CN108586566A - 3β-羟基-5α,8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物及制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种3β‑羟基‑5α,8α‑过氧雄甾‑6‑烯‑17‑(芳环取代)腙衍生物及制备和应用，属于药物化学技术领域。本发明的3β‑羟基‑5α，8α‑过氧雄甾‑6‑烯‑17‑(芳环取代)腙衍生物结构式如下：R1表示‑CH3、‑F、‑Cl、‑C(CH3)3、‑CN、‑OCH3、‑OH或‑H；R2表示‑OCH3、‑CF3或‑H。以去氢表雄酮为原料，先是制备3β‑乙酰氧基‑5‑雄甾烯‑17‑酮，然后经溴代、脱溴反应得到3β‑乙酰氧基‑5，7‑二烯雄甾‑17‑酮中间体，水解还原羟基，然后光照构建5α，8α‑过氧桥，再与水合肼反应得到3β‑羟基‑5α，8α‑过氧雄甾‑6‑烯‑17‑肼中间体，最后进行醛胺缩合反应生成3β‑羟基‑5α，8α‑过氧雄甾‑6‑烯‑17‑(芳环取代)腙衍生物。本发明化合物对肝癌、乳腺癌等癌症具有预防和治疗作用。
Description
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，涉及甾醇过氧化物衍生物、制备及应用，尤其涉及3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物及其制备方法和作为预防和治疗肝癌、乳腺癌等癌症及免疫疾病药物的应用。
背景技术
癌症是严重威胁人类生存的一种恶性疾病。近年来随着人口老龄化和环境污染等因素的增加，癌症的发生率和死亡率有加速上升的趋势，已经成为导致人类死亡的一个主要原因。预计到2025年，全球新增癌症病例将达1930万人。因此，癌症的防治面临严峻的形势。
化学药物治疗、手术治疗和放射治疗的结合使用是现代肿瘤治疗的主要手段。其中，化疗药物起着不可替代的作用。虽然现在已有多种抗肿瘤药物应用于临床，但这些药物的疗效有限，存在耐药问题，且由于对肿瘤细胞和正常细胞缺乏选择性，均存在不同程度的毒副作用，这些问题都限制了化学治疗药物的应用。因此，开发新的高效低毒的抗肿瘤药物仍然是肿瘤治疗研究的重要内容。
在药物的开发过程看，从天然来源的化合物中寻找抗肿瘤药物具有非常重要的地位。1981年至2006年中，28％的新批准的药物是天然产物或其衍生物，而在已批准的抗肿瘤药物中，42％来源于天然产物。药用真菌因物种、遗传和生态的多样性，决定了其代谢产物的多种多样，被认为是筛选抗肿瘤天然活性物质的重要资源，本发明所涉及的结构是基于天然真菌中的过氧化甾醇为母核结构，对其进行结构修饰，从天然产物的构-效关系出发，设计并开发新的抗肿瘤药物具有显著的理论意义和应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物及其制备方法和作为肝癌、乳腺癌等癌症的预防和治疗药物的应用。
本发明提供了式(I)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物：
R1表示-CH3、-F、-Cl、-C(CH3)3、-CN、-OCH3、-OH或-H；
R2表示-OCH3、-CF3或-H。
本发明化合物均具有对肝癌、乳腺癌等癌细胞的增殖抑制作用，其中部分化合物的抑制效果显著。
本发明还提供了3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，包括以下步骤：
(a)将去氢表雄酮(28.8g，0.1mol)溶解在二氯甲烷100mL中，加入吡啶20mL，将上述体系置于室温条件下，然后将乙酸酐40mL缓慢加入上述体系中，反应4～6小时，得到式(II)表示的3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮；
(b)将式(II)化合物加热溶解在环己烷中，然后将二溴海因加入上述体系中，优选式(II)化合物与二溴海因的物质的量比为1∶(1.5～2)，加热回流，反应时间1小时，得到式(III)表示的3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-7α-溴-17-酮；
(c)将式(III)化合物与2，4，6-三甲基吡啶在二甲苯中反应，优选式(III)化合物与2，4，6-三甲基吡啶的物质的量比为1∶(1.3～1.8)，反应温度为135～140℃，反应时间4～6小时，得到式(IV)表示的3β-乙酰氧基-5，7-二烯雄甾-17-酮；
(d)将式(IV)化合物溶解到甲醇中，加入强碱化合物，优选式(IV)化合物与强碱化合物的物质的量比为1∶(0.3～0.5)，加热回流反应，反应时间0.5～1小时，得到式(V)表示的3β-羟基-5，7-二烯雄甾-17-酮；强碱化合物选自氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾。
