CN108601346B

CN108601346B - 用于二色视动物的驱避剂和引诱剂组合物

Info

Publication number: CN108601346B
Application number: CN201780011233.3A
Authority: CN
Inventors: S·J·维纳; K·E·小巴灵格
Original assignee: Arkion Life Sciences LLC; US Department of Agriculture USDA
Current assignee: Arkion Life Sciences LLC; US Department of Agriculture USDA
Priority date: 2016-01-04
Filing date: 2017-01-04
Publication date: 2022-01-11
Anticipated expiration: 2037-01-04
Also published as: US11252953B2; US20170188566A1; MY191751A; ECSP18057724A; ZA201804136B; US10638745B2; US20200221684A1; CA3049200A1; CN108601346A; BR112018013603A2; CO2018008149A2; KR20180110667A; WO2017120186A1; BR112018013603B1; PH12018550098A1

Abstract

现发现驱避剂或引诱剂与波长特异性视觉提示剂的组合在对驱避剂或引诱剂的波长不是最敏感的二色视动物中产生增加的驱避或引诱的预料不到的和协同的效果。本发明的方法可用于驱避二色视动物害虫；或防止或尽量减少货币损失，特别是对农产品、自然资源或私人财产。本发明的方法还可用于引诱二色视动物以用于农业生产、娱乐活动(例如野生啮齿动物饲养者)或以动物为目标的药物的有效施用或缓解技术。

Description

用于二色视动物的驱避剂和引诱剂组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年1月4日提交的美国临时申请第62/274,467号以及2016年7月20日提交的美国临时申请第62/364,513号的优先权，其内容通过引用并于本申请中。

技术领域

本发明涉及从目标食物或位置趋避或诱引二色视动物的组合物和方法。

背景技术

视觉是大多数动物,包括哺乳动物、鸟类和昆虫，的日常行为的基础。大多数动物利用视觉来辅助他们的社交互动、定位和觅食行为。人类的视觉系统被表征为三色视的；人类视色素对三个区域(即红色、绿色和蓝色)中的波长最敏感。大多数鸟类是四色视的；鸟类视色素和油滴是紫外线或紫光(UVS，VS)敏感的，以及人类中也发现的短波长、中波长和长波长(SWS，MSW，LWS)敏感视锥细胞。相比之下，大多数其他动物只对两个波长区域敏感，因此被归类为二色视的。

脊椎动物通常具有单一的视杆细胞感光色素和多达四类的视锥细胞感光色素(即长波、中波、两种短波敏感的视色素；Cowan等，2002)。大多数哺乳动物是二色视的，具有两类视锥细胞感光色素(即长波和短波敏感的视色素；David-Gray等，2002)。脊椎动物视椎细胞感光器的短波敏感(SWS)视色素分为两种分子类别SWS1和SWS2。哺乳动物中只有SWS1类存在。SWS1类已被细分为紫光敏感(VS；峰值最大吸光度，或λ_max＝400-430nm)和紫外线敏感的视色素(UVS，λ_max<380nm；Cowing等，2002)。虽然紫外线(UV)敏感性在动物中广泛存在，但它在哺乳动物中被认为是罕见的，仅限于少数具有λ_max<400nm的物种(Douglas和Jeffery，2014)。然而，没有UVS视色素的动物，如果它们具有透过紫外线波长的视觉介质，则会对紫外线波长敏感，因为如果能量水平充足，所有视色素都会吸收大量的紫外线(Douglas和Jeffery 2014)。

尽管大多数动物对全光谱波长(例如300-1,400nm)不是最敏感的，但该技术的含义包括二色视动物对其不是最敏感的波长的行为响应性(例如>5％驱避或引诱)。本发明利用对二色视动物对它们不是最敏感的波长(例如<400nm，>700nm)的行为响应性的新颖和非显而易见的观察结果。这种独立于表征双色视觉波长的波长的使用对无数种用于二色视动物的趋虫剂和诱引剂的施用具有影响。

发明内容

根据这一发现，本发明的一个目的是提供用于从目标趋避和引诱二色视动物的改进方法和组合物。

本发明的一个目的是提供一种降低与目标相关的二色视动物的行为响应的方法，包括：提供包含波长特异性视觉提示剂和驱避剂的驱避剂组合物，其中所述波长特异性视觉提示剂具有与所述驱避剂的光谱特性非常相似的光谱特性，并且其中所述驱避剂的光谱特性落在所述二色视动物最敏感的范围之外；将所述驱避剂组合物施用于所述目标，将所述目标呈现给所述二色视动物，由此与所述目标相关的所述二色视动物的行为响应比在施用仅包含所述波长特异性视觉提示剂或所述驱避剂中的一种或包含显著更低量的所述波长特异性视觉提示剂或所述驱避剂的一种(或两者)的组合物后将目标呈现给所述二色视动物时降低至少大于5％的水平。视觉提示剂可以以被所述二色视动物视觉识别的有效量施用。

本发明的另一个目的是通过选自以下的驱避剂施用来降低与目标相关的二色视动物的行为响应的方法：(a)将有效量的驱避剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂与相同量或减少量的驱避剂的组合；或(b)将有效量的驱避剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂；或(c)一次或多次同时施用有效量的驱避剂和有效量的波长特异性视觉提示剂。

本发明的另一个目的是用于增加与目标相关的二色视动物的行为响应的方法，包括：提供包含波长特异性视觉提示剂和引诱剂的引诱剂组合物，其中所述波长特异性视觉提示剂具有与引诱剂的光谱特性非常相似的光谱特性，并且其中引诱剂的光谱特性落在所述二色视动物最敏感的范围之外；将所述引诱剂组合物施用于所述目标，将所述目标呈现给所述二色视动物，由此与所述目标相关的所述二色视动物的行为响应比在施用仅包含所述波长特异性视觉提示剂或所述引诱剂中的一种的组合物后将目标呈现给所述二色视动物时增加至少大于5％的水平。

本发明的另一个目的是通过选自以下的引诱剂施用来增加与目标相关的二色视动物的行为响应的方法：(a)将有效量的引诱剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂与相同量或减少量的引诱剂的组合；或(b)将有效量的引诱剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂；或(c)一次或多次同时施用有效量的引诱剂和有效量的波长特异性视觉提示剂。

本发明的另一个目的是一种用于改变与目标相关的二色视动物的行为响应的方法，包括：提供包含波长特异性视觉提示剂和试剂的组合物，其中所述波长特异性视觉提示剂具有与试剂的光谱特性非常相似的光谱特性，并且其中试剂的光谱特性落在所述二色视动物最敏感的范围之外；将所述组合物施用于所述目标，将所述目标呈现给所述二色视动物，由此与所述目标相关的所述二色视动物的行为响应比在施用仅包含所述波长特异性视觉提示剂或所述试剂中的一种的组合物后将目标呈现给所述二色视动物时变化至少大于5％的水平。该变化可以是行为响应的减少，其中该组合物是驱避剂组合物并且该试剂是驱避剂。这种变化可以是行为响应的增加，其中组合物是引诱剂组合物，并且该试剂是引诱剂。

从下面的描述中，本发明的其它目的和优点将变得显而易见。

附图说明

图1是说明在二色视动物加州田鼠(Microtus californicus Peale)中的UV吸收性摄食后驱避剂的驱避性的条形图。与提供给加州田鼠(Microtus californicus Peale)的不同浓度的蒽醌类驱避剂

Shield；

Life Sciences,New Castle,DE,USA)相关的平均摄食驱避性。驱避性代表相对于未处理的全燕麦的平均预处理消耗(第1-3天)的试验消耗(第4天)(n＝每驱避剂浓度8-10只田鼠)。

图2是说明在二色视动物理查森地松鼠(Urocitellus richardsonii Sabine)中UV吸收性摄食后驱避剂的驱避性的条形图。与提供给理查森地松鼠(Urocitellusrichardsonii Sabine)的不同浓度的蒽醌类驱避剂(

Shield；

LifeSciences,New Castle,DE,USA)相关的平均摄食驱避性。驱避性代表相对于未处理的全燕麦的平均预处理消耗(第1-3天)的试验消耗(第4天)(n＝每驱虫剂浓度8-10只地松鼠)。

图3是说明在二色视动物鹿鼠(Peromyscus maniculatus Wagner)中UV吸收性摄食后驱虫剂的趋避性的条形图。与提供给鹿鼠(Peromyscus maniculatus Wagner)的不同浓度的蒽醌类驱虫剂(

Shield；

Life Sciences,New Castle,DE,USA)(Peromyscus maniculatus Wagner)相关的平均拒食性。趋避性代表相对于未处理的全燕麦的平均预处理消耗(第1-3天)的试验消耗(第4天)(n＝每驱虫剂浓度8-9只小鼠)。

