CN108642131A - 一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 - Google Patents
一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108642131A CN108642131A CN201810343183.5A CN201810343183A CN108642131A CN 108642131 A CN108642131 A CN 108642131A CN 201810343183 A CN201810343183 A CN 201810343183A CN 108642131 A CN108642131 A CN 108642131A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- coagulase
- detection reagent
- reacting
- detection
- reacting pad
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种凝固酶检测试剂、反应垫、制备方法及试剂盒。凝固酶检测试剂包括有Tris缓冲液、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酰精氨酸对硝基苯胺;反应垫包括有反应垫载体和其上的检测试剂成分;本发明技术方案具有较高的检验灵敏度和准确度,本发明技术方案中在向检测卡反应孔中滴加标准品,温育一定时间后,可直接观察检测卡反应孔中颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性,这实现了一步法显色,无需再添加显色剂。
Description
技术领域
本发明涉及临床医学凝固酶检验测定技术领域,具体涉及一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒。
背景技术
人的体表与外界相通的腔道中存在着种类繁多数量庞大的微生物,绝大多数微生物的存在对人体有益,还有一些微生物对人体有害。人们通过检测这些有害微生物产生的某种特定物质判断它们的存在和致病性。
表皮葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌,因常堆聚成葡萄串状,故名。多数为非致病菌,少数可导致疾病。葡萄球菌是最常见的化脓性球菌,是医院交叉感染的重要来源。根据生化反应和产生色素不同,可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌三种。其中金黄色葡萄球菌多为致病菌,表皮葡萄球菌偶尔致病,腐生葡萄球菌一般不致病。金葡菌产生多种毒素与酶,其中血浆凝固酶多是致病菌株能产生,常作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要标志,凝固酶是能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生。大肠埃希菌的致病物质之一也是血浆凝固酶。
女性生殖道感染是女性常见疾病,也是全球性的社会及公共卫生问题,具有发病率高、复发率高的特点。中华医学会妇产科感染协作组从2005年开始一直聚焦于女性阴道炎症方面的学术研究,发现女性的下生殖道是一个非常复杂的微生态区域,各类阴道炎症及下生殖道的癌前病变均和微生态失调有关,提出把阴道微生态恢复正常作为阴道炎症治愈的最终目标。因此正确的评价阴道微生态环境,是配合临床诊疗的关键。
2016年中华医学会生殖道微生态诊治专家共识中提出,生殖道微生态评价需要通过形态学和功能学评价结合起来。其中功能学评价依靠各种病原体的代谢酶来评估女性生殖道疾病感染情况。目前市场上针对细菌性阴道病的筛查产品较多,但是细菌性阴道病(BV)只是一类由于乳杆菌减少厌氧菌大量增殖导致的疾病。随着医学的发展,越来越多的疾病类型纷纷找到了病原,除了细菌性阴道病之外,需氧菌性阴道炎也引起了很多专家的重视,2002年美国Donders教授提出了相差显微镜湿片镜检法对需氧菌性阴道炎进行诊断,被国际上公认为诊断需氧菌性阴道炎的金标准。但是此方法对于显微镜的性能要求较高,我国目前多数医院的常规显微镜无法满足该检测方法的需求,同时对于实验室检验人员的医技水平要求较高,因此不便于在市场上大范围的开展针对此类型疾病的筛查。市场上亟需一种可以快速诊断需氧菌性阴道炎的产品。引发需氧菌性阴道炎的病原微生物主要包含:大肠埃希菌、B族链球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌。其中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌代谢均可产生凝固酶,所以在女性阴道分泌物预成酶检测中,凝固酶的作用和意义非常重要,可作为评价需氧菌性阴道炎的重要指标。
同时也可作为这类致病菌株引起的其他的人和动物的感染的检测指标,如奶牛乳腺炎,外科手术部位感染、坠积性肺炎、尿路感染等局部感染,甚至是新生儿败血症。
预成酶检测方法简单,容易操作。只需将分泌物做成的标本液按照说明书要求滴加到反应孔中,经过一段时间温预,通过颜色变化即可对需氧菌性阴道炎做出诊断。相对于形态学镜检,操作简单易行,不会因为操作人员的主观性造成试验结果的不一致。此方法在国内拥有巨大的市场前景,对于我国女性生殖道健康的发展可起到促进作用。
发明内容
本发明旨在提供一种凝固酶检测试剂、反应垫、制备方法及试剂盒,以更有效、更高效地实现需氧菌性阴道炎等的检验测定。
本发明的技术方案如下:
一种凝固酶检测试剂,其成分包括有聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酰精氨酸对硝基苯胺和Tris缓冲液。
作为优选方案,该凝固酶检测试剂由以下成分组成:
聚乙烯吡咯烷酮 0.5~5 g/L;
甘氨酰精氨酸对硝基苯胺 0.1~1 g/L;
Tris缓冲液的摩尔浓度为 0.05~0.5 mol/L。
一种凝固酶反应垫,其包括有载体和上述的凝固酶检测试剂;其中,载体为滤纸,检测试剂包被在载体上,载体固定在检测卡的反应孔中。
上述凝固酶反应垫的制备方法,包括以下步骤:
S1、配制凝固酶检测试剂:将聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰精氨酸对硝基苯胺溶于Tris缓冲液,得到凝固酶检测试剂;
S2、反应垫处理:将载体固定在检测卡的反应孔中,向载体上滴加凝固酶检测试剂,然后进行干燥,干燥的温度为20~60℃,时间为0.5~3 h。
一种凝固酶检测试剂盒,其包括有检测卡和样品稀释液;其中,检测卡上设置有凝固酶反应孔,该凝固酶反应孔中有凝固酶反应垫;样品稀释液为生理盐水;试剂盒置于2~8℃保存。
本发明中凝固酶检测试剂的主要成分是甘氨酰精氨酸对硝基苯胺,显色原理是利用了对硝基苯胺作为发色基团,对硝基苯胺可与多肽相连形成肽键,作为发色肽,当对硝基苯胺与肽链相连时,其溶液为无色液体,而当它游离存在时,显浅黄色。
凝固酶具有蛋白酶活性,能特异识别精氨酸后面的肽键,因此可以实现一步法显色。
在本发明的技术方案中,向检测卡反应孔中滴加标准品,温育一定时间后,可直接观察检测卡反应孔中颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性。本发明技术方案实现了一步法显色,无需添加显色剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明。
实施例1
该实施例中的凝固酶检测试剂是由以下成分组成:
聚乙烯吡咯烷酮 0.5 g/L;
甘氨酰精氨酸对硝基苯胺 1 g/L;
Tris缓冲液的摩尔浓度 0.5 mol/L。
对该实施例中得到的检测试剂进行检测:分别制备酶浓度不同的酶标准品溶液,以检测灵敏度。
取该实施例中的凝固酶检测试剂50 uL,然后滴加标准品溶液10 uL ,37℃下温育7~15 min,观察溶液颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性。
结果如表1所示:
表1
+表示阳性,-表示阴性。
实施例2
该实施例中的凝固酶检测试剂是由以下成分组成:
聚乙烯吡咯烷酮 5 g/L;
甘氨酰精氨酸对硝基苯胺 0.1 g/L;
Tris缓冲液的摩尔浓度 0.05 mol/L。
对该实施例中得到的检测试剂进行检测:分别制备酶浓度不同的酶标准品溶液,以检测灵敏度。
取该实施例中的凝固酶检测试剂50 uL,然后滴加标准品溶液10 uL ,37℃下温育7~15 min,观察溶液颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性。
结果如表2所示:
表2
+表示阳性,-表示阴性。
实施例3
该实施例中的凝固酶检测试剂是由以下成分组成:
聚乙烯吡咯烷酮 2.5 g/L;
甘氨酰精氨酸对硝基苯胺 0.5g/L;
Tris缓冲液的摩尔浓度 0.1 mol/L。
对该实施例中得到的检测试剂进行检测:分别制备酶浓度不同的酶标准品溶液,以检测灵敏度。
取该实施例中的凝固酶检测试剂50 uL,然后滴加标准品溶液10 uL ,37℃下温育7~15 min,观察溶液颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性。
结果如表3所示:
表3
+表示阳性,-表示阴性。
实施例4
该实施例提供了凝固酶反应垫及其制备方法。凝固酶反应垫包括有载体和前述凝固酶检测试剂;其中,载体为滤纸,检测试剂包被在载体上,载体固定在检测卡的反应孔中。该凝固酶反应垫的制备方法如下:
S1、配制实施例1-3的凝固酶检测试剂:将聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰精氨酸对硝基苯胺溶于Tris缓冲液,得到凝固酶检测试剂;
S2、反应垫处理:将载体固定在检测卡的反应孔中,向载体上滴加10 uL凝固酶检测试剂,然后进行干燥,干燥的温度为20~60℃,时间为0.5~3 h。
实施例5
该实施例提供了凝固酶检测试剂盒,该试剂盒包括有检测卡和样品稀释液;其中,检测卡上设置有凝固酶反应孔,该凝固酶反应孔中有凝固酶反应垫,该凝固酶反应垫中检测试剂为实施例1中检测试剂;样品稀释液为生理盐水。
在该实施例试剂盒的检测卡反应孔中滴加标准品10 uL,37℃下温育7~15 min,观察试剂盒反应孔中颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性;结果如表4所示:
表4
+表示阳性,-表示阴性。
实施例6
该实施例提供了凝固酶检测试剂盒,该试剂盒包括有检测卡和样品稀释液;其中,检测卡上设置有凝固酶反应孔,该凝固酶反应孔中有凝固酶反应垫,该凝固酶反应垫中检测试剂为实施例2中检测试剂;样品稀释液为生理盐水。
在该实施例的试剂盒反应孔中滴加标准品10 uL,37℃下温育7~15 min,观察试剂盒反应孔中颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性;结果如表5所示:
表5
+表示阳性,-表示阴性。
实施例7
该实施例提供了凝固酶检测试剂盒,该试剂盒包括有检测卡和样品稀释液;其中,检测卡上设置有凝固酶反应孔,该凝固酶反应孔中有凝固酶反应垫,该凝固酶反应垫中检测试剂为实施例3中检测试剂;样品稀释液为生理盐水。
在该实施例的试剂盒反应孔中滴加标准品10 uL,37℃下温育7~15 min,观察试剂盒反应孔中颜色变化,溶液显黄色表示阳性,无显色表示阴性;结果如表6所示:
表6
+表示阳性,-表示阴性。
以上实施例仅用以详细说明本发明技术方案,但本发明不限于上述具体实施例,凡基于本发明所做的任何改动或变型均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种凝固酶检测试剂,特征在于:其成分包括有聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酰精氨酸对硝基苯胺和Tris缓冲液。
2.根据权利要求1所述凝固酶检测试剂,其特征在于:所述凝固酶检测试剂由以下成分组成:
聚乙烯吡咯烷酮 0.5-5 g/L;
甘氨酰精氨酸对硝基苯胺 0.1-1 g/L;
Tris缓冲液的摩尔浓度为 0.05-0.5 mol/L。
3.一种凝固酶反应垫,其包括有反应垫载体和载体上的如权利要求1或2所述的凝固酶检测试剂。
4.根据权利要求3所述凝固酶反应垫,其特征在于:所述载体为滤纸。