(e)将式(V)化合物溶于吡啶中，加入曙红，优选式(V)化合物与光敏剂曙红的物质的量比为1∶(0.1～0.2)，再向上述体系中通入氧气，反应温度为冰水浴，将体系置于碘钨灯下，反应时间0.5～1小时，反应得到式(VI)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-酮；
(f)将式(VI)化合物和85％水合肼溶于乙醇中，优选式(VI)化合物、85％水合肼的物质的量比为1∶(1.3～1.5)，反应温度为45℃，反应时间2～3小时，反应后过滤或甲醇重结晶，得到式(VII)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼；
(g)将式(VII)化合物溶于无水乙醇中，加入芳香醛，优选式(VII)化合物和芳香醛的物质的量比为1∶(1.05～1.2)，反应温度为50℃，反应时间2～4小时，反应得到式(I)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物，
R1表示-CH3、-F、-Cl、-C(CH3)3、-CN、-OCH3、-OH或-H；
R2表示-OCH3、-CF3或-H。
本发明方法使用工业上普通的试剂和常规的生产条件，反应条件温和，步骤简单。
上述合成过程中的化学反应式如下：
反应条件：a)乙酸酐，二氯甲烷，吡啶，室温；b)二溴海因，环己烷，回流；c)2，4，6-三甲基吡啶，二甲苯，135℃；d)氢氧化钾，甲醇，回流；e)氧气，署红，吡啶，0℃；f)水合肼，乙醇，45℃；g)取代苯甲醛，乙醇，50℃。
R1表示-CH3、-F、-Cl、-C(CH3)3、-CN、-OCH3、-OH或-H；
R2表示-OCH3、-CF3或-H。
本发明的有益效果是：本发明方法是首先以去氢表雄酮为原料，经过乙酸酐保护羟基得到3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮，然后与二溴海因上溴后再用2，4，6-三甲基吡啶脱溴，得到3β-乙酰氧基-5，7-二烯雄甾-17-酮中间体，水解还原羟基得到3β-羟基-5，7-二烯雄甾-17-酮中间体，再与氧气反应，生成3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-酮中间体，之后与85％水合肼反应得到3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼中间体，最后此中间体与芳香醛发生醛胺缩合反应生成式(I)化合物。本发明方法使用工业上普通的试剂和常规的生产条件，反应条件温和，步骤简单。本发明化合物对人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7的增殖具有明显抑制作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
实施例1
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(对甲苯基)腙的制备
(a)3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮的制备
将原料去氢表雄酮(28.8g，0.1mol)溶解于含有100mL二氯甲烷和20mL吡啶的单口圆底烧瓶中，用恒压滴液漏斗滴加乙酸酐40mL，滴加时间控制在20分钟，滴毕，将体系继续搅拌反应4～6小时，TLC检测反应进程，原料消失后停止反应，加入30mL水搅拌后，用40mL×3乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和碳酸氢钠和饱和盐水洗涤，无水硫酸镁干燥后，过滤，减压脱溶，得到白色的固体产物32g，收率98％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)5.41(d，J＝5.1Hz，1H)，4.65-4.54(m，1H)，2.46(dd，J＝19.3，8.6Hz，1H)，2.33(t，J＝7.9Hz，2H)，2.10(dd，J＝18.8，9.4Hz，2H)，2.04(s，3H)，1.94(d，J＝5.7Hz，1H)，1.89(d，J＝2.9Hz，1H)，1.87-1.81(m，2H)，1.71-1.61(m，4H)，1.56(dd，J＝10.4，6.4Hz，1H)，1.48(dd，J＝13.3，4.4Hz，1H)，1.33-1.26(m，2H)，1.19-1.11(m，1H)，1.04(s，3H)，0.99(d，J＝4.6Hz，1H)，0.88(s，3H).ESI-MS m/z：353.9[M+Na]+，369.7[M+K]+.
(b)7α-溴-3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮的制备
将步骤(a)中得到的3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮(32g，0.1mol)，环己烷80mL置于250mL单口烧瓶中，加热65℃至体系澄清，然后将二溴海因(23.3g，0.15mol)加入到上述反应体系中，将体系在80℃条件下反应1～2小时，TLC检测反应进程，原料消失后停止反应。向体系中加入50mL水，搅拌后过滤，收集滤饼。将滤饼溶于50mL二氯甲烷中，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压脱溶，得到黄色固体粗产物35g，收率85.9％。
(c)3β-乙酰氧基-5，7-二烯雄甾-17-酮的制备
将步骤(b)中得到的7α-溴-3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮(35g，0.085mol)加入250mL二甲苯，40mL 2，4，6-三甲基吡啶，置于500mL单口烧瓶中，磁力搅拌加热至135℃，反应3～5小时，待反应至无原料，结束反应。体系冷却后抽滤，滤液用水洗一遍，再用饱和盐水溶液洗两遍，无水硫酸钠干燥，减压回收二甲苯，无水乙醇溶解，冷冻结晶，得浅黄色固体产物11.5g，收率：33％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)5.61(s，1H)，5.57(d，J＝2.6Hz，1H)，4.71(td，J＝11.5，5.9Hz，1H)，2.56-2.49(m，2H)，2.38(t，J＝12.5Hz，1H)，2.24-2.17(m，2H)，2.06(s，3H)，1.97-1.92(m，2H)，1.91(d，J＝3.7Hz，1H)，1.74(t，J＝4.8Hz，2H)，1.70(d，J＝5.2Hz，1H)，1.58(s，2H)，1.40-1.34(m，2H)，1.27(s，1H)，0.98(s，3H)，0.82(s，3H).MS(ESI)m/z：351.7[M+Na]+.
(d)3β-羟基-5，7-二烯雄甾-17-酮的制备
将步骤(c)中得到的3β-乙酰氧基-5，7-二烯雄甾-17-酮(11g，0.034mol)溶于100mL甲醇，置于250mL单口烧瓶中，向体系中加入氢氧化钾2g，磁力搅拌加热至80℃回流，反应0.5～1小时，待反应至无原料，结束反应。过滤，收集沉淀，水洗后真空干燥，得到白色固体产物9.3g，收率：96％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)5.61(s，1H)，5.57(d，J＝2.6Hz，1H)，4.71(td，J＝11.5，5.9Hz，1H)，2.56-2.49(m，2H)，2.38(t，J＝12.5Hz，1H)，2.24-2.17(m，2H)，1.97-1.92(m，2H)，1.91(d，J＝3.7Hz，1H)，1.74(t，J＝4.8Hz，2H)，1.70(d，J＝5.2Hz，1H)，1.58(s，2H)，1.40-1.34(m，2H)，1.27(s，1H)，0.98(s，3H)，0.82(s，3H).MS(ESI)m/z：309.8[M+Na]+，325.8[M+K]+.
(e)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-酮的制备
将步骤(d)中得到的3β-羟基-5，7-二烯雄甾-17-酮(100mg，0.35mmol)，曙红10mg，吡啶20mL置于30mL单口适应试管中，向反应液中通入氧气，并碘钨灯照射，反应至无原料。将体系倒入30mL冰水中，20mL乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物57.8mg，收率：52.1％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)6.52(d，J＝8.5Hz，1H)，6.33(d，J＝8.5Hz，1H)，3,99(s，1H)，2.58-2.46(m，1H)，2.08-1.99(m，1H)，1.98-1.94(m，1H)，1.88(m，1H)，1.86-1.80(m，2H)，1.72(m，1H)，1.68-1.62(m，1H)，1.58-1.55(m，4H)，1.54-1.50(m，1H)，1.38-1.21(m，2H)，1.00(s，3H)，0.91(s，3H).HPLC-MS(ESI)m/z：319.2[M+H]+.
(f)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼的制备
将步骤(e)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-酮(0.80g，2.51mmol)，85％水合肼4mL溶解于40mL无水乙醇中，置于100mL单口烧瓶中，将上述体系加热至45℃反应2～3小时，待反应至无原料，结束反应。过滤或甲醇重结晶，得到白色固体产物0.78g，收率85％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)6.53(d，J＝8.5Hz，1H)，6.35(d，J＝8.5Hz，1H)，4.77(m，2H，-NH2)，4.01(s，1H)，2.55-2.42(m，1H)，2.37-2.19(m，4H)，2.07-1.92(m，2H)，1.88-1.69(3H)，1.64-1.62(m，1H)，1.56-1.52(m，4H)，1.37-1.23(m，2H)，1.05(s，3H)，0.89(s，3H).HPLC-MS(ESI)m/z：333.2[M+H]+.
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(对甲苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和对甲基苯甲醛(40mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物106.7mg，收率：82％。
1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)8.27(s，1H)，7.77-7.74(dd，J＝8.5，5.5Hz，2H)，7.09-7.14(m，2H)，6.55(d，J＝8.4Hz，1H)，6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.01(m，1H)，2.78-2.63(m，2H)，2.19-2.16(m，1H)，2.06-2.04(m，1H)，1.96-1.92(m，2H)，1.90-1.86(m，2H)，1.77-1.63(m，4H)，1.65-1.59(m，2H)，1.37-1.28(m，2H)，1.13(m，3H)，1.04(s，1H)，0.94(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3，δppm)181.2，165.4，160.7，156.7，136.0，130.1，115.9，115.8，82.3，79.0，66.2，51.5，49.1，45.9，37.2，36.9，34.8，33.9，30.1，29.6，27.8，23.1，20.1，18.1，16.7.HPLC-MS(ESI)m/z：435.2[M+H]+.
实施例2
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氟苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氟苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和4-氟苯甲醛(47mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物103.8mg，收率：79％。
1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)8.27(s，1H)，7.78-7.74(dd，J＝8.5，5.5Hz，2H)，7.09-7.15(m，2H)，6.55(d，J＝8.4Hz，1H)，6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.01(m，1H)，2.78-2.63(m，2H)，2.15(m，1H)，2.05-2.04(m，1H)，1.96-1.93(m，2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.77-1.63(m，4H)，1.63-1.56(m，2H)，1.36-1.27(m，2H)，1.13(m，3H)，1.05(s，1H)，0.94(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3，δppm)181.2，165.5，160.8，156.7，136.1，130.1，115.8，115.7，82.3，79.1，66.2，51.5，49.1，45.9，37.1，36.9，34.7，33.9，30.1，29.7，27.8，23.0，20.0，18.1，16.7.HPLC-MS(ESI)m/z：439.2[M+H]+.
实施例3
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氯苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氯苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和4-氯苯甲醛(47mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物115.8mg，收率：85％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.26(s，1H)，7.71-7.69(d，J＝8.4Hz，2H)，7.41-7.39(d，J＝8.4Hz，2H)，6.55(d，J＝8.4Hz，1H)，6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.05-3.97(m，1H)，2.78-2.65(m，2H)，2.15-2.14(m，1H)，2.07-2.04(m，1H)，2.00-1.95(m，2H)，1.89-1.87(m，2H)，1.77-1.75(m，2H)，1.62-1.56(m，4H)，1.37-1.26(m，2H)，1.12(s，3H)，1.06(s，1H)，0.95(s，3H).13C NMR(CDCl3，100MHz，δppm)181.3，156.6，136.7，136.4，132.9，130.1，129.3，129.0，82.3，79.1，66.3，51.5，49.1，46.0，37.2，36.8，34.7，33.9，30.1，27.8，23.0，20.3，18.2，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：455.2[M+H]+.