图4是说明在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus audubonii)中UV吸收性摄食后驱避剂的驱避性的条形图。与提供给棉尾兔(Sylvilagus audubonii Baird)的不同浓度的蒽醌类驱避剂(

Shield；

Life Sciences,New Castle,DE,USA)相关的平均摄食驱避性。驱避性代表相对于未处理的全燕麦的平均预处理消耗(第1-3天)的试验消耗(第4天)(n＝每驱避剂浓度10只兔子)。

图5是说明在二色视啮齿动物即加州田鼠(Microtus californicus)中暴露于UV吸收性摄食后驱避剂后紫外线吸收性视觉提示剂的驱避性的条形图。提供给加州田鼠(Microtus californicus Peale，n＝每个试验组8只)的全燕麦的平均消耗量(±S.E.M.)。在整个四天的试验期间，给田鼠提供未处理的全燕麦和用0.2％UV摄食提示剂(活性成分：二氧化钛；Evonik Goldschmidt Corporation)处理的燕麦。在试验之前，驱避剂调理的试验组暴露于UV摄食后驱避剂。

具体实施方式

本公开涉及视觉提示剂和啮齿动物引诱剂或驱避剂组合物的组合，已经发现它们在二色视动物中产生了提高驱避性或引诱的预料不到的协同作用。本发明的协同作用的特征在于与独立存在(即不组合)时对视觉提示剂和驱避剂或引诱剂观察到的行为响应相比，对视觉提示剂和驱避剂的组合或视觉提示剂和引诱剂的组合的更大的行为响应(例如≥5％驱避性或引诱)。本发明的方法可用于驱避二色视动物害虫；或防止或尽量减少货币损失，特别是对农产品、自然资源或私人财产。本发明的方法也可用于为农业生产、娱乐活动(例如野生啮齿动物饲养者)或靶向-动物的药物的有效施用或缓解技术的目的而引诱二色视动物。

与用于驱避禽类的紫外线策略的现有技术(即四色视动物；美国专利号9131678)相反，本发明的方法和组合物使用具有在二色视动物最敏感的范围之外(例如，<400nm且>700nm的波长)的光谱特性的驱避剂或引诱剂有效且可用于降低或增加与感兴趣的目标(即食物或位置)相关的二色视动物的行为响应。与用多环醌驱避啮齿动物(即，用于驱避啮齿动物的方法，美国专利申请号14595718)相比，本发明的方法和组合物有效且可用于降低或增加与目标相关的二色视动物的行为响应，该方法包括使用波长特异性视觉提示剂和驱避剂或引诱剂的组合。

具体而言，本公开涉及通过使用波长特异性驱避剂和引诱剂与视觉提示剂的组合以及在某些情况下单独使用视觉提示剂来驱避和引诱二色视动物的改进的组合物和方法。

在本公开的一个实施方案中，驱避剂可以与波长特异性视觉提示剂组合使用，所述波长特异性视觉提示剂表现出与驱避剂的光谱特性非常相似的光谱特性，使得二色视动物不在所述试剂之间可视地区分(例如±10-50nm)，可以在保持有效驱避二色视动物的能力的同时降低驱避剂的量(例如，在没有本发明的情况下，达到≥5％驱避性所需的驱避剂的量的≤95％，或者当驱避剂或引诱剂在没有视觉提示剂的情况下使用)。

在一个替代实施方案中，引诱剂可以与波长特异性视觉提示剂组合使用，所述波长特异性视觉提示剂表现出与引诱剂的那些光谱特性非常相似的光谱特性，使得二色视动物不在所述试剂之间可视地区分(例如±10-50nm)，可以在保持有效引诱二色视动物的能力的同时降低引诱剂的量(例如，在没有本发明的情况下，达到≥5％引诱所需的引诱剂的量的≤95％，或者当引诱剂在没有视觉提示剂的情况下使用)。

本公开的一个令人惊讶的发现是，当根据本公开呈现时，对UV或红外(IR)信号不是最敏感的二色视动物实际上对UV或IR信号有行为响应。二色视动物对小于400nm或大于700nm的波长不是最敏感的。然而，当驱避剂或引诱剂与视觉提示剂(其显示与试剂非常相似的光谱特性但落在二色视动物敏感的范围之外)一起呈现至目标时，二色视动物出乎意料地通过表现出当呈现驱避剂时的降低的行为响应或当呈现本公开的引诱剂时的增加的行为响应进行行为响应。

如本文所用，术语“驱避性”是指经处理目标相对于未经处理目标的消耗(或占用)减少的百分比。术语“有效驱避”是指相对于未经处理目标，经处理目标的消耗(或占用)减少至少5％。本文考虑的有效驱避可以是相对于未经处理目标，经处理目标的消耗(或占用)减少5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。这些值可用于定义相对于未经处理目标而言经处理目标的消耗(或占用)例如减少50％至75％，或75％至85％，或25％至50％的范围。

如本文所用，术语“引诱”是指相对于未经处理目标而言经处理目标的消耗(或占用)增加的百分比。术语“有效引诱”意指相对于未经处理目标，经处理目标的消耗(或占用)增加至少5％。本文考虑的有效引诱可以是相对于未经处理目标，经处理目标的消耗(或占用)增加5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。这些值可用于定义相对于未经处理目标而言经处理目标的消耗(或占用)例如增加50％至75％，或75％至85％，或25％至50％的范围。

本文所用术语“相关行为响应”是指二色视动物对有效驱避或有效引诱的响应。例如，当二色视动物表现出相对于未经处理目标而言经处理目标消耗(或占用)减少的相关行为响应时，该响应是有效驱避的结果。或者，当二色视动物表现出相对于未经处理目标而言经处理目标消耗(或占用)增加的相关行为响应时，该响应是有效引诱的结果。此外，在此之前两段中提供的百分比值可以与术语“相关行为响应”一起使用。例如，50％的驱避性相当于相对于未经处理目标而言经处理目标的消耗(或占用)减少50％水平时的行为响应。

根据本公开，用于从目标驱避二色视动物的方法可以通过至少以下任一种方法完成：(i)以有效驱避二色视动物的量将波长特异性视觉提示剂施用于目标；(ii)以有效驱避二色视动物的量将初始处理的波长特异性驱虫剂施用于目标，随后施用波长特异性视觉提示剂与相同或减少施用率的驱避剂的组合；(iii)以有效驱避二色视动物的量将初始处理的波长特异性驱避剂施用于目标，随后施用波长特异性视觉提示剂而不进一步施用驱避剂；和(iv)以有效驱避感兴趣的二色视动物的量将波长特异性驱避剂和波长特异性视觉提示剂同时施用于目标。对于这些施用中的每一个，视觉提示剂以足以引发感兴趣的二色视动物中的相关行为响应的量施用。

适用于本公开的驱避剂包括但不限于蒽醌、氟酰胺、邻氨基苯甲酸盐、甲硫威、咖啡因、毒死蜱、氯氟氰菊酯、乙酸甲基苯基酯、乙酸乙基苯基酯、邻氨基acerophenone、2-氨基-4,5-二甲基ecetophenone、藜芦酰胺、肉桂醛、肉桂酸、肉桂酰胺、烯丙基异硫氰酸酯、辣椒素、TRPV1、苯甲地那铵、白坚木(quebracho)、蔗糖八乙酸酯、奎宁、奎宁盐酸盐、硫酸镁、邻氨基苯乙酮、依米丁二盐酸盐、硫酸铝铵、腐败性和挥发性动物产物(例如鸡蛋、尿液、血粉、蓖麻油)、腐败性和挥发性植物产物(例如松针油、大蒜油、芥子油苷)、d-长叶薄荷酮、福美双、硫代葡萄糖苷、水蓼二醛、胡椒碱(例如，花椒(Zanthoxylum piperum))以及它们的组合。

根据本公开，用于从目标引诱二色视动物的方法可以通过至少以下任一种方法来完成：(i)以有效引诱二色视动物的量将波长特异性视觉提示剂施用于目标；(ii)以有效引诱二色视动物的量将初始处理的波长特异性引诱剂施用于目标，随后施用波长特异性视觉提示剂与相同或降低的施用率的引诱剂的组合；(iii)以有效引诱二色视动物的量将初始处理的波长特异性诱引剂施用于目标，随后施用波长特异性视觉提示剂而不进一步施用引诱剂；和(iv)以有效引诱感兴趣的二色视动物的量将波长特异性引诱剂和波长特异性视觉提示剂同时施用于目标。对于这些施用中的每一个，视觉提示剂以足以引发感兴趣的二色视动物中的相关行为响应的量施用。

适用于本公开的引诱剂包括但不限于基于食物的试剂(例如谷物和谷物产品、种子和种子产品、坚果和坚果产品、坚果黄油、水果和水果产品、乳制品、糖果成分)、能量(例如植物脂肪、动物脂肪)、蛋白质以及它们的组合。

如上所述，视觉提示剂优选表现出与之一起使用的驱避剂或引诱剂的光谱特性非常相似的光谱特性。光谱特性包括反射、吸收、折射以及UV和IR红外波长。视觉提示剂优选表现出在驱避剂或引诱剂的光谱特性的10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50nm内的光谱特性。这些值可用来定义一个范围，例如表现出在驱避剂或引诱剂的光谱特性的10-15nm，或20-35nm，或40-50nm范围内的光谱特性的视觉提示剂。本公开的合适的视觉提示剂优选地表现出与先前或同时施用的驱避剂或引诱剂处理非常相似的光谱特性，使得感兴趣的二色视动物优选地在视觉提示剂与驱避剂或引诱剂或含有驱避剂或引诱剂的第一处理制剂的制剂之间不可视地区分。例如，作为说明而不限于此，一种有效的驱避剂蒽醌显示UVA(320-400nm)和/或UVB(280-320nm)吸光度。为了本公开的目的，合适的视觉提示剂可以在驱避剂或引诱剂的波长处或非常接近该波长处(例如，如上所述±10-50nm)显示UV或IR吸光度、反射率或折射。使用常规的光谱分析技术可以容易地确定驱避剂或引诱剂和视觉提示剂的UV或IR光谱。

用于本公开的视觉提示剂的一些实例包括但不限于氧化钛(IV)(TiQ₂)、三硅氧烷、硅氧烷、其它UV吸收剂和UV反射剂(100-400nm)以及红外线试剂(>700nm)。

在某些实施方案中，本公开提供了用于驱避二色视动物的改进的方法和组合物，其使用在整个所需驱避期施用的减少量的驱避剂(例如在没有本发明的情况下达到≥5％驱避性所需的驱避剂的量的≤95％)。

在其他实施方案中，本公开提供了用于驱避二色视动物的改进的方法和组合物，其利用多次施用驱避剂，其中在初始施用后可以降低驱避剂的量(例如与初始施用相关的≤95％的驱避剂的量)。

在本公开的一个实施方案中，使用驱避剂与表现出与驱避剂非常相似的光谱特性的波长特异性视觉提示剂的组合，使得与先前施用的驱避剂相比可以降低驱避剂的量，同时保持维持二色视动物有效驱避性的能力(例如与初始施用相关的≤95％的驱避剂或引诱剂的量)。

在可选的实施方案中，本公开提供了用于引诱二色视动物的改进的方法和组合物，其使用在整个所需引诱期施用的减少量的引诱剂(例如在没有本发明的情况下达到≥5％引诱所需的驱避剂或引诱剂的量的≤95％)。

在其他实施方案中，本公开提供了用于利用多次施用引诱剂来引诱二色视动物的改进的方法和组合物，其中引诱剂的量可以在初始施用后减少(例如与初始施用相关的≤95％的引诱剂的量)。

在本公开的可选实施方案中，使用引诱剂与表现出与引诱剂非常相似的光谱特性的波长特异性视觉提示剂的组合，使得与先前施用的引诱剂相比可以降低引诱剂的量，同时保持维持二色视动物有效引诱的能力(例如与初始施用相关的驱避剂或引诱剂的量的≤95％)。

在本公开的一个实施方案中，所使用的所需驱避剂或引诱剂的量可以从初始施用到后续施用而变化。在该实施方案中，选择用于初始施用的驱避剂或引诱剂的量(以及在不存在视觉提示剂的情况下的任何后续施用)以从经处理目标(即食物或位置)有效地驱避或引诱二色视动物。因此，如本文所用，“有效量”被定义为导致如本文之前定义的“有效驱避”或“有效引诱”的量。有效量可以根据所选择的特定驱避剂或引诱剂以及以下附加的变量而变化：驱避剂/引诱剂的制剂、特定的感兴趣的二色视动物、目标物质和环境因素(例如施用的背景，包括替代食物和位置，行为历史)。驱避剂和引诱剂的有效量可以是100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、15,000、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、45,000或50000ppm。这些数值可以用来定义一个范围，例如5000-20000ppm或者1000-7500ppm范围内的有效量的驱避剂或引诱剂。

有效量可以通过常规控制实验容易地确定。作为举例但不限于此，在最初的施用中，对于大多数二色视动物，优选量的蒽醌(

SHIELD,FLIGHT

PLUS,AV-1011,AV-2022或AV-4044)是1-2％(重量/重量)活性成分，但可以低至0.01％(重量/重量)活性成分。

术语“后续施用”意指在最初施用驱避剂或引诱剂之后将驱避剂或引诱剂与期望的视觉提示剂组合的那些施用。在某些实施方案中，后续施用中使用的驱避剂或引诱剂的量可以与最初的施用相同。或者，在某些实施方案中，可以减少后续施用中使用的驱避剂或引诱剂的量。在这些后续施用中，驱避剂或引诱剂的减少的量可以是驱比剂或引诱剂的99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、74％、73％、72％、71％、70％、69％、68％、67％、66％、65％、64％、63％、62％、61％、60％、59％、58％、57％、56％、55％、54％、53％、52％、51％、50％、49％、48％、47％、46％、45％、44％、43％、42％、41％、40％、39％、38％、37％、36％、35％、34％、33％、32％、31％、30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％(wt/wt)。这些值可以用来定义一个范围，如95％-50％的驱避剂或引诱剂。进一步设想，驱避剂或引诱剂可以降低至驱避剂或引诱剂的0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％或0.9％(wt/wt)。这些值可以用来定义一个范围，例如0.01-0.1％(wt/wt)的驱避剂或引诱剂。在更进一步的实施方案中，后续施用中使用的驱避剂或引诱剂的量可以完全省略。

本公开进一步设想，在某些实施方案中，将与最初的或减少的量的驱避剂或引诱剂组合使用的一种或多种所需视觉提示剂以至少有效维持仅由驱避剂或引诱剂实现的有效驱避或有效引诱水平的量施用。本发明的协同作用的特征在于相对于视觉提示剂、驱避剂或引诱剂独立施用(不组合)时观察到的行为响应，视觉提示剂与驱避剂或视觉提示与引诱剂的组合的更大的行为响应。视觉提示剂的有效量(与先前提供的相同含义)可以根据所选择的特定驱避剂或引诱剂以及以下附加的变量而变化：驱避剂/引诱剂的制剂、感兴趣的特定的二色视动物、目标物质和环境因素(例如施用的背景，包括替代食物和位置，行为历史)。视觉提示剂的有效量可以是100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、15,000、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、45,000或50,000ppm。这些数值可以用来定义一个范围，例如2000-5000ppm或者4000-7000ppm范围内的有效量。

作为举例但不限于此，一种有效的视觉提示剂是氧化钛(IV)，并且氧化钛(IV)的有效量可以从2,000-5,000ppm(

P25,Evonik Goldschmidt Corp.,Hopewell,VA)至3,500-5,000ppm(目录号232033，购自Aldrich,St.Louis,MO)至4,000-7,000ppm(目录号808，购自Merck&Co.,Whitehouse Station,NJ；HOMBIKAT UV 100购自Sachtleben,Duisburg,Germany；目录号89490，购自Aldrich,St.Louis,MO.；目录号T315-500，购自Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)变化。

在某些实施方案中，如本领域众所周知的，驱避剂和引诱剂可以用一种或多种合适的惰性载体配制。驱避剂和引诱剂以及视觉提示剂的制剂可随着具体的目标和施用方法而变化。驱避剂、引诱剂和视觉提示剂可以配制成例如溶液、乳剂、可乳化的浓缩剂、悬浮浓缩剂、可湿性粉剂、粉剂、颗粒剂、粘附粉剂或颗粒剂和气雾剂。最令人感兴趣的是那些农业上可接受的载体以及那些适于施用于结构、农田或作物、种子、幼苗、果园、葡萄园、牲畜饲料、肥料、杀虫剂、动物或昆虫毒饵及其组合的载体。所选择的特定载体不是关键的，可以使用各种液相和固相载体，包括但不限于水、含水表面活性剂混合物、醇、醚、烃、卤代烃、二醇、酮、酯、油(天然或合成的)、粘土、高岭石、二氧化硅、纤维素、橡胶、滑石、蠕虫状和合成聚合物。

驱避剂和引诱剂以及视觉提示剂也可配制成单一组合物或配制成不同组合物并分开施用。驱避剂和引诱剂和/或视觉提示剂也可以与其他农业有益剂(包括但不限于UV或IR稳定剂、抗氧化剂、诱饵、佐剂、除草剂、肥料和杀虫剂，包括杀虫剂和杀真菌剂)混合配制。

本发明的方法可用于在任何它们造成滋扰的地方驱避或引诱二色视动物，或者更重要的是防止或尽量减少经济损失，特别是对农产品、自然资源或私人财产。驱避剂和引诱剂以及视觉提示剂可以施用于关于二色视动物将被从(至)其驱避(或引诱)的任何目标或空间位置。根据本发明，优选的施用目标包括但不限于结构、农田或作物、种子、幼苗、果园、葡萄园、牲畜饲料、肥料、杀虫剂、动物或昆虫毒饵及其组合的一种或多种。作物包括但不限于玉米、水果、谷物、草、豆类、莴苣、小米、燕麦、稻、行栽作物、高粱、向日葵、树坚果、草皮、蔬菜和小麦中的一种或多种。

用驱避剂或引诱剂以及视觉提示剂对目标进行的后续处理通常在用户所期望的初始施用之后的任何时间施用。例如，在一个预期的实施方案中，后续处理在预期较大的损失期间施用。在实践中，后续处理通常在第一次处理后至少一周(在相同的生长季节)施用。

二色视动物是那些仅使用用于色觉的两种不同类型的光感受器的动物，通常包括胎盘哺乳动物，不包括海洋哺乳动物(鳍足动物和鲸目动物；单色视动物)、与人类(即三色视动物)和大多数鸟类(四色视动物)密切相关的灵长类动物。

目标包括结构、农田或作物、种子、幼苗、果园、葡萄园、牲畜饲料、肥料、杀虫剂、动物或昆虫毒饵及其组合。作物包括玉米、水果、谷物、草、豆类、莴苣、小米、燕麦、稻、行栽作物、高粱、向日葵、树坚果、草皮、蔬菜或小麦。

以下实施例仅用于进一步说明本发明，而不是为了限制由权利要求书限定的本发明的范围。

实施例

应该理解，前面的详细描述仅仅是通过说明的方式给出的，并且在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以在其中进行修改和变化。

实施例-野生啮齿动物和棉尾兔的驱避剂施用策略

需要有效的化学驱避剂和驱虫剂施用策略来管理野生啮齿动物和兔子对农业资源造成的损害。为了比较研究野生啮齿类动物和兔子对化学驱避剂的行为响应，评估圈养的加州田鼠(Microtus californicus Peale)、理查森地松鼠(Urocitellus RichardsoniiSabine)、鹿鼠(Peromyscus maniculatus Wagner)和棉尾兔(Sylvilagus auduboniiBaird)中蒽醌类驱避剂的浓度-响应关系。在小鼠和松鼠中观察到用10,800ppm蒽醌或18,500ppm蒽醌处理的全燕麦的52-56％的摄食驱避性，并且在田鼠和兔子中分别观察到用18,300ppm蒽醌或19,600ppm蒽醌处理的燕麦的84-85％驱避性。除了提供调理食物回避所必需的负面摄食后果外，蒽醌类驱避剂还吸收大多数野生鸟类可见的紫外(UV)波长。为了开发改变脊椎动物害虫的行为的驱避剂施用策略，通过在随后的行为测定中向加州田鼠提供驱避剂和UV处理的食物来进行调理回避实验。相对于未调理的测试个体(P＝0.3161)，用UV摄食后驱避剂处理的田鼠随后避免仅用UV提示剂处理的全燕麦(P＝0.0109)。这些对蒽醌类驱避剂和紫外线摄食提示剂的行为响应被用作野生哺乳动物的驱避剂施用策略。包括摄食后驱避剂和相关视觉提示剂在内的种植前种子处理和表面处理可用于保护与哺乳动物掠夺有关的农业资源。

一些野生啮齿动物和兔子的机会性摄食行为和繁殖力每年造成全世界农业生产的经济损失(Gebhardt等,2011,Jacob和Tkadlec,2010,Johnson和Timm,1987,Pelz,2004,Salmon,2008和Witmer和Singleton,2010)。例如，田鼠(Microtus spp.Schrank和Arvicolaspp.La Cépède)已知会在美国和欧洲造成诸如苜蓿、豌豆和小麦等农作物和重新造林努力的损害(Baldwin,2014,Giusti,2004,Jacob和Tkadlec,2010,Sullivan和Sullivan,2008和Witmer et al.,2007)。地松鼠(Spermophilus spp.Cuvier)对美国西部和加拿大的苜蓿生产造成数百万美元的损失(Johnson-Nistler等,2005和Proulx,2010)。地松鼠造成17.9-23.9百万美元的作物损失和11.9-17.9百万美元(预计2016年估值的美元)对例如建筑物、堤坝和土坝的物理损害以及对坚果作物、树木果实和草地牧草等材料的损害(Baldwin etal.,2013,Marsh,1998)。鹿鼠(Peromyscus spp.Gloger)对玉米、杏仁、鳄梨、柑橘、石榴和甜菜作物造成损害(Pearson et al.,2000and Witmer and Moulton,2012)。棉尾兔(Sylvilagus floridanus Allen)损害树苗、灌木、干草、大豆和草地牧草(Dugger et al.,2004,Johnson and Timm,1987)。

由野生啮齿动物和兔子引起的农业掠夺是一个长期存在的问题，而且几乎没有有成本效益的解决方案。减轻野生啮齿动物和兔子造成的损害的方法包括行为施用(例如物理排除、化学驱避剂)和致死去除。尽管事先评估了许多化学驱避剂，但仍需要对哺乳动物掠夺的有效的解决方案(Agnello等,2014,Baldwin等,2014,Gurney等,1996,Nolte和Barnett,2000,Nolte等,1993,Sutherland,2000和Williams和Short,2014)。野生动物驱避剂的有效性和商业开发取决于驱避剂在农田条件下的功效，相对于未受保护资源预期损害的成本、环境影响以及食物和饲料安全性(Werner等，2009)。

尽管蒽醌是一种天然存在的化合物，在40年代早期被确定为有前景的禽类驱避剂(Heckmanns和Meisenheimer，1944)，但是基于蒽醌的种子处理(AV-1011；

LifeSciences,New Castle,DE,USA)于2016年1月由美国环境保护局首次注册，以保护新种植的水稻。蒽醌已被用于有效趋避乌鸫(Avery等,1997,1998；Carlson等,2013；Cummings等,2002a,b,2011；Neff和Meanley,1957；Werner等,2009,2011a,2014b,c)、加拿大鹅(Brantacanadensis Linnaeus；Blackwell等,1999；Dolbeer等,1998；Werner等,2009)、沙丘鹤(Grus canadensis Linnaeus；Blackwell等,2001)、环颈雉(Phasianus colchicusLinnaeus；Werner等,2009)、欧洲椋鸟(Sturnus vulgaris Linnaeus；Tupper等,2014)、野生火鸡(Meleagris gallopavo Linnaeus；Werner等,2014a)、有角的百灵鸟(Eremophilaalpestris Linnaeus)、大尾白头翁(Quiscalus mexicanus Gmelin)和美洲乌鸦(Corvusbrachyrhynchos Brehm；Werner等,2015)。

然而，相对较少的研究评估了作为哺乳动物驱避剂的蒽醌。Santilli等人(2005年)发现，野猪(Sus scrofa Linnaeus)消耗的用0.64％蒽醌处理的玉米比未处理的玉米减少86.5％。Werner等人(2011b)在提供了用0.5-4.0％蒽醌处理的玉米种子的黑尾草原犬(Cynomys ludovicianus Ord)中观察到24-37％的驱避性。Cowan等人(2015)在黑大鼠(Raltus rattus Linnaeus；0.1％和0.25％蒽醌)和负鼠(Trichosurus vulpecula Kerr；0.25％蒽醌)中观察到对蒽醌处理的诱饵的厌恶。相对于对照诱饵(0.01-0.03％肉桂，青胡萝卜)的消耗，棕色大鼠(R.norvegicus Berkenhout；0.04％和0.08％蒽醌)中蒽醌处理的诱饵的消耗量较少，并且在负鼠(T,vulpecula，0.08％蒽醌；Clapperton等，2015)中的消耗量没有差异。尽管Hansen等人(2015)观察到雌性普通田鼠(M.arvalis Pallas)消耗的用5％蒽醌和氯仿处理的小麦比仅用氯仿处理的小麦减少47％，Hansen等(2016)发现，与仅用氯仿处理的小麦相比，在雄性普通田鼠中用15％蒽醌和氯仿处理的小麦的消耗量没有差异，并且雄性家鼠(Mus musculus Linnaeus)中用15％蒽醌和氯仿处理的小麦的消耗量更大。

对野生啮齿动物和兔子对化学驱避剂的行为响应进行了比较研究，并开发了一种保护一般由这些野生哺乳动物损害的农业资源的有效施用策略。研究包括(1)实验评估加州田鼠(M,californicus Peale)、理查森地松鼠(Urocitellus richardsonii Sabine)、鹿鼠(P.maniculatus Wagner)和棉尾兔(S.audubonii Baird)的蒽醌类驱避剂的浓度-响应关系，以及(2)通过利用野生啮齿动物和兔子对蒽醌类驱避剂和相关视觉提示剂的行为响应来开发驱避剂施用策略。研究还包括在加州田鼠暴露于UV摄食后驱避剂后，调理避免UV视觉提示剂。

在美国科罗拉多州柯林斯堡国家野生动物研究中心(NWRC)的总部进行了四次浓度响应摄食实验。使用适当的科学收集许可证，38只加州田鼠在邻近美国加利福尼亚州的商业洋蓟田捕获，28只理查森地松鼠在美国蒙大拿州苜蓿地内捕获，以及34只鹿鼠和30只棉尾兔在邻近NWRC-Fort Collins捕获。使用基于每个治疗组的8-10个测试个体(Werner等人2009,2011b)，并且因此基于活捕获后测试个体的可用性，对于四种测试物种中的每一个来说为3-4个浓度。NWRC动物护理和使用委员会(NWRC研究协议QA-2104、QA-2243、QA-2333；S.J.Werner-Study主任)批准了与每个实验相关的所有测试个体的捕获、护理和使用。

在每个摄食实验(即隔离，保存)之前，所有测试个体都提供维持性饮食至少一周。为了比较研究化学驱避剂的种内和种间功效，在整个实验(隔离、保存、适应、预测试、测试)中将所有测试个体保持在单独笼中。加州田鼠、理查森地松鼠和棉尾兔保持在NWRC室内动物研究大楼的视觉隔离的单独笼中(23×41×18cm的笼子用于田鼠，62×50×42cm用于地松鼠，62×50×42cm用于兔子)。在整个实验过程中，在NWRC室外动物研究设施中将鹿鼠保持在单独笼中(46×24×19-cm)，以减少研究人员对汉坦病毒的潜在暴露。在整个摄食实验中，所有测试个体可自由获取水和环境富集。

对于每个实验(Werner等,2009,2010,2011a,b)使用蒽醌类驱避剂(

Shield，活性成分：合成9,10-蒽醌；

Life Sciences,New Castle,DE,USA)。通过使用旋转混合器和家用喷雾设备(Werner等，2014a)将水悬浮液(100ml/kg)施用于测试饮食来配制用于所有浓度-响应实验的种子处理物。每个浓度-响应摄食实验的测试饮食都是全燕麦。不希望受到约束，认为驱避性在浓度-响应实验期间与驱避剂浓度直接相关。在实验室摄食实验中，80％以上的驱避性被定义为有效的(Werner et al.,2009,2011a,2014a,b,c)。因此，有效处理(即驱避阈值)的消耗≤在浓度-响应实验期间的平均预测试消耗的20％。

对于每个测试组，将浓度-响应实验的因变量计算为相对于未处理的测试饮食的平均预测试消耗而言经处理的测试饮食的平均测试消耗(即趋避百分比)。NWRC分析化学部门使用高效液相色谱法对蒽醌处理的测试饮食中的实际蒽醌浓度(±10-100ppm AQ)进行定量(Werner等,2009,2011a,2014a,b,c,2015)。使用非线性回归程序(SAS v9.1)来分析驱避百分比作为实际蒽醌浓度(ppm)的函数。当观察到驱避性和驱避剂浓度的非线性关系(a≤0.05)时，预测达到80％摄食驱避性所需的阈值蒽醌浓度。使用描述性统计

来总结用于观察到的阈值驱避性的蒽醌剂量(mg蒽醌/kg体重[BM])。

实施例1-加州田鼠摄食实验

为了鉴定野生啮齿动物的有效化学驱避剂，本实验涉及圈养的加州田鼠的蒽醌类驱避剂的浓度-响应测试。加州田鼠的维持性饮食包括啮齿动物块(

5001；LandO’Lakes,St.Louis,MO,USA)和苹果片。38只加州田鼠(实验性初始)可用于这个摄食实验。所有的田鼠在单独的笼内适应五天(周三至周日)。在适应期内，每日早上08:00点在每个笼子的北侧放置一个装有未经处理的燕麦(随意)的食物碗。

在适应期后三天(周一至周三)，每日08：00时在每个笼子的北侧放置一个碗(30.0g未处理的燕麦)。周二至周四约08：00时测量每日食物消耗(包括溢出和干燥)(±0.1g)。田鼠根据平均预测试消耗进行分级，并且在预测试结束时分配给四个测试组之一(n＝8-10只/组)，使得每组类似地填充显示每日消耗高低的田鼠(Werner et al.,2009,2010,2011a,b)。随机分配组间测试处理(即实验单位)。

在预测试后(周四)的当天，08：00时在笼子北侧放置一个碗(30.0g蒽醌处理的燕麦)。组1-4中的田鼠接受分别用0.25％、0.5％、1.0％或2.0％蒽醌处理的全燕麦(目标浓度，wt/wt)。在周五大约08：00时测量每日食物消耗(包括溢出和干燥)。

暴露于用0.25-2.0％蒽醌处理的全燕麦的加州田鼠在浓度-响应实验期间表现出24-84％的驱避性(图1)。出自我们的蒽醌处理的燕麦的实际蒽醌浓度范围为2,050-18,300ppm蒽醌(图1)。因此，加州田鼠对18,300ppm蒽醌或365.0±103.1mg蒽醌/kg BM(平均田鼠BM＝38.1克)处理的全燕麦表现出84％的驱避性。田鼠驱避性(y)是蒽醌浓度(x)的函数：y＝26.828ln(x)-174.795(r²＝0.95，P＝0.0267)。对于提供处理过的燕麦的加州田鼠，预计阈值浓度约为13,400ppm蒽醌。该实验室功效实验的结果表明阈值浓度为1.3％(wt/wt)的蒽醌可以从处理过的食物有效地驱避加州田鼠。

进行另一实验以说明在二色视动物加州田鼠(Microtus calif ornicus)中暴露于UV吸收性摄食后驱避剂(即9,10-蒽醌)两天后，UV吸收性摄食提示剂的驱避性。16只加州田鼠每只提供两碗未经处理的燕麦三天。根据平均预测试消耗对田鼠进行分级，并在预测试结束时分配给两个测试组中的一个(每个测试组n＝8只田鼠)。然后在测试组中随机分配测试处理(即驱避剂暴露的，未暴露的)。

在为期两天的暴露期间，未暴露组中的田鼠每日都在两个食物碗中提供未经处理的燕麦。为了建立紫外线吸收性食物与其负面摄食后后果之间的认知关联，驱避剂暴露组中的田鼠每日都在两个食物碗中提供用0.25％蒽醌(目标浓度；wt/wt)处理的燕麦(Werner等，2008,2012,2014a)。

在为期四天的测试中，每日为所有田鼠提供一碗未经处理的燕麦和一碗用0.2％的UV吸收性摄食提示剂(Werner et al.2012,2014a,b)处理的燕麦。在整个试验期间，UV处理的燕麦在第一天随机放置，然后每日在所有测试笼内交替处理位置。在每个测试日之后的一天测量每日燕麦消耗量。

治疗组之间观察到统计学显著的处理效果(即处理组间相互作用；P＝0.0146)。暴露于UV吸收性摄食后驱避剂的田鼠随后在整个4天试验中相对于未经处理的燕麦避开了UV吸收性燕麦(即在驱避剂暴露组中观察到42％的驱避性；P＝0.0109；图5)。相比之下，未暴露于UV吸收性摄食后驱避剂的田鼠在测试过程中消耗了类似量的未处理的燕麦和用UV吸收性摄食提示剂处理的燕麦(即，在驱避剂未暴露的组或对照组中观察到<1％的驱避性；P＝0.3161；图5)。因此，二色视动物对UV吸收性摄食提示剂有行为响应。

这些数据表明，在没有预测试暴露于驱避剂的情况下，用UV吸收性提示剂处理的食物的消耗量与未处理食物的消耗量没有差异。然而，在暴露于UV吸收性摄食后驱避剂之后，二色视动物在测试期间显著地避开了UV吸收性提示剂。因此，通过使用表现出与先前施加的驱避剂处理(例如±10-50nm)非常类似的光谱特性的视觉提示剂，可以减少(或者甚至省略；实施例3)趋避剂的量并且仍然有效地驱避二色视动物。在本实施例中观察到的协同作用的特征在于相对于单独视觉提示剂(即不与驱避剂组合)观察到的行为响应，视觉提示剂和驱避剂组合的行为响应更大。

实施例2-理查森地松鼠摄食实验

该实验涉及用圈养的理查森地松鼠对蒽醌类驱避剂进行浓度-响应测试。理查森地松鼠的维持性饮食包括啮齿动物块(

5001；Land O’Lakes,St.Louis,MO,USA)、苹果片和胡萝卜。在单独的笼内(即适应、预测试、测试)对28只理查森地松鼠(实验性-初始)复制我们以前的浓度-响应实验的测试程序。测试组1-3(每组n＝9-10只松鼠)在测试中分别接受用0.5％、1.0％或2.0％蒽醌(目标浓度，wt/wt)处理的全燕麦。

观察到提供了用目标浓度为0.5-2.0％的蒽醌处理的全燕麦的理查森地松鼠中40-56％的摄食驱避性(图2)。燕麦种子处理物的实际蒽醌浓度范围为5,380～18,500ppm蒽醌(图2)。地松鼠驱避性与实际蒽醌浓度弱相关(r²＝0.95；P＝0.1458)。对于18,500ppm蒽醌处理的全燕麦，观察到在理查森地松鼠中56％的驱避性。

进行另外的实验以说明在二色视动物理查森地松鼠(Urocitellusrichardsonii)和鹿鼠(Peromyscus maniculatus)中与UV摄食提示剂(例如二氧化钛)组合的UV吸收剂性摄食后驱避剂(即9,10-蒽醌)的协同驱避。多达四十只理查森地松鼠(地松鼠)和多达四十只鹿鼠(小鼠)每只提供一碗未经处理的燕麦三天。对于每个实验，测试个体基于平均预测试消耗进行排列，并且在预测试结束时(n＝每组10个测试个体)分配给四个测试组之一。随后在测试组中随机分配测试处理物。在为期一天的测试中，每个测试个体都会提供一碗驱避剂处理的燕麦。在测试期间，组1-4中的测试个体接受用0.05％、0.1％、0.25％或0.5％蒽醌处理的燕麦(即目标浓度；wt/wt)。测试处理物还包括0.2％的UV摄食提示剂(例如二氧化钛)。每日燕麦消耗量在测试之后的一天进行测量。

对于用0.05-0.5％蒽醌和0.2％UV摄食提示剂处理的燕麦，地松鼠表现出30-75％的驱避性。对于用0.05-0.5％蒽醌和0.2％UV摄食提示剂处理的小麦，小鼠表现出15-75％的驱避性。对于UV吸收性摄食后驱避剂和UV摄食提示剂处理过的食物，在二色视动物中观察到协同驱避。

实施例3-鹿鼠饲养实验

该实验涉及用圈养的鹿鼠对蒽醌类驱避剂进行浓度-响应测试。鹿鼠的维持性饮食包括啮齿动物块(

5001；Land O’Lakes,St.Louis,MO,USA)、苹果片和胡萝卜。在单独的笼内(即适应、预测试、测试)用34只鹿鼠(实验性-初始)复制我们以前的浓度-响应实验的测试程序。测试组1-4(每组n＝8-9只松鼠)在测试中分别接受用0.25％、0.5％、1.0％或2.0％蒽醌(目标浓度，wt/wt)处理的全燕麦。

暴露于用目标浓度为0.25-2.0％的蒽醌处理过的全燕麦的鹿鼠在浓度-响应实验中表现出19-52％的驱避性(图3)。来自我们的燕麦种子处理物的实际蒽醌浓度范围为2,820-19,900ppm蒽醌(图3)。鹿鼠驱避性与实际蒽醌浓度弱相关(r²＝0.89；P＝0.0580)。

对于用10,800ppm蒽醌处理的全燕麦，在鹿鼠中观察到52％的驱避性。

实施例4-棉尾兔摄食实验

该实验涉及用捕获的棉尾兔的蒽醌类驱避剂的浓度-响应测试。棉尾兔的维持性饮食包括Rabbit

(

Mills,St.Louis,MO,USA)、苹果片和苜蓿干草。在单独的笼内(即，适应、预测试、测试)用30只棉尾兔(实验性初始)中复制我们先前的浓度-响应实验的测试程序。测试组1-3在测试期间分别接受0.5％、1.0％或2.0％蒽醌(目标浓度，wt/wt)处理的全燕麦。

在用目标浓度为0.5-2.0％蒽醌处理的全燕麦的棉尾兔中观察到68-85％的摄食驱避性(图4)。来自我们的燕麦种子处理物的实际蒽醌浓度范围为4,790-19,600ppm蒽醌(图4)。兔子驱避性与实际蒽醌浓度弱相关(r²＝0.99；P＝0.0757)。然而，在提供用19,600ppm蒽醌处理的全燕麦的兔子中观察到85％的摄食驱避性。因此，从用2.0％目标浓度的蒽醌(图4)或149.9±28.1mg蒽醌/kg BM(平均兔BM＝0.8kg)处理的全燕麦中有效驱避棉尾兔。

对于用19,600ppm蒽醌处理的全燕麦，在棉尾兔中观察到85％的驱避性。据认为，可以成功地进行叶面驱避剂用于保护与由棉尾兔引起的损害相关的树苗、灌木、干草、大豆和草地牧草的野外功效试验。野外功效试验可以包括：(1)专门为保护农作物免受哺乳动物掠夺而开发的施用策略；(2)具有预测的啮齿动物或兔子损伤的独立野外复制；(3)基于种属特异性阈值浓度的不同施用率，包括未经处理的对照；(4)收获前分析化学和收获时分析化学；(5)作物损害测量；和(6)作物产量测量(Werner等，2011a)。

进行另一实验来说明在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus audubonii)中UV吸收性摄食后驱避剂(即9,10-蒽醌)的驱避性。给30只棉尾兔(兔子)的每一只提供一碗未处理的燕麦三天。基于平均预测试消耗对兔子进行分级，并在预测试结束时分配给三个测试组之一(每测试组n＝10只兔子)。随后在测试组中随机分配测试处理物。在为期一天的测试中，每个测试个体都会提供一碗驱避剂处理的燕麦。组1-3中的兔子在测试期间接受用0.5％、1％或2％蒽醌(即目标浓度；wt/wt)处理的燕麦。在测试之后的一天测量每日燕麦消耗量。

对于分别用4,790ppm、10,300ppm和19,600ppm蒽醌处理的燕麦(实际浓度通过高效液相色谱法测定；图4)，兔子表现出68％、75％和85％的驱避性。因此，类似于对UV波长最敏感的具有视网膜锥体的四色视鸟类(Werner et al.2009,2011,2014a,b)，二色视动物表现出对经UV吸收性摄食后驱避剂处理的食物的有效驱避性。

进行进一步的实验以说明在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus audubonii)中的UV吸收性摄食后驱避剂(即，9,10-蒽醌)与UV摄食提示剂(例如二氧化钛)的协同驱避性。给30只棉尾兔(兔子)各提供一碗未处理的燕麦三天。对于第一和第二实验，基于平均预测试消耗对测试个体进行分级，并且分别在预测试结束时分配给三个测试组中的一个和四个测试组中的一个。随后在测试组中随机分配测试处理物。在为期一天的测试中，每个测试个体都会提供一碗驱避剂处理的燕麦。对于第一实验，测试个体在试验期间接受用0.5％、1％或2％蒽醌和0.2％UV摄食提示剂(二氧化钛)(即目标浓度；wt/wt)处理的燕麦。对于第二实验，组1和组2在试验期间接受用0.1％或0.25％蒽醌(即目标浓度；wt/wt)处理的燕麦；组3和组4接受用0.1％或0.25％蒽醌和0.2％UV摄食提示剂处理的燕麦。在实验1和2的每个测试之后的一天测量每日燕麦消耗量。

相对于之前的实验1，早期实验中的兔子对于用0.5-2％蒽醌和0.2％UV摄食提示剂处理的燕麦表现出高达3％的驱避性。相对于仅用蒽醌驱避剂处理的燕麦的驱避性，后面实验中的兔子对于用0.1-0.25％蒽醌和UV摄食提示剂组合处理的燕麦显示出高达5％的驱避性。

对于UV吸收性摄食后驱避剂和UV摄食提示剂处理过的食物，在二色视动物中观察到协同趋避。本实施例中观察到的协同作用的特征在于相对于单独驱避剂观察到的行为响应(即不与视觉提示剂相结合)，视觉提示剂和驱避剂组合的行为响应更大。

实施例5-UV摄食提示剂的条件性回避实验

与大多数测试的鸟类不同(Aidala等,2012,Bennett和Cuthill,1994和Cuthill等,2000)，大多数测试的哺乳动物不显示紫外线视觉(Honkavaara等,2002,Hut等,2000,Jacobs,1992,Jacobs和Yolton,1971,Jacobs等,1991和Tovee,1995)。

蒽醌类驱避剂提供负面的摄食后后果和相关的UV摄食提示剂，这对于紫外线处理过的食物的条件回避是必要的(Werner等,2012,2014a)。在加州田鼠中测试在蒽醌调理之后UV处理的食物的条件化回避。条件化回避实验的种子处理物通过使用旋转混合器和家用喷雾设备将水悬浮液(60ml/kg)施用于测试饮食来配制(Werner等,2012,2014b)。

这个摄食实验使用了16只加州田鼠(实验性初始)。每天将维持性饮食(苹果切片和

5001,Land O’Lakes St.Louis,MO,USA)和水再次提供给单独的笼内的所有田鼠。蒽醌类驱避剂(

Shield；

Life Sciences,New Castle,DE,USA)和二氧化钛摄食提示剂(

P25；Acros Organics,Fair Lawn,NJ,U.S.A.)用于条件性回避摄食实验(Werner等,2012,2014a,b)。之前使用Genesys^TM 2,336002分光光度计(Thermo Spectronic US,Rochester,NY,USA)来确定蒽醌类驱避剂和二氧化钛摄食提示剂在UV波长附近吸收(Werner等,2012)。

所有的田鼠在单独的笼内适应五天(周三至周日；第1周)。在整个适应期内提供两个食物碗(每个笼子的东侧和西侧)的无掺杂的燕麦。在适应后的两天(周一和周二；第2周)每天大约在08：00时，提供两个食物碗(笼中东侧和西侧的无掺杂燕麦)。根据预测试的消耗量将笼子分级，将笼子分配到两组中的一组，并且在预测试结束时在组之间随机分配处理物。

在预测试后的两天(周三和周四；第2周)每天大约在08：00时，提供两个食物碗(笼子的东侧和西侧)。为了使用UV吸收性摄食后驱避剂进行行为条件化，将条件化组(第1组；n＝8)中的所有田鼠暴露于在两个食物碗中用0.25％蒽醌(目标浓度，wt/wt)处理的燕麦。未条件化组的所有田鼠(组2；n＝8)暴露于在两个食物碗中未掺杂的燕麦。从周五(第2周)的大约09：30时至周一(第3周)的08：00时，向所有测试个体提供了两个食物碗的维持性饮食。

大约在08：00时，四个测试日的每日(周一至周四；第3周)提供两个食物碗。为了在行为条件化之后用UV吸收性摄食提示剂进行偏好测试，第1组和第2组每日接受在一个碗中用0.2％的UV提示剂处理的燕麦和在另一个碗中未处理的燕麦。UV处理的燕麦在第一个测试日随机定位(即笼子的东侧或西侧)，然后在整个测试过程中每日交替定位，使得每个笼子东侧和西侧各自提供两次UV处理的和未处理的燕麦。在整个测试期间(即，大约08：00h，周二至周五；第3周)，在每个笼子中的东侧和西侧食物碗中单独地测量燕麦消耗量。

条件化回避实验的因变量是处理的和未处理的食物的平均(即每日)测试消耗。在进行Levene等方差检验(a＝0.05)并肯定性检查残余物的当量浓度之后，将消耗数据进行Welch方差分析。采用一般线性模型(SAS v9.1)分析了处理组间的相互作用。Tukey-Kramer多重比较用于分离显著相互作用的平均值(a＝0.05)。描述统计学

用于总结在整个条件化回避实验中处理和未处理的食物的消耗。

两个测试组在四天的测试期间消耗不同量的UV处理的和未处理的食物(F_3,67＝4.48,P＝0.0063)。相对于未经处理的燕麦的消耗，用UV吸收性摄食后驱避剂调理的田鼠在整个测试过程中(即驱避剂调理，图5)消耗的燕麦比仅用UV吸收性提示剂处理的更少。在整个测试过程中(Tukey-Kramer P＝0.0109)，驱避剂调理组每日平均消耗1.6±0.3gUV处理的全燕麦和2.7±0.3g未经处理的燕麦。

相反，在整个测试期间，未调理的田鼠消耗了类似数量的UV处理的燕麦和未经处理的燕麦(图5)。在整个测试过程中(Tukey-Kramer P＝0.3161)，未调理组平均消耗了2.0±0.3gUV处理的全燕麦和2.6±0.2g未经处理的燕麦。因此，在没有事先用UV吸收性摄食后驱避剂进行调理的情况下，UV吸收性提示剂本身并不被加州田鼠嫌恶。此外，虽然加州田鼠对UV波长不是最敏感的，但用UV吸收性摄食后驱避剂调理的田鼠随后消耗了更少的仅用UV吸收性提示剂处理的食物。

因为在用UV吸收性摄食后驱避剂进行调理后，加州田鼠消耗了更少的仅用UV吸收性摄食提示剂处理的测试饮食(即相对于未调理的对照组；图5)，我们观察到二色视啮齿动物中UV视觉提示剂和摄食后驱避剂的提示剂-后果特异性(Domjan,1985)。因此，类似于乌鸫(Werner和Provenza,2011)，加州田鼠将视觉提示剂与摄食前和摄食后后果进行认知关联，并且可靠地将视觉和味觉体验与摄取后后果结合起来以获取营养素并回避毒素。这些视觉提示剂包括用于哺乳动物摄食行为的UV吸收剂和UV反射提示剂。本研究的行为响应可以作为保护农业资源的驱避剂施用策略。该施用策略包括摄食后驱避剂和具有与驱避剂非常相似的视觉特性的摄食提示剂，使得驱避剂浓度可以降低(即，在驱避剂暴露之后包括0％的化学驱避剂，图5)，同时维持或协同增加驱避效力(Werner等,2014b)。

本文描述的驱避剂施用策略(即UV摄食后驱避剂和相关的UV视觉提示剂)对几种野生啮齿动物和兔子有影响。虽然在加州地松鼠中光谱灵敏度函数在520nm处达到峰值(即，VS视色素；Otospermophilus beecheyi；Anderson和Jacobs,1972)，墨西哥地松鼠(Ictidomys mexicanus)的晶状体表现出265-370nm的λ_max(即UVS视色素；Cooper和Robson,1969)。在理查森地松鼠中，50％的入射光在462nm处通过晶状体被透射，315-400nm的光中有0.6％通过晶状体被透射(Douglas和Jeffrey,2014)。虽然短波敏感的锥体(S)仅构成鹿鼠的5-15％锥体，但S视蛋白基因的部分测序表明S锥体视色素的紫外敏感性(Arbrogast等,2013)。在家鼠中，50％的入射光在313-337nm处通过晶状体被透射，315-400nm的光中有81.7％通过晶状体被透射(Douglas和Jeffrey,2014)。发现白兔中最大光学透射率(即94-96％)在630-730nm之间；透射率在400nm下降至50％，在380nm下降至<1％(Algvere等,1993)。在兔子(Oryctolagus cuniculus Linnaeus)中，50％的入射光照射在392nm处被透射，315-400nm的光中有12.7％通过晶状体被透射(Douglas和Jeffrey，2014)。基于本文的测试，可以对野生啮齿动物和兔子进行包含UV摄食后驱避剂和相关的UV摄食提示剂的驱避剂施用策略的商业开发(例如优化制剂的定价)。

分别地，对于用10,800ppm蒽醌或18,500ppm蒽醌处理的全燕麦，在小鼠和松鼠中观察到52-56％的摄食驱避性；对于用18,300ppm蒽醌或19,600ppm蒽醌处理的燕麦，在田鼠和兔子中的驱避性为84-85％。对于提供了用蒽醌类驱避剂处理的食物的这些野生哺乳动物的摄食行为观察到相当大的种间差异。类似地，据预测，加拿大鹅和红翼乌鸫的阈值浓度为1,450-1,475ppm蒽醌，美洲乌鸦的阈值浓度为5,200ppm蒽醌，普通白头翁(Quiscalusquiscula Linnaeus)的阈值浓度为9,200ppm蒽醌，环颈雉的阈值浓度为10,450ppm蒽醌(Werner等，2009,2011a,2015)。因此，蒽醌驱避性与目标动物的体重不成反比，并且在测试的哺乳动物和鸟类中蒽醌存在显著的种间差异。在实验室和野外条件下，可能需要物种特异性功效并确定每个另外的目标动物的处理量。

相对于未调理的测试个体，用UV摄食后驱避剂调理的田鼠随后回避了仅用UV提示剂处理的全燕麦。同样地，相对于未调理的乌鸫，用UV摄食后驱避剂调理的红翅乌鸫随后回避了紫外线处理的食物(Werner等,2012)。最近针对与农作物掠夺有关的野生鸟类开发了这种驱虫剂施用的紫外线策略(Werner 2015)。相对于仅用蒽醌类驱避剂处理的食物的驱避性，当0.2％的UV摄食提示剂与0.02％或0.035％蒽醌(wt/wt；Werner等人，2014b)组合时观察到协同驱避性(即增加45-115％))。驱避剂施用的紫外线策略适用于管理由野生啮齿动物和兔子对植物和动物农业造成的损害。

