CN108624569A

CN108624569A - 小麦籽粒脂肪氧化酶新基因及其应用

Info

Publication number: CN108624569A
Application number: CN201810432659.2A
Authority: CN
Inventors: 陈锋; 田秋珍; 吕国国; 张宁; 赵磊; 任妍
Original assignee: Henan Agricultural University
Current assignee: Henan Agricultural University
Priority date: 2018-05-08
Filing date: 2018-05-08
Publication date: 2018-10-09
Anticipated expiration: 2038-05-08
Also published as: CN108624569B

Abstract

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及小麦籽粒脂肪氧化酶新基因及其应用。本发明提供了小麦籽粒脂肪氧化酶新基因、该基因编码的蛋白，以及鉴定该基因等位基因型的特异性引物对；以待测小麦的基因组DNA为模板，用特异性引物对进行PCR扩增，检测出扩增产物中有2159 bp 条带的为Lox‑3B2a等位基因型小麦，检测出扩增产物中有393 bp条带的为Lox‑3B2b等位基因型小麦。小麦籽粒脂肪氧化酶新基因可应用于小麦品质性状的改良。

Description

小麦籽粒脂肪氧化酶新基因及其应用

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及小麦籽粒脂肪氧化酶新基因及其应用。

背景技术

小麦中的脂肪氧化酶(Lox)在小麦品质方面有重要的作用，Lox活性的高低是影响小麦面粉颜色和其储藏特性的主要因素之一。一方面，具有高Lox活性的小麦品种/系中由于Lox会偶联氧化小麦中的类胡萝卜素，可以取代化学漂白剂使小麦面粉变白，从而提高其商品价值；另一方面Lox活性过高会加快脂质的氧化反应，使籽粒氧化变质，造成储存时间变短，营养价值下降。因此，从宜存储的角度出发，降低Lox活性被认为是一种重要的保存种子的方法之一。因此，对小麦籽粒中Lox活性的变异规律和分布特点进行表型和基因型的研究，为筛选出适应时代需要的品种，从遗传育种上来看有重要的意义。

目前为止，国内外的研究者对Lox活性已经有很多研究，主要研究作物集中在水稻、大豆和大麦中，对小麦的相关研究相对较少。有研究认为，植物中的Lox具有较高的同源性；对小麦不同组织中的脂肪酶进行研究发现，大部分的脂肪酶都来源于麸皮。影响Lox活性的因素有很多，包括基因型、外在环境条件和各种生理生化因素，但基因型是影响Lox活性的主要因素。Hart和Langston利用中国春缺体四体代换系对LPX同工酶进行定位，推测认为小麦Lox基因主要位于第4和第5同源群上，研究还发现脂肪氧化酶的变异维持在DNA水平，不同等位变异主要是由于基因片段的插入、缺失。一般直接利用PCR技术直接用于鉴定和分析等位变异类型，因此，进一步明确该等位变异类型的分子机制，并开发相应的分子标记，从而使用分子标记筛选的方法进行性状改良将会大大加快我国的小麦育种进程。

前人在对小麦籽粒脂肪氧化酶活性进行挖掘和定位的同时，开发出一些与其紧密连锁的SSR标记，如Xbcd1262、Xksud2a、Xwmc312和Xgwm251等(Psheniehnikova等，2008；Geng等，2011)，但是这些标记在实际应用中存在较大的局限性，本发明开发出的功能性分析标记具有高效、准确以及应用范围广的特点。

发明内容

本发明目的主要在于提供小麦籽粒脂肪氧化酶新基因、该基因编码的蛋白、用来检测该基因的引物以及该基因在小麦品质性状改良中的应用。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了小麦籽粒脂肪氧化酶新基因，所述脂肪氧化酶新基因为如下a、b或c表示的DNA序列：

a：核苷酸序列SEQ.ID.NO:1或SEQ.ID.NO:2所示的DNA序列；

b：能与a限定的DNA序列杂交且编码小麦蛋白的DNA序列；

c：与a或b限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码小麦蛋白的DNA序列。

本发明还提供了上述脂肪氧化酶新基因编码的蛋白，所述蛋白为如下d或e所表示的蛋白：

d：氨基酸序列SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4所示的蛋白；

e：将SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且与小麦性状相关的由SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4衍生的蛋白质。

本发明还提供了鉴定上述脂肪氧化酶新基因的特异性引物对，所述特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQ.ID.NO:5所示的上游引物，和核苷酸序列如SEQ.ID.NO:6所示的下游引物。

本发明又提供了利用上述特异性引物对检测脂肪氧化酶等位基因型的方法，包括如下步骤：

以待测小麦的基因组DNA为模板，用核苷酸序列如SEQ.ID.NO:5所示的上游引物，和核苷酸序列如SEQ.ID.NO:6所示的下游引物进行PCR扩增，然后进行如下f或g中所述的判断：

f：扩增片段为2159bp的小麦品种/系为Lox-3B2a等位基因型，在统计学上其脂肪氧化酶活性低于扩增片段为393bp的小麦品种/系；

g：扩增片段为393bp的小麦品种/系为Lox-3B2b等位基因型，在统计学上其脂肪氧化酶活性高于扩增片段为2159bp的小麦品种/系。

进一步地，所述Lox-3B2a等位基因型的小麦品种/系为普通小麦中国春、高优503、晋麦54或豫麦47中的任意一种。

进一步地，所述Lox-3B2b等位基因型的小麦品种/系为新麦9987、新麦19、远丰898或晋麦50中的任意一种。

Lox-3B2a等位基因型的小麦品种/系主要表现在脂肪氧化酶活性较Lox-3B2b等位基因型的小麦品种/系的低。Lox-3B2a等位基因型的小麦品种/系(如中国春)通常比Lox-3B2b等位基因型的小麦品种/系(如新麦9987)脂肪氧化酶活性低5A_U min^-1g^-1左右。因此，脂肪氧化酶不同等位基因的发现将对利用基因工程技术改良小麦农艺性状和培育优质小麦品种起到十分重要作用，同时也有助于品质性状的遗传和分子生物学的进一步研究。

鉴定上述脂肪氧化酶等位基因型的试剂盒，所述试剂盒含有上述特异性引物对。

上述的脂肪氧化酶新基因在小麦品质性状改良中的应用。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1、本发明可以应用于优质小麦新品种培育和优异种质资源的创制，实现早期筛选，节省时间和资源。

2、本发明中的特异性引物可用于直接检测小麦籽粒脂肪氧化酶等位基因型，方法简便。

附图说明

图1为Klein Proteo和Klein Chaja的脂肪氧化酶新基因全长序列的琼脂糖凝胶电泳图。第1泳道为PC-1，代表Klein Proteo；第2泳道为PC-2，代表Klein Chaja。

图2为鉴定Lox-3B2a/Lox-3B2b等位基因型的特异性引物的PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；其中，从左向右，第1泳道为DNA ladder DL2000；第2至12泳道分别为小麦品种/系豫麦47(丰优3号)、晋麦54、晋麦50、远丰898、高优503(小偃503)、04中70、冀923235、内乡1822(豫麦17)、邯4589、新麦19、新麦9987。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步阐述本发明，但本发明的保护内容并不局限于下述具体实施例。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特别说明，均购自常规生化试剂商店。

小麦材料为来自黄淮麦区的有代表性的当地大规模种植的普通小麦品种和高代品系，具体如下：

新麦18：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000:1-401。

鲁麦19：河南农业大学；参考文献：曹学昌.旱地小麦新品种鲁麦19号的选育及配套技术.山东农业科学，1993,4:23-23。

晋麦50：河南农业大学；参考文献：刘新月,张久刚,卫云宗.优质抗旱小麦新品种晋麦78号的选育.山西农业科学，2007,4:35-37。

偃展4110：河南农业大学；参考文献：邵玉华.播期、密度、施肥对偃展4110产量形成及产量的影响.安徽农学通报，2008,14:74-75。

中国春：河南农业大学；Chen F,Beecher B,Morris CF.Physical mapping and anew variant of Puroindoline b-2genes in wheat.Theoretical and AppliedGenetics,2010,120:745-751。“中国春”是中国四川的一个地方品种，是目前世界上最常用的野生型普通小麦对照品种。

豫农202：河南农业大学；孙继冰.小麦新品种豫农202最佳播期研究.种业导刊，2009,6:20-21。“豫农202”河南农业大学农学院小麦分子育种室2007年育成的小麦品种。

Klein Proteo和Klein Chaja:中国农业科学院，Li Liu等。Comparison of lowof low molecular weight glutenin subunits identified by SDS-PAGE,2-DE,MALDI-TOF-MS and PCR in common wheat.BMC Plant Biology 2010,10:124。

实施例1小麦籽粒脂肪氧化酶新基因的特异性引物对的筛选

参考NCBI中国春3B染色体序列(HG670306.1)，从3B染色体上具有LH2功能域(Lipoxygenase homology 2(beta barrel)domain)的碱基序列开始，向其上下游寻找距离最近的起始密码子和终止密码子，确定开放阅读框。然后将该脂肪氧化酶新基因分成6段，利用primer 3.0设计引物并对其进行扩增。

实验材料：Klein Proteo和Klein Chaja完熟期籽粒；

引物：如表1所示。

提取小麦Klein Proteo和Klein Chaja完熟期籽粒基因组DNA，具体方法为：

(1)用锤子砸碎后放入1.5mL离心管中，加入1mL样品提取液，摇30分钟，使其充分混匀；所述样品提取液含288mM NaCl，200mM Tris-HCl，25mM EDTA，0.5％SDS。

(2)在4℃、12,000rpm下离心15分钟，移上清至另一2mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿(体积比为1：1)。

(3)12,000rpm离心15分钟，移上清至另一2mL离心管中，加入0.5倍上清体积的氯仿/异戊醇(体积比为24：1)，充分摇匀。

(4)12,000rpm离心10分钟，移上清至另一新的2mL离心管中，加入1/10上清体积的3M NaAC水溶液(pH＝5.2)和0.6倍上清体积的异丙醇，轻轻混匀，沉淀DNA。

(5)12,000rpm离心15分钟，弃上清，加入0.5mL 70％(体积百分含量)乙醇水溶液，静置5min。

(6)12,000离心5min，弃上清，得沉淀。真空干燥后加入100μL TE溶解沉淀，即得小麦籽粒基因组DNA。

使用引物对Lox-3B2-1、Lox-3B2-2、Lox-3B2-3、Lox-3B2-4、Lox-3B2-5和Lox-3B2-6对得到的Klein Proteo和Klein Chaja籽粒基因组DNA进行扩增。

其中引物对Lox-3B2-1、Lox-3B2-2、Lox-3B2-3在Klein Proteo中能够扩增出目标片段，而在Klein Chaja中则不能扩增出目标片段，引物对Lox-3B2-4、Lox-3B2-5、Lox-3B2-6在Klein Proteo和Klein Chaja中均能扩增出条带位置相同的目的片段。这表明在引物对Lox-3B2-1扩增序列的上游到引物对Lox-3B2-4扩增序列的上游可能发生大片段的缺失或突变；然后在引物对Lox-3B2-1扩增序列的上游和引物对Lox-3B2-4扩增序列的上游之间重新设计特异性引物对(BJF、BJR)，使用特异性引物对(BJF、BJR)在Klein Proteo和KleinChaja中分别进行扩增，得到了两种带型。将特异性引物对(BJF、BJR)的扩增片段进行胶回收单克隆测序，发现该特异性引物对在Klein Proteo和Klein Chaja中扩增出的片段分别长2159bp和393bp。用上游引物Lox-3B2-1-F和下游引物Lox-3B2-6-R，对Klein Proteo和Klein Chaja的完熟期籽粒的DNA扩增，得到脂肪氧化酶新基因的全长序列，将扩增片段进行胶回收单克隆测序，Klein Proteo中脂肪氧化酶新基因长5505bp；Klein Chaja中脂肪氧化酶新基因长3740bp。扩增产物电泳结果如图1所示。在DNAMAN中比对后发现，KleinProteo的脂肪氧化酶新基因从第+474bp(起始密码子ATG中的A为第+1bp)至第+2306bp为1883bp的核苷酸序列，Klein Chaja的脂肪氧化酶新基因从第+474bp至第+540bp为67bp的核苷酸序列。

以小麦籽粒基因组DNA为模板，用特异性引物对(BJF、BJR)扩增，扩增产物长2159bp的定为Lox-3B2a等位基因型，扩增产物长393bp的定为Lox-3B2b等位基因型。

表1引物序列表

实施例2利用特异引物对(BJF、BJR)检测小麦品种/系脂肪氧化酶等位基因型待检测的11个小麦品种/系：豫麦47(丰优3号)a、晋麦54a、晋麦50b、远丰898b、高优503(小偃503)a、04中70b、冀923235a、内乡1822(豫麦17)b、邯4589b、新麦19b和新麦9987b。

利用实施例1中小麦完熟期籽粒基因组DNA的提取方法提取上述11个小麦品种/系的籽粒基因组DNA。

以上述11个小麦品种/系的籽粒基因组DNA为模板，利用特异性引物对(BJF、BJR)进行扩增：PCR反应体系包含1μL基因组DNA(200ng/μL)、0.4μL的10mmol/L dNTP、0.5μL的10pmol上下游引物、2μL 10×Taq Buffer[200mM Tris-HCl(pH 9.0)，200mM KCl，100mM(NH₄)₂SO₄，15mM MgCl₂]、0.4μL的Taq DNA聚合酶(2.5U/μL)、0.6μL的DMSO和14.6μL的ddH₂O。PCR反应程序：先95℃预变性5min；然后95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸2min，共35个循环；最后，72℃延伸7min。

PCR扩增结束后，取上述PCR扩增产物各5μL分别进行1％琼脂糖凝胶电泳(采用1×TAE缓冲液；溴化乙锭(EB)染色，120V，25min)，电泳结束后用凝胶成像系统(MultiGeniusGel Documentation and Analysis System)扫描成像并用计算机进行分析，扩增产物电泳图见图2。

以上述11个小麦品种/系的籽粒基因组DNA为模板，采用引物对Lox-3b2-4进行扩增，扩增片段长度为1103bp。以上述11个小麦品种/系的籽粒基因组DNA为模板，采用引物对Lox-3b2-5进行扩增，扩增片段长度为1056bp。以上述11个小麦品种/系的籽粒基因组DNA为模板，采用引物对Lox-3b2-6进行扩增，扩增片段长度为640bp。PCR反应体系为50μL，包含2μL基因组DNA(200ng/μL)、1μL的TKS DNA聚合酶、25μL的2×TKS Buffer、10pmol的上下游引物各1μL、20.5μL的dd H₂O。PCR反应程序：首先，98℃预变性3min；然后98℃变性15s，59℃退火20s，68℃延伸(1Kb/30s)，共35个循环，最后68℃延伸7min，10℃保存。

然后将上述扩增片段进行胶回收单克隆测序，并利用DNAMAN软件对序列进行分析，发现在上述11个小麦品种/系中，引物对Lox-3B2-4、Lox-3B2-5和Lox-3B2-6扩增出的片段相同；而特异性引物对(BJF、BJR)在上述11个小麦品种/系中扩增出的片段长度不同，小麦品种/系豫麦47(丰优3号)、晋麦54、高优503(小偃503)、冀923235的扩增产物长2159bp，为Lox-3b2a等位基因型，小麦品种/系晋麦50、远丰898、04中70、内乡1822(豫麦17)、邯4589、新麦19、新麦9987的扩增产物长393bp，为Lox-3B2b等位基因型。

实施例3 163个小麦品种/系的脂肪氧化酶等位基因型的检测

利用实施例1中小麦完熟期籽粒基因组DNA的提取方法提取表3中163个小麦品种/系的籽粒基因组DNA。

以表3中163个小麦品种/系的籽粒基因组DNA为模板，利用特异性引物对(BJF、BJR)进行扩增，PCR反应体系和PCR反应程序与实施例2相同。

PCR扩增结束后，取上述PCR扩增产物各5μL分别进行1％琼脂糖凝胶电泳(采用1×TAE缓冲液；溴化乙锭(EB)染色，120V，25min)，电泳结束后用凝胶成像系统(MultiGeniusGel Documentation and Analysis System)扫描成像并用计算机进行分析。然后将上述扩增片段进行胶回收单克隆测序。

所述163个小麦品种/系的脂肪氧化酶等位基因型如表3所示。

实施例4 163个小麦品种/系籽粒脂肪氧化酶活性的测量

试验材料：表3中163个小麦品种/系。

测定所用试剂主要包括：40mM PBS缓冲液(pH 6.8)、99％亚油酸、Tween-20、0.1mol/L NaOH和1mol/L NaOH，配制的试剂使用前进行灭菌处理。

Lox吸光值测试

采用分光光度计法进行测定小麦籽粒Lox吸光值，主要操作步骤如下：

(1)Lox粗酶液的提取：每个小麦品种/系选取2粒种子，将其充分砸碎，使其呈粉末状，装入2.0mL的离心管中，加入1000μL的Lox提取液(40mM PBS缓冲液；pH 6.8)，充分混匀后，冰浴1h(每隔20min轻微震荡混匀1次)，4℃，12000r/min离心10min，所得上清液即为Lox粗酶液。

(2)粗酶液底物吸光度的消除：取上述200μL的Lox粗酶液，进行高温煮沸(100℃)10min以促使Lox酶失活，将此溶液作为测定相应材料的空白对照，以此来消除粗酶液的底物吸光度。

(3)亚油酸底物的配制(现用现配)：亚油酸底物具体包括800μL dd H₂O、15.6μL亚油酸(99％)和15.6μL Tween-20，充分混匀后加入100μL 1mol/L NaOH溶液，轻轻混匀数下后至溶液澄清后，定容至5mL即可。

(4)共轭过氧化物的生成：取步骤1中的Lox粗酶液150μL和步骤3中的300μL亚油酸底物，充分混匀后在30℃温育3min，加入1.5mL 0.1mol/L NaOH溶液混匀，以促使生成反应终止。

(5)紫外分光光度计的测定：以步骤2中的经过高温煮沸Lox粗酶液底物做空白对照，使用UV-2600型紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)在234nm处用1cm光程微量石英比色皿测定共轭过氧化物的吸光度ΔA。试验重复三次。

籽粒总蛋白浓度测试

取待测蛋白样品小麦籽粒Lox粗酶液100μL，采用BCA蛋白定量试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)，利用美国伯腾仪器有限公司生产的ELx808型酶标仪(微孔检测法)测定小麦籽粒Lox粗酶液中的蛋白浓度，主要操作步骤如下：

(1)稀释BSA标准品

蛋白定量试剂BSA标准品的稀释液与待测蛋白样品稀释液的浓度相一致，以保证试验结果的准确性。本实验中小麦籽粒Lox酶和BSA标准品的稀释液都使用浓度为40mM的1×PBS缓冲液(pH 6.8)，BSA标准品稀释方法如下：

表2不同浓度BSA标准品配制方法

(2)配置BCA工作液

采用微孔检测法测定蛋白浓度，BCA工作液总量的计算公式为：BCA工作液总量＝(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×200μL/每个样本BCA工作液体积。根据计算出的需要BCA工作液总量，将BCA蛋白定量试剂盒中的试剂A和试剂B按照50:1的体积比混合，配置BCA工作液，充分混匀后4℃保存备用。

(3)微孔定量检测(蛋白浓度检测范围：20～2000μg/mL)

将稀释好的A～G管的BCA标准品和待测蛋白样品各取25μL分别加到作好标记的96孔板微孔中，每个测定的样本做3个重复，每孔加入200μL的BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃保存温育30min，冷却至室温，用酶标仪在570nm波长下，测定每个样品及BSA标准品吸光值。

(4)蛋白浓度计算

根据BSA标准品稀释的蛋白浓度以及舍去由于操作误差而严重偏离线性曲线的标准品读数后的吸光值(去除背景值后的吸光值读数)绘制标准曲线，由于在测量过程中每一次操作使用的酶标板之间存在差异，所以在每一次测量时都需要绘制一个新的标准曲线，依据此标准曲线计算待测样品的蛋白浓度(X值)。

小麦籽粒Lox活性值计算

酶活性定义为吸光度ΔA在234nm下每毫克(总)蛋白每分钟吸光值增加0.001为1酶活性单位，活性单位表示为A_U min^-1g^-1，计算公式为：

每年种子收获之后，每个品种/系用两粒种子测脂肪氧化酶活性，结果为2年四个重复的平均值，具体结果见表3。

表3 163个小麦品种/系的脂肪氧化酶等位基因型和籽粒脂肪氧化酶活性

163个小麦品种/系籽粒的脂肪氧化酶的方差分析结果显示，Lox-3B2b等位基因型和Lox-3B2a等位基因型两组小麦籽粒脂肪氧化酶的活性数据之间的差异达到显著水平，如表4所示，Lox-3B2b等位基因型小麦籽粒脂肪氧化酶的活性比Lox-3B2a等位基因型小麦籽粒脂肪氧化酶的活性平均高3.42A_U min^-1g^-1。

表4方差分析结果

差异源	SS	df	MS	F	P-value	F crit
							组间	414.9140462	1	414.91405	4.955890527	0.027416707	3.9009887
组内	13227.9797	158	83.721391
							总计	13642.89375	159

上述结果说明，脂肪氧化酶新基因确与小麦籽粒脂肪氧化酶活性相关，Lox-3B2b等位基因型的小麦籽粒脂肪氧化酶活性高，Lox-3B2a等位基因型的小麦籽粒脂肪氧化酶活性低。

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理及工艺条件所做的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 河南农业大学

<120> 小麦籽粒脂肪氧化酶新基因及其应用

<130> 无

<160> 18

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5505

<212> DNA

<213> Triticum aestivum L.

<220>

<221> misc_structure

<222> (474)..(2306)

