CN108653338A - 没食子中抑制肠道致病菌的有效部位生产方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位生产方法及用途,没食子中抑制肠道致病菌有效成分为没食子酸、没食子酸甲酯、双没食子酸、一‑O‑没食子酰基葡萄糖、二‑O‑没食子酰基葡萄糖、三‑O‑没食子酰基葡萄糖和四‑O‑没食子酰基葡萄糖中一种及以上。其生产方法是,没食子粉碎过筛后与水混合煎煮,合并滤液后浓缩收干准备后续分离;将所得样品利用C18色谱柱、聚酰胺色谱柱或大孔吸附树脂柱进行有效部位富集:除去杂质后,用一定浓度的乙醇或甲醇洗脱,收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物。本发明提取物的制备方法工艺简单、设计合理,环境污染小;将其用于抑制肠道致病菌。
Description
技术领域
本发明涉及一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位生产方法及用途。
背景技术
没食子是没食子蜂(Cynips gallae-tinctoriae Oliv.)的幼虫寄生于没食子(Quercus infectoria Oliv.)幼枝上产生的虫瘿。含有没食子含鞣质50~70%,没食子酸2~4%及双没食子酸、树脂等。没食子药用历史悠久,始记于《唐本草》,后续医学著作《海药本草》、《开宝本草》等亦多有论述。《现代实用中药》亦有记述用于治慢性支气管炎。药理学研究表明没食子具有抗炎、抗菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、杀虫、降糖和创伤修复等多种药理活性。西帕依溃结安是新疆维吾尔医医院习用的验方,由没食子单味药制备而成,治疗溃疡性结肠炎疗效确切,本发明通过质谱引导的高效液相制备系统将没食子药材分离并通过体内外药理评价确定了没食子治疗部分肠道致病菌的有效部位。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位的制备方法。
本发明的第二目的是的提供一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位的用途。
本发明的第一个目的实现如下:
第一步:选用没食子为药材,粉碎,过10~80目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/2~1/5混合,水煎提取1~3次,每次1~3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用C18色谱柱、聚酰胺色谱柱或大孔吸附树脂柱进行有效部位分离,用5%以下的甲醇或乙醇溶液除去杂质后,用30~60%的乙醇或甲醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖中的一种及以上。
通过质谱引导的制备液相分离系统制备一-O-没食子酰基葡萄糖、没食子酸、二-O-没食子酰基葡萄糖、双没食子酸、没食子酸甲酯、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖的流分,对各流分的肠道致病菌抑菌效果进行测定,其结果如表1所示。
表1没食子中各成分对致泻性大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌和血清型肠炎沙门氏菌的抑制作用
注:“-”表示无抑菌活性。
本发明的第二目的实现如下:
得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖中的一种及以上用于抑制肠道致病菌。
本发明利用色谱分离后通过体内体外研究确定了没食子的有效部位,并确定了有效部位的化学组成。本发明的没食子提取物的制备方法工艺简单、设计合理,环境污染小。该方法成本较低,收率较高,适宜工业化生产。本发明开展了体内外活性评价是适合工业化生产有效部位的方法。
具体实施方式
实施例1
第一步:选用没食子为药材,粉碎,过10目筛;
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/2混合,水煎提取1次,每次1小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离;
第三步:将第二步所得样品利用聚酰胺色谱进行有效部位富集:用水洗脱除去杂质,再用30%的乙醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖。
通过质谱引导的制备液相分离系统制备一-O-没食子酰基葡萄糖、没食子酸、二-O-没食子酰基葡萄糖、双没食子酸、没食子酸甲酯、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖的流分,对各流分的肠道致病菌抑菌效果进行测定,其结果如表2所示。
表2没食子中各成分对致泻性大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌和血清型肠炎沙门氏菌的抑制作用
注:“-”表示无抑菌活性。
本发明的第二目的实现如下:
得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,可用于抑制肠道致病菌。
实施例2
与实施例1的不同在于:第一步:选用没食子为药材,粉碎,过50目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/2混合,水煎提取2次,每次2小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用C18色谱柱进行有效部位富集:用5%甲醇洗脱除去杂质,再用30%甲醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有二-O-没食子酰基葡萄糖和三-O-没食子酰基葡萄糖。
实施例3
与实施例1的不同在于:第一步:选用没食子为药材,粉碎,过80目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/3混合,水煎提取3次,每次3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用C18色谱柱进行有效部位富集:用5%甲醇洗脱除去杂质,再用60%的甲醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖。
实施例4
与实施例1的不同在于:第一步:选用没食子为药材,粉碎,过30目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/4混合,水煎提取2次,每次3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用聚酰胺色谱进行有效部位富集:用50%的乙醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有三-O-没食子酰基葡萄糖。
实施例5
与实施例1的不同在于:第一步:选用没食子为药材,粉碎,过50目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/2混合,水煎提取3次,每次2小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用BS-45大孔吸附树脂柱进行有效部位富集:用水洗脱除去杂质,再用30%的乙醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖和五-O-没食子酰基葡萄糖。
实施例6
第一步:选用没食子为药材,粉碎,过80目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/3混合,水煎提取3次,每次3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用S-8大孔吸附树脂柱进行有效部位富集:用水洗脱除去杂质,再用60%的乙醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖。
实施例7
第一步:选用没食子为药材,粉碎,过20目筛。
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/4混合,水煎提取2次,每次3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离。
第三步:将第二步所得样品利用NKA-9大孔吸附树脂柱进行有效部位富集:用水洗脱除去杂质,再用70%的乙醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖。
Claims (3)
1.一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位,其特征在于:没食子中抑制牙周疾病致病菌有效成分为:
一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖中的一种及以上。
2.一种没食子中可抑制肠道致病菌的有效部位的生产方法,其特征在于:
第一步:选用没食子为药材,粉碎,过10~80目筛;
第二步:将没食子药材粉末质量与水体积为1/2~1/5混合,水煎提取1~3次,每次1~3小时,合并滤液后浓缩收干准备后续分离;
第三步:将第二步所得样品利用C18色谱柱、聚酰胺色谱柱或大孔吸附树脂柱进行有效部位富集:用5%以下的甲醇或乙醇溶液除去杂质后,用30~60%的乙醇或甲醇洗脱后收集洗脱液,进行浓缩收干,得到的浓缩液或干燥的固体即为没食子抗炎提取物,提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖中的一种及以上。
3.一种可抑制肠道致病菌的有效部位的用途,其特征在于:是将所生产的提取物中含有一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、三-O-没食子酰基葡萄糖、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖和六-O-没食子酰基葡萄糖中的一种及以上用于抑制肠道致病菌。
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