5.如权利要求3所述凝固酶反应垫的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、配制凝固酶检测试剂:将聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰精氨酸对硝基苯胺溶于Tris缓冲液,得到凝固酶检测试剂;
S2、反应垫处理:将载体固定在检测卡的反应孔中,向载体上滴加凝固酶检测试剂,然后进行干燥处理。
6.一种具有如权利要求3所述凝固酶反应垫的凝固酶检测试剂盒,其包括有检测卡和样品稀释液;其中,检测卡上设置有凝固酶反应孔,凝固酶反应孔中有所述凝固酶反应垫;样品稀释液为生理盐水。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810343183.5A CN108642131A (zh) | 2018-04-17 | 2018-04-17 | 一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810343183.5A CN108642131A (zh) | 2018-04-17 | 2018-04-17 | 一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108642131A true CN108642131A (zh) | 2018-10-12 |
Family
ID=63746636
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810343183.5A Pending CN108642131A (zh) | 2018-04-17 | 2018-04-17 | 一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108642131A (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1091832A (zh) * | 1992-09-14 | 1994-09-07 | 生化学工业株式会社 | 特异地检测内毒素的试剂 |
CN101792792A (zh) * | 2009-12-30 | 2010-08-04 | 北京中生金域诊断技术有限公司 | 一种检测阴道分泌物中需氧菌群的试剂盒及其制备方法 |
CN101855539A (zh) * | 2007-11-12 | 2010-10-06 | 国立大学法人广岛大学 | 内毒素浓度测定方法及浓度测定用试剂盒 |
WO2012037719A2 (zh) * | 2010-09-20 | 2012-03-29 | 天津市一瑞生物工程有限公司 | 真菌(1-3)-β-D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法 |
CN105021817A (zh) * | 2014-04-24 | 2015-11-04 | 天津汇滨生物科技有限公司 | 一种人体液的显色法真菌1,3-β-D-葡聚糖检测试剂盒 |
CN106442989A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-22 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种脯氨酸氨基肽酶检测试剂、反应垫、其制备方法及试剂盒 |
CN106645721A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-05-10 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种凝固酶检测试剂、反应垫、其制备方法及试剂盒 |
CN107779494A (zh) * | 2017-11-02 | 2018-03-09 | 北京中生金域诊断技术股份有限公司 | 一种检测感染性阴道炎的试剂盒及其制备方法 |
-
2018
- 2018-04-17 CN CN201810343183.5A patent/CN108642131A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1091832A (zh) * | 1992-09-14 | 1994-09-07 | 生化学工业株式会社 | 特异地检测内毒素的试剂 |
CN101855539A (zh) * | 2007-11-12 | 2010-10-06 | 国立大学法人广岛大学 | 内毒素浓度测定方法及浓度测定用试剂盒 |
CN101792792A (zh) * | 2009-12-30 | 2010-08-04 | 北京中生金域诊断技术有限公司 | 一种检测阴道分泌物中需氧菌群的试剂盒及其制备方法 |
WO2012037719A2 (zh) * | 2010-09-20 | 2012-03-29 | 天津市一瑞生物工程有限公司 | 真菌(1-3)-β-D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法 |
CN105021817A (zh) * | 2014-04-24 | 2015-11-04 | 天津汇滨生物科技有限公司 | 一种人体液的显色法真菌1,3-β-D-葡聚糖检测试剂盒 |
CN106442989A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-22 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种脯氨酸氨基肽酶检测试剂、反应垫、其制备方法及试剂盒 |
CN106645721A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-05-10 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 一种凝固酶检测试剂、反应垫、其制备方法及试剂盒 |