在我们实验性提供0.25-2％蒽醌(wt/wt)处理过的食物的野生哺乳动物中，以高-低驱避性为序的蒽醌类驱避剂的排列效果是棉尾兔(68-85％驱避性)、加州田鼠(24-84％驱避性)、理查森地松鼠(40-56％驱避性)、鹿鼠(19-52％驱避性)和黑尾草原狗(24-37％驱避性；Werner等，201lb)。有趣的是，在欧洲兔(Oryclolagus cuniculus Linnaeus)、理查森地松鼠和黑尾草原狗中，通过眼睛媒介的UVA波长(315-400nm)的透射率估计分别为13％、0.6％和0％(Douglas和Jeffery,2014)。因此，这些野生哺乳动物中这种UV摄食后驱避剂的功效与已知的UVA波长透射率直接成正比。可以执行针对与人类-野生动物冲突相关的野生哺乳动物的非致命的紫外线驱避剂施用策略的开发。

由于在实验室和野外条件下进行的啮齿动物驱避试验中观察到不一致的成功，因此已推荐进行效力实验(即笼，然后封闭，然后进行野外研究)的进展以用于驱避性的可靠测量和非致命性野生动物驱避剂的成功开发(Hansen等，2016b)。可以进行野外封闭实验以进一步评估蒽醌类驱避剂和紫外线施用策略。本实验的结果可以为野生啮齿动物、兔子和其他与人类-野生动物冲突有关的野生啮齿动物设计辅助野外功效实验和开发非致命驱避剂。

这里包含的实验提供了蒽醌类驱避剂和相关的视觉提示剂用于与对农业资源有损失有关的野生啮齿动物和兔子的新调查。对于用10,800ppm蒽醌或18,500ppm蒽醌处理的全燕麦，在鹿鼠和理查森松鼠中观察到52-56％的摄食驱避性；对于用18,300ppm蒽醌或19,600ppm蒽醌处理的燕麦，分别在加州田鼠和棉尾兔中观察到84-85％的驱避性。相对于未调理的测试个体，用UV摄食后驱避剂调理的田鼠随后回避了仅用UV提示剂处理的全燕麦。因此，加州田鼠将摄食前和摄食后结果与视觉提示剂认知地联系起来，并且可靠地将视觉和味觉体验与摄食后结果结合起来以获得营养素并避开毒素。对蒽醌类驱避剂和UV摄食提示剂的这些行为响应在本文中被描述为用于对由野生哺乳动物引起的农业掠夺的非致死性管理的驱避剂施用策略(或方法)。这些方法可以包含摄食后驱避剂和具有与驱避剂非常相似的视觉特性的摄食提示剂，使得驱避剂浓度可以降低同时保持或增加驱避效力。

实施例6

进行另外三个实验来说明包括UV摄食提示剂的诱饵制剂在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus audubonii)、理查森地松鼠(Urocitellus richardsonii)和鹿鼠(Peromyscus maniculatus)中的引诱力。对于每个实验，多达40个测试个体每个提供一碗未处理的燕麦三天。根据平均预测试消耗量对测试个体进行分级，并在预测试结束时分配给四个测试组中的一组(每组n＝10个测试个体)。随后在测试组中随机分配测试处理物。在为期一天的测试中，为每个测试个体提供一碗引诱剂处理过的燕麦。组1-4中的测试个体接受用引诱剂(例如苹果、糖蜜或花生调味剂)和0、0.7％、0.14％或0.2％的UV摄食提示剂(例如二氧化钛)局部处理的燕麦。在测试之后的当天测量每日燕麦消耗量。

相对于未经处理的燕麦的预测试消耗，兔子、地松鼠和小鼠表现出40-85％以上的测试处理物消耗，测试处理物包括0-0.2％的UV摄食提示剂。在二色视动物中观察到引诱剂和UV摄食提示剂处理的食物的协同引诱。

实施例7

以下9,10-蒽醌制剂适用于施用至任何固体或植物表面，当以本申请所述速率施用于表面时对二色视动物是有效的。

实施例8

表1示出了在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus spp.,CORA)、鹿鼠(Peromyscusspp.,DEMI)、家鼠(Mus spp.,HOMl)和理查森地松鼠(Urocitellus richardsonii,RGS)中对包括波长特异性驱避剂加波长特异性视觉提示剂的驱避剂制剂的降低的行为响应(预言性的)。

表1：在二色视动物中对包括波长特异性驱避剂加波长特异性视觉提示剂的驱避剂制剂的降低的行为响应

实施例9

表2说明了在二色视动物棉尾兔(Sylvilagus spp.)、鹿鼠(Peromyscus spp.)、家鼠(Mus spp.)和理查森地松鼠(Urocitellus richardsonii)中对包括波长特异性引诱剂加波长特异性视觉提示剂的引诱剂制剂的增加的行为响应(预言性的)。

表2：在二色视动物中对包括波长特异性驱避剂加波长特异性视觉提示剂的引诱剂制剂的增加的行为响应

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Claims

1.一种用于改变与目标相关的二色视动物的行为响应的方法，包括：

提供包含波长特异性视觉提示剂和驱避剂的组合物，其中所述波长特异性视觉提示试剂具有与所述驱避剂的光谱特性非常相似的光谱特性，并且其中所述波长特异性视觉提示剂和所述驱避剂的光谱特性落在所述二色视动物最敏感的范围之外；

将所述组合物施用于所述目标，

将所述目标呈现给所述二色视动物，

当向所述二色视动物呈现所述波长特异性视觉提示剂和所述驱避剂的组合时与所述目标相关的所述二色视动物的行为响应比当向所述二色视动物仅呈现所述波长特异性视觉提示剂或所述驱避剂中的一种时变化至少大于5％的水平；以及

其中所述波长特异性视觉提示剂和驱避剂各自在100-400nm或大于700nm的波长范围显示UV或IR吸光度、反射率或折射。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述变化是所述行为响应的减少。

3.一种通过选自以下的驱避剂施用来改变与目标相关的二色视动物的行为响应的方法：

a．将有效量的驱避剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂与相同量或减少量的所述驱避剂的组合；或

b．将有效量的驱避剂初始施用于所述目标，随后一次或多次向所述目标施用有效量的波长特异性视觉提示剂；或

c．一次或多次同时施用有效量的驱避剂和有效量的波长特异性视觉提示剂；

其中所述波长特异性视觉提示剂和驱避剂各自在100-400nm或大于700nm的波长范围显示UV或IR吸光度、反射率或折射；和

当向所述二色视动物呈现所述波长特异性视觉提示剂和所述驱避剂的组合时与所述目标相关的所述二色视动物的行为响应比当向所述二色视动物仅呈现所述波长特异性视觉提示剂或所述驱避剂中的一种时变化至少大于5％的水平。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述二色视动物是那些仅使用用于色觉的两种不同类型的光感受器的动物。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述二色视动物是那些仅使用用于色觉的两种不同类型的光感受器的动物。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述目标包括建筑物、农田或作物、种子、幼苗、果园、草皮、牲畜饲料、肥料、杀虫剂、动物诱饵或它们的组合。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述目标包括葡萄园、昆虫诱饵或它们的组合。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述目标包括建筑物、农田或作物、种子、幼苗、果园、草皮、牲畜饲料、肥料、杀虫剂、动物诱饵或它们的组合。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述目标包括葡萄园、昆虫诱饵或它们的组合。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述作物包括水果、谷物、草、行栽作物、向日葵、树坚果或蔬菜。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述蔬菜是莴苣。

12.根据权利要求6所述的方法，其中所述作物包括玉米、豆类、小米、燕麦、稻、高粱或小麦。

13.根据权利要求2所述的方法，其中所述驱避剂选自由以下组成的组：蒽醌、氟酰胺、邻氨基苯甲酸盐、甲硫威、咖啡因、毒死蜱、氯氟氰菊酯、乙酸甲基苯基酯、乙酸乙基苯基酯、邻氨基苯乙酮、2-氨基-4,5-二甲基苯乙酮、藜芦酰胺、肉桂醛、肉桂酸、肉桂酰胺以及它们的组合。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述视觉提示剂选自由以下组成的组：UV吸收性材料、IR吸收性材料、UV反射材料、IR反射材料、UV折射性材料、IR折射性材料、人可视的材料、红外材料以及它们的组合。

15.根据权利要求3所述的方法，其中所述视觉提示剂选自由以下组成的组：UV吸收性材料、IR吸收性材料、UV反射材料、IR反射材料、UV折射性材料、IR折射性材料、人可视的材料、红外材料以及它们的组合。