<400> 1

atgctgcgga gcaccttgcc gctgcaccgg gtgacggcga agaacaagga ggcgtggagg 60

aaggaggcgt cgaagaagaa ggtccggatc ctgggcaggg cggtgctggt catgagggac 120

gtgctcgacc tcggcggctt ccacggctcc ctcctcgacg gcgcccaaaa gttgctcggc 180

agcgacgaca acatctgctt ccacctcatc agcgccaccc tgccagaccc cagtaattaa 240

gcgctccgtc ccccctcttc cttttccttc ctccctgcat tttctggctg cctgggttct 300

gcgagcggca ggtcaagagc aagaaacaat acaaaaaaga aaaatgaaaa acagctcgcg 360

gatttatctc acggctgaaa cagccagatc gattgatcga ataatgcgtt gatttttgtc 420

gcaggcaagg ggaatagtag atgggtgggg aggcgggcgc acgtgcagga gatggtggtg 480

accaaaaagt cgacagcggc tcgggagtcg ttcttcacgg tgacgttcga ctccgacgag 540

tcgcagggca tccccggcgc agtcatcgtc aggaacaact accacgacga gttcctcctc 600

aagacgctca ccatcgaagg cgtcccacgc aagggcaccg tcgtcttcgt cgccaactcc 660

tggatctacc ccaagcatga ccgcgtcttc ttcgccaacg atgtgagtac aaatccattt 720

tccattttca ccaccttcaa cccaaaaata atattcttca tgtctggtct ggtacaccca 780

atcgtactaa aataatcttt accaaaattg gatcttaggc aactcttttt tactactcca 840

aagagagggg gtattagttt tcattatttt gtaggcattt tggatagttt gtaaattact 900

tttattaatt cctaaatgat aaaataaaat taaaaacaat atttgccgca gatgaaatgc 960

gtcggcctgt tgggtgcgcc gggtggacaa gagctggtca ttgtccacgc tgcccgttgg 1020

atcgagttac ccttaagtac taaccatcta ttgggagttg tgggaagaga ggaatgcaca 1080

aatctttagt aatattgcca ttcccatagg agtcattgtt gctaggatta agtaggagag 1140

ctcactttgg atcattgcgg gagcgaggca ttagaataac gtaatgctat cttaataaaa 1200

agctgattca gatagcaagt tgattgcatt cagataacgg acctcacttt gtatataaat 1260

atagcaagtt gatagctaat cccccgcggc tggaggctct cctcgcacga cgcagctgct 1320

gaggctggag cagggccggt ctggatgtgg ctgcaggcgg gtgtggctgg acgcaactgg 1380

atgcgggcgc tgctggagta gggcgccccc gacgttgtcg ccggctcgag gtgggcgcag 1440

tggctgcata atattctgag cagttcaaat attcggccta atttggattt tcagcatccg 1500

gatgacccaa aagtgcatgt acagcccatg tttaaataca cgctgcaaga caagtatttc 1560

ttaagtgatg aaaatgacat agatagatgt atgagtaagt tagagtggca tttttccaag 1620

tggtgaaagt cgttgcggca tagatccaat taatggcaaa ctggaaatag atactactcc 1680

ctccgtcctg aaatacttgt cggagaaatg cataaaaatg gatatatcta gaactaaaat 1740

acgtctagat acgtccattc ccccgacaag tatttccgga cggagggagt acgtaggagt 1800

acccaagaag aaaagatgcc aaattgccaa gttgacttgg tacagacaag caacttacag 1860

gttactatta tttggtcaga tccatcacct aagctgtaaa gttgctgttg ctgggtccgg 1920

gcctttcgtt gtgtcaataa tgccttgtta ggaaaatgta gtgcatagta gatatcctat 1980

acgtcgcata aaattcatat tagcatgaac gaaaaaaagt aagctttttg agaacttcag 2040

tcctttgatt gtctgctgat agtaaaacat tttgcttggc tgatcgattc aaaatgaccg 2100

accgagtgct gtgccaggct gctggctacc ttccctgcat gctcaacaac tcctttccga 2160

ctaattctta gggttttttc taagataatg aactgatatt acaagttacc agtaacgacg 2220

aagattgtaa gttgcaaatg tcatcaactt gctatctgaa taagtttctg gaatctctgg 2280

atccacaact actccctccg tccttgaaag agtgtacttc caactttgtt ggaaagtcaa 2340

agttttctct gtttgaccgt atttatacaa taatagccca acgtttatgc tatcaaatta 2400

gtagcattag attcatgata aaatatattt ttgtcatata cctatttggt ttcacaagca 2460

ttgacatata tttgcacaaa ctttgagata ttttgaccat ccaacaaagt tggaagtaca 2520

ctctttcaag gacagaggga gtagctgtta gatcttaaaa gcaagatggc aacttttcta 2580

ctgtttacga aaaggaacag ctatatttaa ctcttcccct gatgatcaga ggaatgggag 2640

acagaaatac gaaaccgttt tcagaaatag tatatcacaa atgacacact tagttatcta 2700

tttctcactg gttaattaga agcattctca ttttaaatcc gtgagcacct gcttgaggtt 2760

tggggactga gtaaaactac tctattgttt tttctatctg tcacctcatt tttcttgcta 2820

ttttgcagac ctacctgccc agcaaaatgc ccgcaccttt ggtgcaatac cggcgaaacg 2880

aactcatcaa tctccgaggc gacggtacag aaagagagta taaggagcgt gaccgtgtgt 2940

accgctatga ctactacaat gacctgggag agccagacag gggcgagatg tatgcacggc 3000

cgatcctcgg cggcagccaa gaacttccat atccgcgccg tggcagaaca ggccgaggcc 3060

caacaaaaac aggtgagttt ggtgtggtat atcttcaact atgcacagcc atgtcaccct 3120

gcaattggac tcatattggg ggtttgatct tgtcaccaga ccctagatca gagagcagaa 3180

ttcctcagta caaggttaag gaggccatga acatctatgt ctcacgcgat gagcgcgttg 3240

ggcacctcaa gttgtctgac ttccgtgggt actctctcaa ggccatcact gaggctattc 3300

ttccgataat taggacctat gttgacagta cacccaagga gtttgattcg tttcaagata 3360

tctataatct ctatgatggt cttctgaaag tgccggataa ccaacactta aaggagctca 3420

agaataaaat cccccctcag tttattaaaa gtcttttaac agttgttggt gacgacctcc 3480

taaacttgcc ccttccacat gttatcaaat caggtaatca gctgtgtaca tgacataata 3540

cggccatccc ttgttttaca ctttatactt cttacaactt aattattttc ttaaattgta 3600

gatctatatg cttggaggtc agatgaggag tttgcacgtg agatgcttgc aggcgtgaac 3660

ccggtttgca tcagacgtct gacggttagc acctatatat gacatttaaa gaagaataaa 3720

ccatctcctc ataatcgatt gagaattcct catctgtttg gtattttatg accacaggag 3780

ttccctgtaa aaagtactct ggatcccagt gtgtacgggg accagtcaag cacaatcact 3840

gaagatcaaa ttcagcagaa cctggaagaa ggcctcacag tgaaacaggt gtgttgaatg 3900

agtcattgag ctgcaaattg ctagtgaaca agtactgaat aatcagatga gattgattgt 3960

cctaacaacc atgtattgtg caggcaatgg agaggaacag gctcttcatt ttagatcacc 4020

acgataactt catgccattc cttggccgca tcaacaagtt ggaaggcaac ttcatctacg 4080

cttcaaggac cctgctgttc ctcaaggccg acgggacgct caagcccttg gccattgagc 4140

tgagcctgcc gcaccctgat gggcttcagc atggcgcaga gagcagggtg tatgttccgg 4200

ctgacgaacg agttgacggc cagatctggc agcttgccaa ggcttacgcc tgcgtcaatg 4260

actctgcttg gcatcaactg atcagccact ggtatgaatg atgagtatat atagattcca 4320

attgatacca aattagtact gagctaattt tatagtgttt ctctaggttg aacacacatg 4380

cggtgatgga gccgtttgtg attgcgacga accggcaact gagtgtggtg catcccgtgc 4440

acaaactgct gagcccacac taccgcgaca caatgaacat caacgccctg gcgcggacga 4500

tgctcatcaa cgctggcggc ttatttgagc tgactgtctt cccaggaaag tatgcgctcg 4560

agatgtcttc agtggtgtat aagaagtgga aactcaccga gcagggcctc cccgacgacc 4620

tagtcaaaag gtaaatagag gagctcattt ttttttagcg tggaagaata tttgactgaa 4680

gatgaatttt gcttgcttgt ttgtgtgcgc attgcatgca agggcatggc tgtgcgagac 4740

ccgtcgagcc catacggcat ccgtctgctg ctaaaggact acccgtacgc cgtggacggg 4800

ctggcgatct ggtgggcaat ccagcaatgg gtaaaggagt acttgggcat ctattacccc 4860

aacgacggcg tgctccaggc tgacaaggag ctaaaggagt ggtggaaaga ggtgcgcgag 4920

gtcgggcacg gcgacctcaa ggacgaggac tggtggccca agatggagac cgtcgaggag 4980

ctgggcaaga cgtgcatcac catcatctgg gtggcgtcgg ccctgcacgc ggcagtcaac 5040

tttgggcagt accagtatgc ggggtacgtc ccaaaccggc caacggtcag ccggcggaag 5100

atgccggtgc ccggaacgga ggagtataca cagctagagc gtggtgagga agaggccgac 5160

agggttttca tccacaccat cagccagtgc ttccagagca tgctcgccct gaccctcctc 5220

gagaccctgt cgaagcacac gtcggacgaa gtgtacctcg ggcagcgcga cacgccagag 5280

tggacgtcgg atgccaaggc gctggagttg ttcgaaaggt tcggcacaca gctggtggag 5340

atcgaggagc ggatcacggc catgaacaac gacccggcgc tcaagaaccg gaacgggccg 5400

gtgaatatgc cgtacacgct gctgtacccc aacacgtcgg acctcactgg cgacagaggc 5460

cgggggctct cgggcttggg catccccaac agcgtctcca tatga 5505

<210> 2

<211> 3740

<212> DNA

<213> Triticum aestivum L.

<220>

<221> misc_structure

<222> (474)..(540)

<400> 2

atgctgcgga gcaccttgcc gctgcaccgg gtgacggcca agaacaagga ggcgtggagg 60

aaggaggcgt cgaagaagaa ggtccggatc ctgggcaggg tggtgctggt catgagggac 120

gtgctcgacc tcggcgactt cgacgcctcc ctcctcgacg gcgcccaaaa gttgctcggc 180

agggacgaca acatctgctt caacctcgtc agcgccaccc tgccagaccc cagtaattaa 240

gcgctccgtc ccctctcttc cttttcctcc ctccctgcat tttctggctg cctgggttct 300

gcgagcggca ggtcaagagc aagaaacaat acaaaaagga aaaatgaaaa acagctcgtg 360

gatttatctc acggctgaaa cagccagatc gattgatcga ataatgcgtt gatttttgtc 420

gcaggcaagg ggaatagggg atgggtgggg aggcgggcgc acgtgcagga gatttttttc 480

cgaaaagggg ataccccggc ctctgcatca gcatgatgca tacggccctc ttattaaaca 540

aaagagtgta cttccaactt tgttggaaag tcaaagtttt ctatgtttga ccgtgtttat 600

acaataatag cccaacgttt atgctatcaa attagtagca ttagattcat gataaaatat 660

atttttgtca tatacctatt tggtttcaca agcattgaca tatatttgca taaactttga 720

aatattttga ccatccaacg aagttggaag tacactcttt caaggacgga aggagtagct 780

gttagatctt aaaagcaaga tggcaacttt tctactgttt accaaaagga acagctatat 840

ttaactgttc ccctgatgat cagaggaatg ggagacagaa atacgaaacc gttttcagaa 900

atagtatatc acaaatgaca cacttagtta tctatttctc actggttaat tagaagcatt 960

ctcattttaa atccgtgagc acctgcttga ggtttgggga ctgagtaaaa ctactctatt 1020

gttttttcaa tctgtcacct catttttctt gctattttgc agacctacct gcccagcaaa 1080

atgcccgcac ctttggtgca ataccggcga aacgaactca tcaatctccg aggcgacggt 1140

acagaaagag agtataagga gcatgaccgt gtgtaccgct atgactacta caatgacctg 1200

ggagagccag acaggggcga gatgtatgca cggccgatcc tcggcggcag ccaagaactt 1260

ccatatccgc gccgtggcag aacaggccga ggcccaacaa aaaaaggtga gtttggtgtg 1320

gtatatcttc aactatgcac agccatgtca ccctgcaatt ggactcatat tgggggtttg 1380

atcttgtcac cagaccctag atcagagagc agaattcctc agtacaaggt taaggaggcc 1440

atgaacatct atgtcccacg cgatgagcgc gttgggcacc tcaagttgtc tgacttccgt 1500

gggtactctc tcaaggccat cactgaggct attcttccga taattaggac ctatgttgac 1560

agtacaccca aggagtttga ttcgtttcaa gatatctata atctctatga tggtcttctg 1620

aaagtgccgg ataaccaaca cttaaaggag ctcaagaata aaatcccccc tcagtttatt 1680

aaaagtcttt taacagttgt tggtgacgac ctcctaaact tgccccttcc acatgttatc 1740

aaatcaggta atcagctgtg tacatgacat aatacggcca tcccttgttt tacactttat 1800

acttcttaca acttaattat tttcttaaat tgtagatcta tatgcttgga ggtcagatga 1860

ggagtttgca cgtgagatgc ttgcaggcgt gaacccggtt tgcatcagac gtctgacggt 1920

tagcacctat atatgacatt taaagaagaa taaaccatct cctcataatc gattgagaat 1980

tcctcatctg ttttgtattt tatgaccaca ggagttccct gtaaaaagta ctctggatcc 2040

cagtgtgtac ggggaccagt caagcacaat cactgaagat caaattcagc agaacctgga 2100

agaaggcctc acagtgaaac aggtgtgttg aatgagtcat tgagctgcaa attgctagtg 2160

aacaagtact gaataatcag atgagattga ttgtcctaac aaccatgtat tgtgcaggca 2220

atggagagga acaggctctt cattttagat caccacgata acttcatgcc attccttggc 2280

cgcatcaaca agttggaagg caacttcatc tacgcttcaa ggaccctgct gttcctcaag 2340

gccgacggga cgctgaagcc cttggccatt gagctgagcc tgccgcaccc tgatgggctt 2400

cagcatggcg cagagagcag ggtgtatgtt cgggctgacg aacgagttga cggccagatc 2460

tggcagcttg ccaaggctta cgcctgcgtc aatgactctg cttggcatca actgatcagc 2520

cactggtatg aatgatgagt atatatagat tccaattgat accaaattag tactgagcta 2580

attttatagt gtttctctag gttgaacaca catgcggtga tggagccgtt tgtgattgcg 2640

acgaaccggc aactgagtgt ggtgcatccc gtgcacaaac tgctgagccc acactaccgc 2700

gacacgatga acatcaacgc cctggcgcgg acgatgctca tcaacgctgg cggcttattt 2760

gagctgactg tcttcccagg aaagtatgcg ctcgagatgt cttcagtggt gtataagaag 2820

tggaaactca ccgagcaggg cctccccgac gacctagtca aaaggtaaat agaggagctc 2880

attttttttt ttagcgtgga agaatatttg actgaagatg aattttgctt gcttgtttgt 2940

gtgcgcattg catgcagggc atggctgtgc gagacccgtc gagcccatac ggcatccgtc 3000

tgctgctaaa ggactacccg tacgccgtgg acgggctggc gatctggtgg gcaatccagc 3060

aatgggtaaa ggagtacttg ggcatctatt accccaacga cggcgtgctc caggctgaca 3120

aggagctaaa ggagtggtgg aaagaggtgc gcgaggtcgg gcacggcgac ctcaaggacg 3180

aggactggtg gcccaagata gagaccgtcg aggagctggg caagacgtgc atcaccatca 3240

tctgggtggc gtcggccctg cacgcggcag tcaactttgg gcagtaccag tatgcggggt 3300

acgtcccaaa ccggccaacg ttcagccggc ggaagatgcc ggtgcccgga acggaggagt 3360

atacacagct agagcgtggt gaggaagagg ccgacagggt tttcatccac accatcagcc 3420

agtgcttcca gagcatgctc gtcctgaccc tcctcgagac cctgtcgaag cactcgtcgg 3480

acgaagtgta cctcgggcag cgcgacacgc cagagtggac gtcggatgcc aaggcgctgg 3540

agttgttcga aaggttcggc acacagctgg tggagatcga ggagcggatc acggccatga 3600

acaacgaccc ggcgctcaag aaccggaacg ggccggtgaa tatgccgtac acgctgctgt 3660

accccaacac gtcggacctc accggcgaca gaggccgggg gctctcgggc ttgggcatcc 3720

ccaacagcgt ctccatatga 3740

<210> 3

<211> 876

<212> PRT

<213> Triticum aestivum L.

<400> 3

Met Leu Arg Ser Thr Leu Pro Leu His Arg Val Thr Ala Lys Asn Lys

1 5 10 15

Glu Ala Trp Arg Lys Glu Ala Ser Lys Lys Lys Val Arg Ile Leu Gly

20 25 30

Arg Ala Val Leu Val Met Arg Asp Val Leu Asp Leu Gly Gly Phe His

35 40 45

Gly Ser Leu Leu Asp Gly Ala Gln Lys Leu Leu Gly Ser Asp Asp Asn

50 55 60

Ile Cys Phe His Leu Ile Ser Ala Thr Leu Pro Asp Pro Ser Lys Gly

65 70 75 80

Asn Ser Arg Trp Val Gly Arg Arg Ala His Val Gln Glu Met Val Val

85 90 95

Thr Lys Lys Ser Thr Ala Ala Arg Glu Ser Phe Phe Thr Val Thr Phe

100 105 110

Asp Ser Asp Glu Ser Gln Gly Ile Pro Gly Ala Val Ile Val Arg Asn

115 120 125

Asn Tyr His Asp Glu Phe Leu Leu Lys Thr Leu Thr Ile Glu Gly Val

130 135 140

Pro Arg Lys Gly Thr Val Val Phe Val Ala Asn Ser Trp Ile Tyr Pro

145 150 155 160

Lys His Asp Arg Val Phe Phe Ala Asn Asp Thr Tyr Leu Pro Ser Lys

165 170 175

Met Pro Ala Pro Leu Val Gln Tyr Arg Arg Asn Glu Leu Ile Asn Leu

180 185 190

Arg Gly Asp Gly Thr Glu Arg Glu Tyr Lys Glu Arg Asp Arg Val Tyr

195 200 205

Arg Tyr Asp Tyr Tyr Asn Asp Leu Gly Glu Pro Asp Arg Gly Glu Met

210 215 220

Tyr Ala Arg Pro Ile Leu Gly Gly Ser Gln Glu Leu Pro Tyr Pro Arg

225 230 235 240

Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Pro Thr Lys Thr Asp Pro Arg Ser Glu

245 250 255

Ser Arg Ile Pro Gln Tyr Lys Val Lys Glu Ala Met Asn Ile Tyr Val

260 265 270

Ser Arg Asp Glu Arg Val Gly His Leu Lys Leu Ser Asp Phe Arg Gly

275 280 285

Tyr Ser Leu Lys Ala Ile Thr Glu Ala Ile Leu Pro Ile Ile Arg Thr

290 295 300

Tyr Val Asp Ser Thr Pro Lys Glu Phe Asp Ser Phe Gln Asp Ile Tyr

305 310 315 320

Asn Leu Tyr Asp Gly Leu Leu Lys Val Pro Asp Asn Gln His Leu Lys

325 330 335

Glu Leu Lys Asn Lys Ile Pro Pro Gln Phe Ile Lys Ser Leu Leu Thr

340 345 350

Val Val Gly Asp Asp Leu Leu Asn Leu Pro Leu Pro His Val Ile Lys

355 360 365

Ser Asp Leu Tyr Ala Trp Arg Ser Asp Glu Glu Phe Ala Arg Glu Met

370 375 380

Leu Ala Gly Val Asn Pro Val Cys Ile Arg Arg Leu Thr Glu Phe Pro

385 390 395 400

Val Lys Ser Thr Leu Asp Pro Ser Val Tyr Gly Asp Gln Ser Ser Thr

405 410 415

Ile Thr Glu Asp Gln Ile Gln Gln Asn Leu Glu Glu Gly Leu Thr Ala

420 425 430

Met Glu Arg Asn Arg Leu Phe Ile Leu Asp His His Asp Asn Phe Met

435 440 445

Pro Phe Leu Gly Arg Ile Asn Lys Leu Glu Gly Asn Phe Ile Tyr Ala

450 455 460

Ser Arg Thr Leu Leu Phe Leu Lys Ala Asp Gly Thr Leu Lys Pro Leu

465 470 475 480

Ala Ile Glu Leu Ser Leu Pro His Pro Asp Gly Leu Gln His Gly Ala

485 490 495

Glu Ser Arg Val Tyr Val Pro Ala Asp Glu Arg Val Asp Gly Gln Ile

500 505 510

Trp Gln Leu Ala Lys Ala Tyr Ala Cys Val Asn Asp Ser Ala Trp His

515 520 525

Gln Leu Ile Ser His Trp Leu Asn Thr His Ala Val Met Glu Pro Phe

530 535 540

Val Ile Ala Thr Asn Arg Gln Leu Ser Val Val His Pro Val His Lys

545 550 555 560

Leu Leu Ser Pro His Tyr Arg Asp Thr Met Asn Ile Asn Ala Leu Ala

565 570 575

Arg Thr Met Leu Ile Asn Ala Gly Gly Leu Phe Glu Leu Thr Val Phe

580 585 590

Pro Gly Lys Tyr Ala Leu Glu Met Ser Ser Val Val Tyr Lys Lys Trp

595 600 605

Lys Leu Thr Glu Gln Gly Leu Pro Asp Asp Leu Gly Met Ala Val Arg

610 615 620

Asp Pro Ser Ser Pro Tyr Gly Ile Arg Leu Leu Leu Lys Asp Tyr Pro

625 630 635 640

Tyr Ala Val Asp Gly Leu Ala Ile Trp Trp Ala Ile Gln Gln Trp Val

645 650 655

Lys Glu Tyr Leu Gly Ile Tyr Tyr Pro Asn Asp Gly Val Leu Gln Ala

660 665 670

Asp Lys Glu Leu Lys Glu Trp Trp Lys Glu Val Arg Glu Val Gly His

675 680 685

Gly Asp Leu Lys Asp Glu Asp Trp Trp Pro Lys Met Glu Thr Val Glu

690 695 700

Glu Leu Gly Lys Thr Cys Ile Thr Ile Ile Trp Val Ala Ser Ala Leu

705 710 715 720

His Ala Ala Val Asn Phe Gly Gln Tyr Gln Tyr Ala Gly Tyr Val Pro

725 730 735

Asn Arg Pro Thr Val Ser Arg Arg Lys Met Pro Val Pro Gly Thr Glu

740 745 750

Glu Tyr Thr Gln Leu Glu Arg Glu Ala Asp Arg Val Phe Ile His Thr

755 760 765

Ile Ser Gln Cys Phe Gln Ser Met Leu Ala Leu Thr Leu Leu Glu Thr

770 775 780

Leu Ser Lys His Thr Ser Asp Glu Val Tyr Leu Gly Gln Arg Asp Thr

785 790 795 800

Pro Glu Trp Thr Ser Asp Ala Lys Ala Leu Glu Leu Phe Glu Arg Phe

805 810 815

Gly Thr Gln Leu Val Glu Ile Glu Glu Arg Ile Thr Ala Met Asn Asn

820 825 830

Asp Pro Ala Leu Lys Asn Arg Asn Gly Pro Val Asn Met Pro Tyr Thr

835 840 845

Leu Leu Tyr Pro Asn Thr Ser Asp Leu Thr Gly Asp Arg Gly Arg Gly

850 855 860

Leu Ser Gly Leu Gly Ile Pro Asn Ser Val Ser Ile

865 870 875

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> Triticum aestivum L.

<400> 4

Met Leu Arg Ser Thr Leu Pro Leu His Arg Val Thr Ala Lys Asn Lys

1 5 10 15

Glu Ala Trp Arg Lys Glu Ala Ser Lys Lys Lys Val Arg Ile Leu Gly

20 25 30

Arg Val Val Leu Val Met Arg Asp Val Leu Asp Leu Gly Asp Phe Asp

35 40 45

Ala Ser Leu Leu Asp Gly Ala Gln Lys Leu Leu Gly Arg Asp Asp Asn

50 55 60

Ile Cys Phe Asn Leu Val Ser Ala Thr Leu Pro Asp Pro Ser Lys Gly

65 70 75 80

Asn Arg Gly Trp Val Gly Arg Arg Ala His Val Gln Glu Ile Phe Phe

85 90 95

Arg Lys Gly Asp Thr Pro Ala Ser Ala Ser Ala

100 105

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggcaggtcaa gagcaagaaa ca 22

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

cctatttggt ttcacaagca ttgac 25

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

atctggctgg ctaatctccg 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

gcatttcatc tgcggcaaat 20

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

tcatgtctgg tctggtacac c 21

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

actcctacgt actccctccg 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

cggagggagt acgtaggagt 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

catagcggta cacacggtca 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

cgaggcgacg gtacagaaag 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ttcctctcca ttgcctgcac 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

ggagaggaac aggctcttca 20

<210> 16

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

cgtaccccgc atactggta 19

<210> 17

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

cacgcggcag tcaactttg 19

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

tgacgacctg acaacattgg a 21

Claims

1.小麦籽粒脂肪氧化酶新基因，其特征在于，所述脂肪氧化酶新基因为如下a、b或c表示的DNA序列：

a：核苷酸序列SEQ.ID.NO:1或SEQ.ID.NO:2所示的DNA序列；

b：能与a限定的DNA序列杂交且编码小麦蛋白的DNA序列；

c：与a或b限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码小麦蛋白的DNA序列。

2.权利要求1所述脂肪氧化酶新基因编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白为如下d或e所表示的蛋白：

d：氨基酸序列SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4所示的蛋白；

e：将SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且与小麦相关的由SEQ.ID.NO:3或SEQ.ID.NO:4衍生的蛋白质。

3.鉴定权利要求1所述脂肪氧化酶新基因的特异性引物对，其特征在于，所述特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQ.ID.NO:5所示的上游引物，和核苷酸序列如SEQ.ID.NO:6所示的下游引物。

4.利用权利要求3所述的特异性引物对检测脂肪氧化酶等位基因型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

f：扩增片段为2159 bp的小麦品种/系为Lox-3B2a等位基因型，在统计学上其脂肪氧化酶活性低于扩增片段为393 bp的小麦品种/系；

g：扩增片段为393 bp的小麦品种/系为Lox-3B2b等位基因型，在统计学上其脂肪氧化酶活性高于扩增片段为2159 bp的小麦品种/系。

5.根据权利要求4所述的特异性引物对检测脂肪氧化酶等位基因型的方法，其特征在于，所述Lox-3B2a等位基因型的小麦品种/系为普通小麦中国春、高优503、晋麦54或豫麦47中的任意一种。

6.根据权利要求4所述的特异性引物对检测脂肪氧化酶等位基因型的方法，其特征在于，所述Lox-3B2b等位基因型的小麦品种/系为新麦9987、新麦19、远丰898或晋麦50中的任意一种。

7.鉴定权利要求4所述脂肪氧化酶等位基因型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求3 所述特异性引物对。

8.权利要求1所述的脂肪氧化酶新基因在小麦品质性状改良中的应用。