实施例4
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-叔丁基苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-叔丁基苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和4-叔丁基苯甲醛(54mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物115.7mg，收率：81％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.25(d，J＝7.0Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.1，4.5Hz，2H)，7.44(dd，J＝8.2，2.9Hz，2H)，6.55(d，J＝8.4Hz，1H)，6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.04-3.97(m，1H)，2.74-2.60(m，2H)，1.99-1.95(m，1H)，1.87-1.85(m，4H)，1.78-1.77(m，1H)，1.68-1.66(m，2H)，1.60-1.53(m，2H)，1.35(s，9H)，1.12(s，2H)，1.05(m，3H)，0.94(s，3H).13C NMR(CDCl3，100MHz，δppm)180.3，157.5，157.4，154.2，154.1，136.1，131.7，130.1，127.9，125.6，82.3，81.1，79.1，78.9，66.1，51.5，49.1，45.9，37.2，36.8，35.8，34.9，34.0，32.2，30.1，27.8，23.0，20.3，18.2，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：477.3[M+H]+.
实施例5
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氰基苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-氰基苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和4-氰基苯甲醛(43mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物116.2mg，收率：87％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.29(s，1H)，7.87-7.85(d，J＝8.4Hz，2H)，7.72-7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，6.56-6.53(d，J＝8.4Hz，1H)，6.35-6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.05-3.98(m，1H)，2.77-2.64(m，2H)，2.20-2.15(m，1H)，2.07-2.04(m，1H)，2.00-1.94(m，2H)，1.90-1.84(m，1H)，1.78-1.74(m，2H)，1.61-1.56(m，4H)，1.35-1.26(m，2H)，1.15(s，3H)，1.06(s，1H)，0.95(s，3H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ＝182.0，156.7，138.5，136.2，132.4，129.9，128.4，118.4，113.8，82.3，79.0，66.3，51.5，49.1，46.0，37.2，36.8，34.7，33.9，30.1，27.9，23.0，20.3，18.2，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：446.2[M+H]+.
实施例6
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-甲氧基苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(4-甲氧基苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和4-甲氧基苯甲醛(45mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物121.5mg，收率：90％。
1H NMR(400MHz，CDCl3，δppm)8.36(s，1H)，7.72-7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，6.95-6.93(d，J＝8.4Hz，2H)，6.56-6.54(d，J＝8.4Hz，1H)，6.33-6.31(d，J＝8.4Hz，1H)，4.04-3.98(m，1H)，3.86(m，3H)，2.82-2.65(m，2H)，2.18-2.15(m，1H)，2.08-2.04(m，1H)，2.00-1.91(m，2H)，1.89-1.86(m，2H)，1.76-1.67(m，4H)，1.63-1.59(m，2H)，1.56-1.52(m，2H)，1.15(s，3H)，1.05-1.04(m，1H)，0.94(s，3H).13C NMR(CDCl3，100MHz，δppm)180.5，161.7，157.6，136.1，130.1，129.7，127.2，114.2，82.3，79.1，66.2，55.3，51.5，49.1，45.9，37.2，36.8，34.7，34.0，30.1，27.8，23.0，20.3，18.2，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：451.2[M+H]+.
实施例7
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(3-三氟甲基苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(3-三氟甲基苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和3-三氟甲基苯甲醛(57mg，0.33mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物111.3mg，收率：76％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.32(s，1H)，8.05(s，1H)，7.95-7.72(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70-7.68(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59-7.57(m，1H)，6.56-6.54(d，J＝8.4Hz，1H)，6.35-6.33(d，J＝8.4Hz，1H)，4.05-3.98(m，1H)，2.81-2.65(m，2H)，2.18-2.14(m，1H)，2.08-2.05(m，1H)，2.00-1.91(m，2H)，1.89-1.82(m，2H)，1.77-1.69(m，4H)，1.68-1.56(m，2H)，1.37-1.26(m，2H)，1.15(s，3H)，1.06(s，1H)，0.95(s，3H).13C NMR(CDCl3，100MHz，δppm)181.7，161.0，156.6，136.2，131.8，131.2，130.0，129.4，129.2，124.6，124.5，82.3，79.1，66.3，51.5，49.1，46.0，37.2，36.8，34.7，33.9，30.1，27.8，23.0，20.3，18.3，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：489.2[M+H]+.
实施例8
3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(3-甲氧基-4-羟基苯)腙的制备
步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)同实施例1。
(g)3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(3-甲氧基-4-羟基苯)腙的制备
将步骤(f)中得到的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼(100mg，0.30mmol)和3-甲氧基-4-羟基苯甲醛(50mg，0.30mmol)溶于20mL无水乙醇中，置于50mL单口烧瓶中，将上述体系加热至50℃反应2～4小时，待反应至无原料，结束反应。减压脱溶，硅胶柱纯化，得到灰白色固体产物100.7mg，收率：72％。
1H NMR(CDCl3，400MHz，δppm)8.20(s，1H)，7.43(d，J＝1.4Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.14(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，6.94(d，J＝8.1Hz，1H)，6.54(d，J＝8.5Hz，1H)，6.32(d，J＝8.5Hz，1H)，6.06(s，1H)，4.00(m，1H)，3.95(m，3H)，2.76-2.71(m，2H)，2.04(m，1H)，1.92-1.86(m，1H)，1.80-1.72(m，4H)，1.63-1.52(m，3H)，1.36-1.27(m，2H)，1.14-1.11(m，3H)，1.04(s，1H)，0.94(s，3H).13C NMR(CDCl3，100MHz，δppm)180.2，157.7，148.5，147.0，136.1，130.1，129.7，123.9，114.4，108.4，82.3，79.1，66.2，55.3，51.5，49.2，45.9，37.2，36.8，34.5，34.0，30.1，27.8，23.0，20.3，18.3，18.0.HPLC-MS(ESI)m/z：467.2[M+H]+.
实施例9
四氮唑盐还原法(MTT)测试化合物体外抑制人肝癌细胞HepG2的细胞生长实验，具体方法如下。
收集对数生长期HepG2细胞，接种于96孔培养板，每孔细胞数为1.0×105/100μL，置于37℃5％CO2培养箱培养，次日去掉培养基，加入不同浓度化合物100μL(化合物浓度采用对倍稀释，每一个化合物设置5～6个浓度，每一测试设3个平行孔，重复3次)，阴性对照组不加药物，48h后，每孔加入MTT 10μL，继续培养4h，再每孔加入DMSO 100μL终止反应，常温放置1h，用酶标仪检测每孔在492nm处的吸光度OD值，计算细胞生长抑制率。
药物对细胞的生长抑制率(％)＝(溶剂对照组平均OD值-用药组平均OD值)/对照组平均OD值，然后根据不同药物浓度对细胞的生长抑制率(％)计算药物的IC50。
测定结果见表1。
实施例10
四氮唑盐还原法(MTT)测试化合物体外抑制人乳腺癌细胞MCF-7的细胞生长实验，具体方法如下。
