CN108603859B - 尿中代谢物在制备癌的评价方法所使用的试剂盒中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于通过测定对象的尿中代谢物来在对象中检测癌、预测癌的风险、判定癌的分期、判定癌的预后、和/或评价治疗的有效性的方法、装置和试剂盒以及癌检查方法。

Description

尿中代谢物在制备癌的评价方法所使用的试剂盒中的用途
技术领域
本发明主张2016年6月10日提出的美国专利临时申请第 62/348,252号和2016年12月13日提出的美国专利临时申请第 62/433,450号的优先权，并将上述专利申请的说明书和/或附图所记载的内容引入本说明书中。
本发明涉及基于被检验者的尿的代谢物信息来分析被检验者的疾病、特别是癌的状态的方法、试剂盒和装置。
背景技术
日本的医疗经费已超过40兆日元，并且少子老龄化进一步加快，因而将来社会保障经费不足已成为非常严重的社会问题。例如，包括直接、间接费用在内，日本的癌的疾病费用已达到约10兆日元的规模 (国立保健医疗科学院公众卫生政策部调査)。为了大幅降低癌的疾病费用，仅仅是现在的以医院的就诊为基础的诊断技术的高精度化是不够的，已经步入利用邮寄的就诊来修正城市与人口稀少地区的医疗差距、通过乳腺癌等的早期发现来大幅削减疾病费用、开展全身癌/癌种类的大规模筛查、检查试剂盒化等对涉及癌诊断、治疗的社会体系本身进行大规模变革的阶段。
基于该目的，开发了通过计测血液中的氨基酸量来判定癌风险的 AminoIndex法(专利文献1)，以国立癌症研究中心为中心，开展着使用血液中的微小RNA的癌诊断方法的研究(专利文献2)。然而，由于是利用血液的检查，因此，需要在医院进行采血的情况仍未改变。
另一方面，国立大学法人九州大学报道了利用线虫的嗅觉系统来检查癌，其因便利而备受瞩目(专利文献3)。然而，与现有的体外诊断方法不同，这是使用“活的线虫”的检查，因此，需要在大规模检查、品质管理、自动分析中导入新的方法。此外，为了将来作为诊断方法获得认可，明确线虫的癌检测机理也是非常重要的。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：美国专利申请公开第2010/017145号
专利文献2：欧州专利申请公开第3156499号
专利文献3：美国专利申请公开第2017016906号
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于，进行健康人和癌患者的尿中代谢物的全面的分析，确定在健康人与癌患者之间发生增减的代谢物，依据多变量分析，从代谢物分析的观点出发，研究利用尿来检查癌的可能性。
即，本发明涉及用于通过测定对象的尿中代谢物来在对象中检测癌、预测癌的风险、判定癌的分期、判定癌的预后、和/或评价治疗的有效性的方法、装置和试剂盒。
具体而言，在一个方式中，提供一种癌的评价方法，该方法包括：
测定来自对象的尿样中的尿中代谢物的步骤；和
基于上述测定结果评价对象的癌的步骤。
在其他的方式中，提供一种癌的治疗有效性的评价方法，该方法包括：
在来自接受了被检验治疗药或治疗方法的处置的患有癌的动物的尿样中，测定尿中代谢物的步骤；和
基于上述测定结果，评价被检验治疗药或治疗方法对癌的有效性的步骤。
另外，在其他的方式中，提供一种癌的评价用试剂盒，其特征在于，包括用于测定尿样中的尿中代谢物的单元。
另外，在其他的方式中，提供一种癌的评价装置，其特征在于，包括：
测定尿样中的尿中代谢物的测定部；
将上述测定部所测得的尿中代谢物的测定值与基准值或上次的测定值进行比较的比较部；和
根据上述比较部所得到的比较结果对癌进行评价的判定部。
在其他的方式中，提供一种癌检查方法，其特征在于，包括：
选择作为一次检查的检查所使用的尿中代谢物或其数量并接受输入的步骤；
对所输入的尿中代谢物或所输入的数量的尿中代谢物进行来自对象的尿样中的测定值的多变量分析的步骤；
存储上述多变量分析的检查结果的步骤；和
将上述检查结果作为一次检查结果输出的步骤，
在选择上述尿中代谢物或其数量的步骤中，从2种、3种、4～8 种、9～19种或20～30种尿中代谢物中进行选择。
发明效果
利用本发明，能够提供低侵入性、用于简便且低成本地评价癌的方法、装置和试剂盒。因此，本发明在癌的诊断、癌检查、治疗评价、药品开发等领域是有用的。
附图说明
图1是表示癌评价装置的一个实施方式的图。
图2表示尿中代谢物的全面的分析方案。
图3是表示大肠癌尿的LC/MS分析例的图。
图4是表示健康人、乳腺癌、大肠癌的作为多变量分析的一种的主成分分析的结果的图。
图5A是表示利用随机森林(Random Forest)分析得到的使用尿中标志物候选(包含结构未知代谢物和结构已知代谢物)的预测精度的表。可知预测精度高，尿中标志物是有效的。
图5B表示利用随机森林分析得到的生物标志物候选代谢物的精选(包含已知和未知结构)。
图6A是表示利用随机森林分析得到的使用尿中标志物候选(结构已知代谢物)的预测精度的表。可知预测精度高，尿中标志物是有效的。
图6B表示利用随机森林分析得到的生物标志物候选代谢物的精选(仅已知结构)。
图7是表示利用随机森林分析得到的尿中标志物候选的重要度的图。
图8是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物候选(8种)的有效性的图。
图9A是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(2种)的有效性的图。
图9B是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(3种)的有效性的图。
图9C是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(8种)的有效性的图。
图9D是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(19种)的有效性的图。
图9E是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(30种)的有效性的图。
图9F是表示利用作为多变量分析的一种的主成分分析得到的尿中标志物(1325种)的有效性的图。
图10表示代谢物X-18126的LC/MS数据。
图11表示代谢物X-18126的MS/MS数据。
图12表示代谢物X-18126的MS/MS/MS数据。
图13表示代谢物X-24546的LC/MS数据。
图14表示代谢物X-24546的MS/MS数据。
图15表示代谢物X-16567的LC/MS数据。
图16-1表示代谢物X-16567的MS/MS数据。
图16-2表示代谢物X-16567的LC/MS数据(正离子检测模式和负离子检测模式)。
图17表示代谢物X-11440的LC/MS数据。
图18-1表示代谢物X-11440的MS/MS数据。
图18-2表示代谢物X-11440的MS/MS数据。
图19表示代谢物X-12831的LC/MS数据。
图20-1表示代谢物X-12831的MS/MS数据。
图20-2表示代谢物X-12831的LC/MS数据(正离子检测模式和负离子检测模式)。
图21表示代谢物X-12636的LC/MS数据。
图22-1表示代谢物X-12636的MS/MS数据。
图22-2表示代谢物X-12636的LC/MS数据(正离子检测模式和负离子检测模式)。
图23表示代谢物X-24502的LC/MS数据。
图24-1表示代谢物X-24502的MS/MS数据。
图24-2表示代谢物X-24502的LC/MS数据(正离子检测模式和负离子检测模式)。
图25表示代谢物X-23787的LC/MS数据。
图26-1表示代谢物X-23787的MS/MS数据。
图26-2表示代谢物X-23787的LC/MS数据(正离子检测模式和负离子检测模式)。
图27表示被检查者与检查中心之间的流程的一例。
图28表示用于进行图27所示的流程的系统的构成例。
具体实施方式
在本发明所提供的方法、装置和试剂盒中，利用与癌、尤其是乳腺癌和大肠癌关联的新型的尿中标志物和标志物组。该尿中标志物是其在尿中的水平伴随癌的发病和发展而发生变动的代谢物，因此，对于癌的检测、癌的风险预测、癌的分期判定、癌的预后判定、和/或治疗有效性的评价等是有用的。
因此，本发明所涉及的癌的评价方法包括测定来自对象的尿样中的尿中代谢物的步骤、和基于该测定结果评价对象的癌的步骤。
术语“尿中代谢物”、“尿中标志物”或“生物标志物”是指为了癌的检测等而成为测定对象的尿中代谢物，即以下表中所列举的尿中代谢物。另外，“标志物组”是由2种以上的尿中标志物构成的组合。“测定”是指求取代谢物在尿样中的相对存在量或绝对浓度。相对存在量是目标代谢物相对于有意添加的标准物质的测定强度的比。另一方面，绝对浓度是对于目标代谢物，预先使用相同的代谢物制作标准曲线(代谢物的浓度与代谢物的测定强度的关系)，由测得的强度算出其绝对浓度的方法。另外，在本发明中，所谓“测定尿中标志物”，既可以测定作为尿中标志物的代谢物，或者也可以测定其派生物或者衍生物。“派生物”和“衍生物”分别指由作为尿中标志物的代谢物派生的物质和来自该代谢物的物质。“派生物”和“衍生物”例如包含代谢物的片断、经修饰的代谢物等，但并不限定于此。
将本发明中使用的主要的尿中标志物汇总于以下的表1。在表中，“质量”一栏表示利用“检测平台”一栏中记载的检测手段检测时的质量。“检测平台”一栏中的“LC/MS neg”和“LC/MS pos early”分别表示“液相色谱质谱装置(LC/MS)的负离子检测模式”和“液相色谱质谱装置(LC/MS)的正离子检测模式中时间上较早洗脱的模式”。在本说明书中，将“LC/MS pos early”也简称为“液相色谱质谱装置 (LC/MS)的正离子检测模式”。“注释”一栏记载标志物的结构特征和除此之外的信息。
[表1]
Figure GDA0002996408340000061
表1所示的尿中标志物是能够通过单独使用来对癌进行评价的标志物。在本发明中，使用表1所示的19种代谢物中的至少1种作为标志物。其中，在该表中，作为检测平台，记载了LC/MS正离子检测模式或LC/MS负离子检测模式中的一者，但根据所使用的装置，有时能够高速地转换正离子检测模式和负离子检测模式，在这种情况下，作为检测平台，记载正离子检测模式和负离子检测模式两者。
在一个实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的X-18126 的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量134.11计测的化合物。进一步具体而言，测定具有以下结构的化合物。
Figure GDA0002996408340000071
在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的X-16567 的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量188.12、在 LC/MS负离子检测模式中作为质量186.11计测的化合物。进一步具体而言，测定具有以下的结构的化合物。
Figure GDA0002996408340000072
在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的X-24546 的代谢物。即，测定在LC/MS负离子检测模式中作为质量231.05(2 价离子)计测的化合物。
在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的X-11440 的代谢物。即，测定在LC/MS负离子检测模式中作为质量246.07(2 价离子)计测的化合物。
另外，在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的 X-12831的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量 435.22、在LC/MS负离子检测模式中作为质量433.20计测的化合物。
另外，在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的 X-12636的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量 259.16、在LC/MS负离子检测模式中作为质量257.15计测的化合物。
另外，在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的 X-24502的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量 208.09、在LC/MS负离子检测模式中作为质量206.08计测的化合物。
另外，在其他的实施方式中，作为尿中标志物，测定表1所示的 X-23787的代谢物。即，测定在LC/MS正离子检测模式中作为质量 385.16、在LC/MS负离子检测模式中作为质量383.15计测的化合物。
其中，表1所示的代谢物的分析所使用的质谱仪的分辨率非常高，因此，质量能够测定至小数点后2位、3位、4位或5位的程度，但在使用分辨率低的质谱仪时，测定整数质量或小数点后1位的质量。
在本发明中，通过将至少2种尿中标志物组合使用，能够进行更准确且高精度的癌评价以及确定癌的种类的癌的评价。例如，能够将表1所示的尿中标志物的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18或19个组合。具体而言，表1所示的X-18126 的代谢物与其他代谢物的组合没有限定，例如测定：X-18126与X-16567 的组合，X-18126与X-24546的组合，X-18126与X-11440的组合， X-18126与X-12831的组合，X-18126与X-12636的组合，X-18126与 X-24502的组合，X-18126与X-23787的组合，X-16567与X-11440的组合，X-16567与X-24546的组合，X-16567与X-12831的组合，X-16567 与X-12636的组合，X-16567与X-24502的组合，X-16567与X-23787 的组合，X-18126、X-24546与X-16567的组合，X-18126、X-24546与X-11440的组合，X-18126、X-24546与X-12831的组合，X-18126、 X-24546与X-12636的组合，X-18126、X-24546与X-24502的组合， X-18126、X-24546与X-23787的组合，X-18126、X-16567与X-11440 的组合，X-18126、X-16567与X-12831的组合，X-18126、X-16567 与X-12636的组合，X-18126、X-16567与X-24502的组合，X-18126、 X-16567与X-23787的组合。另外，也可以组合图5B所示的30种尿中标志物中的至少1种以上。这样的组合可以根据作为评价对象的癌的种类、对象的种类、性别、年龄和癌的评价目的等适当选择。
例如，优选测定表1所示的X-18126与X-16567的组合、或 X-18126、X-16567与X-24546的组合、或者包含它们的组合。它们是生物标志物候选的有效的代谢物，考虑这些代谢物时，能够区分健康人和癌患者。
作为该识别的方法的一例，可以使用作为多变量分析的一种的主成分分析。在代谢物分析中，相对于健康人，在癌患者中有时会发现多种发生变动的代谢物。直接使用该多维数据时，有时难以明确数据所具有的特征，因此，优选压缩成二维或三维数据并视觉化。具体而言，由多种说明变量(各种的代谢物的观测到的强度)计算目标变量 (第一主成分、第二主成分)，在二维上绘制各检测体并视觉化。例如，图9A～9F表示绘制在二维上的主成分分析结果的例子。作为多变量分析，也能够使用部分最小二乘法等本技术领域公知的分析方法。
在具体的实施方式中，例如测定以下的组合：
(1)至少包含尿中代谢物X-18126、X-16567的组合；
(2)至少包含尿中代谢物X-18126、X-16567、X-24546的组合；
(3)包含尿中代谢物X-18126、X-16567、X-24546、X-11440、 X-12831、X-12636、X-24502、X-23787中的4～8种的组合(图7)；
(4)包含尿中代谢物X-24589、X-17697、X-18126、X-24546、 X-16567、X-23511、X-11440、X-17698、X-12726、X-12831、X-12636、 X-24502、X-23787、X-21470、X-24495、X-15497、X-24473、X-17324、 X-22379中的9～19种的组合(表1)；
(5)包含尿中代谢物X-24589、X-17697、X-18126、吡咯素、 X-24584、脱氢表雄甾酮葡糖醛酸苷、X-24577、X-12329、X-12267、 X-22850、2-氨基苯酚硫酸盐、X-24760、X-12731、3-(3-羟苯基)丙酸酯硫酸盐、呋喃酮硫酸盐、X-12007、2-乙酰胺基苯酚硫酸盐、3-乙酰苯酚硫酸盐、X-23511、X-21807、N-(2-呋喃甲酰基)甘氨酸、X-24497、 X-16567、X-12818、X-24528、X-17707、X-21295、X-24579、X-17324、X-24495中的20～30种的组合(图5B)。
其中，癌是指被称为恶性肿瘤或恶性新生物的疾病，具有自律性增殖、浸润和转移以及恶液质的特征。癌有原发性、转移性、复发性的癌，另外，根据其发展度和扩散的程度分期。根据该原发性、转移性或复发性的差异和分期的不同，需要的处置(治疗方法)也不同。
本发明中作为评价对象的癌没有特别限定，包括实体癌(乳腺癌、大肠癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、食道癌、肝癌、胆管癌、膀胱癌、儿童癌症等)、肉瘤(骨肉瘤、软骨肉瘤等)、血液的癌(白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髄瘤等)。特别优选对乳腺癌和大肠癌进行评价。
尿样是指从对象采集的尿以及对该尿进行处理而得到的样品(例如添加了甲苯、二甲苯、盐酸等防腐剂的尿)。
另外，对象是人和其他的哺乳动物，例如灵长类(猴、黑猩猩等)、家畜动物(牛、马、猪、羊等)、宠物用动物(狗、猫等)、实验动物(小鼠、大鼠、兔等)，还可以是爬虫类和鸟类等。特别优选以人作为对象。
尿中标志物的测定是指优选半定量或定量地测定尿样中的其量或浓度，其量可以是绝对量，或者也可以是相对量。测定可以直接或间接地进行。直接测定包括基于与存在于样品中的尿中代谢物的分子数直接相关的信号，测定其量或浓度。这样的信号例如可以基于尿中代谢物的特定的物理或化学的特性。间接测定是由二次成分(即尿中代谢物以外的成分)、例如配体、标识或酶反应产物得到的信号的测定。
在本发明的一个实施方式中，测定尿中标志物、即尿中代谢物，其测定方法可以使用该技术领域公知的方法或手段，没有特别限定。例如，尿中标志物的测定可以利用用于测定尿中代谢物所特有的物理或化学的特性的手段、例如用于测定准确的分子量或NMR谱等的手段进行。作为用于测定尿中代谢物的手段，可以列举质谱仪、NMR分析仪、二维电泳装置、色谱、液相色谱质谱装置等的分析装置。可以单独使用这些分析装置测定尿中标志物，也可以利用多种分析装置测定尿中标志物。
表1所示的尿中代谢物是由液相色谱质谱装置测出的，因此，使用液相色谱质谱装置能够测定这些尿中代谢物。
如上所述，测定从对象采集的尿样所含的尿中标志物，基于该结果，能够评价对象的癌。还可以在多个时刻从对象采集的尿样中测定尿中标志物。
利用本发明的癌的评价方法，能够在早期判定癌的存在或发展。即，能够判定是否存在基于目前能够利用的诊断方法或基准无法识别的初期分期的癌，或者预测癌的恶性程度和预后。因此，对象能够早期接受癌的治疗，接受适于特定的恶性度等的治疗。另外，由于利用尿样，因此是低侵入性，还具有能够简便且低成本地评价癌这样的优点。
通过使用具有用于测定尿中标志物(尿中代谢物)的手段的试剂盒和/或装置，能够容易且简便地进行本发明的癌的评价方法。
本发明所涉及的癌的评价用试剂盒至少包括以下的单元：
用于测定尿样中的尿中代谢物、优选上述表1所示的尿中代谢物的单元。
本发明的试剂盒的一例是质量分析用试剂组，例如由同位素标识试剂、分级用微型柱(minicolumn)、缓冲液等构成。本发明的试剂盒还可以包括记载了用于实施本发明的方法的顺序和方案的说明书、表示癌的评价中使用的基准值或基准范围的表等。
本发明的试剂盒所包括的构成要素可以单独提供，或者也可以在单一的容器内提供。优选本发明的试剂盒以例如经过调整后的浓度的构成要素的方式包含用于实施本发明的方法所必须的全部的构成要素，以能够实时使用。
本发明所涉及的癌的评价装置包括以下的部件：
测定尿样中的尿中代谢物、优选上述表1所示的尿中代谢物的测定部；
将上述测定部所测得的尿中代谢物的测定值与基准值或上次的测定值进行比较的比较部；和
根据上述比较部所得到的比较结果对癌进行评价的判定部。
另外，若使用多变量分析时，本发明所涉及的癌的评价装置包括以下的部件：
测定尿样中的尿中代谢物、优选上述表1所示的尿中代谢物的测定部；
将根据上述测定部所测得的说明变量(尿中代谢物的量或浓度、或者相对于健康人在癌患者中增减的代谢物的观测到的离子的强度比)进行多变量分析而得到的目标变量(第一主成分、第二主成分等) 的计算值与基准值或上次的目标变量的计算值进行比较的比较部；和
根据上述比较部所得到的比较结果对癌进行评价的判定部。
本发明的装置优选为上述的测定部、比较部和判定部彼此以能够工作的方式连接而成的系统，以实施本发明的方法。将本发明的装置的一个实施方式示于图1。
其中，如上所述，测定部包括用于测定尿样中的尿中代谢物的手段，例如具有质谱仪、NMR分析仪、二维电泳装置、色谱、液相色谱质谱装置等分析装置。
测定部具有由对根据上述那样的分析装置等得到的测定值进行处理的软件和计算机构成的数据分析部。数据分析部基于根据上述那样的分析装置等得到的测定值，参考标准曲线等的数据，从而算出尿样中所含的尿中代谢物的量或者浓度。另一方面，使用多变量分析时，数据分析部算出根据说明变量(尿中代谢物的量或浓度、或者在癌患者中相对于健康人增减的代谢物的观测到的离子的强度比)进行多变量分析而得到的目标变量(第一主成分、第二主成分等)。数据分析部例如可以包括信号显示部分、对测定值进行分析的单元、计算机单元等。
另外，比较部从存储装置(数据库)等中读取关于尿中代谢物的量或者浓度的基准值，将上述测定部所测得的尿中代谢物的测定值与基准值进行比较。另一方面，使用多变量分析时，比较部从存储装置 (数据库)等中读取目标变量(例如第一主成分)的基准值，将上述测定部所得到的目标变量的计算值与基准值进行比较。此时，比较部根据尿中标志物的种类选择并读取合适的基准值。或者，在同一对象的经时的监控时，比较部从存储装置(数据库)等中读取上次的测定值，与测定部所测得的尿中代谢物的测定值进行比较。
另外，判定部基于比较部中将尿中代谢物的测定值与基准值进行比较而得到的结果，或者基于比较部中对多个时刻的尿中代谢物的测定值进行比较而得到的结果，对癌进行评价。另一方面，使用多变量分析时，判定部基于比较部中将目标变量的计算值与基准值进行比较而得到的结果，或者基于比较部中对多个时刻的目标变量的计算值进行比较而得到的结果，对癌进行评价。因此，判定部取得表示对象中癌的存在或癌的分期等的信息。优选的装置是没有专业的临床医生的知识也能够使用的装置，例如是只需要添加样品即可的电子装置。
本发明的装置还可以具有数据保存部、数据输出/显示部等。
在本说明书中，“癌的评价”包含以下的含义：检测对象的癌、预测对象的癌的风险、判定对象的癌的分期、判定对象的癌的预后、评价对存在于对象的癌的治疗效果。根据癌的恶性程度、例如分期和预后(转移、复发等)，所适用的治疗有所不同，因此，判定癌的分期和预后至关重要。另外，在本发明中，“评价”也包含已被评价或诊断过的癌的继续监控和已经进行过的癌的评价或诊断的确认。
另外，利用本发明所涉及的癌的评价方法、评价用试剂盒和评价装置的“评价”的意图在于能够在统计学上对有意义的比例的对象进行评价。因此，利用本发明所涉及的癌的评价方法、评价用试剂盒和评价装置的“评价”也包括未必针对所有评价对象(即100％)均得到准确的结果的情况。在统计学上有意义的比例可以使用各种众所周知的统计评价工具确定，例如使用置信区间的确定、p值的确定、Student 的t检验、曼-惠特尼检验(Mann-Whitney test)等确定。优选的置信区间为至少90％。p值优选为0.1、0.01、0.005或0.0001。更优选利用本发明所涉及的癌的评价方法、评价用试剂盒和评价装置能够适当地评价对象的至少60％、至少80％或至少90％。
癌的评价的具体例如下。在一个实施方式中，测定对象的尿样中的尿中标志物(尿中代谢物)并将该测定值与基准值进行比较。
基准值是作为特定的癌的存在指标的尿中代谢物的量或浓度、或者其量或浓度的范围。另一方面，使用多变量分析时，识别健康人和癌患者的目标变量的计算值成为基准值。例如，基准值可以来自健康人(群体)或癌的低风险者(群体)。或者，基准值可以来自罹患特定的癌、或罹患癌的已知分期、或者患有显示特定的预后的癌的患者(患者群体)。适用于各个对象的基准值可以因对象动物的种类、年龄、性别等各种生理学参数而有所变化。
优选记录尿中标志物的量或浓度与特定的癌的存在和/或特定的分期或者预后的癌的相关性作为数据库。并且，能够将所测得的尿样中的尿中标志物的测定值与数据库中的基准值进行比较。这样的数据库作为癌、特别是癌的有无、特定的分期或者预后的指标的基准值或基准范围是有用的。
表1所示的尿中代谢物的量或浓度在癌患者与健康人中存在差异，其量或浓度因癌(特别是大肠癌和/或乳腺癌)的存在而变化。例如在表1所示的尿中标志物中，X-18126、X-12831、X-24502与健康人相比，在癌患者中其量或浓度降低，X-24546、X-16567、X-11440、X-12636、X23787在癌患者中其量或浓度升高。
因此，基准值来自健康人(群体)或癌的低风险者(群体)时，在表1所示的尿中代谢物(X-18126、X-12831、X-24502)的量或浓度与基准值为同等程度或比其高的情况下，表示对象患癌(特别是大肠癌和/或乳腺癌)的可能性低；在低于基准值的情况下，表示对象患癌(特别是大肠癌和/或乳腺癌)的可能性高。另一方面，表1所示的尿中代谢物(X-24546、X-16567、X-11440、X-12636、X23787)的量或浓度与基准值为同等程度或比其低的情况下，表示对象患癌(特别是大肠癌和/或乳腺癌)的可能性低；在高于基准值的情况下，表示对象患癌(特别是大肠癌和/或乳腺癌)的可能性高。