CN107779494A (zh) * | 2017-11-02 | 2018-03-09 | 北京中生金域诊断技术股份有限公司 | 一种检测感染性阴道炎的试剂盒及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KIYOSHI TSUJI ET AL.: "Automation of Chromogenic Substrate Limulus Amebocyte Lysate Assay Method for Endotoxin by Robotic System", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》 * |
陈正行等: "谷物中生物活性脂多糖的定量分析研究", 《无锡轻工大学学报》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
GILARDI | Infrequently encountered Pseudomonas species causing infection in humans | |
Goyette-Desjardins et al. | Streptococcus suis, an important pig pathogen and emerging zoonotic agent—an update on the worldwide distribution based on serotyping and sequence typing | |
Markey et al. | Clinical Veterinary Microbiology E-Book: Clinical Veterinary Microbiology E-Book | |
MASTRO et al. | Use of nasopharyngeal isolates of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae from children in Pakistan for surveillance for antimicrobial resistance | |
CN102735851B (zh) | 一种猪肺炎支原体多重组抗原elisa检测试剂盒 | |
US8268579B2 (en) | Method and medium for detecting the presence or absence of pathogenic staphylococci in a first generation test sample | |
Church | Aerobic bacteriology | |
CN101592661B (zh) | 布鲁氏菌病抗体竞争酶联免疫吸附试验检测试剂盒 | |
Weissert et al. | Burkholderia pseudomallei misidentified by automated system | |
CN105137073A (zh) | 牛布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条 | |
CN104792986A (zh) | 一种阴道炎多项指标联合检测试剂盒 | |
CN104419703A (zh) | 一种高通量快速检测常见致病菌的方法 | |
CN103499685B (zh) | 人泌尿系统病原菌感染临床诊断的免疫荧光诊断试剂的制备方法 | |
Joubrel et al. | Comparative evaluation of 5 different selective media for Group B Streptococcus screening in pregnant women | |
CN106319028B (zh) | 用于检测解脲支原体和人型支原体的试剂盒 | |
CN108642131A (zh) | 一种凝固酶检测试剂、反应垫及其制备方法和试剂盒 | |
Ito et al. | Yersinia enterocolitica bacteremia and enterocolitis in a previously healthy 20-month-old girl | |
WO2010151764A1 (en) | Method and reagents for detecting the presence or absence of staphylococcus aureus in a test sample | |
CN107677818A (zh) | 猪链球菌9型抗体的ppa‑elisa检测试剂盒及其制备方法 | |
Athlin et al. | The Uni-Gold™ Streptococcus pneumoniae urinary antigen test: an interassay comparison with the BinaxNOW® Streptococcus pneumoniae test on consecutive urine samples and evaluation on patients with bacteremia | |
Perez et al. | Clinical evaluation of testing immediate antibiotic disk sensitivities in bacteriuria | |
CN110243817A (zh) | 一种β-葡萄糖醛酸酶干化学试纸及检测方法 | |
Clyde Jr et al. | 11/LABORATORY DIAGNOSIS OF MYCOPLASMA INFECTIONS | |
Schroeder | UTI and faulty gold standards | |
Parasuraman et al. | Standard Microbiological Techniques (Staining, Morphological and Cultural Characteristics, Biochemical Properties, and Serotyping) in the Detection of ESKAPE Pathogens |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |