CN108619121A - Fty720在保护神经功能中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种FTY720在保护神经功能中的用途，其在抑制大鼠短暂性脑缺血后神经细胞死亡和脑出血后脑水肿具有显著效果。通过采用不同剂量FTY720治疗大鼠颅脑损伤，观察其对大鼠脑炎症反应、神经细胞凋亡和神经功能的影响，从而揭示其剂量疗效关系。并且通过设置小剂量和高剂量两个剂量的FTY20对大鼠腹腔注射，结果显示均显著抑制大鼠损伤皮层神经细胞凋亡和caspase 3活性，降低了脑组织肿瘤坏死因子‑α、白介素‑1β和白介素‑6浓度，改善了大鼠肢体功能和认知功能。

Description

FTY720在保护神经功能中的用途

技术领域

本发明涉及药物技术领域，具体涉及FTY720在保护神经功能中的用途。

背景技术

颅脑损伤发生率高，预后不佳。外力触发的继发性脑损伤呈现瀑布式反应，涉及炎症反应和细胞凋亡。脑外伤后，脑胶质细胞被激活，从而释放包括肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6在内的大量炎症介质，进而激活凋亡蛋白caspase 3。激活的Caspase-3能使许多与细胞结构、细胞周期及DNA修复等相关蛋白或激酶失活，从而使细胞凋亡。颅脑损伤后脑组织局部免疫应答增强加重脑组织的继发性脑损伤，为临床应用免疫抑制疗法治疗颅脑损伤提供一定的实验依据。但另一方面，临床上颅脑损伤患者有50％-70％合并继发性感染，而应用常规免疫抑制剂可致全身免疫功能低下，加重继发性感染。因此寻找一种安全有效的免疫抑制剂对于减少颅脑损伤后继发性脑损伤具有重要意义。

芬戈莫德(FTY720)是一种新型的免疫抑制剂，是将冬虫夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成份ISP-I进行结构改造而成的，在体内代谢为具有生物活性的物质而发挥作用。它的免疫抑制具有双向调节作用，在体内抑制免疫反应发生的同时不破坏机体对病毒的免疫应答及免疫记忆能力，不良反应少，生物利用度高。目前，FTY720用于治疗多发性硬化症已进入Ⅱ期临床试验，治疗肾移植排斥反应已进入Ⅲ期临床研究阶段。最近有研究显示，FTY720可抑制体外培养胶质细胞的炎性因子释放，阻止脑外伤大鼠外伤皮层炎性细胞的聚集，从而降低脑炎症反应。但是对其在神经功能的保护作用方面未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种FTY720的新用途，也就是FTY720具有保护神经功能的作用，其在抑制大鼠短暂性脑缺血后神经细胞死亡和脑出血后脑水肿具有显著效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

FTY720在保护神经功能中的用途，不仅包括在颅脑损伤前对神经功能的保护，也保护对颅脑损伤后的神经功能保护。其中，FTY720的结构式如下：

优选地，FTY720对颅脑损伤后神经功能的保护，对其使用FTY720药物的时间最好不超过18天，因为时间越长，颅脑损伤炎症反应越重，使用过晚，预后不佳，选择的合适的时间进行药物干涉能够起到较好的保护作用。

本发明还通过试验得出了FTY720在大鼠中的每次用量为1～5mg/kg。

不仅如此，除了FTY720本身具有保护神经功能的用途落在本发明的保护范围之内，其在制备保护神经功能药物中的应用也落在本发明的保护范围之内，所述的药物不仅包括FTY720制剂本身，还包括FTY720作为主要成分的药物组合物。

并且所述药物制剂的种类不受限制，包括注射剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂等所有市面上能够制成的制剂种类。

由于神经功能包括大脑认知功能，所以FTY720能够提高大脑认知功能。并且FTY720也具有预防或治疗神经细胞损伤的作用。因此，本发明还保护含有FTY720的药物在提高大脑认知功能中的作用以及药物本身，也保护含有FTY720的药物在预防或治疗神经细胞损伤的作用和药物本身，其保护范围不受药物制备方法的限制。

本发明具有如下优点：

本发明公开了一种FTY720的新用途，也就是FTY720具有保护神经功能的作用，其在抑制大鼠短暂性脑缺血后神经细胞死亡和脑出血后脑水肿具有显著效果。

并且本发明还采用不同剂量FTY720治疗大鼠颅脑损伤，观察其对大鼠脑炎症反应、神经细胞凋亡和神经功能的影响，从而揭示其剂量疗效关系。

附图说明

图1是FTY720对颅脑损伤大鼠损伤皮层神经细胞凋亡的影响。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。发明人通过以下试验得出本发明的结论。具体如下：

一、材料与方法

1.动物处理方法

将80只健康雄性Wistar大鼠(购于南京大学模式动物研究所，清洁级，体重250～300g)随机分成假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组，每组20只。大鼠予50mg/kg戊巴比妥钠腹腔麻醉后，采用Feeney自由落体损伤装置制作大鼠颅脑损伤模型。假手术组大鼠切开头皮，颅骨钻孔后缝合头皮，不作外力打击。假手术组和模型组大鼠手术操作完成前0.5h腹腔注射1mL 0.9％氯化钠注射液，小剂量组和大剂量组大鼠手术操作完成前0.5h按1和5mg/kg剂量腹腔注射FTY720(购于美国Sigma公司，批号：SML0700)。在手术操作完成后24小时，取每组大鼠10只以80mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射深度麻醉，断头处死，分离损伤皮层周边脑组织。每组剩余10只大鼠留作神经功能评价。大鼠受外力打击后有一过性的呼吸抑制，半小时内基本恢复正常。各组大鼠手术操作后有少量死亡，大鼠死亡后补充成活大鼠，保证每组20只大鼠。

2、指标检测

采用TUNEL法(TUNEL试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司，批号：MK1024)检测大鼠损伤皮层凋亡神经细胞，细胞核染色呈棕黄色或棕红色定义为细胞染色阳性，在Olympus-CH光学显微镜下计算10个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，总计1000个细胞，计算平均阳性率(％)。采用四肽荧光底物法检测大鼠损伤皮层caspase-3蛋白活性(caspase-3蛋白活性检测试剂盒购于美国Livemore公司，批号：T9281)，以未加脑组织时的荧光强度为参照值，计算荧光强度，最终比较相对荧光强度。采用ELISA法测定大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(试剂盒购于美国R&D公司，批号：MTA00B)、白介素-1β(试剂盒购于美国R&D公司，批号：M6000B)和白介素-6(试剂盒购于美国R&D公司，批号：MLB00C)浓度，结果表示为pg/mg脑组织。

3.大鼠神经功能评价

参照Vorhees等的方法，采用Morris水迷宫定位航行实验在脑损伤后第8、9、10、11和12天记录大鼠逃避潜伏期，逃避潜伏期越长，大鼠认知功能越差。参考Chen等的方法，在脑损伤后第14、15、16、17和18天测定大鼠改良神经功能缺损程度评分，评分范围为0至18分，分值越高神经功能损伤越严重。

4.统计学方法

采用SPSS19.0统计软件，数据以表示，采用单变量方差分析比较假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组大鼠神经细胞凋亡比例、caspase-3蛋白活性、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6浓度，采用重复测量方差分析比较模型组、小剂量组和大剂量组大鼠逃避潜伏期和改良神经功能缺损程度评分，组间两两比较采用LSD法，P<0.05定为差异有统计学意义。

二、结果分析

1、FTY720对颅脑损伤大鼠逃避潜伏期的影响

从表1可知，在颅脑损伤后第8、9、10、11和12天五个时间点，假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组大鼠逃避潜伏期比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)；且组间两两比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)。采用重复测量方差分析，假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组大鼠逃避潜伏期比较，差异有统计学意义(F＝392.308，P<0.01)，且组间两两比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)，随着药物剂量升高，大鼠逃避潜伏期明显缩短，药效呈剂量依赖性。

表1 FTY720对颅脑损伤大鼠逃避潜伏期的影响

2.FTY720对颅脑损伤大鼠改良神经功能缺损程度评分的影响

假手术组大鼠改良神经功能缺损程度评分均为最低分，即为0分。从表2可知，在颅脑损伤后第14、15、16、17和18天五个时间点，模型组、小剂量组和大剂量组大鼠改良神经功能缺损程度评分比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)；且组间两两比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)。采用重复测量方差分析，模型组、小剂量组和大剂量组大鼠改良神经功能缺损程度评分比较，差异有统计学意义(F＝161.264，P<0.01)，且组间两两比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)，随着药物剂量升高，大鼠改良神经功能缺损程度评分明显下降，药效呈剂量依赖性。

表2 FTY720对颅脑损伤大鼠改良神经功能缺损程度评分的影响

3.FTY720对颅脑损伤大鼠损伤皮层炎性因子浓度及凋亡相关指标的影响

从表3和图1可知，假手术组、模型组、小剂量组和大剂量组大鼠损伤皮层白介素-1β、肿瘤坏死因子-α和白介素-6浓度及caspase-3蛋白活性和凋亡神经细胞比例比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)，且组间两两比较，差异均有统计学意义(均P<0.01)，随着药物剂量升高，上述指标均明显下降，药效呈剂量依赖性。

表3 FTY720对颅脑损伤大鼠损伤皮层炎性因子浓度及凋亡相关指标的影响

本研究设置了1和5mg/kg两个剂量FTY720腹腔注射治疗大鼠创伤性脑损伤。研究结果显示，两个剂量的FTY20腹腔注射均显著抑制大鼠损伤皮层神经细胞凋亡和caspase 3活性，降低脑组织肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6浓度，改善大鼠肢体功能和认知功能。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.FTY720在保护神经功能中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述神经功能包括颅脑损伤后的神经功能。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，颅脑损伤后的时间限制是不超过18天。

4.FTY720在制备保护神经功能药物中的应用。

5.FTY720在制备保护颅脑损伤后的神经功能药物中的应用。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述药物为注射剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。

7.治疗神经细胞损伤的药物，其特征在于，所述药物包括FTY720。

8.预防神经细胞损伤的药物，其特征在于，所述药物包括FTY720。

9.提高大脑认知功能的药物，其特征在于，所述药物包括FTY720。