另外，实施使用这些多种尿中标志物的主成分分析，也能够实现使用第一主成分、第二主成分等的判定。例如使用8种尿中标志物时，得到了图9C所示的主成分分析结果，可知利用第一主成分的计算值 (例如，第一主成分通过－1的直线)，能够识别健康人和癌患者(大肠癌、乳腺癌)。在图9C的情况下，第一主成分的值在－1以上时为癌患者区域，在小于－1时为健康人区域。即，在新的对象的情况下，利用该第一主成分的计算值处于健康人区域还是处于癌患者区域，可以知道对象健康或者患癌的可能性高。
另一方面，基准值来自罹患特定的癌、罹患癌的已知分期或者患有显示特定的预后的癌的患者(患者群体)时，在判断尿中标志物的量或浓度与基准值为同等程度或没有显著性差异(或者在X-18126、 X-12831、X-24502时低于基准值，在X-24546、X-16567、X-11440、 X-12636、X23787时高于基准值)的情况下，表示对象患有该特定的癌的可能性高、患有该已知分期的癌的可能性高、或者显示该特定的预后的可能性高。
另外，实施使用这些多种尿中标志物的主成分分析，也能够实现使用第一主成分、第二主成分等的判定。例如使用8种尿中标志物时，得到了图9C所示的主成分分析结果，可知利用第一主成分的计算值 (例如，第一主成分通过－1的直线)，能够识别健康人和癌患者(大肠癌、乳腺癌)。即，在新的对象的情况下，该第一主成分的计算值处于癌患者的区域时，表示对象患有该特定的癌的可能性高、患有该已知分期的癌的可能性高、或者显示该特定的预后的可能性高。
在其他的实施方式中，在多个时刻从对象采集尿样，对各测定时刻的尿样中所含的尿中标志物进行测定，将尿中标志物的测定值在各测定时刻进行比较。进一步具体而言，将第一时刻的尿中标志物的量或浓度(a)与第二时刻的尿中标志物的量或浓度(b)进行比较。进行主成分分析时，例如将第一主成分的第一时刻的计算值与第二时刻的计算值进行比较。测定可以经时地以至少2次、3次、4次、5次、 10次、15次、20次、30次或更多的次数，间隔例如1日、2日、5日、 1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、半年、1年、2年、3年、 5年或更长时间而进行。利用该比较，能够进行经时的监控，能够对癌的发展、癌的转移或复发等进行评价。
进一步具体地说明时，关于尿中标志物(X-18126、X-12831、 X-24502)，在第一时刻测得的尿中标志物的量或浓度(a)与在第二时刻测得的尿中标志物的量或浓度(b)之比(b/a)小于1时，优选连续显示小于1的值时，表示对象的癌进一步发展的可能性高。关于尿中标志物(X-24546、X-16567、X-11440、X-12636、X23787)，在第一时刻测得的尿中标志物的量或浓度(a)与在第二时刻测得的尿中标志物的量或浓度(b)之比(b/a)超过1时，优选连续显示超过1的值时，表示对象的癌进一步发展的可能性高。
另一方面，关于尿中标志物(X-18126、X-12831、X-24502)，例如在第一时刻测得的尿中标志物的量或浓度(a)与在第二时刻测得的尿中标志物的量或浓度(b)之比(b/a)超过1时，优选连续显示超过 1的值时，表示对象的癌症状消失或减轻的可能性高。另外，关于尿中标志物(X-24546、X-16567、X-11440、X-12636、X23787)，例如在第一时刻测得的尿中标志物的量或浓度(a)与在第二时刻测得的尿中标志物的量或浓度(b)之比(b/a)小于1时，优选连续显示小于1的值时，表示对象的癌症状消失或减轻的可能性高。
癌的评价方法还可以与其他的目前公知的癌的诊断方法组合进行。作为这样的公知的癌的诊断方法，可以列举利用血中癌标志物的测定、图像检查、例如超声波检查、计算机断层摄影(CT)、X射线检查、磁共振摄影(MRI)、正离子CT(PET)等、内视镜检查、活检的病理检查等。
基于上述的评价结果，医师能够对于对象的癌进行诊断，并能够进行适当的处置。即，本发明也涉及在对象中对癌进行评价、治疗的方法。例如，按照本发明所涉及的癌的评价方法，评价对象的癌，在评价为对象患有癌的可能性高时，在对象中进行治疗癌或预防癌的发展的处置。另外，评价为对象的癌的分期发展或癌的预后差的可能性高时，继续治疗，或者根据需要研究治疗方案的变更。或者，评价为对象中存在癌的可能性高时，进行上述那样的其他的癌的诊断方法，确定癌的存在。
癌可以单独或适当组合进行外科手术、放射线疗法、化学疗法、免疫疗法等。癌的治疗可以考虑癌的种类、分期、恶性程度、患者的性别、年龄和状态、患者对治疗的应答性等，由本领域技术人员适当选择。
作为适用本发明的例子，对检查中心的癌检查进行说明。图27表示被检查者与检查中心之间的流程的一例。在检查中心，根据来自被检查者的请求等进行癌检查的指导。被检查者可以在申请一次检查时选择检查的生物标志物数。例如，作为生物标志物数，可以列举2种或3种代谢物(例如尿中代谢物X-18126和X-16567、或X-18126、 X-16567和X-24546)。这可以作为全癌检查(一次性分析各种癌)而利用。
接着，检查中心将采尿所需的检查试剂盒交予被检查者。根据需要利用邮寄等进行寄送。被检查者在收到检查试剂盒后，将检测体交付或寄送等交予检查中心。在检查中心，为了对检测体进行持续检查，根据需要在约－80℃冷冻保存。在检查中心进行一次检查，将检查结果送至被检查者。
被检查者收到一次检查的结果，根据内容进行二次检查的申请。二次检查是生物标志物数比一次检查多的检查。这是能够特定至癌的部位、癌种类的检查。例如，选择利用8种代谢物、19种代谢物、30 种代谢物、更多种代谢物的检查。其中，可以从图7所记载的8种代谢物中选择包含X-18126和X-16567的4～7种代谢物，从表1所记载的19种代谢物中选择包含X-18126和X-16567的9～18种代谢物，从图5B所记载的30种代谢物中选择包含X-18126和X-16567的20～29 种代谢物，从本说明书所示的代谢物中选择包含X-18126和X-16567的31种以上的代谢物。二次检查之后，还可以进行代谢物数更多的三次检查、四次检查。检查结果寄送或发送至被检查者。
图28是表示用于进行图27所示的流程的系统的图。作为被检查者与检查机构或对来自检查机构的信息进行管理的机构交流信息的方法，有通过终端和通信装置的交流。
在检查机构或对来自检查机构的信息进行管理的机构内，具备具有存储装置、运算装置、输入装置、显示装置的终端和用于管理检测体的DB、存储检查条件的DB、存储检查结果的DB、存储被检查者的信息的DB、存储检查委托记录的DB。也可以进行连接，使得能够进行检查所需的与LC/MS装置的交流。
在用户侧的终端，具有输入检查所需的患者信息的画面、选择在一次检查、以及后续检查中接受的代谢物数的画面(或者选择代谢物的数量不同的菜单的画面)、接收并显示检查结果的输出画面。
对使用该系统的癌检查方法进行说明。包括：选择作为一次检查的检查所使用的尿中代谢物或其数量(或者尿中代谢物的数量不同的菜单)并接受输入的步骤、对所输入的尿中代谢物或所输入的数量的尿中代谢物(或者与菜单相对应的尿中代谢物)进行尿样(检测体) 中的测定值的多变量分析的步骤、存储该多变量分析的检查结果的步骤和将该检查结果作为一次检查结果输出的步骤。其中，在上述的选择尿中代谢物或其数量(或者尿中代谢物的数量不同的菜单)的步骤中，从2种(X-18126、X-16567)、3种(X-18126、X-16567、X-24546)、包含X-18126和/或X-16567的4～8种、包含X-18126和/或X-16567 的9～19种、包含X-18126和/或X-16567的20～30种代谢物中进行选择。作为多变量分析，可以使用包括主成分分析、部分最小二乘法在内的公知的分析方法。
另外，在一次检查结果中评价为疑似患癌时，还包括将多于一次检查的数量的尿中代谢物作为二次检查并接受输入的步骤。由此，能够确认一次检查中的癌的疑虑，并且能够特定癌的部位和/或癌种类。
另外，利用本发明所使用的尿中标志物，能够对癌、尤其是大肠癌和乳腺癌的治疗(治疗药或治疗方法)的有效性进行评价，或者对癌的治疗药候选进行筛选。具体而言，评价癌的治疗的有效性的方法或筛选癌的治疗药候选的方法包括：
(a)在来自接受了被检验治疗药或治疗方法的处置的患有癌的动物的尿样中，对尿中代谢物进行测定的步骤；和
(b)基于(a)的测定结果，对被检验治疗药或治疗方法对癌的有效性进行评价的步骤。
在本发明的方法中，从患有癌的动物、即癌发病或存在发病风险的动物采集尿样，对尿样中的尿中标志物进行测定。优选在利用被检验治疗药或治疗方法进行处置之前，从患有癌的动物采集尿样，对尿样中的尿中标志物进行测定。利用被检验治疗药或治疗方法对患有癌的动物进行处置后，在适当的时期采集尿样，对尿样中的尿中标志物进行测定。例如，在刚刚处置之后、30分钟后、1小时后、3小时后、 5小时后、10小时后、15小时后、20小时后、24小时(1日)后、2～ 10日后、10～20日后、20～30日后、1个月～6个月后采集尿样。与上述同样地进行尿样中的尿中标志物的测定、癌的评价。
作为对象的动物可以是患癌的人，或者也可以是癌模型动物(小鼠、大鼠、兔等)。一般而言，在模型动物中确认了被检验治疗药或治疗方法的有效性后，例如通过临床试验等在人中进行有效性的评价。
作为评价或筛选的对象的被检验治疗药或治疗方法的种类没有特别限定。例如，被检验治疗药或治疗方法可以列举任意的物质的因子，具体可以列举：天然生成的分子，例如氨基酸、肽、寡肽、多肽、蛋白质、核酸、脂质、碳水化合物(糖等)、类固醇、糖肽、糖蛋白质、蛋白多糖等；天然生成的分子的合成类似物或衍生物，例如模拟肽、核酸分子(核酸适配体、反义核酸、双链RNA(RNAi)等)等；非天然生成的分子，例如低分子有机化合物(无机和有机化合物库或组合库(combinatorial library)等)等；以及它们的混合物。另外，治疗药或治疗方法可以是单一物质，也可以是由多种物质构成的复合体或者食品和食饵等。另外，被检验治疗药或治疗方法除了上述那样的物质的因子以外，还可以是放射线、紫外线等。
动物的利用被检验治疗药或治疗方法的处置因该治疗药或治疗方法的种类而有所不同，能够由本领域技术人员容易地决定。例如，被检验治疗药的给药量、给药时间、给药途径等给药条件可以由本领域技术人员适当决定。
另外，被检验治疗药或治疗方法的有效性还可以在几个条件下研究。作为这样的条件，可以列举利用被检验治疗药或治疗方法进行处置的时间或期间、量(大小)、次数等。例如，可以制备被检验治疗药的稀释系列等而设定多种用量。
另外，在研究多种被检验治疗药或治疗方法的叠加作用、协同作用等时，也可以将治疗药或治疗方法组合使用。
对从被检验治疗药或治疗方法的处置后的动物采集的尿样中的尿中标志物进行测定，与处置前的量或浓度进行比较，由此能够对被检验治疗药或治疗方法对于癌的消失、癌的缩小、癌症状的改善、癌的发展的停止或减缓是否有效进行评价。
例如，与健康人相比，尿中代谢物X-18126、X-12831、X-24502 的量或浓度在癌患者中减少。因此，对于尿中代谢物X-18126、X-12831、 X-24502，处置后的测定值高于处置前的测定值表示被检验治疗药或治疗方法对于癌的消失、癌的缩小、癌症状的改善、癌的发展的停止或减缓是有效的。另一方面，处置后的测定值低于处置前的测定值或与处置前的测定值没有显著性差异表示被检验治疗药或治疗方法对于癌的治疗是无效的。
另外，例如尿中代谢物X-24546、X-16567、X-11440、X-12636、 X23787的量或浓度在癌患者中上升。因此，对于尿中代谢物X-24546、 X-16567、X-11440、X-12636、X23787，处置后的测定值低于处置前的测定值表示被检验治疗药或治疗方法对于癌的消失、癌的缩小、癌症状的改善、癌的发展的停止或减缓是有效的。另一方面，处置后的测定值高于处置前的测定值或与处置前的测定值没有显著性差异表示被检验治疗药或治疗方法对于癌的治疗是无效的。
进一步而言，实施使用这些多种尿中标志物的主成分分析，也能够进行使用第一主成分、第二主成分等的判定。例如，使用8种尿中标志物时，得到了图9C所示的主成分分析结果，可知利用第一主成分的计算值(例如，第一主成分通过－1的直线)能够识别健康人和癌患者(大肠癌、乳腺癌)。即，在新的对象的情况下，该第一主成分的计算值从癌患者的区域向健康人的区域移动，由此可知被检验治疗药或治疗方法对于癌的消失、癌的缩小、癌症状的改善、癌的发展的停止或减缓是有效的。另一方面，第一主成分的计算值仍然处于癌患者的区域时，表示被检验治疗药或治疗方法对于癌的治疗是无效的。
如上所述，利用本发明所涉及的癌的治疗的有效性的评价方法，能够找到用于治疗或预防癌的治疗药或治疗方法，还能够确认治疗药或治疗方法的有效性。
下面例示实施例对本发明进行具体说明，但该实施例只是为了说明本发明而提供的例子，并不限定或限制本申请中公开的发明的范围。
实施例
实施例1：关于尿中代谢物的全面的分析方案
图2表示本次实施的全面的分析方案。基本上包括以下的过程。
(1)对于健康人、癌患者的尿检测体，包括临床的附加信息在内，获得多个检测体。
(2)对所获得的尿检测体进行使用多种分离模式的液相色谱质谱装置(LC/MS)的全面分析。最终，为了根据LC/MS所取得的数据对健康人和癌患者的尿进行分类，检测尽可能多的代谢物。
(3)进行用于选择相对于健康人尿中检出的成分在癌患者尿中发生增减的成分的热图(Heatmap)分析。
(4)根据热图分析的结果，进行作为多变量分析的一种的主成分分析，对能够区别健康人、癌患者的条件进行探索。即，特定作为生物标志物候选的多种代谢物，利用主成分分析导入新的概念的变量2 或3个，对区分健康人和癌患者的条件进行研究。对于主成分分析的结果，应用作为机器学习的一种的随机森林法，评价各代谢成分的贡献度。
(5)根据数据库检索的结果判断为结构已知的物质时，进行其代谢路径分析。若其妥当，则成为生物标志物候选。
(6)根据数据库检索判断为结构未知时，根据所取得的MS谱或者MS/MS谱进行结构推定。最终，合成推定结构的候选物质，确认其 MS谱或者MS/MS谱等是否与分析结果一致。一致时，实施代谢路径分析后，成为生物标志物候选。
(7)根据以上的结果，包含生物标志物候选在内，决定面向检查的最终的分析规程。
实施例2：尿检测体的获得
为了获得分析所需的尿检测体，有几种方法。
(1)接受伦理审査的批准，从医疗机构获得健康人、癌患者的尿检测体。此时，由医务工作人员提供临床的附加信息(性别、年龄、身高、体重、BMI、癌的有无、患有癌时其分期等)。在这种情况下，为了收集必要的检测体数，有时需要很长时间。
(2)从生物样本库(Biobank)公司购入包括临床的附加信息在内的健康人、癌患者的尿检测体。在这种情况下，不需要伦理审查，但由于日本没有生物样本库公司，因此检测体是外国人的。
关于本次的检测体数，作为健康人(15名)、癌患者(大肠癌15 名、乳腺癌15名)，为了大幅缩短获得时间，采用方法(2)。具体而言，从德国的生物样本库公司Indivumed公司、美国BioOptions公司每1个检测体购入约10ml，获得冷冻保存的检测体。
实施例3：利用多种分离模式的LC/MS分析
对尿中代谢物进行全面分析时，最适合的是液相色谱质谱装置 (LiquidChromatograph/Mass Spectrometer:LC/MS)。作为MS的离子化方法，使用电喷雾离子化(ESI)法的正负离子化模式(+ESI模式/ －ESI模式)，此外，为了得到结构信息，还可以使用质谱分析/质谱分析法(MS/MS)，LC的分离模式的选定成为课题。然而，在不知道尿中代谢物是何物的阶段，不能限定于一种分离模式，因此，如以下的表2所示，使用多种分离模式。
[表2]
表2尿中代谢物分析所使用的分析模式
Figure GDA0002996408340000221
实施例4：热图分析(癌的增减代谢物质的特定)
热图分析是指根据所得到的MS谱、MS/MS谱鉴定代谢物，实施试样之间(癌患者相对于健康人)的量的比较。图3表示了癌的分析例。根据该结果，选出代谢途径覆盖率(metabolism pathway coverage) 和变动代谢物的前30个。
以下，将健康人、癌患者(乳腺癌、大肠癌)的热图分析的结果汇总于表3、4、5。
[表3]
表3.试验设计
类型 检测体数
健康人 15
乳腺癌患者 15
大肠癌患者 15
[表4]
表4.检测代谢物数
Figure GDA0002996408340000231
[表5]
表5.变动代谢物质数
Figure GDA0002996408340000232
实施例5：主成分分析
在主成分分析中，调查说明变量(本次为代谢物的数据)相互的关系，制作导入新的概念的目标变量的关系式。关系式存在多个，一个是导入综合变量的式子，其他是导入相反的概念的目标变量的式子。
本次所使用的方法是方差-协方差矩阵主成分分析法 (variance-covariancematrix principal component analysis)。根据其结果，将由三个目标变量表示的例子示于图4。各目标变量的贡献度为第一成分(25.63％)、第二成分(13.99％)、第三成分(4.97％)。该结果表示利用尿诊断癌的可能性。迄今为止，体外诊断中的癌检查主要以利用血液的检查为主，但若能够实现利用尿的检查，则可能会带来癌检查的社会系统本身的变革。
为了计算图4中的说明变量的重要度，使用随机森林分析法(RF 法)。利用RF法精选区分各种癌和健康人的生物标志物候选代谢物时，列出在现有的MS谱的数据库检索中检索不到的多种结构未知代谢物 (图5B，基于图5A的随机森林分析结果)。另一方面，将结构未知代谢物除外而实施RF法时，选出类固醇作为区分乳腺癌和健康人的标志物，选出外源性代谢物作为区分大肠癌和健康人的生物标志物(图 6B，基于图6A的随机森林分析结果)。
根据以上的分析结果，如下所述选择生物标志物候选。
[表6]
Figure GDA0002996408340000241
实施例6：尿中标志物候选
作为尿中标志物候选，对表6所示的X-18126、X-24546、X-16567、 X-11440、X-12831、X-12636、X-24502和X-23787进行进一步分析。
将其结果示于以下的表7和图7以及8。
[表7]
表7.利用随机森林分析得到的尿中标志物候选的有效性
Figure GDA0002996408340000251
根据以上的分析，显示了尿中代谢物X-18126、X-24546、X-16567、 X-11440、X-12831、X-12636、X-24502和X-23787作为尿中标志物的有效性。
实施例7：尿中标志物候选的组合的分析
为了对尿中标志物候选的组合进行研究，对癌患者(N＝30)和健康人(N＝15)的尿检测体进行使用以下的代谢物的组合的主成分分析：
(1)只使用2种尿中代谢物X-18126、X-16567时的主成分分析；
(2)只使用3种尿中代谢物X-18126、X-16567、X-24546时的主成分分析；
(3)使用8种尿中代谢物X-18126、X-16567、X-24546、X-11440、 X-12831、X-12636、X-24502、X-23787时的主成分分析；
(4)使用19种尿中代谢物X-24589、X-17697、X-18126、X-24546、 X-16567、X-23511、X-11440、X-17698、X-12726、X-12831、X-12636、 X-24502、X-23787、X-21470、X-24495、X-15497、X-24473、X-17324、 X-22379时的主成分分析；
(5)使用30种尿中代谢物X-24589、X-17697、X-18126、吡咯素、X-24584、脱氢表雄甾酮葡糖醛酸苷、X-24577、X-12329、X-12267、 X-22850、2-氨基苯酚硫酸盐、X-24760、X-12731、3-(3-羟苯基)丙酸酯硫酸盐、呋喃酮硫酸盐、X-12007、2-乙酰胺基苯酚硫酸盐、3-乙酰苯酚硫酸盐、X-23511、X-21807、N-(2-呋喃甲酰基)甘氨酸、X-24497、 X-16567、X-12818、X-24528、X-17707、X-21295、X-24579、X-17324、 X-24495时的主成分分析；
(6)使用观测到的全部1325种尿中代谢物时的主成分分析。
将(1)～(6)的主成分分析的结果分别示于图9A(2种代谢物)、图9B(3种代谢物)、图9C(8种代谢物)、图9D(19种代谢物)、图9E(30种代谢物)和图9F(1325种代谢物)。