收集对数生长期MCF-7细胞，接种于96孔培养板，每孔细胞数为1.0×105/100μL，置于37℃5％CO2培养箱培养，次日去掉培养基，加入不同浓度化合物100μL(化合物浓度采用对倍稀释，每一个化合物设置5～6个浓度，每一测试设3个平行孔，重复3次)，阴性对照组不加药物，48h后，每孔加入MTT 10μL，继续培养4h，再每孔加入DMSO 100μL终止反应，常温放置1h，用酶标仪检测每孔在492nm处的吸光度OD值，计算细胞生长抑制率。
化合物对细胞的生长抑制率(％)＝(溶剂对照组平均OD值-用药组平均OD值)/对照组平均OD值，然后根据不同化合物浓度对细胞的生长抑制率(％)计算药物的IC50。
测定结果见表1。
表1：以顺铂为阳性对照，对合成的8个目标化合物进行活性测定
本发明所制备3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物对人肝癌HepG2细胞和人乳腺癌MCF-7细胞具有显著的抑制活性。
Claims (10)
1.一种3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物，其特征在于：其结构式如下：
R1表示-CH3、-F、-Cl、-C(CH3)3、-CN、-OCH3、-OH或-H；
R2表示-OCH3、-CF3或-H。
2.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(a)将去氢表雄酮(28.8g，0.1mol)溶解在二氯甲烷100mL中，加入吡啶20mL，将上述体系置于室温条件下，然后将乙酸酐40mL缓慢加入上述体系中，反应4～6小时，得到式(II)表示的3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-17-酮；
(b)将式(II)化合物加热溶解在环己烷中，然后将二溴海因加入上述体系中，回流反应1小时，得到式(III)表示的3β-乙酰氧基-5-雄甾烯-7α-溴-17-酮；
(c)将式(III)化合物与2，4，6-三甲基吡啶在二甲苯中反应，将上述体系置于油浴条件下，加热反应4～6小时，得到式(IV)表示的3β-乙酰氧基-5，7-二烯雄甾-17-酮；
(d)将式(IV)化合物溶解到甲醇中，加入强碱化合物，得到式(V)表示的3β-羟基-5，7-二烯雄甾-17-酮；
(e)将式(V)化合物溶于吡啶中，加入曙红，再向上述体系中通入氧气，将体系至于碘钨灯下，反应得到式(VI)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-酮；
(f)将式(VI)化合物和质量百分含量85％的水合肼溶于乙醇中，45℃下搅拌反应2小时，过滤，得到式(VII)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-肼；
(g)将式(VII)化合物溶于无水乙醇中，加入芳香醛，50℃下搅拌反应2～4小时，减压蒸馏得到式(I)表示的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物，
R1表示-CH3、-F、-Cl、-C(CH3)3、-CN、-OCH3、-OH或-H；
R2表示-OCH3、-CF3或-H。
3.根据权利要求2所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(b)式(II)化合物与二溴海因的物质的量比为1∶(1.5～2)，加热回流反应，反应时间1小时，后处理时减压脱溶温度不应超过45℃。
4.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(c)式(III)化合物与2，4，6-三甲基吡啶在二甲苯中反应，反应温度为135～140℃，式(III)化合物与2，4，6-三甲基吡啶的物质的量比为1∶(1.3～1.8)，反应时间4～6小时。
5.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(d)式(IV)化合物与强碱化合物的物质的量比为1∶(0.3～0.5)，加热回流反应，反应时间0.5～1小时，强碱化合物选自氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾。
6.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(e)式(V)化合物与光敏剂曙红的物质的量比为1∶(0.1～0.2)，体系置于冰水浴中，氧气匀速通入，500W碘钨灯光照射，反应时间0.5～1小时。
7.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(f)式(VI)化合物与85％水合肼的物质的量比为1∶(1.3～1.5)，反应温度为45℃，反应时间2～3小时，反应后过滤或甲醇重结晶。
8.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(g)式(VII)化合物与芳香醛物质的量比为1∶(1.05～1.2)，反应温度为50℃，反应时间2～4小时。
9.根据权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的制备方法，其特征在于：步骤(g)取代芳香醛结构式为：
10.权利要求1所述的3β-羟基-5α，8α-过氧雄甾-6-烯-17-(芳环取代)腙衍生物的应用，在制备肝癌、乳腺癌的预防和治疗药物中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20180928 |