。
具体的，所述方法还包括：将pH调节完成之后的细胞培养澄清收获液在室温下储存，然后进行蛋白捕获步骤操作，检测目标蛋白的唾液酸含量，评估对唾液酸含量的稳定效果。
本发明是对细胞培养液进行澄清处理后，使用碱性试剂2M Tris-HCl将澄清收获液的pH调至8.0以上。通过对现有工艺和改进后工艺下澄清收获液中唾液酸稳定性进行了研究，经目标蛋白捕获，测试唾液酸含量，发现现有工艺下唾液酸含量出现明显降低，而经本发明改进工艺下的唾液酸保持基本稳定。
附图说明
图1为改进前后的唾液酸含量变化对比图。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一现有工艺与改进后工艺下唾液酸含量变化对比试验
取细胞培养液，按常规操作对细胞培养液进行澄清处理，平均分为两份。取其中一份，使用pH 8.5、2M Tris-HCl缓冲液将该澄清收获液的pH值调至8.0-8.5，为试验组。另一份作为对照组。
将试验组和对照组在室温下储存，并分别与0h、12h、24h、48h取样，进行蛋白捕获步骤操作，检测目标蛋白的唾液酸含量。
如图1所示为唾液酸含量的对比图。由图1可以得知，0h时，试验组与对照组的唾液酸含量相同；与0h相比，12h时对照组唾液酸含量下降约15％，24h时对照组唾液酸含量下降约20％；而试验组在24h内唾液酸含量保持稳定不变，延长至48h时试验组唾液酸含量下降＜1.0％。
本发明提供的方法能够使细胞培养澄清收获液中唾液酸含量在至少48h内保持稳定不变(含量下降＜1.0％)，可有效避免在下一产品捕获步骤的多个循环时间内唾液酸含量出现显著下降，有利于保持最终药物蛋白产品的较长的半衰期及活性。
综上所述，上述各实施例仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，皆应包含在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种使唾液酸含量稳定的方法，其特征在于，使用碱性试剂调节细胞培养澄清收获液的pH值≥8.0。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，调节细胞培养澄清收获液的pH值至8.0～8.5。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碱性试剂为Tris-HCl缓冲液。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的pH值为8.5、浓度为2M。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述使用pH值为8.5、浓度为2M的Tris-HCl缓冲液调节细胞培养澄清收获液的pH值至8.0～8.5。
6.如权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：将pH调节完成之后的细胞培养澄清收获液在室温下储存，然后进行蛋白捕获步骤操作，检测目标蛋白的唾液酸含量。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109776626A (zh) * 2018-12-29 2019-05-21 中国科学院合肥物质科学研究院 一种预防唾液酸水溶液变色的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5510261A (en) * 1991-11-21 1996-04-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Juniot University Method of controlling the degradation of glycoprotein oligosaccharides produced by cultured Chinese hamster ovary cells
FI981099A0 (fi) * 1998-05-18 1998-05-18 Marja Makarow Menetelmä glykoproteiinien sialyloimiseksi
WO2009126564A1 (en) * 2008-04-07 2009-10-15 Bayer Healthcare Llc Methods of recombinant production of glycoproteins
CN102753572A (zh) * 2009-10-06 2012-10-24 百时美施贵宝公司 应用糖皮质激素在哺乳动物细胞培养物中生产糖蛋白的方法
CN103221537A (zh) * 2011-01-06 2013-07-24 约翰·霍普金斯大学 在哺乳动物细胞中产生具有延长的循环半衰期的重组糖蛋白的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5510261A (en) * 1991-11-21 1996-04-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Juniot University Method of controlling the degradation of glycoprotein oligosaccharides produced by cultured Chinese hamster ovary cells
FI981099A0 (fi) * 1998-05-18 1998-05-18 Marja Makarow Menetelmä glykoproteiinien sialyloimiseksi
WO2009126564A1 (en) * 2008-04-07 2009-10-15 Bayer Healthcare Llc Methods of recombinant production of glycoproteins
CN102753572A (zh) * 2009-10-06 2012-10-24 百时美施贵宝公司 应用糖皮质激素在哺乳动物细胞培养物中生产糖蛋白的方法
CN103221537A (zh) * 2011-01-06 2013-07-24 约翰·霍普金斯大学 在哺乳动物细胞中产生具有延长的循环半衰期的重组糖蛋白的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109776626A (zh) * 2018-12-29 2019-05-21 中国科学院合肥物质科学研究院 一种预防唾液酸水溶液变色的方法

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