如图9A和图9B所示，可知在使用被认为特别重要的生物标志物 (X-18126与X-16567的组合，或者X-18126、X-16567与X-24546的组合)时，能够识别健康人和癌患者(大肠癌患者和乳腺癌患者)，这些结果表明X-18126、X-16567、X-24546是有力的生物标志物。作为一次检查，利用这2种代谢物或者3种代谢物调查被检查者的检测体属于哪一个区域，由此能够判定是否存在癌的疑虑。
另一方面，如图9C和图9D所示，将用于主成分分析的生物标志物数从8种增加至19种时，健康人与癌患者(大肠癌患者和乳腺癌患者)的识别能力提高。另外，如图9E所示，可知将生物标志物数增加至30种时，不仅能够识别健康人和癌患者，连乳腺癌患者和大肠癌患者都能够识别。另外，如图9F所示，将计测到的全部代谢物用于主成分分析时，虽然能够识别，但识别程度稍有下降。
作为一次检查、或者作为一次检查之后的二次检查、进而作为二次检查之后的三次检查，利用上述(5)的30种代谢物或包含这30种中的X-18126、X-16567的20～29种代谢物作为标志物，调查被检查者的检测体更符合哪一个，由此可知是否存在癌的疑虑。另外，也能够推定癌的种类。
上述结果表明通过控制生物标志物数，能够实现全部癌种类的检查(一次性检查各种癌种类)、癌种类的检查(检查特定的癌种类) 这样的多阶段的检查。
实施例8：尿中标志物候选的分析
作为尿中标志物候选，对于表6所示的X-18126、X-24546、 X-16567、X-11440、X-12831、X-12636、X-24502和X-23787，分析实施例3所记载的LC/MS的数据。另外，还进一步进行MSn分析。
将X-18126、X-24546、X-16567、X-11440、X-12831、X-12636、 X-24502和X-23787的LC/MS数据分别示于图10、13、15、17、19、 21、23和25。在图中，上部表示利用液相色谱得到的色谱图，下部表示利用质谱仪得到的质谱。另外，将各自的MS/MS的数据示于图11、 14、16-1、18、20-1、22-1、24-1和26-1，将X-18126的MS/MS/MS 的数据示于图12。将X-16567、X-12831、X-12636、X-24502和X-23787 的LC/MS正离子检测模式和负离子检测模式的数据分别示于图16-2、 20-2、22-2、24-2和26-2。
该分析的结果确认各代谢物的质量如下：
X-18126：在LC/MS正离子检测模式中质量134.11
X-16567：在LC/MS正离子检测模式中质量188.12、在LC/MS负离子检测模式中质量186.11
X-24546：在LC/MS负离子检测模式中质量231.05(2价离子)
X-11440：在LC/MS负离子检测模式中质量246.07(2价离子)
X-12831：在LC/MS正离子检测模式中质量435.22、在LC/MS负离子检测模式中质量433.20
X-12636：在LC/MS正离子检测模式中质量259.16、在LC/MS负离子检测模式中质量257.15
X-24502：在LC/MS正离子检测模式中质量208.09、在LC/MS负离子检测模式中质量206.08
X-23787：在LC/MS正离子检测模式中质量385.16、在LC/MS负离子检测模式中质量383.15
由数据分析的结果可知X-18126是具有以下结构的化合物。
Figure GDA0002996408340000271
由数据分析的结果还可知，X-16567是具有以下的结构的化合物。
Figure GDA0002996408340000281
将本说明书中引用的全部出版物、专利和专利申请直接作为参考而引入本说明书中。

Claims (6)

1.一种用于检测尿中代谢物的质量分析用试剂组在制备癌的评价方法所使用的试剂盒中的用途，其特征在于，
所述尿中代谢物包含在液相色谱质谱分析法LC/MS正离子检测模式中作为质量134.11计测的以下结构式所示的代谢物，
Figure FDA0002996408330000011
所述癌为乳腺癌和/或大肠癌。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，
尿中代谢物还包含选自下列尿中标志物中的至少1种的尿中代谢物：
在LC/MS正离子检测模式中作为质量188.12、在LC/MS负离子检测模式中作为质量186.11计测的以下结构式所示的代谢物，
Figure FDA0002996408330000012
在LC/MS负离子检测模式中作为质量231.05计测的代谢物；
在LC/MS负离子检测模式中作为质量246.07计测的代谢物；
在LC/MS正离子检测模式中作为质量435.22、在LC/MS负离子检测模式中作为质量433.20计测的代谢物；
在LC/MS正离子检测模式中作为质量259.16、在LC/MS负离子检测模式中作为质量257.15计测的代谢物；
在LC/MS正离子检测模式中作为质量208.09、在LC/MS负离子检测模式中作为质量206.08计测的代谢物；
在LC/MS正离子检测模式中作为质量385.16、在LC/MS负离子检测模式中作为质量383.15计测的代谢物。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，
癌的评价是对象的癌的检测、对象的癌的风险预测、对象的癌的分期判定、对象的癌的预后判定、或对于对象所存在的癌的治疗效果的评价。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，
评价步骤包括与选自健康人或低风险者样品中的尿中代谢物的测定值、罹患癌或罹患癌的已知分期的患者的样品中的尿中代谢物的测定值、患有显示特定的预后的癌的患者的样品中的尿中代谢物的测定值以及在其他时刻获取的对象的样品中的尿中代谢物的测定值中的基准值的比较。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，
基准值来自健康人或癌的低风险者时，在正离子检测模式中作为质量134.11计测的代谢物的测定值低于基准值表示对象中存在癌、癌发病、或癌发展。
6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，
基准值来自罹患特定的癌、罹患癌的已知分期或患有显示特定的预后的癌的患者时，在正离子检测模式中作为质量134.11计测的代谢物的测定值与基准值为同等程度、没有显著性差异、或者低于基准值表示对象罹患该癌、该特定的癌发病、该已知分期的癌发病或显示该特定的预后。
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